用于杂草控制的组合物及方法

摘要

本披露尤其涉及用于杂草控制的方法和组合物，例如，通过向包含作物植物和杂草的场所施用杂草控制量的包含SDPS抑制性除草剂的杀有害生物剂组合物来在所述场所处选择性地控制杂草的方法，其中修饰所述作物植物，使得它们包含为所述作物植物提供针对所述抑制SPDS的除草剂的耐受性的SDPS。组合物还尤其包括适用于在所述方法中使用的重组多核苷酸。

说明书

相关申请的交叉引用

本申请要求2019年5月20日提交的美国专利申请号62/850248的优先权，将其全部内容通过援引并入本文。

序列表

本申请附有一个序列表，该序列表定名为81880-WO-REG-ORG-P-1_SEQ LIST_ST25.txt，创建于2020年3月15日，大小为大约1,533kb。本序列表通过援引以其全文并入本文。本序列表随同此申请经由EFS-Web提交，并且符合37C.F.R.§1.824(a)(2)-(6)和(b)。

技术领域

本披露总体上涉及用于控制作物中的杂草的组合物和方法，其包括产生对茄呢基二磷酸合酶(Solanesyl Diphosphate Synthase，SDPS)抑制性除草剂的除草剂耐受性的组合物和方法。

背景技术

已广泛报道了使用除草剂耐受性转基因将作物工程化以变得耐受除草剂并且从而将某些除草剂的使用扩展到另外的作物中。可以简单地通过编码除草剂靶蛋白的基因的过表达和/或通过编码改变的并且从而对除草剂不敏感的靶位点的转基因的表达(例如，在草甘膦耐受性的情况下，草甘膦不敏感的5-烯醇式丙酮莽草酰-3-磷酸合酶)和/或将除草剂代谢成无活性形式的酶的表达(例如，在草铵膦耐受性的情况下，草丁膦N-乙酰转移酶)来赋予除草剂耐受性。类似地，原位诱变(定向或其他方式)已用于突变，例如乙酰乳酸合酶(ALS)或乙酰CoA羧化酶(ACCase)除草剂靶基因，以产生突变型耐受除草剂的作物品系。除了对非选择性除草剂草甘膦和草铵膦具有耐受性的早期实例外，现在有大量关于赋予针对其他除草剂的除草剂耐受性的转基因和方法的报道，例如通过抑制以下来起作用的那些：4-羟基苯丙酮酸双加氧酶(HPPD)、原卟啉原氧化酶(PPO)以及几种生长素型除草剂，特别是麦草畏和2,4D。

申请人仍需要另外的组合物和方法来赋予对其他除草剂的除草剂耐受性，例如为种植者提供另外的施用灵活性以及提供另外的耐受性管理选择。更特别地，申请人需要组合物和方法来赋予对除草化合物的除草剂耐受性，该除草化合物经由抑制茄呢基二磷酸合酶发挥其除草效果。

在高等植物中，茄呢基二磷酸合酶参与泛醌和质体醌的生物合成。这些酶的作用是提供茄呢基二磷酸酯，其充当泛醌和质体醌侧链的前体。在拟南芥中，SDPS1被表征为负责产生泛醌侧链前体的酶，而靶向SDPS2的质体负责产生质体醌侧链前体。质体醌生物合成途径先前已被除草剂靶向，这些除草剂抑制HPPD或HST酶以产生特征性漂白表型。本披露尤其基于申请人关于某些除草化合物的工作，这些除草化合物经由抑制茄呢基二磷酸合酶来发挥其除草效果。

发明内容

本披露因此尤其涉及用于在场所处选择性地控制杂草的组合物和方法。本披露进一步涉及重组DNA技术，并且特别涉及当与非转基因类植物相比时表现出对除草剂的显著抗性或显著耐受性的转基因植物的产生。本披露进一步涉及DNA编辑技术，并且特别涉及当与非转基因类植物相比时表现出对除草剂的显著抗性或显著耐受性的DNA编辑植物的产生。

尚未报道植物中对茄呢基二磷酸合酶(SDPS)抑制性除草剂的耐受性，因为其先前未被认为是某些类别的除草化合物的靶位点。过表达茄呢基二磷酸合酶基因或表达或过表达其变体的转基因植物耐受所述除草剂。因此，本发明因此尤其提供了在更广泛的农业背景中利用茄呢基二磷酸合酶抑制性除草剂的机会。

在一个实例中，本披露包括在包含作物植物和杂草的场所处选择性地控制杂草的方法。该方法包括向该场所施用杂草控制量的杀有害生物剂组合物，该杀有害生物剂组合物包含茄呢基二磷酸合酶抑制性除草剂，其中修饰这些作物植物以包含茄呢基二磷酸合酶，该茄呢基二磷酸合酶为该作物植物提供针对该茄呢基二磷酸合酶抑制性除草剂的耐受性。

可以用重组多核苷酸修饰这些作物植物，该重组多核苷酸提供茄呢基二磷酸合酶，该茄呢基二磷酸合酶为作物植物提供针对茄呢基二磷酸合酶抑制性除草剂的耐受性。

在一些实例中，茄呢基二磷酸合酶可以衍生自拟南芥(Arabidopsis thaliana)、普通小麦(Triticum aestivum)(小麦(Wheat))、大麦(Hordeum vulgare，Barley)、水稻(Oryza sativa，Rice)、玉蜀黍(Zea mays，Maize)、大豆(Glycine max，Soybean)、莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii)或小球藻(Chlorella fusca)。在一些实例中，茄呢基二磷酸合酶可以选自：SEQ ID NO:1-18、45-349和663-665的SDPS；或“经修饰的”SDPS，该“经修饰的”SDPS具有与SEQ ID NO:1-18、45-349和663-665中所示的序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的氨基酸序列，或和具有选自由655-662组成的组的基序的SDPS；或在对应于SEQ ID NO:5的以下氨基酸位置中的一个的位置处具有至少一个突变的SDPS：F240L、F227L、F229L、F247L、L120A、L120R、L120W、L123A、L123C、L123D、L123N、L123S、L123W、E127A、E127G、E127K、E127Y、N128L、N128P、V130D、V130K、L131A、L131E、L131M、L131P、A134V、F139D、F139K、F139N、F139R、F139T、P148I、P148L、P148M、P148T、P148V、V151E、V151F、V151I、V151M、V151N、L174F、L174T、A175I、A175P、A175S、E176A、E176D、E176H、E176K、E176N、E176P、E176Y、I177A、I177C、I177F、I177L、I177M、I177S、I177T、I177Y、I178G、I178Q、I178W、E179I、M180I、M180Q、M180S、M180Y、M180W、I181M、I181N、A184G、A184S、A184T、T183C、T183Q、S185A、S185T、S185G、I187E、I187F、I187T、I187V、H188F、H188I、H188L、H188M、H188V、V191A、V191T、I204A、I204F、I204G、I204H、I204K、I204Q、I204R、I204S、I204T、Y208A、Y208D、Y208E、Y208H、Y208I、Y208K、Y208L、Y208M、Y208N、Y208Q、Y208R、Y208S、Y208T、Y208V、G209N、T210Y、R211D、R211E、R211N、R211T、R211V、L215I、L215M、A216T、F219A、M220I、M220C、F221W、A222G、A222M、A222S、Q223A、Q223E、Q223F、Q223G、Q223H、Q223I、Q223K、Q223L、Q223M、Q223R、Q223Y、S224F、S224I、S224M、S224N、S224Q、S224T、S224V、S225C、S225F、S225H、S225I、S225K、S225M、S225N、S225Q、S225T、S225V、S225Y、W226A、W226C、W226E、W226I、W226L、W226Q、W226R、W226T、W226V、F227D、F227L、F227M、F227R、F227V、F227W、L228C、L228I、L228M、L228T、L228V、A229H、A229I、A229L、A229M、A229N、A229T、N230E、N230R、E235G、K238G、K238N、K238S、L239A、L239R、I240A、I240C、I240W、S241A、S241H、S241N、S241T、V243A、V243G、V243N、V243Q、V243S、I244A、I244F、I244G、I244H、I244K、I244L、I244M、I244N、I244P、I244Q、I244S、I244V、I244Y、K245F、K245H、K245M、K245N、K245W、D246E、D246M、D246N、D246Q、D246S、D246T、D246Y、F247E、F247L、F247M、F247N、F247V、A248P、S249A、S249E、S249F、S249G、S249K、S249L、S249N、S249Q、S249T、S249V、S249Y、G250A、I252L、I252M、I252V、K253L、A255T、A255W、S256N、T257E、T257G、T257H、T257M、T257Q、T257W、Y274D、Y274G、Y274L、Y274M、Y274Q、T276S、L279F、I280W、I280F、A282G、A282H、A282K、A282N、A282R、S283C、S283F、S283I、S283M、S283T、S283W、R306F、R306H、R306L、R306N、L310G、G309A、G309F、G309M、G309S、L310D、L310E、L310F、L310H、L310N、L310Q、L310W、L310Y、F312C、F312I、F312L、F312M、F312V、Q313A、Q313C、Q313D、Q313S和Q313T。在一些实例中，茄呢基二磷酸合酶可以含有突变，该突变对应于如SEQ ID NO.3或5中所示的F240L突变或等效编号。在一些实例中，通过编辑内源性茄呢基二磷酸合酶来提供该茄呢基二磷酸合酶，例如以实现以上突变中的任一种。

当编辑内源性SDPS时，例如，可以以多种方式进行编辑。例如，编辑可以包括以下中的至少一种：(a)编码茄呢基二磷酸合酶的多核苷酸的一种或多种可替代的剪接转录物的产生；(b)编码茄呢基二磷酸合酶的多核苷酸中一个或多个核苷酸的缺失；(c)编码该茄呢基二磷酸合酶的多核苷酸的一个或多个外显子的移码突变；(d)编码茄呢基二磷酸合酶的多核苷酸中一个或多个核苷酸的取代；和(e)与茄呢基二磷酸合酶的表达可操作地连接的调节元件的一个或多个核苷酸的缺失或修饰，其中该调节元件包括启动子、内含子、3’UTR和终止子中的至少一种。编辑的靶标可以变化并且可以包括，例如，至少一个编辑以编码对应于表1氨基酸位置中的一个的突变。

根据本披露可以使用多种编辑构建体。例如，可以使用的构建体包括核酸以及任选地至少一种指导RNA，该核酸编码选自由定点核酸酶组成的组的DNA修饰酶，所述定点核酸酶选自由以下组成的组：大范围核酸酶(MN)、锌指核酸酶(ZFN)、转录激活因子样效应子核酸酶(TALEN)、Cas核酸酶(例如，Cas9或Cas12)、Cpf1(有时也称为Cas 12)核酸酶、dCas9-FokI、dCpf1-FokI、嵌合Cas9-胞苷脱氨酶、嵌合Cas9-腺嘌呤脱氨酶、嵌合FEN1-FokI和Mega-TAL、切口酶Cas9(nCas9)、嵌合dCas9非FokI核酸酶和dCpf1非FokI核酸酶；该至少一种指导RNA对应于选自编码表1的氨基酸的序列的靶序列。在许多实例中，DNA修饰酶是DNA修饰酶是定点核酸酶，所述定点核酸酶选自由以下组成的组：Cas9核酸酶、Cfp1核酸酶、dCas9-FokI、dCpf1-FokI、嵌合Cas9-胞苷脱氨酶、嵌合Cas9-腺嘌呤脱氨酶、嵌合FEN1-FokI和Mega-TAL、切口酶Cas9(nCas9)、嵌合dCas9非FokI核酸酶和dCpf1非FokI核酸酶，并且将包括指导RNA。

靶序列可以变化并且可以包括15-25个核苷酸长的序列(包括编码表1的氨基酸的序列，例如3个核苷酸的序列)。

在本文披露的作物植物和方法的许多实例中，作物植物可以包含编码另外的除草剂耐受酶的另外的重组多核苷酸。例如，另外的除草剂耐受酶可以选自由以下组成的组：5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸酯合酶(EPSPS)、HST、草甘磷乙酰基转移酶(GAT)、细胞色素P450、草丁膦乙酰转移酶(PAT)、乙酰乳酸合酶(ALS)、原卟啉原氧化酶(PPGO)、羟基苯丙酮酸双加氧酶(HPPD)和麦草畏降解酶。

此外，应该清楚的是，杀有害生物剂组合物可以包含另外的除草剂。例如，一种或多种另外的除草剂可以包括草甘膦或其盐、草铵膦或其盐、氯乙酰苯胺、甲草胺、乙草胺、异丙甲草胺、精异丙甲草胺(S-metholachlor)；光系统II抑制剂、三嗪、莠灭净、莠去津、氰草津、特丁津、三嗪酮(triazinon)、环嗪酮、赛克津、脲、绿麦隆、敌草隆、异丙隆、利谷隆、丁噻隆；ALS抑制剂、磺酰脲、酰嘧磺隆、绿磺隆、氟啶嘧磺隆、氯吡嘧磺隆、烟嘧磺隆、氟嘧磺隆、氟磺隆、玉嘧磺隆、醚苯磺隆、三氟啶磺隆、三氟甲磺隆、二苯醚、三氟羧草醚、氟磺胺草醚、抑制HPPD的除草剂、硝磺草酮、氟吡草酮、麦草畏、和2,4D。

本披露还针对重组多核苷酸。在一个实施例中，重组多核苷酸包含(i)编码茄呢基二磷酸合酶的与植物可操作的启动子可操作地连接的区域；和(ii)任选地，与植物可操作的启动子可操作地连接的至少一个另外的区域，该区域编码选自由以下组成的组的除草剂耐受酶：羟基苯丙酮酸双加氧酶(HPPD)、5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸酯合酶(EPSPS)、草甘磷乙酰基转移酶(GAT)、细胞色素P450、草丁膦乙酰转移酶(PAT)、乙酰乳酸合酶(ALS)、原卟啉原氧化酶(PPGO)、羟基苯丙酮酸双加氧酶(HPPD)和麦草畏降解酶。

编码茄呢基二磷酸合酶的区域可以是(a)与选自由SEQ ID NO:20-41、350-654和666-668组成的组的序列至少90％相同的核酸序列；或编码多肽的核酸序列，该多肽包含选自由SEQ ID NO:1-18、45-349和663-665组成的组的氨基酸序列；或编码多肽的核酸序列，该多肽包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：与SEQ ID NO:1-18、45-349和663-665至少95％相同的氨基酸序列；或编码SDPS的核酸序列，该SDPS具有选自SEQ ID NO:655-662的基序；或编码SDPS的核酸序列，该SDPS在对应于SEQ ID NO:5的以下氨基酸位置中的一个的位置处具有至少一个突变：F240L、F227L、F229L、F247L、L120A、L120R、L120W、L123A、L123C、L123D、L123N、L123S、L123W、E127A、E127G、E127K、E127Y、N128L、N128P、V130D、V130K、L131A、L131E、L131M、L131P、A134V、F139D、F139K、F139N、F139R、F139T、P148I、P148L、P148M、P148T、P148V、V151E、V151F、V151I、V151M、V151N、L174F、L174T、A175I、A175P、A175S、E176A、E176D、E176H、E176K、E176N、E176P、E176Y、I177A、I177C、I177F、I177L、I177M、I177S、I177T、I177Y、I178G、I178Q、I178W、E179I、M180I、M180Q、M180S、M180Y、M180W、I181M、I181N、A184G、A184S、A184T、T183C、T183Q、S185A、S185T、S185G、I187E、I187F、I187T、I187V、H188F、H188I、H188L、H188M、H188V、V191A、V191T、I204A、I204F、I204G、I204H、I204K、I204Q、I204R、I204S、I204T、Y208A、Y208D、Y208E、Y208H、Y208I、Y208K、Y208L、Y208M、Y208N、Y208Q、Y208R、Y208S、Y208T、Y208V、G209N、T210Y、R211D、R211E、R211N、R211T、R211V、L215I、L215M、A216T、F219A、M220I、M220C、F221W、A222G、A222M、A222S、Q223A、Q223E、Q223F、Q223G、Q223H、Q223I、Q223K、Q223L、Q223M、Q223R、Q223Y、S224F、S224I、S224M、S224N、S224Q、S224T、S224V、S225C、S225F、S225H、S225I、S225K、S225M、S225N、S225Q、S225T、S225V、S225Y、W226A、W226C、W226E、W226I、W226L、W226Q、W226R、W226T、W226V、F227D、F227L、F227M、F227R、F227V、F227W、L228C、L228I、L228M、L228T、L228V、A229H、A229I、A229L、A229M、A229N、A229T、N230E、N230R、E235G、K238G、K238N、K238S、L239A、L239R、I240A、I240C、I240W、S241A、S241H、S241N、S241T、V243A、V243G、V243N、V243Q、V243S、I244A、I244F、I244G、I244H、I244K、I244L、I244M、I244N、I244P、I244Q、I244S、I244V、I244Y、K245F、K245H、K245M、K245N、K245W、D246E、D246M、D246N、D246Q、D246S、D246T、D246Y、F247E、F247L、F247M、F247N、F247V、A248P、S249A、S249E、S249F、S249G、S249K、S249L、S249N、S249Q、S249T、S249V、S249Y、G250A、I252L、I252M、I252V、K253L、A255T、A255W、S256N、T257E、T257G、T257H、T257M、T257Q、T257W、Y274D、Y274G、Y274L、Y274M、Y274Q、T276S、L279F、I280W、I280F、A282G、A282H、A282K、A282N、A282R、S283C、S283F、S283I、S283M、S283T、S283W、R306F、R306H、R306L、R306N、L310G、G309A、G309F、G309M、G309S、L310D、L310E、L310F、L310H、L310N、L310Q、L310W、L310Y、F312C、F312I、F312L、F312M、F312V、Q313A、Q313C、Q313D、Q313S和Q313T。

