新生大鼠

摘要： 目的 建立并比较新生SD大鼠心肌细胞的原代培养方法.方法 采用胰酶法和胰酶+Ⅱ型胶原酶法分别消化心肌组织,两次90 min差速贴壁纯化心肌细胞,倒置显微镜下观察细胞形态变化,分别采用台盼蓝和免疫荧光染色评估心肌细胞的存活率和纯度.结果 与胰酶法相比,胰酶+Ⅱ型胶原酶法可以获得形态良好且结构完整的心肌细胞;胰酶+Ⅱ型胶原酶法分离心肌细胞的获得率[(1.21±0.03)×106 vs(0.65±0.02)×106,P<0.01]和心肌细胞存活率[(93.37±0.40)％vs(86.40±0.36)％,P<0.01]明显高于胰酶法;两种方法获得的心肌细胞纯度均达到95％以上,但是胰酶+Ⅱ型胶原酶法获得心肌细胞所耗时间明显多于胰酶法[(14.00±0.40)h vs(4.59±0.10)h,P<0.01].结论 胰酶+Ⅱ型胶原酶法比胰酶法分离心肌细胞耗时长,但胰酶+Ⅱ型胶原酶法分离的心肌细胞获得率高、存活率高、细胞结构完整,是一种简单易行且高效的培养方法.

摘要： 目的探讨电刺激对新生缺氧缺血性脑损伤(HIBD)大鼠脑组织胰岛素样生长因子1(IGF-1)及其受体(IGF-1R)表达和神经轴索超微结构的影响。方法选择SPF级新生SD大鼠64只,随机分为对照组、模型组、氯胺酮组、电刺激组,每组16只。模型组、氯胺酮组、电刺激组构建HIBD模型,模型组建模后立即予生理盐水灌胃,氯胺酮组建模后立即予氯胺酮灌胃,电刺激组建模后立即予低频电刺激耳后部小脑顶核,对照组不予干预。连续干预4周后,参照Zea-Longa的分级标准评估各组神经功能缺损程度,通过水迷宫实验检测各组学习记忆能力(包括逃避潜伏期、经过原平台位置次数、原平台象限停留时间),显微镜下观察各组脑组织病理变化,采用TUNEL法检测各组神经细胞凋亡率,电镜下观察各组神经轴索超微结构,采用RT-PCR法和Western blotting法检测各组脑组织IGF-1、IGF-1R mRNA与蛋白表达。结果与对照组比较,模型组、氯胺酮组和电刺激组神经功能缺损评分、逃避潜伏期、神经细胞凋亡率明显升高,而经过原平台位置次数、原平台象限停留时间明显降低(P均0.05)。对照组海马组织及神经轴索超微结构正常;模型组海马组织可见较多红细胞,炎症细胞浸润明显,神经轴索突触减少,间隙融合,线粒体数量减少;氯胺酮组和电刺激组海马组织红细胞数量较模型组明显减少,炎症细胞浸润亦明显减轻,神经轴索超微结构趋于正常。与对照组比较,模型组、氯胺酮组和电刺激组脑组织IGF-1、IGF-1R mRNA与蛋白相对表达量均明显降低(P均0.05)。结论电刺激对新生HIBD大鼠脑神经具有明显保护作用,对神经轴索恢复具有促进作用,其机制可能与促进新生HIBD大鼠脑组织IGF-1、IGF-1R表达,进而激活IGF-1/IGF-1R信号通路有关。

摘要： 目的通过观察实验动物脑组织形态学改变及神经行为改变,了解新生大鼠脑白质损伤后的神经系统自我修复潜能。方法将48只2-3日龄SD新生大鼠随机分为脑室周围白质软化(PVL)模型组(24只)和对照组(24只),模型组结扎右侧颈总动脉并缺氧2.5 h制备成PVL模型,对照组仅游离右侧颈总动脉但不结扎及缺氧,分别于建模后3 d、7 d和14 d观察并比较两组大鼠脑组织形态学改变及神经行为能力情况。结果病理切片可见模型组大鼠脑内凋亡细胞、白质结构疏松、神经元细胞凝固性坏死,符合PVL的病理改变。建模后3 d、7 d、14 d两组均可见神经细胞增殖,模型组建模14d增殖细胞数大于建模3 d(P<0.05),髓鞘数目及髓鞘厚度小于对照组(P<0.05)。建模后14 d对照组空间位置觉、学习记忆能力优于模型组(P<0.05),建模后14 d模型组大鼠寻找平台时间较建模后3 d缩短(P<0.05)。结论建立模型符合PVL模型,发生脑损伤后14 d,观察到大鼠脑白质损伤后神经系统存在一定的自我修复潜能。

