HDHD5-AS1长链非编码RNA水平检测试剂在制备卵巢癌干性诊断试剂中的应用

摘要

本发明公开了HDHD5‑AS1长链非编码RNA水平检测试剂在制备卵巢癌干性诊断试剂中的应用。本发明提供了一种新的通过检测HDHD5‑AS1长链非编码RNA水平判断卵巢癌的干性的方法。本发明可用于判断卵巢癌的恶性程度。

说明书

技术领域

本发明涉及分子诊断领域，具体涉及一种HDHD5-AS1长链非编码RNA水平检测试剂在制备卵巢癌干性诊断试剂中的应用。

背景技术

卵巢癌(Ovarian cancer,OC)是最常见且最致命的妇科恶性肿瘤之一，近年来，随着治疗方式的发展，卵巢癌患者的5年生存率有所提高，但也仅有30％左右。卵巢癌患者生存率低的原因主要在于早期诊断方法和合理治疗方案的缺乏。一方面，卵巢癌缺乏典型的早期症状，缺乏早期筛查标志物，导致大部分患者诊断时已是晚期，预后较差。另一方面，由于卵巢癌目前缺乏合理的系统性治疗方案，部分卵巢癌患者经过治疗后仍发生复发或转移，导致卵巢癌患者的5年生存率难以提高。

卵巢癌恶性程度的判断对卵巢癌的治疗有重要意义。卵巢癌恶性程度与卵巢癌发生复发及转移的概率呈正相关，判断卵巢癌的恶性程度有利于推测卵巢癌发生复发或转移的可能性，以做好及时的预防。

判断卵巢癌的干性程度是判断卵巢癌恶性程度的重要方法，卵巢癌的干性程度是指卵巢癌组织或腹水中卵巢癌细胞的干性程度。卵巢癌细胞的干性程度与分化程度呈负相关，与细胞的转移、耐药的发生概率呈正相关，因此，判断卵巢癌干性程度有助于判断卵巢癌恶性程度。本研究涉及的HDHD5-AS1(全称HDHD5 antisense RNA1)是一种长链非编码RNA，申请人研究发现HDHD5-AS1的表达水平与卵巢癌患者的生存能力成正比，与卵巢癌的干性程度成反比，因此，可作为标志物判断卵巢癌的干性。所以，检测HDHD5-AS1表达水平的试剂可应用于判断卵巢癌的干性程度，以判断卵巢癌的恶性程度。本发明将有助于提高卵巢癌的诊疗水平。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种能一种HDHD5-AS1长链非编码RNA水平检测试剂在制备卵巢癌干性诊断试剂中的应用。

为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种HDHD5-AS1长链非编码RNA水平检测试剂在制备卵巢癌干性诊断试剂中的应用。

本发明优选的，所述检测HDHD5-AS1表达水平的试剂指能够检测HDHD5-AS1 RNA水平的试剂。

本发明优选的，所述HDHD5-AS1全称描述为HDHD5 antisense RNA 1，在Pubmed数据库中的ID为100130717，在人类染色体中的位置为Chromosome 22-NC_000022.11(17159389-17165445)。

本发明优选的，HDHD5-AS1表达水平指细胞中HDHD5-AS1的RNA水平。

本发明优选的，所述检测HDHD5-AS1 RNA水平的方法包括探针法、RT-PCR法或测序法。

更优选的，所述检测HDHD5-AS1 RNA水平的方法为RT-PCR法，所述RT-PCR使用的引物如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。

