摘要:目的:本研究通过对猪瘟病毒(CSFV)感染后猪血管内皮细胞(SUVEC)的与氧化应激状态的相关指标的检测明确氧化应激在猪瘟病毒的致病机理中的作用,以期为揭示CSFV的致病机理提供科学资料,并为CSFV抗病毒药物的研发提供新的靶点和方向.方法:CSFV感染SUVEC后,通过荧光观察检测、原位比色检测和流式细胞术检测明确在感染后不同的时间点细胞内氧化应激的标志性产物ROS水平的变化,并通过Western blot和实时荧光定量PCR的方法明确与氧化应激相关的抗氧化应激蛋白和炎症相关蛋白的变化,进而通过抗氧化剂的应用明确氧化应激和CSFV的病毒复制之间的关系.结果:荧光观察检测、原位比色检测和流式细胞术检测结果表明CSFV在感染SUVEC 24h、48h和72h后,SUVEC内的ROS水平的显著升高,并且随着感染时间的延长ROS水平的升高越明显;实时荧光定量PCR检测发现,感染CSFV的SUVEC细胞内的抗氧化应激蛋白的水平明显变化,与空白细胞相比,接毒后24h后PRDX-6的mRNA水平升高了约3倍;接毒后48h,升高了约4倍;接毒后72h,PRDX-6的mRNA水平显著升高,将近20倍.SUVEC中的Trx mRNA水平在接种CSFV后升高了.相比接毒后24h的上调表达约2倍,接毒后48h、72h,Trx表达显著升高,分别为10倍、16倍,在接毒后24h,与对照组比较,HO-1的mRNA水平波动变小.接毒后48h,HO-1的mRNA水平有所下降,约0.3倍;接毒后72h,HO-1的mRNA水平升高至4倍.由此可见,CSFV可以调节抗氧化应激蛋白的mRNA水平的变化,但是不同的抗氧化应激蛋白的调节作用有所不同,这有可能和各个蛋白在细胞内具体的功能的不同有关.进一步的检测表明抗炎因子PPAR的mRNA水平下降而促炎因子.COX-2 mRNA水平和蛋白水平显著升高说明CSFV感染对SUVEC有明显的促炎作用.抗氧化剂NAC、GSH、BHA和姜黄素加入CSFV感染的SUVEC培养基后,CSFV基因的复制下降.说明氧化应激的发生和CSFV病毒的复制关系密切。结论:综上所述,本研究首次通过试验发现CSFV感染可以引起SUVEC发生氧化应激,有助于炎症的发生,并且抗氧化剂的添加可以抑制CSFV病毒的复制,本研究为明确CSFV致病机制提供了新的科学资料.