小分子肽在制备治疗或预防慢性肾性蛋白尿的药物中的应用

摘要

本发明公开了一种小分子肽在制备治疗或预防慢性肾性蛋白尿的药物中的应用。属于生物制药技术领域，本发明叙述了一种从虫类中药桑螵蛸中提取获得的肽类药物在治疗或预防慢性肾性蛋白尿的药物中的应用。本发明能够改善肾小球滤过膜损伤导致的肾小球性蛋白尿；改善因感染、中毒所致肾小管损伤等疾病导致的肾小管性蛋白尿；改善血中异常蛋白产生过多导致的溢出性蛋白尿；改善肾小管代谢产生的蛋白质组织分解破坏导致的组织性蛋白尿；改善因炎症和药物刺激泌尿系统分泌的蛋白质异常导致的组织性蛋白尿；改善因剧烈运动、发热、受寒及精神紧张引起的一过性蛋白尿从而导致的生理性蛋白尿。本发明对于慢性肾性蛋白尿类疾病的治疗有着显著的疗效。

说明书

技术领域

本发明涉及生物制药技术领域，具体的是，涉及了一种小分子肽在制备治疗或预防慢性肾性蛋白尿的药物中的应用。

背景技术

慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)是严重危害人类健康的重大疾病之一，具有发病率高、知晓率低、医疗费用高和合并心血管时间危险性高等特点。我国约10.8％成人患有CKD。CKD在早期通常没有明显的症状，但当进展至中晚期时，随着肾脏功能下降，体内毒素积累过多导致出现一系列尿毒症的症状，需要进行透析甚至肾移植，严重影响患者生存质量，同时带来巨大的经济负担。

蛋白尿是CKD早期的一个重要标志，而且也是促进CKD进展至终末期肾病(end-stage renal disease,ESRD)的独立危险因素。蛋白尿既是肾小球损伤的结果，更是继发性肾小管损伤的首要原因，在肾小球疾病向ESRD发展中起着举足轻重的作用。持续大量蛋白尿引起肾小球损伤，增加了白蛋白滤过，使肾小管吸收白蛋白负荷增加，导致肾小管间质纤维化的进行性发展，最终导致ESRD。2012年肾脏病改善全球预后组织(KDIGO)发布的慢性肾脏疾病新分期标准中，在原有肾小球滤过率(eGFR)分期的基础上，将eGFR和尿蛋白结合，制定了新的分期方法，这种新的分期方法对肾脏疾病的终点事件和死亡有更强的预测作用，也充分体现尿蛋白在肾病病情进展中的重要作用。研究表明，蛋白尿维持在小于1g/d，10年内发生ESRD的危险性小于5％，蛋白尿维持在1-2g/d，10年内发生ESRD的危险性在5-20％，蛋白尿维持在2-3g/d，10年内发生ESRD的危险性在20-40％，蛋白尿大于3g/d，10年内发生ESRD的危险性在40-60％[6]。虽然目前尚不能完全证明降低蛋白尿是一个治疗靶点，但对于大多数存在长期大量蛋白尿患者，控制大量蛋白尿引起的肾损伤并进展至纤维化阶段是阻止或延缓CKD进展至ESRD关键治疗策略之一，具有重大意义。

阿霉素肾病(adriamycin nephropathy)是用来模拟人体肾脏疾病所建立的一种药理学实验模型，其方法是通过使用阿霉素(adriamycin,ADR)干预动物或体外细胞，使其表现出与患者肾脏疾病相似的病理特征和临床表现。此模型以高蛋白尿、低蛋白血症、高血脂及水肿为特征，其病理过程为肾小管间质炎症和纤维化，继而肾小球硬化和肾功能衰竭。

发明内容

针对上述问题，本发明提供了一种小分子肽在制备治疗或预防慢性肾性蛋白尿的药物中的应用。

本发明的技术方案是：本发明所述的小分子肽在制备治疗或预防慢性肾性蛋白尿的药物中的应用。

进一步的，所述小分子肽用于改善肾小球滤过膜损伤导致的肾小球性蛋白尿。

进一步的，所述小分子肽用于改善因感染、中毒所致肾小管损伤导致的肾小管性蛋白尿。

进一步的，所述小分子肽用于改善因继发性肾小球疾病史导致的肾小管性蛋白尿。

进一步的，所述小分子肽用于改善血中异常蛋白产生过多导致的溢出性蛋白尿。

进一步的，所述小分子肽用于改善肾小管代谢产生的蛋白质组织分解破坏导致的组织性蛋白尿。

进一步的，所述小分子肽用于改善因炎症和药物刺激泌尿系统分泌的蛋白质异常导致的组织性蛋白尿。

进一步的，所述小分子肽用于改善因剧烈运动、发热、受寒及精神紧张引起的一过性蛋白尿从而导致的生理性蛋白尿。

进一步的，一种具有缓解肾性蛋白尿的活性小分子肽，具有氨基酸序列Tyr-Glu-Val-Glu-Asp-Tyr-Arg,或其药学上可以接受的盐

进一步的，所述的小分子肽序列在上述的序列基础上，一个或多个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有相同功能的肽，或该肽药学上可以接受的盐。