摘要： 目的:观察PI3K激动剂对新生大鼠卵巢PI3K/Akt/Foxo3a蛋白、细胞周期以及凋亡蛋白表达的影响。方法:取7日龄雌性大鼠卵巢体外培养,随机分为对照组、PI3K激活剂组、PI3K通路抑制剂组,每组10只。培养7dHE染色观察培养5d卵巢组织卵泡形态学;荧光显微镜法检测卵巢细胞凋亡;Western blot法比较p-AKT、p-FOXO3A、CDK2、P27、BCL-2及TAP63蛋白表达;PCR法检测培养3,5,7d PI3K、Akt、Foxo3a、Bcl-2、p27、Cdk2和Tap63 mRNA表达量。结果:PI3K激活剂组卵巢组织PI3K、p-AKT、p-FOXO3A、BCL-2、CDK2和TAP63蛋白表达增加(P<0.01),P27蛋白表达减少,尤以第5天最显著(P<0.05),之后逐渐下降,第7天达到最低(P<0.05);而PI3K抑制剂组卵巢组织PI3K、p-AKT、p-FOXO3A、CDK2、BCL-2和TAP63蛋白表达减少,P27蛋白表达增加。结论:激活PI3K/AKT/Foxo3a信号通路可以促进原始卵泡发育,其机制可能与上调卵巢组织PI3K、AKT、FOXO3A、BCL-2、CDK2和TAP63蛋白表达,下调P27蛋白表达有关。

摘要： 目的探讨重组人白细胞介素-11(rhIL-11)对新生大鼠缺氧缺血性脑病(HIE)的作用。方法48只7日龄Sprague-Dawley(SD)新生大鼠均分为假手术(Sham)组、HIE组、HIE+0.9μg/kg rhIL-11组及HIE+3.6μg/kg rhIL-11组,每组12只;HIE各组新生大鼠行右颈动脉结扎术后于8%O_(2)和92%N_(2)的低氧气体中缺氧2 h建立HIE模型,Sham组仅暴露右侧颈动脉、不结扎和不缺氧;缺血缺氧造模1 h,各rhIL-11组新生大鼠侧脑室注射rhIL-11,HIE组和Sham组大鼠予等体积生理盐水;造模成功48 h,对4组新生大鼠进行短期行为学测试(翻正反射、负趋地性试验及神经功能缺陷评分);处死新生大鼠取脑组织,测定4组新生大鼠的脑梗死体积和脑组织含水量。结果建立HIE模型48 h后,与HIE组比较,0.9μg/kg rhIL-11组和3.6μg/kg rhIL-11组新生大鼠翻正反射和负趋地性试验时间减少、神经功能缺陷评分降低(P<0.05或P<0.01);与HIE组比较,3.6μg/kg rhIL-11组新生大鼠脑梗死体积减少(P<0.01);脑组织含水量结果表明高剂量rhIL-11减轻脑含水量(P<0.05),与HIE组比较,差异有统计学意义。结论rhIL-11对新生大鼠HIE引起的脑损伤具有神经保护作用。

