RNAi技术

摘要： 随着昆虫分子生物学技术的蓬勃发展,RNA干扰(RNAi)作为21世纪以来的变革性技术,通过特异性抑制靶基因转录后水平的表达,在昆虫基因功能研究方面被广泛应用.由于沉默重要基因的表达会导致某些昆虫的死亡或行为缺陷,故该技术被认为是一种潜在的害虫防治策略,在控制、研究甚至保护昆虫方面具有巨大潜力,目前已被广泛应用于半翅目、直翅目、双翅目等昆虫.RNAi是昆虫学研究和害虫控制潜在应用的流行和重要的反向遗传学策略.从RNAi技术的原理、导入方法、效率影响因素及在农业害虫中的应用研究实例等4方面进行了综述,并对其防控应用和发展前景进行了展望.

摘要： 自从RNA干扰(RNA interference,RNAi)现象被发现以来,RNAi技术快速发展为高效的转录后基因沉默的工具,被广泛应用于基因功能分析和多种疾病(如恶性肿瘤、乙型肝炎、肥胖症、多发性神经病变等)的临床或临床前治疗.小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)是RNAi技术的效应分子.然而作为负电性的生物大分子,裸siRNA在体内半衰期短且容易被核酸酶降解和肾小球滤过,因此其临床应用受到极大的限制.如何构建安全高效的体内递送载体用于提高siRNA在体内的稳定性和靶细胞中基因沉默效率是RNAi技术临床转化的关键.目前已有诸多纳米载体,如脂质体被应用于siRNA体内递送,并在临床或临床前疾病治疗上取得了较好的疗效.实体瘤具有特殊的血管结构和生理微环境(如弱酸及乏氧环境、特定化学物质或酶过度表达等),因此近年来国内外学者将研究兴趣聚焦在构建肿瘤微环境响应的纳米载体,用于提高siRNA在体内稳定性、肿瘤部位富集量和肿瘤细胞中靶基因沉默效率.本文综述了肿瘤微环境响应的siRNA递送载体的设计原理及功能特征,分析了现有肿瘤微环境响应的siRNA递送载体的优势和不足,探讨了肿瘤微环境响应的siRNA递送载体的未来发展趋势.

摘要： 据2016年9约28日《光明日报》报道，中科院微生物所郭惠珊研究组利用RNAi技术，在棉花黄萎病的基础理论和防治技术方面取得了突破性进展。研究组取得了三方面研究成果。第一，发现黄萎病致的病机制。研究组观察到，黄萎病的致病菌“大丽轮枝菌”会产生特殊的侵染结构——附着枝，进而形成穿刺钉，用来刺穿根表皮细胞壁，最终实现病菌在根维管组织的定殖。

摘要： 目的 研究小干扰RNA沉默β-catenin对胃癌MGC803细胞bax基因表达的影响.为以β-catenin为靶点的肿瘤预防和治疗提供理论依据.方法 设计β-catenin短链发夹式RNA (short hairpin RNA,shRNA)干扰质粒,通过脂质体转染MGC-803细胞.将细胞分为3组:空白对照组(未转染)、阴性对照组(空质粒转染)、质粒干扰组.用RT-PCR技术检测β-catenin表达情况.免疫组化SP染色方法测BAX含量.结果 RT-PCR技术检测β-catenin转录情况:β-catenin空白对照组OD值(1.6833±0.021),阴性对照组OD值(1.292±0.087),质粒干扰组OD值(0.7399±0.042).经单因素方差分析,组间比较差异有统计学意义(P＜0.01);经过多重比较SNK检验结果显示,质粒干扰组与阴性对照组和空白对照组差异有统计学意义(P＜0.01).阴性对照组和空白对照组没有统计学意义(P＞0.05).免疫组化BAX染色结果显示:空白对照组细胞质染色呈淡黄色,质粒干扰组与阴性对照组相比,细胞质着色则明显增强,黄染加重.结论 通过RNAi技术沉默β-catenin基因表达,使MGC-803细胞的β-catenin表达下调,质粒干扰组的促凋亡基因bax表达更强.

