摘要：目的:羊栖菜俗名为海大麦、海茜菜、海菜芽、鹿角尖等,为褐藻门马尾藻科植物.羊栖菜多糖是从羊栖菜全藻中提取分离得到的多糖成分,是羊栖菜水提液的主要成分之一.我们曾经观察了SFPS的体内、体外抗肿瘤作用,并发现其对人胃癌SGC-7901细胞具有显著的抑制作用,且其机制与诱导肿瘤细胞凋亡相关.本研究观察SFPS对人胃癌SGC-7901细胞内[Ca2+]i变化的影响,进一步揭示其诱导肿瘤细胞凋亡的机制.方法:人胃癌细胞系SGC-7901常规复苏后,培养于含10﹪小牛血清RPMI-1640培养液中,在37°C,5﹪C02及95﹪湿度的CO2培养箱中培养,2～3d传代一次.用RPMI-1640培养液调细胞至3×106/ml,接种于培养皿中培养48h后,弃去培养液并用PBS及无钙台式液洗2次,然后加入1ml无钙台式液,于1ml无钙台式液中加入100μL含Fluo-3/AM(1mg/mL),37℃避光孵育1h,弃上清液后用无钙台式液洗并最终悬浮于1ml无钙台式液.将负载Fluo-3/AM的SGC-7901细胞置于激光共聚焦显微镜载物台上,选定观察目标,按顺序观察未给药细胞、加入100μL(50μg/mL)SFPS后细胞和弃去药液再加入无钙台式液后细胞内荧光强度的变化,即[Ca2+]i水平,每一阶段观察时间均为500s,实验条件:激发激光488nm,Pinhole500μm,扫描激光强度30﹪,PMTl30﹪,物镜40X.结果本实验采用激光共聚焦技术在其Timeseries程序下对给药前后SGC-7901人胃癌细胞每隔50s进行-次扫描,观测细胞内[Ca2+]i的变化,结果:发现给药前SGC-7901细胞内[Ca2+]i处于一个相对恒定的浓度,FI值约为600;给药后,[Ca2+]i迅速升高至700以上然后又降低至570～580,这表明SFPS作用于SGC-7901细胞后,可引起肿瘤细胞内Ca2+浓度升高,细胞内Ca2+具有两个来源:(1)细胞外钙内流;(2)细胞内钙库释放.由于SGC-7901细胞处理过程中已用无钙台式液处理,细胞外无Ca2+,因此细胞内Ca2+的升高只能来源于细胞内钙的释放.而[Ca2+]i在升高后又降低,则可认为[Ca2+]i升高后,激活了细胞凋亡机制,随着凋亡的发生,生物膜的一些生物学特性将发生一些改变,而引起细胞内Ca2+外流,从而使[Ca2+]i在升高到一定程度后又降低.这一结论也可从加入CaCl2后[Ca2+]i后FI值升高至710这-改变得以验证,CaCl2加入后,细胞内[Ca2+]i又升高,表明加入CaCl2后,细胞外有Ca2+,而抑制了加CaCl2前细胞内Ca>的顺浓度梯度转运,此时细胞外Ca2+大于细胞内Ca2+,而使Ca2+由细胞外流入细胞内,进而细胞内Ca2+再一次升高,所以以上的推断是合理的.结论:SFPS能通过引起肿瘤细胞内钙库Ca2+的释放而升高肿瘤细胞内Ca2+浓度,这可能是SFPS诱导肿瘤细胞凋亡进而达到抗肿瘤作用的主要机制.