摘要： 目的探讨桔梗总皂苷(PGS)对高氧致支气管肺发育不良(BPD)新生大鼠肺损伤及HGF/c-Met信号通路的影响。方法将66只SD新生大鼠分为对照组、BPD组、地塞米松(TD)组及桔梗总皂苷低、中、高剂量组,每组11只。除对照组外,通过持续吸入高浓度氧(氧体积分数为90%)复制BPD模型。桔梗总皂苷低、中、高剂量组分别腹腔注射50 mg/kg、100 mg/kg、200 mg/kg桔梗总皂苷,地塞米松组腹腔注射地塞米松5 mg/kg,BPD组和对照组给予等量生理盐水。连续给药14 d后,检测各组大鼠肺组织湿重/干重(W/D)值,HE染色法观察各组大鼠肺组织病理变化,并进行肺组织辐射状肺泡计数(RAC),酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组大鼠肺组织中炎症因子白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,Western blotting检测蛋白HGF、c-Met、p-c-Met在肺组织的表达。结果与对照组相比,BPD组大鼠肺泡结构不完整,肺泡腔增大,肺泡间隔增厚,且出现炎症细胞浸润,新生大鼠肺组织W/D值,炎症因子IL-6、TNF-α水平,HGF、p-c-Met/c-Met蛋白表达升高(P<0.05),肺组织RAC降低(P<0.05);与BPD组相比,地塞米松组、桔梗总皂苷低、中、高剂量组新生大鼠肺泡病理改变明显减轻,大鼠肺组织W/D值、炎症因子IL-6、TNF-α水平、HGF、p-c-Met/c-Met蛋白表达降低(P<0.05),肺组织RAC升高(P<0.05)。结论桔梗总皂苷可减轻BPD新生大鼠肺损伤及肺组织炎症反应,可能与HGF/c Met信号通路有关。

摘要： 目的观察人参皂苷Rb1(ginsenoside Rb1,G-Rb1)对高氧诱导新生仔鼠肺损伤的改善作用及相关机制。方法模型组、Rb1组、Rb1联合ML385组建立新生仔鼠高氧肺损伤模型。Rb1联合ML385组腹腔注射G-Rb1(10 mg/kg)+灌胃ML385(20 mg/kg),Rb1组腹腔注射G-Rb1(10 mg/kg)+灌胃等量生理盐水,空白组、模型组腹腔注射、灌胃等量生理盐水。检测丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性;检测肺表面活性物质蛋白-D(alveolar surface active substance-D,SP-D)含量;检测肺组织核因子E2相关因子2(nuclear factor-E2 related factor2,Nrf2)蛋白表达量。结果与模型组比较,Rb1组MDA水平、SP-D水平降低,SOD活性、Nrf2蛋白表达量升高(P <0.05);与Rb1组比较,Rb1联合ML385组MDA水平、SP-D水平升高,SOD活性、Nrf2蛋白表达量降低(P <0.05)。结论 G-Rb1可改善新生仔鼠肺损伤,提升机体抗氧化能力,抑制肺组织氧化应激反应,激活Nrf2/ARE通路可能是其发挥作用的机制之一。

摘要： 目的探讨外源性肿瘤坏死因子刺激蛋白6(TSG-6)干预对支气管肺发育不良新生大鼠高氧肺损伤的保护作用,并分析其机制。方法将80只新生大鼠按照随机数字表法分为4组,分别为空气对照组、高氧肺损伤模型组、TSG-6预防组和TSG-6治疗组,每组各20只。空气对照组不建模,其他3组通过吸高氧建立高氧肺损伤新生大鼠模型。其中,高氧肺损伤模型组置于高氧箱内持续吸高氧14 d;TSG-6预防组在置于高氧箱前2 h实施气管内注入TSG-6剂量0.25μg/g TSG-6,然后进行高氧肺损伤吸氧;TSG-6治疗组进行高氧肺损伤吸氧,在吸高氧第5天开始在气管内注入剂量0.25μg/g TSG-6,直至14 d。分别于干预后7 d和14 d,苏木精-伊红染色观察各组大鼠肺组织病理学情况并进行放射状肺泡计数(RAC),酶联免疫吸附试验试剂盒检测大鼠肺组织中TSG-6、血管内皮生长因子(VEGF)和血清白细胞介素6(IL-6)水平,脂质过氧化丙二醛试剂盒检测血清丙二醛含量,总超氧化物歧化酶(SOD)活性试剂盒检测各血清SOD活性。结果干预7~14 d后,相较于高氧肺损伤组,TSG-6预防组和治疗组支气管上皮结构完整,上皮细胞形态结构正常、排列紧密;组织中可见肺泡壁轻度增厚,但TSG-6治疗组较预防组可见较多淋巴细胞与中性粒细胞浸润。干预后14 d,与高氧模型组相比,TSG-6预防组和TSG-6治疗组RAC、TSG-6、VEGF和SOD水平均显著增加,TSG-6预防组也显著高于TSG-6治疗组,差异均有统计学意义(P<0.05);与高氧模型组相比,TSG-6预防组和TSG-6治疗组IL-6、丙二醛水平均显著降低,TSG-6预防组也显著低于TSG-6治疗组,差异均有统计学意义(P<0.05)。与干预后7 d相比,干预后14 d,TSG-6预防组和TSG-6治疗组以上指标均显著改善,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论TSG-6干预治疗可显著改善高氧所致肺损伤的病理学程度,对支气管上皮细胞形态结构具有保护作用,并可避免大鼠肺泡减少而出现发育不良情况,其作用机制可能与促进TSG-6、VEGF水平增加和调节炎症与氧化应激反应水平平衡有关,且预干预治疗效果总体上优于建模后治疗。