本披露还涉及对茄呢基二磷酸合酶抑制性除草剂耐受的植物细胞。植物细胞可以包括如上所述的重组多核苷酸。

本披露还涉及核酸分子，该核酸分子包含编码蛋白质的核苷酸序列，该蛋白质能为作物植物提供针对茄呢基二磷酸合酶抑制性除草剂的耐受性，其中该核苷酸序列(a)编码蛋白质，该蛋白质包含与SEQ ID NO:1-18、45-349和663-665中的任一个具有至少80％到至少99％序列同一性的氨基酸序列；(b)选自SEQ ID NO:20-41、350-654和666-668；(c)是(a)或(b)的合成序列，该合成序列已进行密码子优化用于在转基因生物中表达；或(d)SDPS，其具有选自SEQ ID NO:655-662的基序；或在对应于SEQ ID NO:5的氨基酸位置中的一个的位置处具有至少一个突变的SDPS，如以上示例的。在某些实例中，蛋白质包含SEQ IDNO:3或13-18的氨基酸序列。

本披露还涉及包含可操作地连接至如以上所述的核酸分子的异源启动子的嵌合基因。在典型的实施例中，异源启动子是植物可表达型启动子。合适的植物可表达型启动子包括泛素、夜香树属黄病毒、玉米TrpA、OsMADS 6、玉蜀黍H3组蛋白、噬菌体T3基因9 5'UTR、玉米蔗糖合成酶1、玉米醇脱氢酶1、玉米捕光复合物、玉米热休克蛋白、玉蜀黍mtl、豌豆小亚基RuBP羧化酶、水稻肌动蛋白、水稻亲环蛋白、Ti质粒甘露碱合酶、Ti质粒胭脂碱合酶、矮牵牛查尔酮异构酶、豆类富甘氨酸蛋白1、马铃薯糖蛋白、凝集素、CaMV 35S以及S-E9小亚基RuBP羧化酶启动子。

本披露还涉及包含如以上所述的嵌合基因的质粒，以及包含以上所述的嵌合基因的植物以及含有以上所述的编辑的植物。

在其他实例中，本披露涉及重组茄呢基二磷酸合酶在用于鉴定茄呢基二磷酸合酶抑制性除草剂的体外筛选方法中的用途。

在其他实例中，本披露涉及重组茄呢基二磷酸合酶在用于鉴定茄呢基二磷酸合酶变体的体外筛选方法中的用途，该茄呢基二磷酸合酶变体对茄呢基二磷酸合酶抑制性除草剂具有增加的耐受性。

因此，根据本发明的实施例，提供了在包含作物植物和杂草的场所处选择性地控制杂草的方法，该方法包括向该场所施用杂草控制量的包含SDPS抑制性除草剂的杀有害生物剂组合物，其中修饰这些作物植物，使得它们包含为该作物植物提供针对该SDPS抑制性除草剂的耐受性的SDPS。

SEQ ID NO:1是拟南芥SDPS1的AA序列。

SEQ ID NO:2是拟南芥SDPS2的AA序列。

SEQ ID NO:3是拟南芥SDPS2 F240L的AA序列。

SEQ ID NO:4是玉蜀黍SDPS1的AA序列。

SEQ ID NO:5是玉蜀黍SDPS2的AA序列。

SEQ ID NO:6是普通小麦SDPS的AA序列。

SEQ ID NO:7是大麦SDPS的AA序列。

SEQ ID NO:8是大豆(Glycine Max)SDPS的AA序列。

SEQ ID NO:9是水稻(粳稻(japonica))SDPS的AA序列。

SEQ ID NO:10是小球藻SDPS的AA序列。

SEQ ID NO:11是小球藻SDPS F227L的AA序列。

SEQ ID NO:12是莱茵衣藻SDPS的AA序列。

SEQ ID NO:13是His-Trunc拟南芥SDPS2的AA序列。

SEQ ID NO:14是His-Trunc拟南芥SDPS2 F240L的AA序列。

SEQ ID NO:15是His-Trunc玉蜀黍SDPS1的AA序列。

SEQ ID NO:16是His-Trunc玉蜀黍SDPS2的AA序列。

SEQ ID NO:17是His-Trunc玉蜀黍SDPS1 F229L的AA序列。

SEQ ID NO:18是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 F247L的AA序列。

SEQ ID NO:19是质粒的DNA序列。

SEQ ID NO:20是拟南芥SDPS1的DNA序列。

SEQ ID NO:21是拟南芥SDPS2的DNA序列。

SEQ ID NO:22是拟南芥SDPS2 F240L的DNA序列。

SEQ ID NO:23是玉蜀黍SDPS1的DNA序列。

SEQ ID NO:24是玉蜀黍SDPS2的DNA序列。

SEQ ID NO:25是普通小麦SDPS的DNA序列。

SEQ ID NO:26是大麦SDPS的DNA序列。

SEQ ID NO:27是大豆SDPS的DNA序列。

SEQ ID NO:28是水稻(粳稻)SDPS的DNA序列。

SEQ ID NO:29是小球藻SDPS的DNA序列。

SEQ ID NO:30是小球藻SDPS F227L的DNA序列。

SEQ ID NO:31是莱茵衣藻SDPS的DNA序列。

SEQ ID NO:32是大肠杆菌优化的His-Trunc拟南芥SDPS2的DNA序列。

SEQ ID NO:33是大肠杆菌优化的His-Trunc拟南芥SDPS2 F240L的DNA序列。

SEQ ID NO:34是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS1的DNA序列。

SEQ ID NO:35是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2的DNA序列。

SEQ ID NO:36是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS1 F229L的DNA序列。