摘要： 目的 研究β-catenin小干扰RNA对胃癌MGCC803细胞bcl-2基因表达的影响.方法 将细胞分为质粒干扰组、阴性对照组(空质粒转染)、空白对照组(未转染).通过脂质体,利用构建的β-catenin短链发夹式RNA (shRNA)干扰质粒转染MGC-803细胞.用RT-PCR技术进行β-catenin表达检测.免疫组化方法检测bcl-2含量.结果 β-catenin质粒干扰组OD值(0.7399±0.042),阴性对照组OD值(1.2992±0.087),空白对照组OD值(1.6833±0.021).单因素方差分析组间比较,差异具有统计学意义(P＜0.01);多重比较SNK检验结果显示质粒干扰组与阴性对照组和空白对照组比较,差异具有统计学意义(P＜0.01),阴性对照组和空白对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).免疫组化bcl-2染色结果显示:空白对照组细胞质染色较浅呈淡黄色,质粒干扰组与阴性对照组相比,细胞质着色明显减弱,黄染区域变小.结论 RNAi技术沉默β-catenin基因表达后,MGC-803细胞的β-catenin表达下调,3个实验组中的质粒干扰组的bcl-2抑凋亡基因表达最弱.提示它在胃癌发生发展中起重要作用.

摘要： 新疆石河子大学人畜共患病研究团队近日在口蹄疫疾病防控领域取得新突破。其研究成果受到国际生命科学顶尖杂志《eLife》高度评价，认为“该研究成果将RNAi技术和转基因动物技术相结合。

摘要： 以采用RNAi技术获得的HiⅡ、HiⅡA、HiⅡB和H99抗玉米矮花叶病转基因T1和T2代为材料,通过病毒接种、草丁膦涂抹、目的基因和标记基因PCR扩增,研究了利用RNAi原理构建的目的基因对玉米矮花叶病的抗性效果以及玉米转基因后代群体鉴定筛选技术.结果表明,90.00％的转基因株系抗病性超过非转基因株系,30.00％的转基因株系抗病株率超过了抗病对照黄早4,转基因株系的抗病性明显提高,说明利用RNAi技术选育抗矮花叶病转基因玉米株系是可行的.4种筛选鉴定方法比较结果表明,目的基因PCR和病毒接种鉴定方法最可靠,在转基因后代群体鉴定过程中,可在苗期用200 mg/L的草丁膦筛选阳性植株基础上,再采用目的基因PCR鉴定,筛选出抗性转基因植株或株系,不仅可以减少鉴定的工作量,而且可以提高鉴定的准确性.

摘要： RNA干扰( RNA interference, RNAi )是近年来生物学研究领域的一项重大发现,是由双链RNA诱导的特异性序列的基因沉默现象。近年来,RNAi技术日益完善、成熟,已逐渐应用于功能基因组学、基因表达调控机制等研究领域。作为一种有效的工具,RNAi技术在眼科疾病的基因治疗方面也取得了很大的进展。本文就近年来国内外关于RNAi技术与角膜内皮细胞损伤、白内障、青光眼、新生血管性疾病、增生性玻璃体视网膜病变的研究现状进行简要概括。%RNA interference is an important discovery in the field of biology in recent years, which is a gene silencing phenomena of specific sequences induced by double-stranded RNA. RNAi technology becomes perfect and mature increasingly, and has been gradually applied in functional genomics, regulatory mechanisms of gene expression research areas. As an effective tool, RNAi technology in gene therapy of eye disease has also made great progress. This paper briefly reviews the current researches of RNAi technology adopting in corneal endolthelial cells injury and therapies of cataract, glaucoma, neovascular diseases and proliferative vitreoretinopathy.