摘要： 目的 探讨小图lncRNA-MALAT1表达对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)的影响。方法 取SPF级7 d龄SD大鼠40只,随机分为假手术组、模型组、lncRNA对照组、silncMALAT1组,每组10只。Rice-Vannucci法建立新生大鼠HIBD模型,造模后2 h,侧脑室分别注射生理盐水、生理盐水、空载体重组腺病毒液、silncMALAT1各5μl。造模后7 d,Morris水迷宫试验评估空间学习和记忆能力,TUNEL染色检测海马组织神经元凋亡,PCR和免疫印迹法检测海马组织BDNF/TrkB信号通路mRNA和蛋白表达变化。结果 模型组造模失败2只,lncRNA组失败2只,silncMALAT1组失败1只,造模成功率为83.33%。下调lncRNAMALAT1表达,明显增加新生大鼠学习和记忆能力(P<0.05),明显减少海马组织神经元凋亡率(P<0.05),明显下调BDNF/TrkB mRNA和蛋白表达水平(P<0.05)。结论 下调lncRNA-MALAT1表达可减轻新生大鼠HIBD,其机制可能与抑制BDNF/TrkB信号通路、减轻海马组织神经元凋亡有关。

摘要： 目的:分析趋化因子CXCL1及其受体CXCR2在坏死性小肠结肠炎(necrotizing enterocolitis,NEC)新生Sprague-Dawley(SD)大鼠肠组织和脑组织中的表达,探讨NEC相关早产儿脑损伤发病机制,为早产儿脑损伤防治提供理论基础。方法:选取川北医学院实验动物中心购得的SPF级1日龄大鼠43只(1只死亡),随机分为实验组(21只)和对照组(21只)。构建未成熟大鼠NEC模型,即实验组采用3%葡聚糖硫酸钠盐灌胃,每天4次,持续3d,建立NEC模型;对照组用同样方法灌胃生理盐水。分别于灌胃后3h、24h、72h后采取断头法处死新生鼠(每个时间点6只),留取全脑及全肠组织,采用Western Blot法分别检测不同时间点肠组织及脑组织中CXCL1、CXCR2蛋白的含量。应用GelPro软件对Western Blot条带进行灰度分析。于灌胃后72h各组取3只做脑组织及肠组织病理切片,苏木精-伊红染色。病理组织检测行病理描述分析。结果:与对照组比较,实验组大鼠肠组织肠道肿胀,肠腔积气明显,肠壁变薄;肠组织绒毛有受损、脱落和坏死,肠腺体紊乱、缺失,黏膜下及肌层有水肿、分离,基底变薄,有炎症细胞浸润;脑组织细胞层次结构不清,室周白质多孔、疏松,胶质细胞减少。WB结果显示:与对照组相比较,实验组肠组织CXCL1水平在灌胃后3h、72h增高,差异有统计学意义(F=9.476,P0.05);实验组脑组织CXCL1水平在灌胃后72h显著增高,差异有统计学意义(F=35.767,P<0.05);实验组脑组织CXCR2水平在灌胃后3h、24h、72h表达均明显增高,差异有统计学意义(F=50.083,P<0.05)。结论:CXCL1/CXCR2在NEC相关脑损伤中发挥作用,CXCL1/CXCR2可能参与了肠脑轴在传递肠道炎症对发育中大脑损伤中的发病机制。