SEQ ID NO:37是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 F247L的DNA序列。

SEQ ID NO:38是烟草优化的拟南芥SDPS2的DNA序列。

SEQ ID NO:39是烟草优化的拟南芥SDPS2 F240L的DNA序列。

SEQ ID NO:40是烟草优化的小球藻SDPS的DNA序列。

SEQ ID NO:41是烟草优化的小球藻SDPS F227L的DNA序列。

SEQ ID NO:42是SDPS Cpf1-人工质粒的DNA序列。

SEQ ID NO:43是玉蜀黍，靶序列的DNA序列。

SEQ ID NO:44是Cpf1核酸酶的DNA序列。

SEQ ID NO:45是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 L120A的蛋白质序列。

SEQ ID NO:46是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 L120R的蛋白质序列。

SEQ ID NO:47是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 L120W的蛋白质序列。

SEQ ID NO:48是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 L123A的蛋白质序列。

SEQ ID NO:49是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 L123C的蛋白质序列。

SEQ ID NO:50是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 L123D的蛋白质序列。

SEQ ID NO:51是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 L123N的蛋白质序列。

SEQ ID NO:52是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 L123S的蛋白质序列。

SEQ ID NO:53是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 L123W的蛋白质序列。

SEQ ID NO:54是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 E127A的蛋白质序列。

SEQ ID NO:55是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 E127G的蛋白质序列。

SEQ ID NO:56是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 E127K的蛋白质序列。

SEQ ID NO:57是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 E127Y的蛋白质序列。

SEQ ID NO:58是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 N128L的蛋白质序列。

SEQ ID NO:59是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 N128P的蛋白质序列。

SEQ ID NO:60是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 V130D的蛋白质序列。

SEQ ID NO:61是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 V130K的蛋白质序列。

SEQ ID NO:62是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 L131A的蛋白质序列。

SEQ ID NO:63是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 L131E的蛋白质序列。

SEQ ID NO:64是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 L131M的蛋白质序列。

SEQ ID NO:65是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 L131P的蛋白质序列。

SEQ ID NO:66是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 A134V的蛋白质序列。

SEQ ID NO:67是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 F139D的蛋白质序列。

SEQ ID NO:68是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 F139K的蛋白质序列。

SEQ ID NO:69是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 F139N的蛋白质序列。

SEQ ID NO:70是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 F139R的蛋白质序列。

SEQ ID NO:71是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 F139T的蛋白质序列。

SEQ ID NO:72是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 P148I的蛋白质序列。

SEQ ID NO:73是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 P148L的蛋白质序列。

SEQ ID NO:74是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 P148M的蛋白质序列。

SEQ ID NO:75是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 P148T的蛋白质序列。

SEQ ID NO:76是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 P148V的蛋白质序列。

SEQ ID NO:77是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 V151E的蛋白质序列。

SEQ ID NO:78是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 V151F的蛋白质序列。

SEQ ID NO:79是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 V151I的蛋白质序列。

SEQ ID NO:80是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 V151M的蛋白质序列。

SEQ ID NO:81是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 V151N的蛋白质序列。

SEQ ID NO:82是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 L174F的蛋白质序列。

SEQ ID NO:83是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 L174T的蛋白质序列。

SEQ ID NO:84是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 A175I的蛋白质序列。

SEQ ID NO:85是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 A175P的蛋白质序列。

SEQ ID NO:86是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 A175S的蛋白质序列。

SEQ ID NO:87是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 E176A的蛋白质序列。

SEQ ID NO:88是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 E176D的蛋白质序列。

SEQ ID NO:89是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 E176H的蛋白质序列。

SEQ ID NO:90是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 E176K的蛋白质序列。

SEQ ID NO:91是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 E176N的蛋白质序列。

SEQ ID NO:92是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 E176P的蛋白质序列。

SEQ ID NO:93是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 E176Y的蛋白质序列。

SEQ ID NO:94是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I177A的蛋白质序列。

SEQ ID NO:95是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I177C的蛋白质序列。

SEQ ID NO:96是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I177F的蛋白质序列。

SEQ ID NO:97是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I177L的蛋白质序列。

SEQ ID NO:98是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I177M的蛋白质序列。

SEQ ID NO:99是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I177S的蛋白质序列。

SEQ ID NO:100是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I177T的蛋白质序列。

SEQ ID NO:101是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I177Y的蛋白质序列。

SEQ ID NO:102是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I178G的蛋白质序列。

SEQ ID NO:103是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I178Q的蛋白质序列。

SEQ ID NO:104是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I178W的蛋白质序列。

SEQ ID NO:105是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 E179I的蛋白质序列。

SEQ ID NO:106是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 M180I的蛋白质序列。

SEQ ID NO:107是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 M180Q的蛋白质序列。

SEQ ID NO:108是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 M180S的蛋白质序列。

SEQ ID NO:109是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 M180Y的蛋白质序列。

SEQ ID NO:110是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 M180W的蛋白质序列。

SEQ ID NO:111是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I181M的蛋白质序列。

SEQ ID NO:112是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I181N的蛋白质序列。

SEQ ID NO:113是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 A184G的蛋白质序列。

SEQ ID NO:114是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 A184S的蛋白质序列。

SEQ ID NO:115是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 A184T的蛋白质序列。

SEQ ID NO:116是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 T183C的蛋白质序列。

SEQ ID NO:117是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 T183Q的蛋白质序列。

SEQ ID NO:118是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S185A的蛋白质序列。

SEQ ID NO:119是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S185T的蛋白质序列。

SEQ ID NO:120是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S185G的蛋白质序列。

SEQ ID NO:121是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I187E的蛋白质序列。

SEQ ID NO:122是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I187F的蛋白质序列。

SEQ ID NO:123是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I187T的蛋白质序列。

SEQ ID NO:124是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I187V的蛋白质序列。

SEQ ID NO:125是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 H188F的蛋白质序列。

SEQ ID NO:126是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 H188I的蛋白质序列。

SEQ ID NO:127是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 H188L的蛋白质序列。

SEQ ID NO:128是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 H188M的蛋白质序列。

SEQ ID NO:129是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 H188V的蛋白质序列。

SEQ ID NO:130是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 V191A的蛋白质序列。

SEQ ID NO:131是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 V191T的蛋白质序列。

SEQ ID NO:132是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I204A的蛋白质序列。

SEQ ID NO:133是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I204F的蛋白质序列。

SEQ ID NO:134是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I204G的蛋白质序列。

SEQ ID NO:135是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I204H的蛋白质序列。

SEQ ID NO:136是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I204K的蛋白质序列。

SEQ ID NO:137是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I204Q的蛋白质序列。

SEQ ID NO:138是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I204R的蛋白质序列。

SEQ ID NO:139是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I204S的蛋白质序列。

SEQ ID NO:140是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I204T的蛋白质序列。

SEQ ID NO:141是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 Y208A的蛋白质序列。

SEQ ID NO:142是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 Y208D的蛋白质序列。

SEQ ID NO:143是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 Y208E的蛋白质序列。

SEQ ID NO:144是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 Y208H的蛋白质序列。

SEQ ID NO:145是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 Y208I的蛋白质序列。

SEQ ID NO:146是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 Y208K的蛋白质序列。

SEQ ID NO:147是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 Y208L的蛋白质序列。

SEQ ID NO:148是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 Y208M的蛋白质序列。

SEQ ID NO:149是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 Y208N的蛋白质序列。

SEQ ID NO:150是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 Y208Q的蛋白质序列。

SEQ ID NO:151是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 Y208R的蛋白质序列。

SEQ ID NO:152是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 Y208S的蛋白质序列。

SEQ ID NO:153是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 Y208T的蛋白质序列。

SEQ ID NO:154是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 Y208V的蛋白质序列。

SEQ ID NO:155是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 G209N的蛋白质序列。

SEQ ID NO:156是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 T210Y的蛋白质序列。

SEQ ID NO:157是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 R211D的蛋白质序列。

SEQ ID NO:158是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 R211E的蛋白质序列。

SEQ ID NO:159是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 R211N的蛋白质序列。

SEQ ID NO:160是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 R211T的蛋白质序列。

SEQ ID NO:161是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 R211V的蛋白质序列。

SEQ ID NO:162是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 L215I的蛋白质序列。

SEQ ID NO:163是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 L215M的蛋白质序列。

SEQ ID NO:164是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 A216T的蛋白质序列。

SEQ ID NO:165是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 F219A的蛋白质序列。

SEQ ID NO:166是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 M220I的蛋白质序列。

SEQ ID NO:167是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 M220C的蛋白质序列。

SEQ ID NO:168是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 F221W的蛋白质序列。

SEQ ID NO:169是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 A222G的蛋白质序列。

SEQ ID NO:170是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 A222M的蛋白质序列。

SEQ ID NO:171是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 A222S的蛋白质序列。

SEQ ID NO:172是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 Q223A的蛋白质序列。

SEQ ID NO:173是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 Q223E的蛋白质序列。

SEQ ID NO:174是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 Q223F的蛋白质序列。

SEQ ID NO:175是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 Q223G的蛋白质序列。

SEQ ID NO:176是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 Q223H的蛋白质序列。

SEQ ID NO:177是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 Q223I的蛋白质序列。

SEQ ID NO:178是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 Q223K的蛋白质序列。

SEQ ID NO:179是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 Q223L的蛋白质序列。

SEQ ID NO:180是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 Q223M的蛋白质序列。

SEQ ID NO:181是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 Q223R的蛋白质序列。

SEQ ID NO:182是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 Q223Y的蛋白质序列。

SEQ ID NO:183是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S224F的蛋白质序列。

SEQ ID NO:184是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S224I的蛋白质序列。

SEQ ID NO:185是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S224M的蛋白质序列。

SEQ ID NO:186是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S224N的蛋白质序列。

SEQ ID NO:187是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S224Q的蛋白质序列。

SEQ ID NO:188是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S224T的蛋白质序列。

SEQ ID NO:189是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S224V的蛋白质序列。

SEQ ID NO:190是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S225C的蛋白质序列。

SEQ ID NO:191是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S225F的蛋白质序列。

SEQ ID NO:192是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S225H的蛋白质序列。

SEQ ID NO:193是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S225I的蛋白质序列。

SEQ ID NO:194是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S225K的蛋白质序列。

SEQ ID NO:195是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S225M的蛋白质序列。

SEQ ID NO:196是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S225N的蛋白质序列。

SEQ ID NO:197是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S225Q的蛋白质序列。

SEQ ID NO:198是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S225T的蛋白质序列。

SEQ ID NO:199是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S225V的蛋白质序列。

SEQ ID NO:200是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S225Y的蛋白质序列。

SEQ ID NO:201是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 W226A的蛋白质序列。

SEQ ID NO:202是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 W226C的蛋白质序列。

SEQ ID NO:203是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 W226E的蛋白质序列。

SEQ ID NO:204是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 W226I的蛋白质序列。

SEQ ID NO:205是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 W226L的蛋白质序列。

SEQ ID NO:206是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 W226Q的蛋白质序列。

SEQ ID NO:207是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 W226R的蛋白质序列。

SEQ ID NO:208是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 W226T的蛋白质序列。

SEQ ID NO:209是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 W226V的蛋白质序列。

SEQ ID NO:210是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 F227D的蛋白质序列。

SEQ ID NO:211是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 F227L的蛋白质序列。

SEQ ID NO:212是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 F227M的蛋白质序列。

SEQ ID NO:213是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 F227R的蛋白质序列。

SEQ ID NO:214是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 F227V的蛋白质序列。

SEQ ID NO:215是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 F227W的蛋白质序列。

SEQ ID NO:216是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 L228C的蛋白质序列。

SEQ ID NO:217是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 L228I的蛋白质序列。

SEQ ID NO:218是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 L228M的蛋白质序列。

SEQ ID NO:219是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 L228T的蛋白质序列。

SEQ ID NO:220是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 L228V的蛋白质序列。

SEQ ID NO:221是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 A229H的蛋白质序列。

SEQ ID NO:222是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 A229I的蛋白质序列。

SEQ ID NO:223是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 A229L的蛋白质序列。

SEQ ID NO:224是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 A229M的蛋白质序列。

SEQ ID NO:225是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 A229N的蛋白质序列。

SEQ ID NO:226是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 A229T的蛋白质序列。

SEQ ID NO:227是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 N230E的蛋白质序列。

SEQ ID NO:228是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 N230R的蛋白质序列。

SEQ ID NO:229是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 E235G的蛋白质序列。

SEQ ID NO:230是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 K238G的蛋白质序列。

SEQ ID NO:231是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 K238N的蛋白质序列。

SEQ ID NO:232是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 K238S的蛋白质序列。

SEQ ID NO:233是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 L239A的蛋白质序列。

SEQ ID NO:234是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 L239R的蛋白质序列。

SEQ ID NO:235是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I240A的蛋白质序列。

SEQ ID NO:236是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I240C的蛋白质序列。

SEQ ID NO:237是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I240W的蛋白质序列。

SEQ ID NO:238是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S241A的蛋白质序列。

SEQ ID NO:239是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S241H的蛋白质序列。

SEQ ID NO:240是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S241N的蛋白质序列。

SEQ ID NO:241是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S241T的蛋白质序列。

SEQ ID NO:242是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 V243A的蛋白质序列。

SEQ ID NO:243是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 V243G的蛋白质序列。

SEQ ID NO:244是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 V243N的蛋白质序列。

SEQ ID NO:245是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 V243Q的蛋白质序列。

SEQ ID NO:246是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 V243S的蛋白质序列。

SEQ ID NO:247是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I244A的蛋白质序列。

SEQ ID NO:248是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I244F的蛋白质序列。

SEQ ID NO:249是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I244G的蛋白质序列。

SEQ ID NO:250是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I244H的蛋白质序列。

SEQ ID NO:251是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I244K的蛋白质序列。

SEQ ID NO:252是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I244L的蛋白质序列。

SEQ ID NO:253是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I244M的蛋白质序列。

SEQ ID NO:254是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I244N的蛋白质序列。

SEQ ID NO:255是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I244P的蛋白质序列。

SEQ ID NO:256是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I244Q的蛋白质序列。

SEQ ID NO:257是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I244S的蛋白质序列。

SEQ ID NO:258是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I244V的蛋白质序列。

SEQ ID NO:259是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I244Y的蛋白质序列。

SEQ ID NO:260是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 K245F的蛋白质序列。

SEQ ID NO:261是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 K245H的蛋白质序列。

SEQ ID NO:262是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 K245M的蛋白质序列。

SEQ ID NO:263是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 K245N的蛋白质序列。

SEQ ID NO:264是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 K245W的蛋白质序列。

SEQ ID NO:265是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 D246E的蛋白质序列。

SEQ ID NO:266是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 D246M的蛋白质序列。

SEQ ID NO:267是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 D246N的蛋白质序列。

SEQ ID NO:268是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 D246Q的蛋白质序列。

SEQ ID NO:269是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 D246S的蛋白质序列。

SEQ ID NO:270是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 D246T的蛋白质序列。

SEQ ID NO:271是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 D246Y的蛋白质序列。

SEQ ID NO:272是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 F247E的蛋白质序列。

SEQ ID NO:273是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 F247L的蛋白质序列。

SEQ ID NO:274是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 F247M的蛋白质序列。

SEQ ID NO:275是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 F247N的蛋白质序列。

SEQ ID NO:276是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 F247V的蛋白质序列。

SEQ ID NO:277是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 A248P的蛋白质序列。

SEQ ID NO:278是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S249A的蛋白质序列。

SEQ ID NO:279是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S249E的蛋白质序列。

SEQ ID NO:280是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S249F的蛋白质序列。

SEQ ID NO:281是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S249G的蛋白质序列。

SEQ ID NO:282是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S249K的蛋白质序列。

SEQ ID NO:283是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S249L的蛋白质序列。

SEQ ID NO:284是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S249N的蛋白质序列。

SEQ ID NO:285是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S249Q的蛋白质序列。

SEQ ID NO:286是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S249T的蛋白质序列。

SEQ ID NO:287是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S249V的蛋白质序列。

SEQ ID NO:288是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S249Y的蛋白质序列。

SEQ ID NO:289是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 G250A的蛋白质序列。

SEQ ID NO:290是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I252L的蛋白质序列。

SEQ ID NO:291是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I252M的蛋白质序列。

SEQ ID NO:292是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I252V的蛋白质序列。

SEQ ID NO:293是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 K253L的蛋白质序列。

SEQ ID NO:294是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 A255T的蛋白质序列。

SEQ ID NO:295是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 A255W的蛋白质序列。

SEQ ID NO:296是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S256N的蛋白质序列。

SEQ ID NO:297是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 T257E的蛋白质序列。

SEQ ID NO:298是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 T257G的蛋白质序列。

SEQ ID NO:299是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 T257H的蛋白质序列。

SEQ ID NO:300是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 T257M的蛋白质序列。

SEQ ID NO:301是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 T257Q的蛋白质序列。

SEQ ID NO:302是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 T257W的蛋白质序列。

SEQ ID NO:303是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 Y274D的蛋白质序列。

SEQ ID NO:304是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 Y274G的蛋白质序列。

SEQ ID NO:305是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 Y274L的蛋白质序列。

SEQ ID NO:306是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 Y274M的蛋白质序列。

SEQ ID NO:307是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 Y274Q的蛋白质序列。

SEQ ID NO:308是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 T276S的蛋白质序列。

SEQ ID NO:309是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 L279F的蛋白质序列。

SEQ ID NO:310是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I280W的蛋白质序列。

SEQ ID NO:311是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I280F的蛋白质序列。

SEQ ID NO:312是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 A282G的蛋白质序列。

SEQ ID NO:313是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 A282H的蛋白质序列。

SEQ ID NO:314是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 A282K的蛋白质序列。

SEQ ID NO:315是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 A282N的蛋白质序列。

SEQ ID NO:316是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 A282R的蛋白质序列。

SEQ ID NO:317是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S283C的蛋白质序列。

SEQ ID NO:318是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S283F的蛋白质序列。

SEQ ID NO:319是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S283I的蛋白质序列。

SEQ ID NO:320是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S283M的蛋白质序列。

SEQ ID NO:321是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S283T的蛋白质序列。

SEQ ID NO:322是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S283W的蛋白质序列。

SEQ ID NO:323是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 R306F的蛋白质序列。

SEQ ID NO:324是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 R306H的蛋白质序列。

SEQ ID NO:325是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 R306L的蛋白质序列。

SEQ ID NO:326是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 R306N的蛋白质序列。

SEQ ID NO:327是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 L310G的蛋白质序列。

SEQ ID NO:328是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 G309A的蛋白质序列。

SEQ ID NO:329是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 G309F的蛋白质序列。

SEQ ID NO:330是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 G309M的蛋白质序列。

SEQ ID NO:331是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 G309S的蛋白质序列。

SEQ ID NO:332是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 L310D的蛋白质序列。

SEQ ID NO:333是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 L310E的蛋白质序列。

SEQ ID NO:334是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 L310F的蛋白质序列。

SEQ ID NO:335是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 L310H的蛋白质序列。

SEQ ID NO:336是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 L310N的蛋白质序列。

SEQ ID NO:337是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 L310Q的蛋白质序列。

SEQ ID NO:338是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 L310W的蛋白质序列。

SEQ ID NO:339是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 L310Y的蛋白质序列。

SEQ ID NO:340是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 F312C的蛋白质序列。

SEQ ID NO:341是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 F312I的蛋白质序列。

SEQ ID NO:342是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 F312L的蛋白质序列。

SEQ ID NO:343是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 F312M的蛋白质序列。

SEQ ID NO:344是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 F312V的蛋白质序列。

SEQ ID NO:345是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 Q313A的蛋白质序列。

SEQ ID NO:346是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 Q313C的蛋白质序列。

SEQ ID NO:347是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 Q313D的蛋白质序列。

SEQ ID NO:348是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 Q313S的蛋白质序列。

SEQ ID NO:349是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 Q313T的蛋白质序列。

SEQ ID NO:350是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 L120A的DNA序列。

SEQ ID NO:351是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 L120R的DNA序列。

SEQ ID NO:352是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 L120W的DNA序列。

SEQ ID NO:353是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 L123A的DNA序列。

SEQ ID NO:354是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 L123C的DNA序列。

SEQ ID NO:355是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 L123D的DNA序列。

SEQ ID NO:356是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 L123N的DNA序列。

SEQ ID NO:357是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 L123S的DNA序列。

SEQ ID NO:358是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 L123W的DNA序列。

SEQ ID NO:359是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 E127A的DNA序列。

SEQ ID NO:360是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 E127G的DNA序列。

SEQ ID NO:361是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 E127K的DNA序列。

SEQ ID NO:362是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 E127Y的DNA序列。

SEQ ID NO:363是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 N128L的DNA序列。

SEQ ID NO:364是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 N128P的DNA序列。

SEQ ID NO:365是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 V130D的DNA序列。

SEQ ID NO:366是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 V130K的DNA序列。

SEQ ID NO:367是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 L131A的DNA序列。

SEQ ID NO:368是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 L131E的DNA序列。

SEQ ID NO:369是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 L131M的DNA序列。

SEQ ID NO:370是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 L131P的DNA序列。

SEQ ID NO:371是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 A134V的DNA序列。

SEQ ID NO:372是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 F139D的DNA序列。

SEQ ID NO:373是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 F139K的DNA序列。

SEQ ID NO:374是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 F139N的DNA序列。

SEQ ID NO:375是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 F139R的DNA序列。

