一种调控德国鸢尾开花的关键基因IgBBX7及其表达蛋白和应用

摘要

本发明公开了一种调控德国鸢尾开花的关键基因

说明书

技术领域

本发明属于植物基因工程技术领域，涉及一种调控德国鸢尾开花的关键基因

背景技术

开花是植物生长发育过程中至关重要的环节，是植物由营养生长向生殖生长的重要转折点，对植物的遗传和繁衍能力起决定性作用，因此植物的成花分子机理研究近年来成为植物功能研究的一个热点。目前已知植物开花途径主要有春化路径、光周期路径、自主路径、赤霉素路径和年龄路径。

德国鸢尾（

BBX蛋白是锌指蛋白家族的一个亚家族，是植物生长和发育过程中的关键调控因子，其介导基因表达调控和蛋白互作，参与了开花调控、光形态建成及响应植物避荫反应及生物胁迫和非生物胁迫等过程，但其在德国鸢尾中的功能尚未见报道。

发明内容

针对现有技术存在的上述问题，本发明的目的是提供一种调控德国鸢尾开花的关键基因

本发明的又一目的在于提供上述调控德国鸢尾开花的关键基因

本发明的目的可以通过以下技术方案实现：

一种德国鸢尾

所述的德国鸢尾

用于克隆获取

IgBBX7-F：5′-ATGGGTTCCCTTTGCGACTTCTGTG-3′

IgBBX7-R：5′-TCCACTCTGCCAGACAAGAAGCTAT-3′。

含有所述德国鸢尾

本发明还提供了一种

相比于现有技术，本发明的有益效果为：

本发明提供了一个在德国鸢尾中调控开花时间的新基因

附图说明

图 1为

图 2为

图 3为

图 4为

具体实施方式

以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。

植物材料：

基因克隆所用的德国鸢尾叶片采集于江苏省中国科学院植物研究所鸢尾种质资源圃。亚细胞定位所用烟草为本氏烟草，基因功能验证所用的拟南芥为哥伦比亚（

菌株和载体：

大肠杆菌

实施例1：

（1）德国鸢尾

采用TaKaRa公司的MiniBEST Plant RNA Extraction Kit试剂盒提取德国鸢尾叶片总RNA，然后采用TaKaRa公司快速反转录试剂盒将1000 ng RNA反转录为cDNA。根据序列信息设计特异引物，结合PCR扩增目的基因的全长序列。

上游引物IgBBX7-F：5′-ATGGGTTCCCTTTGCGACTTCTGTG-3′；

下游引物IgBBX7-R：5′-TCCACTCTGCCAGACAAGAAGCTAT-3′。

以反转录的cDNA为模板，进行PCR反应，产物连接到pMD19-T载体，转化

（2）IgBBX7转录激活活性分析

将IgBBX7蛋白全长提交至NCBI网站进行序列分析，利用该网站domain &structure保守结构域查找功能寻找该基因的保守结构域，发现其N端有两个B-box结构域，C端有一个CCT结构域（图1）。根据结构域所在位置设计引物，构建了其全长、IgBBX7N、IgBBX7-CCT和IgBBX7-C段的pGBKT7载体，并将这四种载体以及pGBKT7空载体分别与pGADT7空载按照Clontech的酵母转化试剂盒的操作方法共同转化酵母感受态