进一步的，所述药物由所述寡肽和药学上可接受的载体组成；

所述药学上可接受的载体，其可能具有一定生理活性，但该成分的加入不会改变上述药物组合物在疾病治疗过程中的主导地位，而仅仅发挥辅助功效，这些辅助功效仅仅是对该成分已知活性的利用，是医药领域惯用的辅助治疗方式；

若将上述辅助性成分与本发明药物组合物配合使用，仍然应属于本发明保护的范围。

进一步的，所述药学上可接受的载体为稀释剂、载剂或赋形剂。

进一步的，所述药物为注射制剂或口服制剂。

肽类药物在小分子药物和生物制剂之间占据着独特的药学空间；从2000年到2019年，FDA批准的肽类药物有52个，疾病涉及糖尿病、癌症、骨质疏松症等；肽类药物由于其独特的性质，目前除了已经上市的80个品种的肽类药物，仍有约150个在进行临床研究及400-600个处于临床前研究阶段；肽类药物具有毒副作用小；生产工艺简单等特点；YR-7(序列YEVEDYR)从虫类中药桑螵蛸中提取获得，可抑制肾脏组织损伤和肾脏纤维化，降低蛋白尿，延缓慢性肾脏病的病程。

本发明的有益效果是：本发明所述小分子肽能够改善肾小球滤过膜损伤导致的肾小球性蛋白尿；能够改善因感染、中毒所致肾小管损伤或者因继发性肾小球疾病史导致的肾小管性蛋白尿；改善血中异常蛋白产生过多导致的溢出性蛋白尿；改善肾小管代谢产生的蛋白质组织分解破坏导致的组织性蛋白尿；能够改善因炎症和药物刺激泌尿系统分泌的蛋白质异常导致的组织性蛋白尿；能够改善因剧烈运动、发热、受寒及精神紧张引起的一过性蛋白尿从而导致的生理性蛋白尿。对于慢性肾性蛋白尿类疾病的治疗有着显著的疗效。

附图说明：

图1是本发明的实施例中YR-7减轻阿霉素诱导的小鼠肾损伤对比图；

图2是本发明的实施例中YR-7减轻阿霉素诱导的HK-2细胞损伤的示意图；

图3是本发明的实施例中YR-7STZ+HFD诱导的小鼠肾损伤的对比图。

具体实施方式

为了更清楚地说明本发明的技术方案，下面结合附图对本发明的技术方案做进一步的详细说明：

如图1-3所示，图1中，图(a)、(b)为YR-7可降低小鼠血浆中的肌酐、尿素氮水平的对比图；图(c)为YR-7可上调小鼠血浆白蛋白的水平的示意图；图(d)、(e)及(f)为YR-7可降低小鼠尿液中肌酐、尿素氮、尿蛋白水平的对比图；图(g)为YR-7可显著改善小鼠肾脏组织病变示意图；(其中，*p＜0.05，**p＜0.01，*与模型组相比；#p＜0.05，##p＜0.01，#与空白组相比)；图2中，图(a)、(b)、(c)为YR-7可显著降低HK-2细胞Fibronectin、α-SMA及CollagenⅠ的蛋白表达水平的对比图；图(d)为IF验证YR-7可显著降低HK-2细胞Fibronectin、α-SMA及CollagenⅠ的蛋白表达的示意图；(其中，*p＜0.05，**p＜0.01，*与模型组相比；#p＜0.05，##p＜0.01，#与空白组相比)；图3中，图(a)、(b)为YR-7可降低小鼠血浆中的肌酐、尿素氮水平的对比图；图(c)为YR-7可上调小鼠血浆白蛋白的水平的对比图；图(d)、(e)及(f)为YR-7可降低小鼠尿液中肌酐、尿素氮、尿蛋白水平的示意图；图(g)为YR-7可显著改善小鼠肾脏组织病变的示意图；(其中，*p＜0.05，**p＜0.01，*与模型组相比；#p＜0.05，##p＜0.01，#与空白组相比)。