SEQ ID NO:376是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 F139T的DNA序列。

SEQ ID NO:377是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 P148I的DNA序列。

SEQ ID NO:378是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 P148L的DNA序列。

SEQ ID NO:379是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 P148M的DNA序列。

SEQ ID NO:380是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 P148T的DNA序列。

SEQ ID NO:381是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 P148V的DNA序列。

SEQ ID NO:382是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 V151E的DNA序列。

SEQ ID NO:383是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 V151F的DNA序列。

SEQ ID NO:384是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 V151I的DNA序列。

SEQ ID NO:385是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 V151M的DNA序列。

SEQ ID NO:386是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 V151N的DNA序列。

SEQ ID NO:387是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 L174F的DNA序列。

SEQ ID NO:388是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 L174T的DNA序列。

SEQ ID NO:389是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 A175I的DNA序列。

SEQ ID NO:390是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 A175P的DNA序列。

SEQ ID NO:391是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 A175S的DNA序列。

SEQ ID NO:392是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 E176A的DNA序列。

SEQ ID NO:393是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 E176D的DNA序列。

SEQ ID NO:394是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 E176H的DNA序列。

SEQ ID NO:395是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 E176K的DNA序列。

SEQ ID NO:396是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 E176N的DNA序列。

SEQ ID NO:397是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 E176P的DNA序列。

SEQ ID NO:398是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 E176Y的DNA序列。

SEQ ID NO:399是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I177A的DNA序列。

SEQ ID NO:400是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I177C的DNA序列。

SEQ ID NO:401是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I177F的DNA序列。

SEQ ID NO:402是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I177L的DNA序列。

SEQ ID NO:403是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I177M的DNA序列。

SEQ ID NO:404是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I177S的DNA序列。

SEQ ID NO:405是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I177T的DNA序列。

SEQ ID NO:406是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I177Y的DNA序列。

SEQ ID NO:407是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I178G的DNA序列。

SEQ ID NO:408是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I178Q的DNA序列。

SEQ ID NO:409是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I178W的DNA序列。

SEQ ID NO:410是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 E179I的DNA序列。

SEQ ID NO:411是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 M180I的DNA序列。

SEQ ID NO:412是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 M180Q的DNA序列。

SEQ ID NO:413是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 M180S的DNA序列。

SEQ ID NO:414是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 M180Y的DNA序列。

SEQ ID NO:415是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 M180W的DNA序列。

SEQ ID NO:416是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I181M的DNA序列。

SEQ ID NO:417是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I181N的DNA序列。

SEQ ID NO:418是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 A184G的DNA序列。

SEQ ID NO:419是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 A184S的DNA序列。

SEQ ID NO:420是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 A184T的DNA序列。

SEQ ID NO:421是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 T183C的DNA序列。

SEQ ID NO:422是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 T183Q的DNA序列。

SEQ ID NO:423是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S185A的DNA序列。

SEQ ID NO:424是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S185T的DNA序列。

SEQ ID NO:425是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S185G的DNA序列。

SEQ ID NO:426是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 H188F的DNA序列。

SEQ ID NO:427是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 H188I的DNA序列。

SEQ ID NO:428是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 H188L的DNA序列。

SEQ ID NO:429是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 H188M的DNA序列。

SEQ ID NO:430是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 H188V的DNA序列。

SEQ ID NO:431是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I187E的DNA序列。

SEQ ID NO:432是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I187F的DNA序列。

SEQ ID NO:433是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I187T的DNA序列。

SEQ ID NO:434是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I187V的DNA序列。

SEQ ID NO:435是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 V191A的DNA序列。

SEQ ID NO:436是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 V191T的DNA序列。

SEQ ID NO:437是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I204A的DNA序列。

SEQ ID NO:438是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I204F的DNA序列。

SEQ ID NO:439是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I204G的DNA序列。

SEQ ID NO:440是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I204H的DNA序列。

SEQ ID NO:441是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I204K的DNA序列。

SEQ ID NO:442是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I204Q的DNA序列。

SEQ ID NO:443是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I204R的DNA序列。

SEQ ID NO:444是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I204S的DNA序列。

SEQ ID NO:445是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I204T的DNA序列。

SEQ ID NO:446是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 Y208A的DNA序列。

SEQ ID NO:447是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 Y208D的DNA序列。

SEQ ID NO:448是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 Y208E的DNA序列。

SEQ ID NO:449是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 Y208H的DNA序列。

SEQ ID NO:450是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 Y208I的DNA序列。

SEQ ID NO:451是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 Y208K的DNA序列。

SEQ ID NO:452是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 Y208L的DNA序列。

SEQ ID NO:453是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 Y208M的DNA序列。

SEQ ID NO:454是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 Y208N的DNA序列。

SEQ ID NO:455是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 Y208Q的DNA序列。

SEQ ID NO:456是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 Y208R的DNA序列。

SEQ ID NO:457是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 Y208S的DNA序列。

SEQ ID NO:458是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 Y208T的DNA序列。

SEQ ID NO:459是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 Y208V的DNA序列。

SEQ ID NO:460是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 G209N的DNA序列。

SEQ ID NO:461是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 T210Y的DNA序列。

SEQ ID NO:462是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 R211D的DNA序列。

SEQ ID NO:463是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 R211E的DNA序列。

SEQ ID NO:464是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 R211N的DNA序列。

SEQ ID NO:465是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 R211T的DNA序列。

SEQ ID NO:466是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 R211V的DNA序列。

SEQ ID NO:467是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 L215I的DNA序列。

SEQ ID NO:468是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 L215M的DNA序列。

SEQ ID NO:469是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 A216T的DNA序列。

SEQ ID NO:470是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 F219A的DNA序列。

SEQ ID NO:471是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 M220I的DNA序列。

SEQ ID NO:472是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 M220C的DNA序列。

SEQ ID NO:473是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 F221W的DNA序列。

SEQ ID NO:474是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 A222G的DNA序列。

SEQ ID NO:475是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 A222M的DNA序列。

SEQ ID NO:476是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 A222S的DNA序列。

SEQ ID NO:477是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 Q223A的DNA序列。

SEQ ID NO:478是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 Q223E的DNA序列。

SEQ ID NO:479是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 Q223F的DNA序列。

SEQ ID NO:480是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 Q223G的DNA序列。

SEQ ID NO:481是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 Q223H的DNA序列。

SEQ ID NO:482是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 Q223I的DNA序列。

SEQ ID NO:483是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 Q223K的DNA序列。

SEQ ID NO:484是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 Q223L的DNA序列。

SEQ ID NO:485是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 Q223M的DNA序列。

SEQ ID NO:486是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 Q223R的DNA序列。

SEQ ID NO:487是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 Q223Y的DNA序列。

SEQ ID NO:488是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S224F的DNA序列。

SEQ ID NO:489是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S224I的DNA序列。

SEQ ID NO:490是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S224M的DNA序列。

SEQ ID NO:491是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S224N的DNA序列。

SEQ ID NO:492是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S224Q的DNA序列。

SEQ ID NO:493是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S224T的DNA序列。

SEQ ID NO:494是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S224V的DNA序列。

SEQ ID NO:495是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S225C的DNA序列。

SEQ ID NO:496是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S225F的DNA序列。

SEQ ID NO:497是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S225H的DNA序列。

SEQ ID NO:498是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S225I的DNA序列。

SEQ ID NO:499是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S225K的DNA序列。

SEQ ID NO:500是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S225M的DNA序列。

SEQ ID NO:501是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S225N的DNA序列。

SEQ ID NO:502是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S225Q的DNA序列。

SEQ ID NO:503是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S225T的DNA序列。

SEQ ID NO:504是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S225V的DNA序列。

SEQ ID NO:505是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S225Y的DNA序列。

SEQ ID NO:506是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 W226A的DNA序列。

SEQ ID NO:507是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 W226C的DNA序列。

SEQ ID NO:508是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 W226E的DNA序列。

SEQ ID NO:509是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 W226I的DNA序列。

SEQ ID NO:510是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 W226L的DNA序列。

SEQ ID NO:511是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 W226Q的DNA序列。

SEQ ID NO:512是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 W226R的DNA序列。

SEQ ID NO:513是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 W226T的DNA序列。

SEQ ID NO:514是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 W226V的DNA序列。

SEQ ID NO:515是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 F227D的DNA序列。

SEQ ID NO:516是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 F227L的DNA序列。

SEQ ID NO:517是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 F227M的DNA序列。

SEQ ID NO:518是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 F227R的DNA序列。

SEQ ID NO:519是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 F227V的DNA序列。

SEQ ID NO:520是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 F227W的DNA序列。

SEQ ID NO:521是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 L228C的DNA序列。

SEQ ID NO:522是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 L228I的DNA序列。

SEQ ID NO:523是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 L228M的DNA序列。

SEQ ID NO:524是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 L228T的DNA序列。

SEQ ID NO:525是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 L228V的DNA序列。

SEQ ID NO:526是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 A229H的DNA序列。

SEQ ID NO:527是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 A229I的DNA序列。

SEQ ID NO:528是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 A229L的DNA序列。

SEQ ID NO:529是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 A229M的DNA序列。

SEQ ID NO:530是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 A229N的DNA序列。

SEQ ID NO:531是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 A229T的DNA序列。

SEQ ID NO:532是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 N230E的DNA序列。

SEQ ID NO:533是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 N230R的DNA序列。

SEQ ID NO:534是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 E235G的DNA序列。

SEQ ID NO:535是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 K238G的DNA序列。

SEQ ID NO:536是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 K238N的DNA序列。

SEQ ID NO:537是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 K238S的DNA序列。

SEQ ID NO:538是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 L239A的DNA序列。

SEQ ID NO:539是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 L239R的DNA序列。

SEQ ID NO:540是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I240A的DNA序列。

SEQ ID NO:541是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I240C的DNA序列。

SEQ ID NO:542是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I240W的DNA序列。

SEQ ID NO:543是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S241A的DNA序列。

SEQ ID NO:544是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S241H的DNA序列。

SEQ ID NO:545是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S241N的DNA序列。

SEQ ID NO:546是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S241T的DNA序列。

SEQ ID NO:547是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 V243A的DNA序列。

SEQ ID NO:548是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 V243G的DNA序列。

SEQ ID NO:549是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 V243N的DNA序列。

SEQ ID NO:550是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 V243Q的DNA序列。

SEQ ID NO:551是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 V243S的DNA序列。

SEQ ID NO:552是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I244A的DNA序列。

SEQ ID NO:553是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I244F的DNA序列。

SEQ ID NO:554是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I244G的DNA序列。

SEQ ID NO:555是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I244H的DNA序列。

SEQ ID NO:556是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I244K的DNA序列。

SEQ ID NO:557是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I244L的DNA序列。

SEQ ID NO:558是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I244M的DNA序列。

SEQ ID NO:559是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I244N的DNA序列。

SEQ ID NO:560是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I244P的DNA序列。

SEQ ID NO:561是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I244Q的DNA序列。

SEQ ID NO:562是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I244S的DNA序列。

SEQ ID NO:563是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I244V的DNA序列。

SEQ ID NO:564是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I244Y的DNA序列。

SEQ ID NO:565是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 K245F的DNA序列。

SEQ ID NO:566是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 K245H的DNA序列。

SEQ ID NO:567是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 K245M的DNA序列。

SEQ ID NO:568是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 K245N的DNA序列。

SEQ ID NO:569是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 K245W的DNA序列。

SEQ ID NO:570是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 D246E的DNA序列。

SEQ ID NO:571是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 D246M的DNA序列。

SEQ ID NO:572是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 D246N的DNA序列。

SEQ ID NO:573是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 D246Q的DNA序列。

SEQ ID NO:574是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 D246S的DNA序列。

SEQ ID NO:575是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 D246T的DNA序列。

SEQ ID NO:576是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 D246Y的DNA序列。

SEQ ID NO:577是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 F247E的DNA序列。

SEQ ID NO:578是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 F247L的DNA序列。

SEQ ID NO:579是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 F247M的DNA序列。

SEQ ID NO:580是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 F247N的DNA序列。

SEQ ID NO:581是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 F247V的DNA序列。

SEQ ID NO:582是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 A248P的DNA序列。

SEQ ID NO:583是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S249A的DNA序列。

SEQ ID NO:584是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S249E的DNA序列。

SEQ ID NO:585是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S249F的DNA序列。

SEQ ID NO:586是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S249G的DNA序列。

SEQ ID NO:587是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S249K的DNA序列。

SEQ ID NO:588是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S249L的DNA序列。

SEQ ID NO:589是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S249N的DNA序列。

SEQ ID NO:590是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S249Q的DNA序列。

SEQ ID NO:591是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S249T的DNA序列。

SEQ ID NO:592是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S249V的DNA序列。

SEQ ID NO:593是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S249Y的DNA序列。

SEQ ID NO:594是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 G250A的DNA序列。

SEQ ID NO:595是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I252L的DNA序列。

SEQ ID NO:596是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I252M的DNA序列。

SEQ ID NO:597是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I252V的DNA序列。

SEQ ID NO:598是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 K253L的DNA序列。

SEQ ID NO:599是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 A255T的DNA序列。

SEQ ID NO:600是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 A255W的DNA序列。

SEQ ID NO:601是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S256N的DNA序列。

SEQ ID NO:602是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 T257E的DNA序列。

SEQ ID NO:603是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 T257G的DNA序列。

SEQ ID NO:604是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 T257H的DNA序列。

SEQ ID NO:605是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 T257M的DNA序列。

SEQ ID NO:606是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 T257Q的DNA序列。

SEQ ID NO:607是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 T257W的DNA序列。

SEQ ID NO:608是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 Y274D的DNA序列。

SEQ ID NO:609是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 Y274G的DNA序列。

SEQ ID NO:610是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 Y274L的DNA序列。

SEQ ID NO:611是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 Y274M的DNA序列。

SEQ ID NO:612是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 Y274Q的DNA序列。

SEQ ID NO:613是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 T276S的DNA序列。

SEQ ID NO:614是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 L279F的DNA序列。

SEQ ID NO:615是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I280W的DNA序列。

SEQ ID NO:616是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 I280F的DNA序列。

SEQ ID NO:617是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 A282G的DNA序列。

SEQ ID NO:618是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 A282H的DNA序列。

SEQ ID NO:619是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 A282K的DNA序列。

SEQ ID NO:620是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 A282N的DNA序列。

SEQ ID NO:621是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 A282R的DNA序列。

SEQ ID NO:622是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S283C的DNA序列。

SEQ ID NO:623是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S283F的DNA序列。

SEQ ID NO:624是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S283I的DNA序列。

SEQ ID NO:625是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S283M的DNA序列。

SEQ ID NO:626是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S283T的DNA序列。

SEQ ID NO:627是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 S283W的DNA序列。

SEQ ID NO:628是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 R306F的DNA序列。

SEQ ID NO:629是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 R306H的DNA序列。

SEQ ID NO:630是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 R306L的DNA序列。

SEQ ID NO:631是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 R306N的DNA序列。

SEQ ID NO:632是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 L310G的DNA序列。

SEQ ID NO:633是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 G309A的DNA序列。

SEQ ID NO:634是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 G309F的DNA序列。

SEQ ID NO:635是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 G309M的DNA序列。

SEQ ID NO:636是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 G309S的DNA序列。

SEQ ID NO:637是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 L310D的DNA序列。

SEQ ID NO:638是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 L310E的DNA序列。

SEQ ID NO:639是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 L310F的DNA序列。

SEQ ID NO:640是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 L310H的DNA序列。

SEQ ID NO:641是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 L310N的DNA序列。

SEQ ID NO:642是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 L310Q的DNA序列。

SEQ ID NO:643是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 L310W的DNA序列。

SEQ ID NO:644是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 L310Y的DNA序列。

SEQ ID NO:645是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 F312C的DNA序列。

SEQ ID NO:646是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 F312I的DNA序列。

SEQ ID NO:647是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 F312L的DNA序列。

SEQ ID NO:648是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 F312M的DNA序列。

SEQ ID NO:649是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 F312V的DNA序列。

SEQ ID NO:650是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 Q313A的DNA序列。

SEQ ID NO:651是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 Q313C的DNA序列。

SEQ ID NO:652是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 Q313D的DNA序列。

SEQ ID NO:653是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 Q313S的DNA序列。

SEQ ID NO:654是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 Q313T的DNA序列。

SEQ ID NO:655是N、X1、N、X2、X3、X4、X5、X6、G、X7、X8、X9、P、X10、X11、X12、X13、A、X14、X15、Q、I、X16、X17、A、G、G、K的SDPS蛋白序列基序。

SEQ ID NO:656是K、X1、X2、R、X3、X4、X5、X6、F、L的SDPS蛋白序列基序。

SEQ ID NO:657是H、X1、R、X2、X3、X4、X5、X6、7、X8、X9、H、X10、X11、X12、L、X13、X14、D、D、X15、X16、D的SDPS蛋白序列基序。

SEQ ID NO:658是G、X1、X2、T、X3、X4、X5、X6、X7、X8、X9、X10、X11、A、V、X12、X13、G、D、X14的SDPS蛋白序列基序。

SEQ ID NO:659是X1、X2、X3、X4、X5、X6、X7、X8、X9、X10、X11、L、E的SDPS蛋白序列基序。

SEQ ID NO:660是N、X1、X2、V、I、X3、X4、X5、X6、X7、X8、X9、X10、X11、X12、X13、X14、X15、E、X16、X17、Q、X18、X19、X20的SDPS蛋白序列基序。

SEQ ID NO:661是S、X1、X2、K、X3、A、S、X4、X5、A、X6、X7、X8的SDPS蛋白序列基序。

SEQ ID NO:662是G、X1、X2、L、X3、X4、X5、X6、X7、V、V的SDPS蛋白序列基序。

SEQ ID NO:663是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 N128Y的蛋白质序列。

SEQ ID NO:664是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 T183G的蛋白质序列。

SEQ ID NO:665是His-Trunc玉蜀黍SDPS2 A184C的蛋白质序列。

SEQ ID NO:666是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 N128Y的DNA序列。

SEQ ID NO:667是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 T183C的DNA序列。

SEQ ID NO:668是大肠杆菌优化的His-Trunc玉蜀黍SDPS2 A184C的DNA序列。

附图说明

图1示出了用于转化、用于基因插入的载体F240L的图形表示。

图2示出了用于转化、用于基因编辑的载体的图形表示。

图3是显示表达各种SDPS基因的4个植物群体的损害评分的表格。

具体实施方式

本说明不旨在是可以实施本发明的所有不同方式，或可以添加到本发明中的所有特征的详细目录。例如，关于一个实施例所说明的特征可以并入其他实施例中，并且关于一个特定实施例所说明的特征可以从那个实施例删除。因此，本发明考虑了，在本发明的一些实施例中，可以排除或省略本文陈述的任何特征或特征的组合。此外，鉴于本披露内容，本文提出的不同实施例的众多变化以及附加对于本领域技术人员将是显而易见的，这不脱离本发明。因此，以下说明旨在阐述本发明的一些特定实施例，并且并没有穷尽地叙述其所有排列、组合和变化。

除非另外定义，本文所用的所有技术和科学术语均具有与本发明所属领域的普通技术人员通常所理解的相同的含义。在本文的发明的说明中使用的术语是仅出于描述特定实施例的目的，且并不旨在限制本发明。

如本文和所附权利要求所使用的，单数形式“一个/一种(a/an)”和“所述/该(the)”包括复数指代物，除非上下文另外明确地指示。因此，例如，提及“一种植物”是提及一种或多种植物并且包括本领域技术人员已知的其等效物等。

如本文所使用的，词语“和/或”是指并且涵盖一个或多个相关联的列出项的任何及全部可能组合，连同当以可替代性(“或”)解释时组合的缺少。

术语“约”本文用于意指大约、大致、约或在……左右。当术语“约”结合数值范围来使用时，它通过将边界延伸至高于以及低于所阐述的数值来限定这个范围。一般而言，术语“约”本文用于将数值限定至以20％的变化，优选地10％上下(更高或更低)，高于以及低于规定值。关于温度，术语“约”意指±1℃，优选±0.5℃。当术语“约”被用于本发明的上下文中(例如与温度或分子量值组合)时，确切值(即，无“约”)是优选的。

如本文所使用的，术语“扩增的”意指使用至少一种核酸分子作为模板，构建核酸分子的多个拷贝或与该核酸分子互补的多个拷贝。扩增系统包括聚合酶链式反应(PCR)系统、连接酶链式反应(LCR)系统、基于核酸序列的扩增(NASBA，安大略省密西索加的坎基尼公司(Cangene，Mississauga，Ontario))、Q-β复制酶系统、基于转录的扩增系统(TAS)、以及链置换扩增(SDA)。参见，例如，Diagnostic Molecular Microbiology:Principles andApplications[诊断分子微生物学：原理与应用],PERSING等人编,American Society forMicrobiology[美国微生物学会],华盛顿(Washington,D.C.),(1993)。扩增的产物被称为“扩增子”。

根据本发明的“组装的序列”、“组装的多核苷酸”、“组装的核苷酸序列”等是通过比对多核苷酸或测序的多核苷酸的部分(即k-mer，通过DNA测序获得的读数的长度k的所有可能的子序列)的重叠序列制备的合成多核苷酸，其使用DNA测序技术从基因组DNA确定。组装的序列典型地含有碱基识别(base-calling)错误，与获得基因组DNA的基因组中包含的天然DNA序列相比，碱基识别错误可能是错误确定的碱基、插入和/或缺失。因此，例如，“组装的多核苷酸”可以编码蛋白质，并且根据本发明，该多核苷酸和该蛋白质二者都不是天然产物，而是仅通过人类行为而存在。

如本文所使用的术语“嵌合构建体”或“嵌合基因”或“嵌合多核苷酸”或“嵌合核酸”(或类似术语)是指如下构建体或分子，该构建体或分子包含被组装进单个核酸分子中的不同来源的两个或更多个多核苷酸。术语“嵌合构建体”、“嵌合基因”、“嵌合多核苷酸”或“嵌合核酸”是指如下任何构建体或分子，该构建体或分子含有但不限于(1)多核苷酸(例如，DNA)，包括在自然界中没有被发现在一起的调节多核苷酸和编码多核苷酸(即，构建体中的至少一个多核苷酸相对于它的其他多核苷酸中的至少一个是异源的)，或(2)编码不是天然毗邻的蛋白部分的多核苷酸，或(3)不是天然毗邻的启动子部分。另外，嵌合构建体、嵌合基因、嵌合多核苷酸或嵌合核酸可以包含衍生自不同来源的调节多核苷酸和编码多核苷酸，或包含衍生自相同来源、但以与在自然界中所发现的不同的方式进行布置的调节多核苷酸和编码多核苷酸。在本发明的一些实施例中，嵌合构建体、嵌合基因、嵌合多核苷酸或嵌合核酸包含表达盒，该表达盒包含在调节多核苷酸的控制下、特别地在植物或细菌中具有功能性的调节多核苷酸的控制下的本发明的多核苷酸。

“编码序列”是转录成RNA(如mRNA、rRNA、tRNA、snRNA、正义RNA或反义RNA)的核酸序列。优选地，RNA进而在生物中被翻译以产生蛋白质。

如本文所使用的，“密码子优化的”序列意指如下核苷酸序列，其中这些密码子被选择以反映宿主细胞或生物可以具有的特定的密码子偏好性。这典型地是以这样一种方式来完成，该方式是为了保持由待优化的核苷酸序列所编码的多肽的氨基酸序列。在某些实施例中，重组DNA构建体的DNA序列包括已经针对该构建体有待在其中进行表达的细胞(例如，动物、植物、或真菌细胞)进行了密码子优化的序列。例如，有待在植物细胞中表达的构建体可以使其全部或部分序列(例如，第一基因抑制元件或基因表达元件)进行密码子优化用于在植物中表达。参见例如，美国专利号6,121,014，通过援引并入本文。

术语“包含(comprises或comprising)”当用于本说明书中时指示所说明的特征、整数、步骤、操作、要素、或组分的存在，但并不排除一个或多个其他特征、整数、步骤、操作、要素、组分、或其组的存在或添加。

如本文所使用的，过渡短语“基本上由……组成”(以及语法变体)意指，权利要求书的范围有待被解读为涵盖权利要求书中所列举的指定材料或步骤以及不实质上改变所要求的发明的一个或多个基本和新颖特征的那些。因此，当用于本发明的权利要求中时，术语“基本上由……组成”并不旨在被解释为等同于“包含(comprising)”。

在本发明的上下文中，“对应于(corresponding to或corresponds to)”意指当变体或同系物SDPS的氨基酸序列时，“对应于”在该变体或同系物蛋白中某些枚举的位置的氨基酸是与参考蛋白中的这些位置比对的那些，但在相对于本发明的特定参考氨基酸序列而言的这些精确的数字位置中是不必要的。

术语“结构域”是指沿着进化相关蛋白的序列的比对在特定位置处保守的一组氨基酸。虽然其他位置上的氨基酸可在同系物之间有所不同，但是在特定位置处高度保守的氨基酸指示在蛋白质的结构、稳定性或功能中很可能是必需的氨基酸。通过其在蛋白质同系物家族的经比对序列中的高度保守性进行鉴别，其可用作鉴别物(identifier)，用来确定所讨论的任何多肽是否属于先前鉴别的多肽组。

如本文所使用的“表达盒”意指能够在适当的宿主细胞中指导至少一种目的多核苷酸(例如编码SDPS的多核苷酸)的表达的核酸分子，该核酸分子包含可操作地连接至目的多核苷酸(其可操作地连接至终止信号)的启动子。“表达盒”还典型地包含正确翻译目的多核苷酸所需的另外的多核苷酸。该表达盒还可以包含在目的多核苷酸的直接表达中不是必需的但是由于用于从表达载体去除该表达盒的方便限制位点而存在的其他多核苷酸。包含一个或多个目的多核苷酸的表达盒可以是嵌合的，意味着它的组分中的至少一种相对于它的其他组分中的至少一种是异源的。该表达盒还可以是天然存在的但已经是以对于异源表达有用的重组形式而获得的表达盒。然而，典型地，该表达盒相对于该宿主是异源的，即在该表达盒中的目的多核苷酸不是天然存在于该宿主细胞中的，并且必须已经通过转化过程或育种过程引入到该宿主细胞或该宿主细胞的祖先中。该表达盒中的一个或多个目的多核苷酸的表达通常是在启动子的控制下。在多细胞生物(如植物)的情况下，启动子还可能对于特定组织、或器官、或者发育阶段是特异性的或优先的。当被转化进植物中时，表达盒或其片段也可被称为“插入的多核苷酸”或者“插入多核苷酸”。

如本文所使用的，在提及特定多核苷酸时，“全长序列”意指具有天然或突变的SDPS序列的完整核酸序列。“天然序列”旨在意指内源性序列，即在生物基因组中发现的非工程化序列。