以上加接头的引物序列具体如下（小写字母为载体同源臂）：

IgBBX7-BD-F：5′-ggaattccaatatggaattccATGAAGTCTAATCCAGGCAACAAA-3′

IgBBX7-BD-R：5′-ataagaatgcggccgctaaactatCGGTTTTTCTTCTTTTCCCTGTA-3′（用于全长扩增）

IgBBX7-BD-F1：5′-ggaattccaatatggaattccATGAAGTCTAATCCAGGCAACAAA-3′

IgBBX7-BD-R1：5′-ataagaatgcggccgctaaactatATGGCCATTCCAATCACAGTTGTGG-3′（用于N段扩增）

IgBBX7-BD-F2：5′-ggaattccaatatggaattccATGAAGTCTAATCCAGGCAACAAA-3′

IgBBX7-BD-R2：5′-ataagaatgcggccgctaaactatGTTAGCTGCAGGGAATGAAGAGCA-3′（用于CCT段扩增）

IgBBX7-BD-F3：5′-ggaattccaatatggaattccAGAGACAGTGCTGTTATGCGTTACA-3′

IgBBX7-BD-R3：5′-ataagaatgcggccgctaaactatGCCTGCCTTCACAAATCTGCCTTTC-3′（用于C段扩增）

（3）IgBBX7蛋白亚细胞定位

利用加接头的引物进行

以上加接头的引物序列具体如下（小写字母为载体同源臂）：

IgBBX7-GFP-F：5′-gactagtcATGGGTTCCCTTTGCGACTTCTGTG-3′

IgBBX7-GFP-R：5′-cgggatcccgTCCACTCTGCCAGACAAGAAGCTAT-3′。

（4）

采用花粉管侵染法将含pCAMBIA1305-

检测引物序列如下：

IgBBX7-test-F：5′-AGGGAACAGCAGTAATGGGG-3′

IgBBX7-test-R：5′-GCTTTGTTGCCTGGATTAGACT-3′。

核苷酸序列：

atgggttccctttgcgacttctgtggggagcaaagatctatggtctactgccgatcagatgctgctcgcttgtgcttgtcatgtgaccgcaacgtccactctgccaatgctctatctagccgccactctcgaactcttttatgtgaccgctgcttctcacaacctgccattgctcgctgcattgaggaaaacatctcactttgccacaactgtgattggaatggccataatgactcctcagcttcgggacataaaaggcaggcaatcaactgctactcaggctgcccatcagcggcagagctctctagaatatggtccttcgttacggaattccctcagattaatgattctaattgcgaggaggaaatgggtcttatgagcatcagtgaaaactatgtcagcacttgttggggggcgccagggaacagcagtaatggggatttagccatgaatgatctgaataacatgaataaaaatagtccttggattggttcatcttcttcatctgcagtaaatgctatggcatgcagtgcaaatcagcaaactggttctctggagtcaactacacctaagctatgtggtactgagatgaaaaatcctggtatctgcaagaatgatttctttgaagatttcacagtagatgatgttgatttaacctttgagaactatgaagaactttttggcggacctcatgacaactcgaagcagctatttgatgatactgagattgatgatagcttttttgatatgaaggaaatgtctgctggtaattctaactgccagggtgaatttggtgcagaggcatcatcttctcggcatgtcaaatccagccagccagcatgtagcaatgcagtttctgctgattccatgaagtctaatccaggcaacaaagcagatcctagtgtatgttttcctgcaaggaaagcttattccagtgtatccctttccttttctgggttgactggtgagagtagtgccggagaccatgaaatgtcatcagtgatgctcacgggcgagcctccgtggtttcctactggtaatgagtgctcttcattccctgcagctaacagagacagtgctgttatgcgttacagggaaaagaagaaaaaccgcaagtttgataagaaaataaggtacgagtctcgcaaagccagggcggatgtgcgaagacgggtgaaaggcagatttgtgaaggcaggcgacgcttacgactacgatccactctgccagacaagaagctat 1242 bp

氨基酸序列：

mgslcdfcgeqrsmvycrsdaarlclscdrnvhsanalssrhsrtllcdrcfsqpaiarcieenislchncdwnghndssasghkrqaincysgcpsaaelsriwsfvtefpqindsnceeemglmsisenyvstcwgapgnssngdlamndlnnmnknspwigsssssavnamacsanqqtgslesttpklcgtemknpgickndffedftvddvdltfenyeelfggphdnskqlfddteiddsffdmkemsagnsncqgefgaeasssrhvkssqpacsnavsadsmksnpgnkadpsvcfparkayssvslsfsgltgessagdhemssvmltgeppwfptgnecssfpaanrdsavmryrekkknrkfdkkiryesrkaradvrrrvkgrfvkagdaydydplcqtrsy 414 bp

序列表

<110> 江苏省中国科学院植物研究所

<120> 一种调控德国鸢尾开花的关键基因IgBBX7及其表达蛋白和应用

<160> 1

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 3

<211> 1242

<212> DNA

<213> Iris germanica

<400> 3

atgggttccc tttgcgactt ctgtggggag caaagatcta tggtctactg ccgatcagat 60

gctgctcgct tgtgcttgtc atgtgaccgc aacgtccact ctgccaatgc tctatctagc 120

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