摘要： 本研究首先建立了脑辐射损伤的动物模型,运用放射自显影示踪技术表明,新生大鼠脑内注射浓缩铀后,放射性核素行径主要定位于细胞核中,在细胞浆和细胞间隙中亦有呈现.从多方位的研究α辐射体浓缩铀脑内照射对Wistar纯品系新生大鼠体格生长及神经行为的影响.结果表明新生大鼠脑内照射浓缩铀后可导致生长延迟及神经行为异常.运用放射免疫技术检测浓缩铀脑内照射后,大鼠的小脑、皮质、海马、间脑中神经元特异性烯醇化酶(NSE)、白细胞介素-1β(IL-1β)的含量变化.发现随着浓缩铀235U脑内照射剂量的增加,NSE含量下降,IL-1β却显著上升,并有剂量反应依赖关系.从生物化学角度表明,α辐射体浓缩铀在新生大鼠中对发育脑损伤的作用特征具有神经细胞的敏感性,易脆性和代偿性.

摘要： 一种研究高压氧对脑出血大鼠脑内血管新生影响的方法，将SD大鼠随机分为假手术组(A组)、模型组（B组）和高压氧组（C组）。采用组织切片HE染色显微镜下观察各组大鼠血肿周围脑组织新生血管形成情况；采用免疫组织化学分析方法检测各组大鼠脑内HIF1-α、VEGF的蛋白表达含量；采用荧光定量RT-PCR方法测定各组大鼠脑组织HIF1-αmRNA、VEGFmRNA的表达水平。

摘要： 本发明提供一种在大鼠离乳期给与3‑MA处理制备神经发育缺陷大鼠模型的方法，包括给予正常离乳期大鼠连续7天腹腔注射自噬抑制剂3‑MA制备抑制自噬发生的大鼠模型，并通过免疫印迹检测自噬发生，而后通过三箱社交实验验证社交障碍、开放旷场实验、高架十字迷宫实验以及黑白箱实验验证大鼠模型焦虑水平是否增加，通过Y迷宫实验和被动规避实验验证大鼠模型是否出现记忆损伤，大鼠模型与对照组进行高尔基体染色，观察海马和额叶神经元及突触形态。通过多次实验发现，离乳期3‑MA处理制备神经发育缺陷的大鼠模型，具有成本低廉，造模周期短，模型行为异常更明显，稳定性更好的优势，可用于精神分裂症、孤独症等疾病研究及新药研发。

摘要： 本实用新型提供一种经玻璃体腔注射大鼠诱导视网膜蜕变用针对大鼠的注射器，涉及针筒技术领域，本实用新型包括本体和固定装置，所述本体为注射器，所述本体的一端连通有连接口，所述连接口远离本体的一端设有针头，所述本体的表面设有固定装置，所述固定装置包括连接板，所述连接板的内部与本体贯穿滑动连接，所述连接板的一侧固定连接有滑柱，所述滑柱远离连接板的一端滑动连接有套环，所述套环的表面固定连接有两个固定板，所述固定板呈“L”形，且固定板的长臂端贯穿插设有圆柱。本实用新型解决了在注射的过程中老鼠可能会乱动，可能会导致人无法一次性的将注射液通过注射器注射进老鼠体内的问题。

摘要： 本发明公开了一种新生大鼠海马神经元原代培养的培养液及原代培养大鼠海马神经元的方法，该培养液是在基础培养液Neurobasalmedium中加入1、6二磷酸果糖、果糖和营养添加剂。原代培养新生大鼠海马神经元具有以下步骤：①制备海马神经元培养液；②取材、消化；③制备单细胞悬液；④接种、培养。本发明原代培养大鼠培养海马神经元的方法简便，采用本发明培养液能够获得生长状态良好、纯度较高的海马神经元，具有重要的应用价值和经济价值。