本发明优选的，所述卵巢癌干性程度高应代表卵巢癌组织或腹水中的卵巢癌细胞的干性程度高。

本发明优选的，所述卵巢癌干性程度高应代表卵巢癌恶性程度高。

本发明优选的，所述卵巢癌干性程度高应代表该类患者平均生存期短。

本发明优选的，所述卵巢癌干性程度高应代表卵巢癌细胞中的卵巢癌干性标志物表达水平高。

本发明优选的，所述卵巢癌干性标志物为NOTCH2、CD9、TPO、CD29、DKK2、BMI1 中的一个或多个。

更优选的，所述干性判断公式为CT

本发明的有益效果在于：本发明公开了一种检测HDHD5-AS1表达水平的试剂，能够应用于制备判断卵巢癌的干性程度的试剂，可选择的检测方法多样，可实现各临床分期卵巢癌患者的肿瘤干性程度判断，能够指导卵巢癌病人的治疗方案选择，能够帮助判断卵巢癌的复发转移概率，从而实现提前预防，有助于卵巢癌患者的临床管理，具有良好的市场前景。

附图说明

为了使本发明的目的、技术方案和有益效果更加清楚，本发明提供如下附图进行说明：

图1为HDHD5-AS1表达水平与卵巢癌患者生存的相关性分析；

图2为HDHD5-AS1表达水平鉴别卵巢癌患者5年内死亡率的准确性分析；

图3为根据HDHD5-AS1表达水平判断体外培养卵巢癌细胞干性程度的准确性分析。

具体实施方式

下面结合附图和具体实施例对本发明作进一步说明，以使本领域的技术人员可以更好的理解本发明并能予以实施，但所举实施例不作为对本发明的限定。

实施例1、HDHD5-AS1低表达预示卵巢癌病人不良预后

从TCGA(The Cancer Genome Atlas)数据库下载卵巢癌样本的HDHD5-AS1表达数据和相应的患者生存数据，通过Kaplan-meier公式分析HDHD5-AS1的表达水平与卵巢癌患者生存的相关性，结果如图1所示，HDHD5-AS1高表达组患者与HDHD5-AS1低表达组患者的生存差异具有统计学意义

实施例2、HDHD5-AS1高表达鉴定卵巢癌患者5年内死亡的准确性

从TCGA(The Cancer Genome Atlas)数据库下载卵巢癌样本的HDHD5-AS1表达数据和相应的患者生存数据，根据患者的生存时间将患者分为生存时间＞5年组和生存时间小＜5年组，根据两组患者的HDHD5-AS1的表达水平绘制ROC曲线，结果如图2所示，统计结果

实施例3、HDHD5-AS1的表达水平判断体外培养卵巢癌细胞干性程度的准确性

培养Caov-3、SKOV3、A2780、Ovcar4、ES2、Ovcar8、Caov-4、Nihovcar3、Heya8、IGROV1 卵巢癌细胞，通过悬浮培养方式分离培养卵巢癌细胞微球，通过传统贴壁培养方式培养贴壁卵巢癌细胞，分别检测每种细胞的HDHD5-AS1的RNA水平，利用公式CT

RT-PCR检测使用的引物如下：

HDHD5-AS1 F：5′-agacccttagtgatgttcagtcc-3′(SEQ ID NO.1)；

HDHD5-AS1 R：5′-ggcgtcagcaggtttacagaa-3′(SEQ ID NO.2)；

GAPDH F：5’-ctgggctacactgagcacc-3’(SEQ ID NO.3)；

GAPDH R：5’-aagtggtcgttgagggcaatg-3’(SEQ ID NO.4)。

以上所述实施例仅是为充分说明本发明而所举的较佳的实施例，本发明的保护范围不限于此。本技术领域的技术人员在本发明基础上所作的等同替代或变换，均在本发明的保护范围之内。本发明的保护范围以权利要求书为准。

序列表

<110> 重庆大学附属肿瘤医院

<120> HDHD5-AS1长链非编码RNA水平检测试剂在制备卵巢癌干性诊断试剂中的应用

<160> 4

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial sequences)

<400> 1

agacccttag tgatgttcag tcc 23

<210> 2

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial sequences)

<400> 2

ggcgtcagca ggtttacaga a 21

<210> 3

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial sequences)

<400> 3

ctgggctaca ctgagcacc 19

<210> 4

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial sequences)

<400> 4

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