因此，本发明的核苷酸序列的片段可以编码SDPS多肽的生物活性部分，或者它可以是可以用作杂交探针等或PCR引物(使用以下披露的方法)的片段。突变体SDPS多肽的生物活性部分可以通过分离本发明的一种核苷酸序列的一部分、表达所编码的突变体SDPS蛋白的部分(例如，通过体外重组表达)、并且评价编码的突变体SDPS蛋白的部分的活性来制备。核酸分子(本发明的核苷酸序列的片段)包含至少15、20、50、75、100、150、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、1100、1200、或1300个连续的核苷酸，或多达存在于本文披露的全长核苷酸序列中的数目的核苷酸。

“变体”旨在意指基本上相似的序列。对于多核苷酸，变体包含在参比多核苷酸之内的一个或多个内部位点处的一个或多个核苷酸的缺失和/或添加和/或在突变体SDPS多核苷酸中的一个或多个位点处的一个或多个核苷酸的取代。如本文所使用的，“参考”多核苷酸或多肽分别包含SDPS核苷酸序列或氨基酸序列。如本文所使用的，“天然”多核苷酸或多肽分别包含天然存在的核苷酸序列或氨基酸序列。本领域的普通技术人员将认识到本发明的这些核酸的变体将被如此构建从而使得开放阅读框得以维持。对于多核苷酸，保守性变体包括编码本发明的一种突变体SDPS多肽的氨基酸序列的那些序列(由于遗传密码的简并性)。如这些天然存在的等位基因变体可以使用熟知的分子生物学技术、例如使用以下概述的聚合酶链式反应(PCR)以及杂交技术来鉴定。变体多核苷酸还包括合成衍生的多核苷酸，例如像通过使用定点诱变产生的但是仍然编码本发明的突变体SDPS蛋白的那些。通常，本发明的特定的多核苷酸的变体将具有与该特定的多核苷酸至少约40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多的序列同一性，如通过本文别处所述的序列比对程序和参数所确定的。

本发明的特定多核苷酸(即参比多核苷酸)的变体还可以通过比较由变体多核苷酸编码的多肽与由该参比多核苷酸编码的多肽之间的百分比序列同一性来评价。在任何两个多肽之间的百分比序列同一性可以使用本文别处描述的序列比对程序和参数来计算。其中本发明的任何给定的多核苷酸对是通过比较它们编码的两个多肽共有的百分比序列同一性来评价的，在两个被编码的多肽之间的百分比序列同一性是跨过本文所述的葡萄糖基转移酶序列的全部的至少约40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多的序列同一性。

“变体”蛋白质旨在意指通过在SDPS蛋白中的一个或多个内部位点处缺失或添加一个或多个氨基酸和/或在SDPS蛋白中的一个或多个位点处取代一个或多个氨基酸来从参考蛋白质衍生的蛋白质。由本发明涵盖的变体蛋白是生物学活性的，即它们继续具有SDPS蛋白的所希望的生物活性，即，如本文所述的SDPS酶活性。此类变体可以产生于例如遗传多态性或产生于人的操作。本发明的突变体SDPS蛋白的生物活性变体将与该突变体SDPS蛋白跨该突变体SDPS蛋白的氨基酸序列的全部具有至少约40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多的序列同一性，如通过本文别处所述的序列比对程序和参数所确定的。本发明的蛋白质的生物活性变体可能不同于以少至1-15个氨基酸残基、少至1-10个(如6-10个)、少至5个(如4、3、2个、或甚至1个)氨基酸残基的蛋白质。例如，描述为F227L的变体氨基酸序列将包括用亮氨酸残基替代227位处的苯丙氨酸残基。

“基因”在本文中被定义为包含一个或多个多核苷酸的遗传单位，该遗传单位占据染色体或质粒上特定位置并且含有用于生物中的特定特征或性状的遗传指令。

当提及基因或多核苷酸或多肽使用时，术语“异源”是指基因或多核苷酸或多肽不是在其天然环境中或含有其非天然环境中存在的一部分(即，已经通过人工改变)。例如，异源基因可以包括自一个物种引入到另一个物种的多核苷酸。异源基因还可以包括对生物来说是天然的多核苷酸，该多核苷酸已经以一些方式(例如，经突变；以多个拷贝添加；连接至非天然启动子或增强子多核苷酸等)被改变。异源基因可以进一步包含植物基因多核苷酸，其包含植物基因的cDNA形式；这些cDNA可以以正义方向(以产生mRNA)或反义方向(以产生一种反义RNA转录本，其与mRNA转录本是互补的)被表达。在本发明的一个方面，异源基因与内源性植物基因的区别在于该异源基因多核苷酸被典型地连接至包含调节元件如启动子的多核苷酸上，未发现这些多核苷酸与由该异源基因编码的蛋白质的基因或与该染色体中的植物基因多核苷酸天然相关联，或者与在自然界中未发现的染色体的部分(例如，在基因座中表达的基因，其中该基因未正常表达)相关联。另外，“异源”多核苷酸是指不与将多核苷酸引入其中的宿主细胞天然地相关联的多核苷酸，包括天然存在的多核苷酸的非天然存在的多拷贝。

“同源重组”是在相同的多核苷酸的区域中成对染色体的两个DNA分子或染色单体之间的DNA片段的交换(“交叉”)。“重组事件”在本文被理解为意指减数分裂交叉。

当核酸序列编码了多肽(该多肽与由参考核酸序列所编码的多肽具有相同的氨基酸序列)时，这种核苷酸序列与这种参考核酸序列“同类编码”。

术语“分离的”核酸分子、多核苷酸或蛋白质是不再存在于其天然环境中的核酸分子、多核苷酸或蛋白质。本发明的分离的核酸分子、多核苷酸或蛋白质可以按照纯化的形式存在，或者可以存在于重组宿主中，例如转基因细菌或转基因植物中。因此，如本文所列举的对“分离的”核酸分子的要求涵盖当核酸分子包含在转基因植物基因组内时的核酸分子。

“核酸分子”是可以从任何来源中分离的或可以合成制备的单链或双链DNA或RNA。在本发明的上下文中，核酸分子通常是DNA的区段。

“可操作地连接”是指在单一核酸片段上多核苷酸的关联，这样使得一者的功能影响另一者的功能。例如，当启动子能够影响编码多核苷酸或功能RNA的表达时(即，该编码多核苷酸或功能RNA处于该启动子的转录控制之下)，则该启动子与该编码多核苷酸或功能RNA是可操作地连接的。正义方向或者反义方向的编码多核苷酸能够与调节多核苷酸可操作地连接。

“植物”是在发育的任何阶段的任何植物，特别是种子植物。

“植物细胞”是植物的结构和生理单位，包含原生质体和细胞壁。植物细胞可以处于分离的单个细胞或培养细胞的形式，或者是作为较高级的组织单位(如例如，植物组织、植物器官、或全株植物)的一部分。

“植物细胞培养物”意指植物单元(例如像，原生质体、细胞培养物细胞、植物组织中的细胞、花粉、花粉管、胚珠、胚囊、接合子以及处于不同发育阶段的胚)的培养物。

“植物材料”是指叶、茎、根、花或花的部分、果实、花粉、卵细胞、接合子、种子、切条、细胞或组织培养物、或植物的任何其他部分或产物。

“植物器官”是植物的独特而明显的已结构化并且分化的部分，如根、茎、叶、花蕾或胚。

如本文所使用的“植物组织”意指组织化成结构和功能单元的一组植物细胞。包括植物中或培养物中的任何植物组织。这个术语包括但不限于：全株植物、植物器官、植物种子、组织培养物以及被组织化成结构或功能单元的任何植物细胞群组。这个术语与如以上列出的或由该定义以其他方式涵盖的任何特定类型的植物组织的联合应用或单独应用并不旨在排除任何其他类型的植物组织。

“多核苷酸”是指由共价键合于链中的许多核苷酸单体构成的聚合物。此类“多核苷酸”包括DNA、RNA、经修饰的寡核苷酸(例如，包含对于生物RNA或DNA不典型的碱基的寡核苷酸，如2'-O-甲基化寡核苷酸)等。在一些实施例中，核酸或多核苷酸可以是单链的、双链的、多链的或其组合。除非另有说明，否则本发明的特定核酸或多核苷酸任选地包含或编码除明确指示的任何多核苷酸之外的互补多核苷酸。

“目的多核苷酸”是指任何多核苷酸，当其转移至生物(例如，植物)中时赋予该生物所希望的特征，如昆虫抗性、疾病抗性、除草剂耐受性、抗生素抗性、改进的营养价值、工业过程中改进的性能、商业上有价值的酶或代谢物的产生、或者改变的繁殖能力。

术语“启动子”是指多核苷酸，通常在它的编码多核苷酸的上游(5')，它通过提供对正确转录所需的RNA聚合酶以及其他因子的识别来控制该编码多核苷酸的表达。

“原生质体”是分离的植物细胞，没有细胞壁或仅具有部分的细胞壁。

如本文所使用的，术语“重组”是指核酸分子(例如，DNA或RNA)或蛋白质或生物的如下形式，该形式通常不会在自然界中发现并且正因为如此通过人类干预来产生。如本文所使用的，“重组核酸分子”是包括多核苷酸组合的核酸分子，这些多核苷酸不会天然地一起存在并且是人类干预的结果，例如，由至少两种彼此异源的多核苷酸的组合组成的核酸分子，或人工合成的(例如，使用组装的核苷酸序列合成的多核苷酸)并且包含偏离通常存在于自然界中的多核苷酸的多核苷酸的核酸分子，或包含人工掺入至宿主细胞的基因组DNA中和该宿主细胞基因组相关侧翼DNA中的转基因的核酸分子。重组核酸分子的另一个实例是由将转基因插入至植物的基因组DNA中产生的DNA分子，其可以最终导致该生物中的重组RNA/或蛋白分子的表达。如本文所使用的，“重组植物”是通常不会在自然界中存在的植物，是人类干预的结果，并且含有掺入至其基因组中的转基因和/或异源核酸分子。由于此类基因组改变，重组植物明显不同于相关的野生型植物。

“调节元件”是指参与控制核苷酸序列的表达的序列。调节元件包含可操作地连接至目的核苷酸序列的启动子以及终止信号。它们还典型地涵盖适当翻译该核苷酸序列所需的序列，例如，内含子、3’UTR和终止子。

在两个核酸或氨基酸序列的上下文中，术语“同一性”或“相同的”或“基本上相同的”是指当针对最大对应性进行比较和比对时具有至少60％、优选至少80％、更优选90％、甚至更优选95％、并且最优选至少99％核苷酸或氨基酸残基同一性的两个或更多个序列或子序列，如使用以下序列比较算法之一或通过目测检查所测量的。优选地，基本的同一性存在于整个具有长度为至少约50个残基或碱基的序列的区域中，更优选地在整个至少约100个残基或碱基的区域中，并且最优选地这些序列在至少约150个残基或碱基上是基本上相同的。在尤其优选的实施例中，在整个编码区域长度中的序列是基本上相同的。此外，基本上相同的核酸或氨基酸序列基本上执行相同的功能。

对于序列比较，典型地，一个序列充当与测试序列进行比较的参考序列。当使用序列比较算法时，将测试序列和参考序列输入到计算机中(如有必要，指定子序列坐标)，并且指定序列算法程序的参数。然后，该序列比较算法基于所指定的程序参数来计算一种或多种测试序列相对于该参考序列的序列同一性百分比。

用于比较的序列的最佳比对可以按照以下方式进行，例如通过Smith和Waterman,Adv.Appl.Math.[应用数学进展]2:482(1981)的局部同源性算法、通过Needleman和Wunsch,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]48:443(1970)的同源比对算法、通过Pearson和Lipman,Proc.Nat'l.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]85:2444(1988)的相似性方法的搜索，通过这些算法的计算机化实施(威斯康星州遗传学分析软件包(Wisconsin GeneticsSoftware Package)中的GAP、BESTFIT、FASTA和TFASTA，遗传学计算机组(GeneticsComputer Group)，科学街575号，麦迪逊，威斯康星州)，或通过目测检查(总体上参见Ausubel等人,下文)。

适于确定序列同一性百分比以及序列相似性的算法的一个实例是BLAST算法，其描述于以下文献中：Altschul等人,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]215:403-410(1990)。执行BLAST分析的软件是通过国家生物技术信息中心(the National Center forBiotechnology Information，美国国家医学图书馆(U.S.National Library ofMedicine)，美国洛克维尔大道8600号(8600Rockville Pike)，贝塞斯达，马里兰州20894)可供公众使用的。这种算法涉及首先通过鉴定查询序列中具有长度W的短字码而鉴定得分高的序列对(HSP)，这些得分高的序列对当与数据库序列中具有相同长度的字码(word)进行比对时匹配或满足一些正值阈值的得分T。T被称为邻近字码得分阈(Altschul等人,1990)。这些初始的邻近字码命中充当种子用于起始搜索以发现含有它们的较长的HSP。然后，将这些字码命中在两个方向上沿着每个序列延伸直到累积的比对得分可以增加。对于核苷酸序列，使用参数M(对于一对匹配残基的奖赏得分；总是>0)和N(对于错配残基的罚分；总是<0)来计算累积的得分。对于氨基酸序列，使用得分矩阵来计算累积得分。当累积的比对得分从它的最大达到值降低了数量X；由于累积一个或多个负得分的残基比对使累积得分趋于0或0以下；或者到达任一序列的末端时，停止这些字码命中在每个方向上的延伸。BLAST算法的参数W、T、以及X决定了比对的灵敏度与速度。BLASTN程序(对核苷酸序列来说)使用字长(W)为11、期望值(E)为10、截止值(cutoff)为100、M＝5、N＝-4、以及两条链的比较作为默认值。对于氨基酸序列，BLASTP程序使用字长(W)为3、期望值(E)为10、以及BLOSUM62评分矩阵作为默认值(参见Henikoff和Henikoff,Proc.Natl.Acad Sci.USA[美国国家科学院院刊]89:10915(1989))。

除了计算序列同一性百分比之外，BLAST算法还进行两个序列之间相似性的统计分析(参见例如，Karlin和Altschul,Proc.Nat'l.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]90:5873-5787(1993))。由BLAST算法提供的相似性的一种量度是最小概率总和(P(N))，它提供了在两个核苷酸或氨基酸序列之间会偶然发生匹配的概率的指示。例如，若在测试核酸序列与参考核酸序列的比较中最小概率总和小于约0.1、更优选地小于约0.01、并且最优选地小于约0.001，则该测试核酸序列被认为是与该参考序列相似的。

两个核酸序列基本上相同的另一个指示是这两种分子在严格条件下彼此杂交。短语“特异性杂交”是指分子在严格条件下仅与特定的核苷酸序列结合、双链化或杂交，这是在该序列存在于复合混合物(例如，总细胞的)DNA或RNA中时进行的。“基本上结合”是指在探针核酸与靶核酸之间的互补杂交，并且涵盖少量错配，这些错配可以通过降低杂交介质的严格来容纳，以实现靶核酸序列的所希望的检测。

在核酸杂交实验(如DNA杂交和RNA杂交)的上下文中，“严格杂交条件”和“严格杂交洗涤条件”是序列依赖性的，并且在不同的环境参数下是不同的。较长的序列在较高的温度下特异性杂交。对核酸杂交的广泛指导见于以下文献中：Tijssen(1993)LaboratoryTechniques in Biochemistry and Molecular Biology-Hybridization with NucleicAcid Probes[生物化学和分子生物学实验室技术-使用核酸探针的杂交]第2章第I部分“Overview of principles of hybridization and the strategy of nucleic acidprobe assays[杂交原理和核酸探针测定策略综述]”Elsevier[爱思唯尔集团],纽约。通常，对于在一个限定的离子强度和pH下的特异序列，高严格杂交和洗涤条件被选择为比热融点(Tm)大约低5℃。典型地，在“严格条件”下，探针将会与它的靶子序列进行杂交，但不会与其他序列杂交。

Tm是50％的靶序列与完全匹配的探针进行杂交所处的温度(在限定的离子强度及pH下)。极严格条件被选择为等于对于特定探针的Tm。对于互补核酸(它们在DNA或RNA印迹中在滤器上具有超过100个互补的残基)的杂交的严格杂交条件的实例是在42℃下、具有1mg肝素的50％甲酰胺、将杂交进行过夜。高严格洗涤条件的实例是0.15M NaCl在72℃下持续约15分钟。严格洗涤条件的实例是0.2×SSC洗涤在65℃下持续15分钟(参见，Sambrook，下文，对于SSC缓冲液的说明)。通常，高严格洗涤之前会先进行低严格洗涤，以去除背景探针信号。对于例如超过100个核苷酸的双链体的中等严格洗涤的实例是1×SSC在45℃下持续15分钟。对于例如超过100个核苷酸的双链体的低严格洗涤的实例是4-6×SSC在40℃下持续15分钟。对于短探针(例如，约10至50个核苷酸)，严格条件典型地涉及小于约1.0M的Na离子的盐浓度，典型地在pH 7.0至8.3下约0.01至1.0M的Na离子浓度(或其他盐类)，并且该温度典型地是至少约30℃。还可以通过添加去稳定剂(如甲酰胺)来达到严格条件。一般而言，相比于不相关的探针，在特定的杂交测定中观察到高出2倍(或更高)的信噪比就表明检测到特异性杂交。如果在严格条件下彼此不杂交的核酸所编码的蛋白是基本上相同的，则它们仍然是基本上相同的。例如，当使用遗传密码允许的最大程度的密码子简并而创建核酸的拷贝时，则发生这种情况。