摘要： 目的：本研究通过建立高效干扰HOXA10表达的真核载体pGPHI/GFP/Neo-HOXA10,探讨RNAi技术逆转人慢性髓系白血病K562细胞株多药耐药的新方案.方法：根据前期筛选的针对HOXA10的特异性siRNA序列设计shRNA寡核苷酸链,并构建质粒表达载体pGPHI/GFP/Neo-HOXA10,应用阳离子脂质体转染K562细胞.G418筛选4周后,经RT-PCR鉴定重组载体稳定表达的细胞株;MTT法检测细胞转染前后对长春新碱、依托泊苷的敏感性变化;Hochest33258染色检测细胞凋亡形态改变;流式细胞术检测各组细胞的凋亡率.结果：成功构建pGPHI/GFP/Neo-HOXA10载体,mRNA水平证实成功建立HOXA10低表达的白血病细胞模型;MTT结果显示实验组细胞IC50值明显低于对照组(P＜0.05),对VCR及VP-16的敏感性明显增强;Hoechst染色显示实验组细胞加入化疗药物后较对照组出现明显凋亡形态改变;流式细胞术表明实验组细胞联合化疗药物使细胞凋亡率显著增加(P＜0.05),而对照组比较无明显差异(P＞0.05).结论：以HOXA10为靶标构建的质粒表达载体能明显增强长春新碱、依托泊苷对K562细胞抑制增殖、诱导凋亡作用,提高白血病细胞对化疗药物的敏感性,在一定程度上能逆转白血病细胞的多药耐药.

摘要： 目的：本研究通过建立高效干扰HOXA10表达的真核载体pGPHI/GFP/Neo-HOXA10,探讨RNAi技术逆转人慢性髓系白血病K562细胞株多药耐药的新方案.方法：根据前期筛选的针对HOXA10的特异性siRNA序列设计shRNA寡核苷酸链,并构建质粒表达载体pGPHI/GFP/Neo-HOXA10,应用阳离子脂质体转染K562细胞.G418筛选4周后,经RT-PCR鉴定重组载体稳定表达的细胞株;MTT法检测细胞转染前后对长春新碱、依托泊苷的敏感性变化;Hochest33258染色检测细胞凋亡形态改变;流式细胞术检测各组细胞的凋亡率.结果：成功构建pGPHI/GFP/Neo-HOXA10载体,mRNA水平证实成功建立HOXA10低表达的白血病细胞模型;MTT结果显示实验组细胞IC50值明显低于对照组(P＜0.05),对VCR及VP-16的敏感性明显增强;Hoechst染色显示实验组细胞加入化疗药物后较对照组出现明显凋亡形态改变;流式细胞术表明实验组细胞联合化疗药物使细胞凋亡率显著增加(P＜0.05),而对照组比较无明显差异(P＞0.05).结论：以HOXA10为靶标构建的质粒表达载体能明显增强长春新碱、依托泊苷对K562细胞抑制增殖、诱导凋亡作用,提高白血病细胞对化疗药物的敏感性,在一定程度上能逆转白血病细胞的多药耐药.

摘要： 目的：本研究通过建立高效干扰HOXA10表达的真核载体pGPHI/GFP/Neo-HOXA10,探讨RNAi技术逆转人慢性髓系白血病K562细胞株多药耐药的新方案.方法：根据前期筛选的针对HOXA10的特异性siRNA序列设计shRNA寡核苷酸链,并构建质粒表达载体pGPHI/GFP/Neo-HOXA10,应用阳离子脂质体转染K562细胞.G418筛选4周后,经RT-PCR鉴定重组载体稳定表达的细胞株;MTT法检测细胞转染前后对长春新碱、依托泊苷的敏感性变化;Hochest33258染色检测细胞凋亡形态改变;流式细胞术检测各组细胞的凋亡率.结果：成功构建pGPHI/GFP/Neo-HOXA10载体,mRNA水平证实成功建立HOXA10低表达的白血病细胞模型;MTT结果显示实验组细胞IC50值明显低于对照组(P＜0.05),对VCR及VP-16的敏感性明显增强;Hoechst染色显示实验组细胞加入化疗药物后较对照组出现明显凋亡形态改变;流式细胞术表明实验组细胞联合化疗药物使细胞凋亡率显著增加(P＜0.05),而对照组比较无明显差异(P＞0.05).结论：以HOXA10为靶标构建的质粒表达载体能明显增强长春新碱、依托泊苷对K562细胞抑制增殖、诱导凋亡作用,提高白血病细胞对化疗药物的敏感性,在一定程度上能逆转白血病细胞的多药耐药.