摘要： 本发明涉及生物技术领域，更具体地涉及分离原代新生大鼠心肌细胞(NRCM)的方法，所述方法采用两种消化酶进行逐步消化，并且不包括离心步骤。

摘要： 本发明属于动物细胞培养技术领域，涉及一种新生大鼠皮肤终隔细胞大量扩增方法及应用。步骤如下：新生大鼠皮肤样品的预处理；酶消化液配置；酶消化液处理样品，获得终隔细胞悬液；制备新生大鼠皮肤终隔细胞原代细胞；原代细胞的传代扩大培养，制备传代细胞；c‑kit+/CD34+流式细胞仪分选纯化皮肤终隔细胞，重悬细胞液，扩大培养，制备纯度较高的皮肤终隔细胞。本发明采用0.05%胶原酶II、0.05%胰蛋白酶，联合消化法分离培养皮肤终隔细胞，该方法得到的原代终隔细胞数量大，纯度高，活力好，经流式细胞仪分选后，可快速大量扩增，扩增后细胞形态稳定，活力高，可广泛用于后续相关终隔细胞形态检测和功能研究。

摘要： 本发明提出一种新生大鼠嗅球嗅鞘细胞(OECs)的分组纯化方法，其应用于新生大鼠嗅球嗅鞘细胞的纯化过程，所述纯化过程包括OECs的取材；OECs的分离：OECs分组纯化及比较；形态学观察以及OECs纯度检测。本发明通过不同的的新生大鼠嗅球嗅鞘细胞(OECs)的纯化方法实验，结果显示体外培养的新生大鼠嗅球OECs主要为双极或三级细胞，其突起细长。未经纯化的OECs则成纤维细胞生长迅速而占优势，三种纯化方法均能使接种14d后的OECs纯度均值大于75％。p75抗体吸附法和阿糖胞苷抑制法的纯化率均值略高于差速贴壁法。故新生大鼠嗅球OECS的原代培养中细胞纯化是必要的；在脊髓损伤再生研究中，较之p75抗体吸附法和阿糖胞苷抑制法，差速贴壁法是一种简单、经济、实用的OECs纯化方法。

摘要： 本发明公开了一种新生大鼠海马神经元原代培养的培养液及原代培养大鼠海马神经元的方法，该培养液是在基础培养液Neurobasalmedium中加入1、6二磷酸果糖、果糖和营养添加剂。原代培养新生大鼠海马神经元具有以下步骤：①制备海马神经元培养液；②取材、消化；③制备单细胞悬液；④接种、培养。本发明原代培养大鼠培养海马神经元的方法简便，采用本发明培养液能够获得生长状态良好、纯度较高的海马神经元，具有重要的应用价值和经济价值。

摘要： 本发明提出一种新生大鼠嗅球嗅鞘细胞(OECs)的分离方法，其应用于OECs的纯化过程，所述纯化过程包括OECs的取材；OECs的分离：OECs分组纯化及比较；形态学观察以及OECs纯度检测。本发明通过不同的新生大鼠嗅球嗅鞘细胞(OECs)的纯化方法实验，结果显示体外培养的新生大鼠嗅球OECs主要为双极或三级细胞，其突起细长。未经纯化的OECs则成纤维细胞生长迅速而占优势，三种纯化方法均能使接种14d后的OECs纯度均值大于75％。p75抗体吸附法和阿糖胞苷抑制法的纯化率均值略高于差速贴壁法。故新生大鼠嗅球OECS的原代培养中细胞纯化是必要的；在脊髓损伤再生研究中，较之p75抗体吸附法和阿糖胞苷抑制法，差速贴壁法是一种简单、经济、实用的OECs纯化方法。

摘要： 一种新生大鼠手术台，其包括：固定大鼠的台体；台体的周缘设有防止大鼠逃脱固定的板体，且板体与台体可合围成一盒体；在台体上设置一可绕台体平面一直线翻折的展示板，且对应大鼠躯干及四肢位置在展示板上分别设置固定大鼠躯干及四肢的束紧带；束紧带可在展示板上进行移动；使用时利用板体与台体组成的盒体可以便于工作人员进行大鼠手术台的场地更换，且可将台体作为手术台完全展示在工作人员眼前；利用可活动翻折的展示板可以帮助工作人员观察大鼠后侧躯干；利用可移动的束紧带可以帮助工作人员观察大鼠被固定位置。