如图所述；本发明所述的小分子肽在制备治疗或预防慢性肾性蛋白尿的药物中的应用。

进一步的，所述小分子肽用于改善肾小球滤过膜损伤导致的肾小球性蛋白尿；

肾小球性蛋白尿：由于炎症、免疫、代谢等因素引起肾小球滤过膜损伤；使电荷屏障减弱或滤过模孔径增大甚至断裂。血浆蛋白特别是白蛋白从肾小球大量滤过。

进一步的，所述小分子肽用于改善因感染、中毒所致肾小管损伤导致的肾小管性蛋白尿；所述小分子肽用于改善因继发性肾小球疾病史导致的肾小管性蛋白尿；

肾小管性蛋白尿：因感染、中毒所致肾小管损伤或继发于肾小球疾病史；肾小球滤过膜可正常或不正常。肾小管重吸收蛋白的能力降低，从而引起肾小管性蛋白尿。

进一步的，所述小分子肽用于改善血中异常蛋白产生过多导致的溢出性蛋白尿；

溢出性蛋白尿：肾小球滤过功能和肾小管重吸收功能均正常；血中异常蛋白产生过多，经肾小球滤过而形成溢出性蛋白尿。

进一步的，所述小分子肽用于改善肾小管代谢产生的蛋白质组织分解破坏导致的组织性蛋白尿；所述小分子肽用于改善因炎症和药物刺激泌尿系统分泌的蛋白质异常导致的组织性蛋白尿；

组织性蛋白尿：右尿液形成过程中，肾小管代谢产生的蛋白质组织分解破坏的蛋白质以及炎症和药物刺激泌尿系统分泌的蛋白质形成的蛋白尿称为组织性蛋白尿。

进一步的，所述小分子肽用于改善因剧烈运动、发热、受寒及精神紧张引起的一过性蛋白尿从而导致的生理性蛋白尿；

生理性蛋白尿：剧烈运动、发热、受寒、精神紧张等因素也可以导致一过性蛋白尿。

具体的；以下通过具体实施方式对发明内容做进一步详细说明：

实施例一

小分子肽YR-7对阿霉素诱导的小鼠肾损伤的作用；

实验动物：雄性Balb/c小鼠，体重22-24g，SPF级；

实验方案：小鼠适应性饲养5d后，采用数字表法将实验动物分为对照组、模型组、和YR-7(低、中、高)，每组8只；对照组尾静脉注射生理盐水，模型组及给药组尾单次静脉注射阿霉素(15mg/kg)，一周后收集尿液，检测尿液中肌酐、尿素氮及尿蛋白，确证模型建立成功；YR-7组于第二周开始分别灌胃给予10、20、40mg/kg，给药周期3周；于给药第三周结束后，所有小鼠收集24h尿液，眼眶取血，室温静置30min后，2500g离心15min，收集血浆，根据肌酐、尿素氮及总蛋白试剂盒说明检测血液及尿液中相关指标；取肾脏，用中性多聚甲醛固定，常规脱水包埋，石蜡切片后，采用HE染色，显微镜观察肾脏的组织病理学变化。

实验结果：YR-7对慢性肾损伤小鼠血浆及尿液中肌酐、尿素氮、尿蛋白及白蛋白水平有显著改善作用，病理切片显示模型组肾组织内可见大面积肾小管凝固性坏死，细胞结构消失，组织结构破坏，部分肾小管蛋白管型，管腔内可见粉红色蛋白黏液渗出，肾小管纤维化；给予YR-7后，肾脏病理评分显著降低。

实施例二

小分子肽YR-7对阿霉素诱导的HK-2细胞损伤的作用；

实验材料：HK-2细胞

实验方案：

(1)、将培养好的人肾小管上皮细胞以1.5×10

(2)、将培养好的人肾小管上皮细胞以1.5×10

实验结果：WB及IF均表明YR-7可显著降低纤维化相关蛋白α-SMA，Fibronectin,CollagenⅠ表达水平。

实施例三

小分子肽YR-7对STZ+HFD诱导的小鼠肾损伤的作用；

实验动物：雄性C57BL/6J，体重22-24g，SPF级

实验方案：采用腹腔注射链脲佐菌素(STZ)合并高脂饮食(HFD)制备糖尿病肾病小鼠模型；8周龄雄性C57BL/6J小鼠给予HFD或正常饲料4周，禁食12h后腹腔注射STZ(120mg/kg)或溶剂对照柠檬酸缓冲液，一周后血糖水平高于16.7mmol/L表示糖尿病模型建立成功；给予YR-7(10、20、40mg/kg)，每组8只，连续给药8周，同时继续HFD或正常饲料喂养；实验结束后收集血液及肾脏。

实验结果：建立了STZ+HFD诱导的小鼠模型，证实YR-7对其血浆及尿液中肌酐、尿素氮、尿蛋白及白蛋白水平有显著改善作用，PAS、Masson病理切片显示桑螵蛸提取物可显著降低肾脏组织病理评分，改善组织结构。

最后，应当理解的是，本发明中所述实施例仅用以说明本发明实施例的原则；其他的变形也可能属于本发明的范围；因此，作为示例而非限制，本发明实施例的替代配置可视为与本发明的教导一致；相应地，本发明的实施例不限于本发明明确介绍和描述的实施例。