摘要： 目的：本研究通过建立高效干扰HOXA10表达的真核载体pGPHI/GFP/Neo-HOXA10,探讨RNAi技术逆转人慢性髓系白血病K562细胞株多药耐药的新方案.方法：根据前期筛选的针对HOXA10的特异性siRNA序列设计shRNA寡核苷酸链,并构建质粒表达载体pGPHI/GFP/Neo-HOXA10,应用阳离子脂质体转染K562细胞.G418筛选4周后,经RT-PCR鉴定重组载体稳定表达的细胞株;MTT法检测细胞转染前后对长春新碱、依托泊苷的敏感性变化;Hochest33258染色检测细胞凋亡形态改变;流式细胞术检测各组细胞的凋亡率.结果：成功构建pGPHI/GFP/Neo-HOXA10载体,mRNA水平证实成功建立HOXA10低表达的白血病细胞模型;MTT结果显示实验组细胞IC50值明显低于对照组(P＜0.05),对VCR及VP-16的敏感性明显增强;Hoechst染色显示实验组细胞加入化疗药物后较对照组出现明显凋亡形态改变;流式细胞术表明实验组细胞联合化疗药物使细胞凋亡率显著增加(P＜0.05),而对照组比较无明显差异(P＞0.05).结论：以HOXA10为靶标构建的质粒表达载体能明显增强长春新碱、依托泊苷对K562细胞抑制增殖、诱导凋亡作用,提高白血病细胞对化疗药物的敏感性,在一定程度上能逆转白血病细胞的多药耐药.

摘要： 目的：本研究通过建立高效干扰HOXA10表达的真核载体pGPHI/GFP/Neo-HOXA10,探讨RNAi技术逆转人慢性髓系白血病K562细胞株多药耐药的新方案.方法：根据前期筛选的针对HOXA10的特异性siRNA序列设计shRNA寡核苷酸链,并构建质粒表达载体pGPHI/GFP/Neo-HOXA10,应用阳离子脂质体转染K562细胞.G418筛选4周后,经RT-PCR鉴定重组载体稳定表达的细胞株;MTT法检测细胞转染前后对长春新碱、依托泊苷的敏感性变化;Hochest33258染色检测细胞凋亡形态改变;流式细胞术检测各组细胞的凋亡率.结果：成功构建pGPHI/GFP/Neo-HOXA10载体,mRNA水平证实成功建立HOXA10低表达的白血病细胞模型;MTT结果显示实验组细胞IC50值明显低于对照组(P＜0.05),对VCR及VP-16的敏感性明显增强;Hoechst染色显示实验组细胞加入化疗药物后较对照组出现明显凋亡形态改变;流式细胞术表明实验组细胞联合化疗药物使细胞凋亡率显著增加(P＜0.05),而对照组比较无明显差异(P＞0.05).结论：以HOXA10为靶标构建的质粒表达载体能明显增强长春新碱、依托泊苷对K562细胞抑制增殖、诱导凋亡作用,提高白血病细胞对化疗药物的敏感性,在一定程度上能逆转白血病细胞的多药耐药.