以下是可以用来克隆同源核苷酸序列(这些序列与本发明的参考核苷酸序列基本上相同)的杂交/洗涤条件的设置的实例：参比核苷酸序列在以下条件下优选地与该参比核苷酸序列杂交：在7％十二烷基硫酸钠(SDS)、0.5M NaPO4、1mM EDTA中在50℃下，并且在2xSSC、0.1％SDS中在50℃下洗涤；更令人希望的是在7％十二烷基硫酸钠(SDS)、0.5MNaPO4、1mM EDTA中在50℃下，并且在1xSSC、0.1％SDS中在50℃下洗涤；仍又更加令人希望的是在7％十二烷基硫酸钠(SDS)、0.5M NaPO4、1mM EDTA中在50℃下，并且在0.5xSSC、0.1％SDS中在50℃下洗涤；优选在7％十二烷基硫酸钠(SDS)、0.5M NaPO4、1mM EDTA中在50℃下，并且在0.1xSSC、0.1％SDS中在50℃下洗涤；更优选在7％十二烷基硫酸钠(SDS)、0.5MNaPO4、1mM EDTA中在50℃下，并且在0.1xSSC、0.1％SDS中在65℃下洗涤。

两个核酸序列或蛋白基本上相同的另一个指示是由第一核酸编码的蛋白与由第二核酸编码的蛋白进行免疫性交联反应或与其特异性结合。因此，蛋白质典型地是与第二蛋白质基本上一致的，例如其中这两种蛋白质仅区别于保守性取代。

如本文所使用的，“合成多核苷酸”是指包含天然存在的多核苷酸中不存在的碱基或结构性特征的多核苷酸。

对除草剂基本“耐受”的植物(当将它们经历除草剂时)提供的剂量/响应曲线与由类似经历的非耐受样植物提供的相比向右移动。此类剂量/响应曲线在x轴上绘制“剂量”并在y轴上绘制“杀死百分比”、“除草效果”等。为了产生给定的除草效果，耐受性植物典型地需要非耐受样植物的差不多至少两倍的除草剂。对除草剂基本“抗性”的植物在经历农业社区典型地用于杀死田间杂草的浓度和比率的除草剂时，很少(若有的话)出现坏死、裂解、萎黄或其他病变。

“转化”是用于将异源核酸引入到宿主细胞或生物的方法。特别地，“转化”意指DNA分子稳定地整合到目的生物的基因组中。

“转化的/转基因的/重组的”是指异源核酸分子已经引入其中的宿主生物例如细菌或植物。核酸分子可以被稳定地整合到宿主的基因组中，或者核酸分子还可以作为染色体外分子存在。这种染色体外分子能够自主复制。转化的细胞、组织或植物应当理解为不仅涵盖转化过程的终产物，而且涵盖其转基因子代。“非转化的”、“非转基因的”、或“非重组的”宿主是指不含该异源的核酸分子的野生型生物，例如细菌或植物。

例如，一旦已经将赋予除草剂抗性的SDPS多核苷酸单独地或与编码赋予所希望的性状的多肽的一种或多种另外的核酸分子结合而克隆到表达系统中，它就是被转化到了植物细胞中。本发明的受体和目标表达盒可以以多种技术公认的方式被引入到植物细胞中。术语“引入”在多核苷酸(例如，目的核苷酸构建体)的背景下是意指以这样一种方式将多核苷酸递呈到植物中，即该多核苷酸得到进入植物细胞的内部的途径。其中有待引入多于一个多核苷酸，这些多核苷酸可以作为单个核苷酸构建体的部分而进行组装，或者作为分开的核苷酸构建体，并且可以位于相同的或不同的转化载体上。因此，或作为育种方案的一部分，例如在植物中的在单一的转化事件中、在分开的转化事件中可以将这些多核苷酸引入到目的宿主细胞中。本发明的这些方法并不取决于用于引入一个或多个多核苷酸到植物中的特定方法，仅仅是获得一个或多个多核苷酸对于植物的至少一个细胞的内部的接近。在本领域中已知的用于将多个多核苷酸引入到植物中的方法包括但不限于瞬时转化方法、稳定转化方法、以及病毒介导的方法。

在多核苷酸的语境下，“瞬时转化”旨在意指将多核苷酸引入该植物中并且它不整合到该植物的基因组中。

在被引入植物中的多核苷酸的背景下，“稳定引入(stably introducing)”或“稳定引入的(stably introduced)”意指所引入的多核苷酸被稳定地掺入到植物基因组中，并且因此该植物用该多核苷酸进行了稳定转化。

“稳定转化(stable transformation)”或“稳定转化的(stably transformed)”旨在意指被引入到植物中的多核苷酸(例如，本文所述的核苷酸构建体)整合进该植物的基因组中并且能够被其子代所继承，更特别地，通过多个连续代的子代而遗传。

对于那些在植物转化领域的普通技术人员而言，用于植物转化的可获得的众多转化载体是已知的，并且与本发明有关的基因可以与任何这样的载体结合使用。载体的选择将取决于优选的转化技术以及用于转化的目标物种。对于某些目标物种，可以优选不同的抗生素或除草剂选择性标志物。在转化中常规使用的选择性标志物包括赋予对卡那霉素以及相关抗生素的抗性的nptll基因(Messing和Vierra Gene[基因]19:259-268(1982)；Bevan等人,Nature[自然]304:184-187(1983))、赋予对除草剂草铵膦(还被称作草丁膦；参见White等人,Nucl.Acids Res[核酸研究]18:1062(1990)，Spencer等人Theor.Appl.Genet[理论与应用遗传学]79:625-631(1990)以及美国专利号5,561,236以及5,276,268)的抗性的pat和bar基因、赋予对抗生素潮霉素的抗性的hph基因(Blochinger和Diggelmann,Mol.Cell Biol.[分子细胞生物学]4:2929-2931)、以及赋予对甲氨蝶呤的抗性的dhfr基因(Bourouis等人,EMBO J.[欧洲分子生物学学会杂志]2(7):1099-1104(1983))、赋予对草甘膦的抗性的EPSPS基因(美国专利号4,940,935和5,188,642)、也赋予对草甘膦的抗性的草甘膦N-乙酰基转移酶(GAT)基因(Castle等人(2004)Science[科学],304:1151-1154；美国专利申请公开号20070004912、20050246798和20050060767)、以及提供代谢甘露糖的能力的6-磷酸甘露糖异构酶基因(美国专利号5,767,378和5,994,629)。可替代地，以及在一个优选的实施例中，本发明的SDPS基因与作为选择剂的合适底物PSII除草剂的使用结合，它自身被用作选择性标志物。

用于再生植物的方法在本领域也是熟知的。例如，已经利用Ti质粒载体用于递送外源DNA，以及直接DNA摄入、脂质体、电穿孔、显微注射、以及微弹。此外，可以利用来自农杆菌属的细菌来转化植物细胞。以下是用于转化双子叶和单子叶植物二者的代表性技术连同代表性质体转化技术的说明。

对于使用根癌农杆菌的转化而言，很多载体是可获得的。这些载体典型地携带至少一个T-DNA边界序列并且包括例如pBIN19(Bevan,Nucl.Acids Res.[核酸研究](1984))的载体。对于在农杆菌转化中有用的载体的构建，参见，例如，美国专利申请公开号2006/0260011，通过援引结合在此。

没有使用根癌农杆菌的转化避免了在选择的转化载体中对于T-DNA序列的需要，并且因此除了例如以上描述的含有T-DNA序列的那些载体以外，可以利用缺乏这些序列的载体。不依赖农杆菌的转化技术包括经由粒子轰击、原生质体摄入(例如PEG和电穿孔)和显微注射的转化。载体的选择很大程度上取决于对于被转化的物种的优先选择。对于这些载体的构建，参见，例如美国申请号20060260011，通过援引结合在此。

用于双子叶植物的转化技术在本领域也是熟知的，并且包括基于农杆菌的技术以及不需要农杆菌的技术。非农杆菌技术涉及直接通过原生质体或细胞的外源基因材料的摄入。这可以通过PEG或电穿孔介导的摄入、粒子轰击介导的递送、或显微注射来完成。由Paszkowski等人,EMBO J.[欧洲分子生物学杂志]3:2717-2722(1984)，Potrykus等人,Mol.Gen.Genet.[分子遗传学与普通遗传学]199:169-177(1985)，Reich等人,Biotechnology[生物技术]4:1001-1004(1986)，以及Klein等人,Nature[自然]327:70-73(1987)描述了这些技术的实例。在每一情况下，使用本领域已知的标准技术将这些转化的细胞再生为完整的植物。

对于双子叶植物的转化，农杆菌介导的转化是优选的技术，因为它的高转化效率以及它的对于许多不同的物种的广泛实用。农杆菌转化典型地涉及将携带目的外源DNA的二元载体(例如，pCIB200或pCIB2001)转移到适当的农杆菌菌株中，该二元载体可以依赖于由该宿主农杆菌菌株(例如用于pCIB200以及pCIB2001的CIB542菌株(Uknes等人PlantCell[植物细胞]5:159-169(1993)))或者在共驻留Ti质粒上亦或在染色体上携带的vir基因的互补物。通过使用携带重组二元载体的大肠杆菌以及携带质粒(例如pRK2013)并且能够将该重组二元载体移动到目标农杆菌菌株中的辅助大肠杆菌菌株的三亲本杂交方法来实现该重组二元载体到农杆菌的转移。可替代地，可以通过DNA转化将该重组二元载体转移到农杆菌中(Hofgen和Willmitzer,Nucl.Acids Res.[核酸研究]16:9877(1988))。

通过重组体农杆菌转化目标植物物种通常涉及该农杆菌与来自该植物的外植体的共培养，并且遵循本领域熟知的方案。将转化的组织在存在于二元质粒T-DNA边界之间的携带有抗生素标志物或除草剂抗性标志物的可选择性培养基上再生。

另一种用基因转化植物细胞的方法涉及在植物组织和细胞上推进惰性的或生物学活性的粒子。这种技术披露于美国专利号4,945,050、5,036,006和5,100,792(均属于Sanford等人)中。一般地，这种方法涉及在细胞上在有效穿透该细胞的外表面并提供掺入在其内部中的条件下推进惰性的或生物学活性的粒子。当使用惰性粒子时，可以通过用含有所希望的基因的载体包被这些粒子以将该载体引入细胞中。可替代地，该靶细胞可以被该载体围绕使得该载体通过该粒子的激发而被带入该细胞中。也可以将生物学活性的粒子(例如，干酵母细胞、干细菌或噬菌体，各自包含被试图引入的DNA)推进到植物细胞组织中。

多数单子叶植物物种的转化现在也已经变成了常规操作。优选的技术包括使用PEG或电穿孔技术的直接基因转移进入原生质体、以及粒子轰击进入愈伤组织。专利申请EP0 292 435、EP 0 392 225、以及WO 93/07278描述了用于从良种近交品系玉蜀黍制备愈伤组织和原生质体、使用PEG或电穿孔转化原生质体、以及从转化的原生质体再生玉蜀黍植物的技术。Gordon-Kamm等人(Plant Cell[植物细胞]2:603-618(1990))和Fromm等人(Biotechnology[生物技术]8:833-839(1990))已经公开了使用粒子轰击用于转化源于A188的玉蜀黍品系的技术。此外，WO 93/07278和Koziel等人(Biotechnology[生物技术]11:194-200(1993))描述了通过粒子轰击用于转化良种近交品系玉蜀黍的技术。这种技术利用了从授粉之后14-15天的玉蜀黍雌穗切除的1.5-2.5mm长的未成熟玉蜀黍胚以及用于轰击的PDS-1000He Biolistics装置。

水稻的转化也可以利用原生质体或粒子轰击通过直接基因转移技术来进行。原生质体介导的转化已经对Japonica型和Indica型进行了描述(Zhang等人Plant Cell Rep[植物细胞报告]7:379-384(1988)；Shimamoto等人Nature[自然]338:274-277(1989)；Datta等人Biotechnology[生物技术]8:736-740(1990))。使用粒子轰击也可常规地转化两种类型(Christou等人Biotechnology[生物技术]9:957-962(1991))。此外，WO 93/21335描述了经由电穿孔用于转化水稻的技术。

还已经描述了使用农杆菌转化单子叶植物。参见WO 94/00977以及美国专利号5,591,616，这两者均通过援引并入本文。还参见Negrotto等人，Plant Cell Reports[植物细胞报告]19:798-803(2000)，通过援引并入本文。

经由用本发明中的目的核酸序列的转化获得的植物可以是各种各样的植物物种的任何一种，包括单子叶植物和双子叶植物的那些；然而，在本发明的方法中所使用的植物优选地选自在本文别处所示的农学上重要的目标作物的列表。与对于产量和质量重要的其他特征相结合到本发明的基因的表达可以通过育种结合到植物品系中。育种的方法和技术在本领域中是已知的。参见例如Welsh J.R.,Fundamentals of Plant Genetics andBreeding[植物遗传与育种基础],John Wiley&Sons,[约翰威立国际出版公司]纽约(1981)；Crop Breeding[作物育种],Wood D.R.(编辑)American Society of AgronomyMadison[美国农学学会],Wis.(1983)；Mayo O.,The Theory of Plant Breeding[植物育种理论],第二版,Clarendon Press[克拉伦登出版社],牛津(1987)；Singh,D.P.,Breedingfor Resistance to Diseases and Insect Pests[针对疾病与虫害抗性的育种],Springer-Verlag[斯普林格出版社],纽约(1986)；以及Wricke和Weber,QuantitativeGenetics and Selection Plant Breeding[数量遗传学与选择性植物育种],Walter deGruyter和Co.[德古意特出版社公司],柏林(1986)。

核苷酸在本文中用以下标准缩写表示：腺嘌呤(A)、胞嘧啶(C)、胸腺嘧啶(T)、以及鸟嘌呤(G)。氨基酸也由以下标准缩写表示：丙氨酸(Ala；A)、精氨酸(Arg；R)、天冬酰胺(Asn；N)、天冬氨酸(Asp；D)、半胱氨酸(Cys；C)、谷氨酰胺(Gln；Q)、谷氨酸(Glu；E)、甘氨酸(Gly；G)、组氨酸(His；H)、异亮氨酸(Ile；1)、亮氨酸(Leu；L)、赖氨酸(Lys；K)、甲硫氨酸(Met；M)、苯丙氨酸(Phe；F)、脯氨酸(Pro；P)、丝氨酸(Ser；S)、苏氨酸(Thr；T)、色氨酸(Trp；W)、酪氨酸(Tyr；Y)、以及缬氨酸(Val；V)。

本披露尤其提供了用于在场所处选择性地控制杂草的组合物和方法。本发明进一步涉及重组DNA技术，并且特别涉及当与非转基因类植物相比时表现出对除草剂的显著抗性或显著耐受性的转基因植物的产生。对除草剂基本“耐受”的植物(当将它们经历除草剂时)提供的剂量/响应曲线与由类似经历的非耐受样植物提供的相比向右移动。此类剂量/响应曲线在x轴上绘制“剂量”并在y轴上绘制“杀死百分比”、“除草效果”等。为了产生给定的除草效果，耐受性植物典型地需要非耐受样植物的差不多至少两倍的除草剂。对除草剂基本“抗性”的植物在经历农业社区典型地用于杀死田间杂草的浓度和比率的除草剂时，很少(若有的话)出现坏死、裂解、萎黄或其他病变。

尚未报道植物中对茄呢基二磷酸合酶(SDPS)抑制性除草剂的耐受性，因为其先前未被认为是某些类别的除草化合物的靶位点。过表达茄呢基二磷酸合酶基因或其变体的转基因植物耐受所述除草剂。此外，可以在植物中编辑天然SDPS基因以赋予对所述除草剂的耐受性。因此，本披露因此尤其提供了在更广泛的农业环境中利用茄呢基二磷酸合酶抑制性除草剂的机会。

因此，根据本披露的一个方面，提供了在包含作物植物和杂草的场所处选择性地控制杂草的方法，该方法包括向该场所施用杂草控制量的包含SDPS抑制性除草剂的杀有害生物剂组合物，其中修饰这些作物植物，使得它们包含为该作物植物提供针对该SDPS抑制性除草剂的耐受性的SDPS。

出于本发明的目的，SDPS抑制性除草剂是抑制拟南芥SDPS(即在如本文所述的测定方法中表现出小于10μM，优选地5μM的IC50)的除草剂。

在一个这样的实施例中，SDPS抑制性除草剂是具有式(I)的化合物：在一个这样的实施例中，SDPS抑制性除草剂是具有式(I)的化合物：

其中

R

R

R

R

具有式(I)的示例性化合物包括以下所示的除草剂化合物实例1和除草剂化合物实例2：

除草剂化合物实例1：

除草剂化合物实例2：

在本发明的另一个实施例中，SDPS抑制性除草剂是具有正下方的式(1)的化合物

如WO 2015/089003中所披露的，将其全部内容通过援引并入本文。

在本发明的另一个实施例中，SDPS抑制性除草剂是WO 2015/108779中披露的化合物。因此，在此实施例中，SDPS抑制性除草剂是具有式(1)的化合物：

其中

Q是通过碳原子与式1的其余部分结合的并且任选地被1至4个R

Z是O或S；

每个R

R

每个R

m是0、1、2或3；

每个n独立地是0、1或2；

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

在此实施例中，具有式(1)的化合物优选地选自由以下组成的组：5-[2-氯-6-(5-氯嘧啶-2-基)氧基-苯基]-3-(二氟甲基)异噁唑、5-[2-溴-6-(5-氯嘧啶-2-基)氧基-苯基]-3-(二氟甲基)异噁唑和3-(5-氯嘧啶-2-基)氧基-2-[3-(二氟甲基)异噁唑-5-基]苄腈。更优选地，化合物是5-[2-氯-6-(5-氯嘧啶-2-基)氧基-苯基]-3-(二氟甲基)异噁唑。

在本发明的另一个实施例中，SDPS抑制性除草剂是具有正下方的式(1)的化合物

如WO 2016/010731中所披露的，将其全部内容通过援引并入本文。

在本发明的另一个实施例中，SDPS抑制性除草剂是具有正下方所示的式的化合物

如WO 2016/014814中所披露的，将其全部内容通过援引并入本文。

在本发明的另一个实施例中，SDPS抑制性除草剂是具有正下方的式(1)的化合物

如WO 2016/149315中所披露的，将其全部内容通过援引并入本文。

在本发明的另一个实施例中，SDPS抑制性除草剂是WO 2016/196606中披露的具有式(1)的化合物。因此，在此实施例中，SDPS抑制性除草剂是具有式(I)的化合物(包括所有几何和立体异构体)，其N-氧化物及盐：

