一种采用灰霉病菌分生孢子实现高效遗传操作的方法

摘要

本发明公开了一种采用灰霉病菌分生孢子实现高效遗传操作的方法，包括下列步骤：Botrytis cinerea B05.10菌株转接菌株于新的培养基中，获得分生孢子；Ste12转录因子进行了基因敲除，采用Pzp‑hph‑knock质粒为骨架，通过酶切连接，构建BcSte12基因敲除的质粒载体；将质粒载体转入到AGL1农杆菌菌株中；制备分生孢子悬浮液，过滤去除菌丝，获得液生孢子；将侵染菌液和液生孢子进行等体积混合，获得混合液；将诱导共培养步骤中培养完成的硝酸纤维素膜转移至含有潮霉素与头孢霉素的PDA固体平板上；取菌块提取基因组，用验证引物进行PCR验证，待验证完成对平板上相应编号菌落进行多次传代培养，并进一步进行Southern blot验证。本发明通过将分生孢子经液体培养，极大提高了遗传转化效率。