摘要： 目的：在课题组之前的病例对照研究中发现细胞极性基因PARD3的单核苷酸多态性和微缺失与中国山西省出生缺陷高发区的神经管畸形发生相关.因此,希望在细胞模型中进一步验证PARD3基因的功能,探究其在神经管发育中的可能机制.方法：在MDCK细胞中利用RNA干扰慢病毒抑制PARD3基因表达水平,用Real-TimePCR检测神经管发育相关基因的表达变化情况;同时利用细胞免疫荧光技术对相关蛋白进行亚细胞定位.结果：1、在慢病毒载体介导的PARD3基因干扰细胞模型中,PARD3基因抑制率达到75％.PAR复合物中PARD6表达无显著改变,PRKCI表达下调(P＜0.05).平面细胞极性信号通路(planar cell polarity,PCP)的基因celsr1表达下调(P＜0.05),Dishevelled2(Dvl2)表达显著上调(P＜0.05),而Frizzled表达无明显改变,已报道的与人神经管畸形发生相关基因vang/1表达也下调(P＜0.05)2、抑癌基因PTEN表达下调,差异有统计学意义.3、MDCK细胞爬片的免疫荧光染色中,观察到PARD3与细胞紧密连接的标志蛋白ZO-2分布一致.Vangl2和PAR复合物的成分之一aPKC亚细胞定位也主要在细胞膜上.结论：1、在细胞模型中，抑制PARD3基因的表达后PCP通路核心基因Vangl,Dvl2等表达水平显著改变，且免疫荧光染色结果也显示PARD3与己知的神经管畸形发生相关基因Vangl2空间分布相近，因此PARD3可能与PCP信号通路组分相互作用，从而调节神经胚的发育。2、抑制PARD3基因的表达后PTEN表达下调，而PTEN基因参与调节胚胎早期发育过程中的上皮细胞向间充质细胞的转变(epithelial-mesenchymal transition,EMT)，这也可能是PARD3基因调节神经管发育的另一个机制。

摘要： 目的：在课题组之前的病例对照研究中发现细胞极性基因PARD3的单核苷酸多态性和微缺失与中国山西省出生缺陷高发区的神经管畸形发生相关.因此,希望在细胞模型中进一步验证PARD3基因的功能,探究其在神经管发育中的可能机制.方法：在MDCK细胞中利用RNA干扰慢病毒抑制PARD3基因表达水平,用Real-TimePCR检测神经管发育相关基因的表达变化情况;同时利用细胞免疫荧光技术对相关蛋白进行亚细胞定位.结果：1、在慢病毒载体介导的PARD3基因干扰细胞模型中,PARD3基因抑制率达到75％.PAR复合物中PARD6表达无显著改变,PRKCI表达下调(P＜0.05).平面细胞极性信号通路(planar cell polarity,PCP)的基因celsr1表达下调(P＜0.05),Dishevelled2(Dvl2)表达显著上调(P＜0.05),而Frizzled表达无明显改变,已报道的与人神经管畸形发生相关基因vang/1表达也下调(P＜0.05)2、抑癌基因PTEN表达下调,差异有统计学意义.3、MDCK细胞爬片的免疫荧光染色中,观察到PARD3与细胞紧密连接的标志蛋白ZO-2分布一致.Vangl2和PAR复合物的成分之一aPKC亚细胞定位也主要在细胞膜上.结论：1、在细胞模型中，抑制PARD3基因的表达后PCP通路核心基因Vangl,Dvl2等表达水平显著改变，且免疫荧光染色结果也显示PARD3与己知的神经管畸形发生相关基因Vangl2空间分布相近，因此PARD3可能与PCP信号通路组分相互作用，从而调节神经胚的发育。2、抑制PARD3基因的表达后PTEN表达下调，而PTEN基因参与调节胚胎早期发育过程中的上皮细胞向间充质细胞的转变(epithelial-mesenchymal transition,EMT)，这也可能是PARD3基因调节神经管发育的另一个机制。