其中

A是：

B是O或S；

R1是H、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6卤代烷基、C2-C6卤代烯基、C2-C6卤代炔基、C3-C6环烷基、C3-C6卤代环烷基、C3-C6卤代环烷基烷基、C4-C6烷基环烷基、C4-C6环烷基烷基、C1-C6烷基氨基、C1-C6卤代烷基氨基、C2-C10二烷基氨基、C2-C10卤代二烷基氨基、C3-C6环氨基、C1-C6烷氧基、C3-C6烯氧基、C3-C6炔氧基、C1-C6卤代烷氧基、C3-C6卤代烯氧基、C3-C6卤代炔氧基、C3-C6环烷氧基、C3-C6卤代环烷氧基、C4-C6环烷基烷氧基、C4-C6卤代环烷基烷氧基、C2-C6烷氧基烷基、C2-C6卤代烷氧基烷基、C2-C6烷氧基卤代烷基、C2-C6烷氧基烷氧基、C2-C6氰基烷基、C2-C6氰基烷氧基、C3-C7氰基烷氧基烷基、C1-C6羟基烷基、C1-C6硝基烷基、C1-C6烷基硫代、C1-C6卤代烷基硫代、C3-C8环烷基硫代、C1-C6烯基硫代、C1-C6烷基亚磺酰基、C1-C6卤代烷基磺酰基、C3-C8环烷基磺酰基、C2-C6烷基硫代烷基、C2-C6卤代烷基硫代烷基、苄基、-N(R7)(OR8)、-ON(R9a)(R9b)或-N(R7)N(R9a)(R9b)；

Z是O或S；

R2是卤素、氰基、硝基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6卤代烷基、C3-C6环烷基或-SOnR10；

每个R3独立地是卤素、氰基、硝基、CHO、C(＝O)NH2、C(＝S)NH2、SO2NH2、C1-C4烷基、C2-C4烯基、C2-C4炔基、C1-C4卤代烷基、C2-C4卤代烯基、C2-C4卤代炔基、C3-C6环烷基、C3-C6卤代环烷基、C4-C6烷基环烷基、C4-C6环烷基烷基、C2-C6烷基羰基、C2-C6卤代烷基羰基、C2-C6烷氧基羰基、C3-C7环烷基羰基、C2-C4烷氧基、C3-C4烯氧基、C3-C4炔氧基、C1-C4卤代烷氧基、C3-C6环烷氧基、C3-C6卤代环烷氧基、C4-C6环烷基烷氧基、C2-C6烷氧基烷基、C2-C6卤代烷氧基烷基、C2-C6烷氧基卤代烷基、C2-C6烷氧基烷氧基、C2-C4烷基羰基氧基、C2-C6氰基烷基、C2-C6氰基烷氧基、C2-C4烷基硫代烷基、-C(＝O)N(Rlla)(Rllb)、-C(＝NOR12)H、-C(＝N(R13))H或-SOnRl4；

m是0、1、2或3；

每个n独立地是0、1或2；

R4是H、C1-C6烷基或C1-C6卤代烷基；

R5是H、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6卤代烷基、C2-C6卤代烯基、C2-C6卤代炔基、C3-C6环烷基、C3-C6卤代环烷基、C4-C6烷基环烷基、C4-C6环烷基烷基、C2-C6烷氧基烷基、C2-C6卤代烷氧基烷基、C2-C6烷氧基卤代烷基、C2-C6氰基烷基、C3-C7氰基烷氧基烷基、C1-C6羟基烷基、C1-C6硝基烷基、C2-C6烷基硫代烷基、C2-C6卤代烷基硫代烷基或苄基；

每个R6a和R6b独立地是H、C1-C6烷基或C1-C6卤代烷基；

R7是H、C1-C6烷基或C1-C6卤代烷基；

R8是H、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C2-C6烷氧基烷基、C2-C6卤代烷氧基烷基或C2-C6氰基烷基；

每个R9a和R9b独立地是H、C1-C6烷基或C1-C6卤代烷基；

R10独立地是C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6烷基氨基或C2-C10二烷基氨基；

每个Rlla独立地是C1-C4烷基或C1-C4卤代烷基；

每个Rllb独立地是H、C1-C4烷基或C1-C4卤代烷基；

每个R12独立地是H或C1-C4烷基；

每个R13独立地是H、氨基、C1-C4烷基或C1-C4烷基氨基；

每个R14独立地是C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6烷基氨基或C2-C10二烷基氨基；并且R15是H或C1-C6烷基。

在此实施例中，具有式(1)的化合物优选地选自由以下组成的组：5-氯-2-[3-氯-2-(5,5,5-三氟戊基)苯氧基]嘧啶、2-[3-溴-2-(5,5,5-三氟戊基)苯氧基]-5-氯-嘧啶、3-(5-氯嘧啶-2-基)氧基-2-(5,5,5-三氟戊基)苄腈、1-[2-氯-6-(5-氯嘧啶-2-基)氧基-苯基]-4,4,4-三氟-丁-1-酮、1-[2-溴-6-(5-氯嘧啶-2-基)氧基-苯基]-4,4,4-三氟-丁-1-酮和3-(5-氯嘧啶-2-基)氧基-2-(4,4,4-三氟丁酰基)苄腈。更优选地，化合物是1-[2-氯-6-(5-氯嘧啶-2-基)氧基-苯基]-4,4,4-三氟-丁-1-酮。

在本发明的另一个实施例中，SDPS抑制性除草剂是具有正下方的式(1)的化合物

如WO 2017/011288中所披露的，将其全部内容通过援引并入本文。

在本发明的另一个实施例中，SDPS抑制性除草剂是具有正下方的式(1)的化合物

如WO 2018/204164中所披露的，将其全部内容通过援引并入本文。

在本发明的另一个实施例中，SDPS抑制性除草剂是具有式(I)的化合物，如国际专利申请PCT/EP 2019/079971中所披露的。因此，在此实施例中，SDPS抑制性除草剂是具有式(I)的化合物

或其农艺学上可接受的盐，

其中

Q是5元芳香族杂环，其任选地被1或2个独立地选自由以下组成的组的R3取代基取代：C1-C4烷基、C2-C4烯基、C2-C4炔基、环丙基、C1-C4卤代烷基、C1-C2烷氧基-、C1-C2卤代烷氧基-、卤素、-C(O)C1-C4烷基、NO2、-CH2CN、-CN和-S(O)pC1-C4烷基；

每个R1独立地选自由以下组成的组：卤素、-CN、硝基、C1-C4烷基、C2-C4烯基、C2-C4炔基、C1-C4卤代烷基、C1-C4烷氧基-、C1-C4卤代烷氧基-和-S(O)pC1-C4烷基；

每个R2独立地选自由以下组成的组：卤素、-CN、NO2、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基、C3-C6环烷基、C2-C4烯基、C2-C4炔基、-S(O)pC1-C4烷基、C1-C4烷氧基、-C(O)C1-C4烷基、-C(O)OC1-C4烷基和C1-C4卤代烷氧基；

m＝0、1或2；

n＝0、1或2；并且

p＝0、1或2。

在此实施例中，具有式(I)的化合物优选地选自由以下组成的组：5-[2-[(5-氯-3-氟-2-吡啶基)氧基]-6-氟-苯基]-3-(二氟甲基)异噁唑、5-氯-3-氟-2-[2-[4-(三氟甲基)吡唑-1-基]苯氧基]吡啶和5-氯-2-[2-[3-(二氟甲基)异噁唑-5-基]-3-氟-苯氧基]吡啶-3-甲腈。

在本发明的另一个实施例中，SDPS抑制性除草剂是具有正下方所示的式的化合物

如WO 2019/016066中所披露的，将其全部内容通过援引并入本文。

在本发明的另一个实施例中，SDPS抑制性除草剂是具有正下方的式(I)的化合物

如WO 2020/002089中所披露的，将其全部内容通过援引并入本文。

在本发明的另一个实施例中，SDPS抑制性除草剂是具有正下方的式(I)的化合物

如WO 2020/002087中所披露的，将其全部内容通过援引并入本文。

在本发明的另一个实施例中，SDPS抑制性除草剂是具有正下方的式(I)的化合物

如WO 2020/002085中所披露的，将其全部内容通过援引并入本文。

在本发明的另一个实施例中，SDPS抑制性除草剂是具有正下方的式(I)的化合物

如EP 0061913 A2中所披露的，将其全部内容通过援引并入本文。

在适用的情况下，SDPS抑制性除草剂可以作为外消旋体或作为单一对映异构体(或富含对映异构体的对映异构体混合物)存在。

应该理解的是，在上述方法中，可以将除草剂组合物施用于作物出苗前和/或作物出苗后的场所(所谓的“过多”施用)。在优选的实施例中，在作物出苗前施用除草剂组合物。可以根据需要施用单次或实际上多次施用以获得需要的杂草控制。可以将SDPS抑制性除草剂以任何合适的比率施用于该场所。典型地，本发明的基因组编辑或转基因植物表现出对以每公顷约5至约2,000克活性成分(g/ha)的量施用的SDPS抑制性除草剂的抗性或耐受性，该量包括，例如，约5g/ha、约10g/ha、约15g/ha、约20g/ha、约25g/ha、约30g/ha、约35g/ha、约40g/ha、约45g/ha、约50g/ha、约55g/ha、约60g/ha、约65g/ha、约70g/ha、约75g/ha、约80g/ha、约85g/ha、约90g/ha、约95g/ha、约100g/ha、约110g/ha、约120g/ha、约130g/ha、约140g/ha、约150g/ha、约160g/ha、约170g/ha、约180g/ha、约190g/ha、约200g/ha、约210g/ha、约220g/ha、约230g/ha、约240g/ha、约250g/ha、约260g/ha、约270g/ha、约280g/ha、约290g/ha、约300g/ha、约310g/ha、约320g/ha、约330g/ha、约340g/ha、约350g/ha、约360g/ha、约370g/ha、约380g/ha、约390g/ha、约400g/ha、约410g/ha、约420g/ha、约430g/ha、约440g/ha、约450g/ha、约460g/ha、约470g/ha、约480g/ha、约490g/ha、约500g/ha、约510g/ha、约520g/ha、约530g/ha、约540g/ha、约550g/ha、约560g/ha、约570g/ha、约580g/ha、约590g/ha、约600g/ha、约610g/ha、约620g/ha、约630g/ha、约640g/ha、约650g/ha、约660g/ha、约670g/ha、约680g/ha、约690g/ha、约700g/ha、约710g/ha、约720g/ha、约730g/ha、约740g/ha、约750g/ha、约760g/ha、约770g/ha、约780g/ha、约790g/ha、约800g/ha、约810g/ha、约820g/ha、约830g/ha、约840g/ha、约850g/ha、约860g/ha、约870g/ha、约880g/ha、约890g/ha、约900g/ha、约910g/ha、约920g/ha、约930g/ha、约940g/ha、约950g/ha、约960g/ha、约970g/ha、约980g/ha、约990g/ha、约1,000g/ha、约1,010g/ha、约1,020g/ha、约1,030g/ha、约1,040g/ha、约1,050g/ha、约1,060g/ha、约1,070g/ha、约1,080g/ha、约1,090g/ha、约1,100g/ha、约1,110g/ha、约1,120g/ha、约1,130g/ha、约1,140g/ha、约1,150g/ha、约1,160g/ha、约1,170g/ha、约1,180g/ha、约1,190g/ha、约1,200g/ha、约1,210g/ha、约1,220g/ha、约1,230g/ha、约1,240g/ha、约1,250g/ha、约1,260g/ha、约1,270g/ha、约1,280g/ha、约1,290g/ha、约1,300g/ha、约1,310g/ha、约1,320g/ha、约1,330g/ha、约1,340g/ha、约1,350g/ha、约360g/ha、约1,370g/ha、约1,380g/ha、约1,390g/ha、约1,400g/ha、约1,410g/ha、约1,420g/ha、约1,430g/ha、约1,440g/ha、约1,450g/ha、约1,460g/ha、约1,470g/ha、约1,480g/ha、约1,490g/ha、约1,500g/ha、约1,510g/ha、约1,520g/ha、约1,530g/ha、约1,540g/ha、约1,550g/ha、约1,560g/ha、约1,570g/ha、约1,580g/ha、约1,590g/ha、约1,600g/ha、约1,610g/ha、约1,620g/ha、约1,630g/ha、约1,640g/ha、约1,650g/ha、约1,660g/ha、约1,670g/ha、约1,680g/ha、约1,690g/ha、约1,700g/ha、约1,710g/ha、约1,720g/ha、约1,730g/ha、约1,740g/ha、约1,750g/ha、约1,760g/ha、约1,770g/ha、约1,780g/ha、约1,790g/ha、约1,800g/ha、约1,810g/ha、约1,820g/ha、约1,830g/ha、约1,840g/ha、约1,850g/ha、约1,860g/ha、约1,870g/ha、约1,880g/ha、约1,890g/ha、约1,900g/ha、约1,910g/ha、约1,920g/ha、约1,930g/ha、约1,940g/ha、约1,950g/ha、约1,960g/ha、约1,970g/ha、约1,980g/ha、约1,990g/ha、或约2,000g/ha。

术语“杂草”涉及任何不想要的植被并且包括，例如，残留或“劣种(rogue)”或“自生自长的(volunteer)”作物植物。

在本发明的一方面，用重组多核苷酸修饰该作物植物，该重组多核苷酸提供SDPS，该SDPS为作物植物提供针对SDPS抑制性除草剂的耐受性。

典型地，重组多核苷酸将包含(i)可操作地连接的植物可操作的启动子(ii)编码SDPS的区域和(iii)转录终止子。典型地，重组多核苷酸将进一步包含编码多肽的区域，该多肽能将SDPS靶向至亚细胞器如叶绿体。重组多核苷酸可以进一步包含例如转录增强子。此外，可以根据植物宿主(其中需要表达SDPS)来对编码SDPS的区域进行“密码子优化”。技术人员非常清楚对本发明的上下文有用的植物可操作启动子、转录终止子、叶绿体转运肽、增强子等。

SDPS可以是“野生型”酶或者其可以是已经被修饰以提供优先动力学特性(关于提供除草剂耐受性植物)的酶。

合适的SDPS的实例是，但不限于，衍生自以下的那些：拟南芥、普通小麦(小麦)、大麦(Hordeum vulgare，Barley)、水稻(Oryza sativa，Rice)、玉蜀黍(Zea mays，Maize)、大豆(Glycine max，Soybean)、小球藻和莱茵衣藻。

应当理解，可以通过重组多核苷酸的方式将经修饰的SDPS引入植物中。图1说明了可用于将经修饰的SDPS引入植物的质粒(SEQ ID NO:19)的一个实例。转化方法如上所述并且是本领域已知的，但简言之，图1中的质粒包括重组多核苷酸，该重组多核苷酸包含(i)编码茄呢基二磷酸合酶的区域，该区域可操作地连接至植物可操作的启动子。

对于图1中的载体组分(也相对于SEQ ID NO:19)，cNPT2-01-04(起点：592终点：1567)编码新霉素磷酸转移酶；cNPT3-01-01(起点：5869终点：6660)编码赋予卡那霉素抗性的磷酸转移酶；cTETR-01-01(起点：10273终点：10923)是tet R的基因；SDPS2 F240L(起点：12305终点：13564)编码经修饰的SDPS；bNLB-01-01(起点：2746终点：2893)显示与T-DNA左边界的相似性；bNRB-01-03(起点：11297终点：11458)是T-DNA右边界；pNOS-01-01(起点：284终点：590)是Nos启动子；p35S-07-01(起点：11484终点：11810)是CaMV 35s启动子；p35S-10-01(起点：11811终点：12227)是CaMV35s启动子；复制源特征包括oRK2-01-01(起点：8317终点：8934)和oCOLE-03-01(起点：9724终点：10039)；tNOS-01-01(起点：17终点：271)是胭脂碱合酶的终止子；tNOS-01-01(起点：1786终点：2040)是胭脂碱合酶的终止子。

可替代地，可以通过基因编辑技术的方式来原位编辑内源性SDPS，以提供对SDPS抑制性除草剂耐受的SDPS。这样的基因组编辑和/或诱变技术是本领域熟知的。同样，引入可以通过本领域已知的任何方式完成，包括：基因渗入、转基因或定点核酸酶(SDN)。特别地，通过定点核酸酶(SDN)的方式引入对该核酸序列的修饰。更特别地，SDN选自：大范围核酸酶、锌指、转录激活子样效应子核酸酶系统(TALEN)或成簇规律间隔短回文重复系统(CRISPR)。SDN也被称为“基因组编辑”，或用工程化核酸酶进行基因组编辑(GEEN)。这是一种类型的遗传工程，其中使用在基因组中的期望定位处产生位点特异性双链断裂(DSB)的工程化核酸酶在生物体的基因组中插入、缺失或取代DNA。通过非同源末端连接(NHEJ)或同源重组(HR)修复诱导的双链断裂，导致靶向突变(‘编辑’)。特别地，SDN可以包含以下技术，如：大范围核酸酶、锌指核酸酶(ZFN)、转录激活子样效应子核酸酶(TALEN)(Feng等人2013Cell Res.[细胞研究]23,1229-1232,Sander和Joung Nat.Biotechnol.[自然生物技术]32,347-355 2014)、和成簇规律间隔短回文重复(CRISPR-Cas)系统。