摘要： 目的：在课题组之前的病例对照研究中发现细胞极性基因PARD3的单核苷酸多态性和微缺失与中国山西省出生缺陷高发区的神经管畸形发生相关.因此,希望在细胞模型中进一步验证PARD3基因的功能,探究其在神经管发育中的可能机制.方法：在MDCK细胞中利用RNA干扰慢病毒抑制PARD3基因表达水平,用Real-TimePCR检测神经管发育相关基因的表达变化情况;同时利用细胞免疫荧光技术对相关蛋白进行亚细胞定位.结果：1、在慢病毒载体介导的PARD3基因干扰细胞模型中,PARD3基因抑制率达到75％.PAR复合物中PARD6表达无显著改变,PRKCI表达下调(P＜0.05).平面细胞极性信号通路(planar cell polarity,PCP)的基因celsr1表达下调(P＜0.05),Dishevelled2(Dvl2)表达显著上调(P＜0.05),而Frizzled表达无明显改变,已报道的与人神经管畸形发生相关基因vang/1表达也下调(P＜0.05)2、抑癌基因PTEN表达下调,差异有统计学意义.3、MDCK细胞爬片的免疫荧光染色中,观察到PARD3与细胞紧密连接的标志蛋白ZO-2分布一致.Vangl2和PAR复合物的成分之一aPKC亚细胞定位也主要在细胞膜上.结论：1、在细胞模型中，抑制PARD3基因的表达后PCP通路核心基因Vangl,Dvl2等表达水平显著改变，且免疫荧光染色结果也显示PARD3与己知的神经管畸形发生相关基因Vangl2空间分布相近，因此PARD3可能与PCP信号通路组分相互作用，从而调节神经胚的发育。2、抑制PARD3基因的表达后PTEN表达下调，而PTEN基因参与调节胚胎早期发育过程中的上皮细胞向间充质细胞的转变(epithelial-mesenchymal transition,EMT)，这也可能是PARD3基因调节神经管发育的另一个机制。

摘要： 目的：在课题组之前的病例对照研究中发现细胞极性基因PARD3的单核苷酸多态性和微缺失与中国山西省出生缺陷高发区的神经管畸形发生相关.因此,希望在细胞模型中进一步验证PARD3基因的功能,探究其在神经管发育中的可能机制.方法：在MDCK细胞中利用RNA干扰慢病毒抑制PARD3基因表达水平,用Real-TimePCR检测神经管发育相关基因的表达变化情况;同时利用细胞免疫荧光技术对相关蛋白进行亚细胞定位.结果：1、在慢病毒载体介导的PARD3基因干扰细胞模型中,PARD3基因抑制率达到75％.PAR复合物中PARD6表达无显著改变,PRKCI表达下调(P＜0.05).平面细胞极性信号通路(planar cell polarity,PCP)的基因celsr1表达下调(P＜0.05),Dishevelled2(Dvl2)表达显著上调(P＜0.05),而Frizzled表达无明显改变,已报道的与人神经管畸形发生相关基因vang/1表达也下调(P＜0.05)2、抑癌基因PTEN表达下调,差异有统计学意义.3、MDCK细胞爬片的免疫荧光染色中,观察到PARD3与细胞紧密连接的标志蛋白ZO-2分布一致.Vangl2和PAR复合物的成分之一aPKC亚细胞定位也主要在细胞膜上.结论：1、在细胞模型中，抑制PARD3基因的表达后PCP通路核心基因Vangl,Dvl2等表达水平显著改变，且免疫荧光染色结果也显示PARD3与己知的神经管畸形发生相关基因Vangl2空间分布相近，因此PARD3可能与PCP信号通路组分相互作用，从而调节神经胚的发育。2、抑制PARD3基因的表达后PTEN表达下调，而PTEN基因参与调节胚胎早期发育过程中的上皮细胞向间充质细胞的转变(epithelial-mesenchymal transition,EMT)，这也可能是PARD3基因调节神经管发育的另一个机制。

摘要： 目的：在课题组之前的病例对照研究中发现细胞极性基因PARD3的单核苷酸多态性和微缺失与中国山西省出生缺陷高发区的神经管畸形发生相关.因此,希望在细胞模型中进一步验证PARD3基因的功能,探究其在神经管发育中的可能机制.方法：在MDCK细胞中利用RNA干扰慢病毒抑制PARD3基因表达水平,用Real-TimePCR检测神经管发育相关基因的表达变化情况;同时利用细胞免疫荧光技术对相关蛋白进行亚细胞定位.结果：1、在慢病毒载体介导的PARD3基因干扰细胞模型中,PARD3基因抑制率达到75％.PAR复合物中PARD6表达无显著改变,PRKCI表达下调(P＜0.05).平面细胞极性信号通路(planar cell polarity,PCP)的基因celsr1表达下调(P＜0.05),Dishevelled2(Dvl2)表达显著上调(P＜0.05),而Frizzled表达无明显改变,已报道的与人神经管畸形发生相关基因vang/1表达也下调(P＜0.05)2、抑癌基因PTEN表达下调,差异有统计学意义.3、MDCK细胞爬片的免疫荧光染色中,观察到PARD3与细胞紧密连接的标志蛋白ZO-2分布一致.Vangl2和PAR复合物的成分之一aPKC亚细胞定位也主要在细胞膜上.结论：1、在细胞模型中，抑制PARD3基因的表达后PCP通路核心基因Vangl,Dvl2等表达水平显著改变，且免疫荧光染色结果也显示PARD3与己知的神经管畸形发生相关基因Vangl2空间分布相近，因此PARD3可能与PCP信号通路组分相互作用，从而调节神经胚的发育。2、抑制PARD3基因的表达后PTEN表达下调，而PTEN基因参与调节胚胎早期发育过程中的上皮细胞向间充质细胞的转变(epithelial-mesenchymal transition,EMT)，这也可能是PARD3基因调节神经管发育的另一个机制。

摘要： 本发明属于分子生物学，涉及一种用于干扰目标序列的RNAi片段及其制备方法，所述方法为根据目标序列得到一个可以形成颈环结构的理论序列，根据该理论序列设计并分段合成该序列以及该序列的反向互补序列，将分段合成的序列磷酸化，然后将磷酸化后的序列混合，变性，退火，最后与酶切后的RNAi表达载体连接即得到用于干扰目标序列的RNAi表达载体。本发明还涉及含有用于干扰目标序列的RNAi片段的重组载体及其制备方法，以及所述RNAi片段用于构建RNAi表达载体的用途。本发明所述方法用于构建RNAi表达载体时，能够简化实验步骤，节省实验时间，降低实验成本。

摘要： 本发明涉及一种利用RNAi技术提高大豆产量的方法，本发明发现核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示的序列编码的RNA分子能够抑制大豆FT家族基因的表达，该FT家族基因包括SEQ ID No.1至SEQ ID No.6所示的至少19个连续核苷酸和/或其互补序列。本发明首次利用RNAi技术获得了大豆FT家族基因的抑制表达株系，所述株系中大豆FT家族基因表达明显降低，大豆花期延迟5‑7天，单株产量增幅达50％以上，达到极显著水平。本发明为大豆高产新品种的培育提供了新的方法及资源，具有重要的理论及经济价值。

摘要： 本发明公开了一种RNAi技术联合小剂量5‑氨基酮戊酸（ALA）诱导肿瘤细胞原卟啉IX（PpIX）积聚的方法，是在外源性添加小剂量ALA的同时，利用RNAi基因沉默技术抑制亚铁螯合酶（FECH）的表达，从而使得外源性ALA所诱导产生的内源性PpIX能够更有效地积聚在肿瘤细胞。本发明还提供了上述RNAi所用的三个双链siRNA片段，对FECH具有很高的沉默效率。利用本发明的方法和双链siRNA片段，可在只使用小剂量外源性ALA的情况下，即可获得大量的PpIX并使其积聚在肿瘤细胞，实现肿瘤病灶的标示，尤其是对于早期肿瘤的标示，具有显著的意义。

摘要： 本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种利用RNAi技术和RNAi rescue原理制备突变型克隆载体的方法及应用，包括如下步骤：目的基因RNAi有效靶点设计和载体构建；RNAitarget mRNA区第三个碱基同义突变；多重PCR获得含同义突变的目的基因全长mRNA；突变型克隆载体构建；突变型克隆载体构建成功证明；回复功能实验。本发明的方法通过RNAi沉默基因观察功能变化情况，回复突变的载体与RNAi同时感染或转染目的细胞，一方面沉默内源目的基因，但不沉默外源目的基因，通过外源突变型载体表达与内源相同功能的蛋白，经过这样组合处理细胞功能不发生改变；或者将突变型载体导入RNAi沉默后，功能得到回复，证明功能表型是由此基因引起的。本发明为基因功能研究提供了一种新的模型和方法。

摘要： 本发明提供了一种用于干扰三疣梭子蟹性别决定基因表达的RNAi试剂及其RNAi方法和应用。所述RNAi试剂中包含形成一个双链区的一条有义链和一条反义链；所述有义链的序列如SEQ ID No.2所示，所述反义链的序列如SEQ ID No.3所示。本发明利用所述的RNAi试剂能够高效敲降Dmrt基因在三疣梭子蟹早期发育时期的表达，且对三疣梭子蟹的损害较小，进而能够应用于三疣梭子蟹性别决定机制解析和性别控制技术研究，该方法操作简单，有助于梭子蟹单性养殖技术的突破，因此，具有广阔的应用前景。

摘要： 描述了用于抑制α‑1抗胰蛋白酶(AAT)基因的RNAi物质，包含AAT RNAi物质的组合物，和使用方法。还公开了药物组合物，所述药物组合物包含一种或多种AAT RNAi物质以及能够体内递送一种或多种RNAi物质至肝细胞的一种或多种赋形剂。体内递送一种或多种AAT RNAi物质至肝细胞抑制AAT基因表达并治疗与AAT缺乏相关的疾病，如慢性肝炎，肝硬化，肝细胞癌，转氨酶升高，胆汁淤积，纤维化和暴发性肝衰竭。

摘要： 本发明提供一种用于干扰动物卵巢颗粒细胞中抑制素βA基因的RNAi干扰片段及RNAi干扰载体。RNAi干扰载体具有所述RNAi干扰片段；所述RNAi片段的序列为TGCCC TTGCT TTGGC TGAGA GGATT或CATCG GGACG GAGGGCAGAA ATGAA或GCTGC ACTTT GAGAT TTCCC AAGAA或CCATC CGTCT CTTTC AACAGCAGAA。本发明提供的RNAi干扰片段及RNAi干扰载体通过对绵羊卵巢颗粒细胞中抑制素基因进行沉默，间接影响发情相关激素和发情性状，有效的促使绵羊发情，解决了绵羊非繁殖季节不发情、不产羔的繁殖问题。

摘要： 本发明属于分子生物学，涉及一种用于干扰目标序列的RNA i片段及其制备方法，所述方法为根据目标序列得到一个可以形成颈环结构的理论序列，根据该理论序列设计并分段合成该序列以及该序列的反向互补序列，将分段合成的序列磷酸化，然后将磷酸化后的序列混合，变性，退火，最后与酶切后的RNAi表达载体连接即得到用于干扰目标序列的RNA i表达载体。本发明还涉及含有用于干扰目标序列的RNA i片段的重组载体及其制备方法，以及所述RNAi片段用于构建RNAi表达载体的用途。本发明所述方法用于构建RNAi表达载体时，能够简化实验步骤，节省实验时间，降低实验成本。

摘要： 本发明提供适宜于在体外或体内表达抗相关细胞、组织或器官内的一等位基因或多等位基因的y－x多重RNAi因子的组合物和方法，以治疗疾病。

摘要： 本发明公开了一种利用RNAi技术提高植物抗赤霉病的方法，根据几丁质合酶基因Chs7、蛋白激酶C基因Pkc和二型肌球蛋白基因Myo2筛选RNAi干扰区段，成功构建了4个用于抑制镰刀菌致病力的RNAi载体，将RNAi载体分别转化镰刀菌后，发现镰刀菌在生长、发育以及致病力等方面受到不同程度的抑制，这4个RNAi干扰片段对应的dsRNA能在体外抑制镰刀菌孢子生长，经dsRNA处理的小麦对赤霉病的抗性提高。