因此，本披露还涉及可用于编辑的质粒。质粒包括编码DNA修饰酶，如定点核酸酶，例如，Cas9核酸酶、Cfp1核酸酶、dCas9-FokI、dCpf1-FokI、嵌合Cas9-胞苷脱氨酶、嵌合Cas9-腺嘌呤脱氨酶、嵌合FEN1-FokI和Mega-TAL、切口酶Cas9(nCas9)、嵌合dCas9非FokI核酸酶和dCpf1非FokI核酸酶的核酸。质粒还包括至少一种指导RNA。质粒还可以包括另外的组分，例如，它们可以包括gRNA启动子，例如prOsU3-01(其是用于非编码RNA的pol III依赖性转录的水稻U3启动子)以调节至少一种gRNA的表达。载体可类似地包括另外的特征如，选择性标志物，例如磷酸甘露糖异构酶(PMI)并可与甘露糖选择一起使用来回收稳定转化的植物。另外的特征包括调控序列，例如用于调控选择性标志物的表达的启动子和终止子。

载体可以进一步包括辅助转化的另外的特征，例如有助于如上所述的农杆菌介导的转化的特征。

靶序列可以变化并且可以包括15-25个核苷酸长的序列(包括编码表1的氨基酸的序列，例如3个核苷酸的序列)。

图2说明了可用于编辑的质粒(SEQ ID NO:42)的一个实例。在此实例中，质粒是二元CRISPR构建体，其含有靶向玉蜀黍基因区域的Cpf1内切酶。泛素启动子驱动内切核酸酶的表达和gRNA。载体还含有作为选择性标志物的PMI。

对于图2中所示的载体组分(其中位置相对于SEQ ID NO:42)，cLbCpf1-02(起点：2049终点：5831)是II类CRISPR/Cas系统的RNA引导的核酸内切酶并且是来自毛螺菌科细菌ND2006的水稻密码子优化版本；cPMI-09(起点：10334终点：11512)是合成的磷酸甘露糖异构酶基因；cSpec-03(起点：12240终点：13028)是编码酶氨基糖苷3'腺苷酰转移酶的基因，赋予了对大观霉素和链霉素的抗性以用于将载体保持在大肠杆菌和农杆菌中；cVirG-09(起点：13328终点：13960)是用于克隆目的的无功能VirG基因；cRepA-01(起点：13990终点：15063)编码复制蛋白；bNRB-04(起点：4终点：143)是根癌农杆菌胭脂碱ti质粒的T-DNA的右边界区；bNRB-01-01(起点：101终点：125)是右边界重复；bNLB-03(起点：11831终点：11960)是根癌农杆菌胭脂碱ti质粒的T-DNA的左边界区；prSoUbi4-02(起点：229终点：2030)是组成型甘蔗ubi4启动子；prSoUbi4-02(起点：6099终点：7900)是组成型甘蔗ubi4启动子；prUbi1-04(起点：8326终点：10317)是玉蜀黍多聚泛素1启动子；oVS1-02(起点：15106终点：15510)是来自假单胞菌的质粒pVS1的复制起点和分隔区，并且在根癌农杆菌宿主中用作复制起点；oCOLE-06(起点：16188终点：16994)是在大肠杆菌中起作用的ColE1复制起点；rHH-01(起点：7908终点：7950)是来自某些病毒(包括烟草环斑病毒)的卫星RNA的保守序列基序，负责自我切割；rLbCrRNA-01(起点：7951终点：7971)是LbCpf1的支架crRNA，也称为指导RNA的同向重复(DR)；rLbgRNACpf1ZmLHT1-01(起点：7951终点：7971)是CRISPR/Cpf1指导RNA，其包括毛螺菌科细菌ND2006 LbCrRNA(靶向玉蜀黍基因组中的序列)的同向重复；rHDV-01(起点：7995终点：8062)编码来自丁型肝炎病毒(HDV)的可自我切割的核酶的序列。应当清楚的是，图2中的实例仅作为说明提供，本领域的其他技术人员将能够容易地根据本发明设计载体。

应进一步理解，所述方法中使用的作物植物可以进一步包含编码另外的除草剂耐受酶的另外的重组多核苷酸。另外的除草剂耐受酶的实例包括，例如，选自由以下组成的组的除草剂耐受酶：5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸酯合酶(EPSPS)、HST、草甘磷乙酰基转移酶(GAT)、细胞色素P450、草丁膦乙酰转移酶(PAT)、乙酰乳酸合酶(ALS)、原卟啉原氧化酶(PPGO)、羟基苯丙酮酸双加氧酶(HPPD)、八氢番茄红素脱氢酶(PD)、麦草畏降解酶(例如WO02/068607)和芳基氧基除草剂降解酶(如WO 2007/053482和WO 2005/107437中教导的)。

杀有害生物剂组合物可以进一步包含一种或多种另外的杀有害生物成分。另外的杀有害生物成分可以包括，例如，除草剂(如讨论的)，然而也可以包括杀真菌剂和/或杀虫剂。优选地，上述方法中使用的杀有害生物剂组合物可以进一步包含一种或多种另外的除草剂，作物植物对这些除草剂天然耐受，或经由表达如本文提及的一种或多种另外的转基因来对其具有抗性。在优选的实施例中，一种或多种另外的除草剂选自由以下组成的组：草甘膦(包括其农业化学上可接受的盐)；草铵膦(包括其农业化学上可接受的盐)；氯乙酰苯胺，例如，甲草胺、乙草胺、异丙甲草胺、精异丙甲草胺；光系统II抑制剂，例如三嗪(如莠灭净、莠去津、氰草津和特丁津)，三嗪酮(如环嗪酮和赛克津)，脲(如绿麦隆、敌草隆、异丙隆、利谷隆和丁噻隆)；ALS-抑制剂，例如磺酰脲，如酰嘧磺隆、绿磺隆、氟啶嘧磺隆、氯吡嘧磺隆、烟嘧磺隆、氟嘧磺隆、氟磺隆、玉嘧磺隆、醚苯磺隆、三氟啶磺隆和三氟甲磺隆；二苯醚，例如，三氟羧草醚和氟磺胺草醚；抑制HPPD的除草剂，如，硝磺草酮和氟吡草酮；麦草畏(包括其农业化学上可接受的盐)和2,4D(包括其农业化学上可接受的盐)。

本发明还进一步提供了重组多核苷酸，该重组多核苷酸包含(i)编码SDPS的与植物可操作的启动子可操作地连接的区域和(ii)至少一种另外的异源多核苷酸，其包含与植物可操作的启动子可操作地连接的编码另外的除草剂耐受酶的区域。另外的除草剂耐受酶，例如，选自由以下组成的组：羟基苯丙酮酸双加氧酶(HPPD)、5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸酯合酶(EPSPS)、草甘磷乙酰基转移酶(GAT)、细胞色素P450、草丁膦乙酰转移酶(PAT)、乙酰乳酸合酶(ALS)、原卟啉原氧化酶(PPGO)、八氢番茄红素脱氢酶(PD)、和麦草畏降解酶(如WO02/068607中教导的)。

优选地，重组多核苷酸包含(i)编码SDPS的与植物可操作的启动子可操作地连接的区域和(ii)编码HPPD的与植物可操作的启动子可操作地连接的区域。重组多核苷酸还可能包含至少两个、三个或更多个另外的区域，每个区域编码例如如先前定义的除草剂耐受酶。因此，在另一个优选的实施例中，重组多核苷酸包含(i)编码SDPS的区域，(ii)编码HPPD酶的区域和(iii)编码草甘膦耐受酶的区域。

本发明进一步提供包含根据本发明的重组多核苷酸的载体。

本发明进一步涉及过表达SDPS酶的转化植物，与未转化的类似植物相比，这些转化植物对SDPS抑制性除草剂表现出显著的抗性或显著的耐受性。

因此，本发明进一步提供了植物细胞，当与未转化的类似植物细胞相比时，这些植物细胞表现出对SDPS抑制性除草剂的显著抗性或显著耐受性-所述植物细胞包含如本文所述的本发明的重组多核苷酸。应理解的是，编码SDPS的区域和编码一种或多种另外的除草剂耐受酶的任何区域可以在相同的(“连接的”)或实际上分开的转化重组多核苷酸分子上提供。

植物细胞可以进一步包含另外的转基因性状，例如提供对昆虫、真菌和/或线虫的抗性的异源多核苷酸。

本发明进一步提供包含根据本发明的植物细胞的形态学正常的可育SDPS抑制剂耐受植物、植物细胞、组织和种子。

转化的植物或植物细胞包括但不限于大田作物、水果和蔬菜，如卡诺拉油菜、向日葵、烟草、甜菜、棉花、玉蜀黍、小麦、大麦、水稻、高粱、番茄、芒果、桃子、苹果、梨、草莓、香蕉、甜瓜、mangelworzel、马铃薯、胡萝卜、莴苣、卷心菜、洋葱等。特别优选的转基因植物是大豆属、甘蔗、豌豆、蚕豆、白杨、葡萄、柑橘、苜蓿、黑麦、燕麦、草坪草和饲草、亚麻和油菜、以及尚未特别提及的坚果生产植物。在方法的特别优选的实施例中，所述植物是双子叶植物，优选地选自由以下组成的组：卡诺拉油菜、向日葵、烟草、甜菜、大豆、棉花、高粱、番茄、芒果、桃子、苹果、梨、草莓、香蕉、甜瓜、马铃薯、胡萝卜、莴苣、卷心菜、洋葱，并且特别优选地是大豆。在另外优选的实施例中，所述植物是玉蜀黍或水稻。优选地，本发明的植物是大豆、水稻或玉蜀黍。本发明还包括前述植物的后代，以及此类植物和后代的种子或其他繁殖材料。

本发明还进一步提供了提供对SDPS抑制性除草剂具有耐受性的转基因植物的方法，该方法包括用包含编码SDPS酶的区域的一种或多种重组多核苷酸转化植物材料，使用SDPS抑制性除草剂来选择转化的植物材料并且将材料再生为形态正常的可育植物。

本发明进一步涉及用于在植物转化中使用包含编码SDPS的区域的多核苷酸(作为选择性标志物)的方法以及包含编码SDPS的区域的多核苷酸在耐受除草剂(其全部或部分通过抑制SDPS起作用)的植物的生产中的用途。

本发明还进一步涉及SDPS抑制剂作为选择剂在植物转化中的用途以及重组SDPS在用于鉴定SDPS抑制性除草剂的体外筛选方法中的用途。

本披露还涉及用于鉴定茄呢基二磷酸合酶抑制性除草剂的各种方法。在典型的实施例中，方法包括在植物中表达SDPS；并且

将植物暴露于除草剂，其中相对于不表达SDPS的对照植物，植物中降低的损害表明化合物是茄呢基二磷酸合酶抑制性除草剂。SDPS可以选自(a)SEQ ID NO:1-18、45-349、和663-665的SDPS；或(b)“经修饰的”SDPS，其具有与SEQ ID NO:1-18、45-349和663-665中所示的序列至少80％相同的氨基酸序列；或(c)“经修饰的”SDPS，其具有与SEQ ID NO:1-18、45-349和663-665中所示的序列至少90％相同的氨基酸序列；或(d)“经修饰的”SDPS，其具有与SEQ ID NO:1-18和45-349中所示的序列至少95％相同的氨基酸序列；或(e)具有选自SEQ ID NO:655-662的基序的SDPS，或(f)或在对应于SEQ ID NO:5的以下氨基酸位置中的一个的位置处具有至少一个突变的SDPS：F240L、F227L、F229L、F247L、L120A、L120R、L120W、L123A、L123C、L123D、L123N、L123S、L123W、E127A、E127G、E127K、E127Y、N128L、N128P、V130D、V130K、L131A、L131E、L131M、L131P、A134V、F139D、F139K、F139N、F139R、F139T、P148I、P148L、P148M、P148T、P148V、V151E、V151F、V151I、V151M、V151N、L174F、L174T、A175I、A175P、A175S、E176A、E176D、E176H、E176K、E176N、E176P、E176Y、I177A、I177C、I177F、I177L、I177M、I177S、I177T、I177Y、I178G、I178Q、I178W、E179I、M180I、M180Q、M180S、M180Y、M180W、I181M、I181N、A184G、A184S、A184T、T183C、T183Q、S185A、S185T、S185G、I187E、I187F、I187T、I187V、H188F、H188I、H188L、H188M、H188V、V191A、V191T、I204A、I204F、I204G、I204H、I204K、I204Q、I204R、I204S、I204T、Y208A、Y208D、Y208E、Y208H、Y208I、Y208K、Y208L、Y208M、Y208N、Y208Q、Y208R、Y208S、Y208T、Y208V、G209N、T210Y、R211D、R211E、R211N、R211T、R211V、L215I、L215M、A216T、F219A、M220I、M220C、F221W、A222G、A222M、A222S、Q223A、Q223E、Q223F、Q223G、Q223H、Q223I、Q223K、Q223L、Q223M、Q223R、Q223Y、S224F、S224I、S224M、S224N、S224Q、S224T、S224V、S225C、S225F、S225H、S225I、S225K、S225M、S225N、S225Q、S225T、S225V、S225Y、W226A、W226C、W226E、W226I、W226L、W226Q、W226R、W226T、W226V、F227D、F227L、F227M、F227R、F227V、F227W、L228C、L228I、L228M、L228T、L228V、A229H、A229I、A229L、A229M、A229N、A229T、N230E、N230R、E235G、K238G、K238N、K238S、L239A、L239R、I240A、I240C、I240W、S241A、S241H、S241N、S241T、V243A、V243G、V243N、V243Q、V243S、I244A、I244F、I244G、I244H、I244K、I244L、I244M、I244N、I244P、I244Q、I244S、I244V、I244Y、K245F、K245H、K245M、K245N、K245W、D246E、D246M、D246N、D246Q、D246S、D246T、D246Y、F247E、F247L、F247M、F247N、F247V、A248P、S249A、S249E、S249F、S249G、S249K、S249L、S249N、S249Q、S249T、S249V、S249Y、G250A、I252L、I252M、I252V、K253L、A255T、A255W、S256N、T257E、T257G、T257H、T257M、T257Q、T257W、Y274D、Y274G、Y274L、Y274M、Y274Q、T276S、L279F、I280W、I280F、A282G、A282H、A282K、A282N、A282R、S283C、S283F、S283I、S283M、S283T、S283W、R306F、R306H、R306L、R306N、L310G、G309A、G309F、G309M、G309S、L310D、L310E、L310F、L310H、L310N、L310Q、L310W、L310Y、F312C、F312I、F312L、F312M、F312V、Q313A、Q313C、Q313D、Q313S和Q313T。在许多实例中，SDPS变体可以包括上述突变中的2、3、4、5、6或7个。观察到的损害典型地将包括漂白。暴露比率可以变化并且可以包括暴露在2.5ppm至20ppm的范围内。

本披露还涉及鉴定对参考茄呢基二磷酸合酶抑制性除草剂(参考除草剂)具有增加的耐受性的茄呢基二磷酸合酶变体的各种方法。参考除草剂可以是例如具有未知作用模式的商业除草剂或新颖除草剂。方法典型地包括获得表达第一SDPS变体的第一植物和表达含有至少一个与所述第一变体不同的氨基酸的第二SDPS变体的第二植物；和将该第一植物和该第二植物暴露于该参考除草剂，其中一种植物相对于另一种植物的降低的损害表明存在对该参考除草剂具有增加的耐受性的变体。变体中的任何氨基酸均可以改变，并且在许多实施例中，变体将相差两个、三个、四个、五个或更多个氨基酸。用于产生变体的示例性氨基酸包括表1中的那些。SDPS可以包括(a)SEQ ID NO:1-18、45-349和663-665的SDPS；或(b)“经修饰的”SDPS，其具有与SEQ ID NO:1-18、45-349和663-665中所示的序列至少80％相同的氨基酸序列；或(c)“经修饰的”SDPS，其具有与SEQ ID NO:1-18、45-349和663-665中所示的序列至少90％相同的氨基酸序列；或(d)“经修饰的”SDPS，其具有与SEQ ID NO:1-18、45-349和663-665中所示的序列至少95％相同的氨基酸序列；或(e)具有选自SEQ ID NO:655-662的基序的SDPS；或(f)或在对应于SEQ ID NO:5的氨基酸位置中的一个的位置处具有至少一个突变的SDPS，如以上示例的。暴露比率可以变化，例如在2.5ppm至20ppm的范围内。

由金维智公司(Genewiz)(南普兰菲尔德，美国)合成针对大肠杆菌密码子使用优化的编码N末端his标记的SDPS基因(Seq ID 13-18)的DNA序列，以包括5’NdeI和3’NotI限制性位点。将这些经由NdeI和NotI限制性位点克隆到大肠杆菌表达质粒pET24a(Novagen公司(Novagen))中，并将所得质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中并且然后用50μg/ml卡那霉素维持。根据制造商的说明转化来自安捷伦公司(Agilent)的大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞。简而言之，将100ul等分试样的感受态细胞解冻，在冰上与1.7ul的β-巯基乙醇预混合并且然后在冰上与1-50ng的DNA在轻轻涡旋下孵育30min。将每个转化反应在返回至冰之前短暂(45s)升温至42℃，并且然后与预热至42℃的0.9ml的SOC培养基混合。然后将细胞悬浮液在37℃下孵育1小时，以250rpm震荡，然后将5和50ul等分试样铺板到含有50μg/ml卡那霉素的LB琼脂平板上。过夜生长后挑取转化的菌落。在初始种子培养物中预生长后，将转化细胞转移至Formedium自诱导培养基(其具有超级肉汤(Terrific broth)基质并且包括微量元素(目录号：AIMTB0210))，并且将培养物在37℃下在2.5L烧瓶中200rpm下生长3小时，随后在20℃，200rpm下过夜生长。在4℃下，以6,000rpm，20min收获细胞。在生物质收获后，将约20g湿重的细胞糊重悬于100ml裂解缓冲液中，该缓冲液是PBS(磷酸盐缓冲盐水)pH 7.4，10％甘油，20mM咪唑。将细胞搅拌约30min以重悬并且然后在20000psi的压力下使用恒定系统细胞破碎仪来裂解。通过在贝克曼(Beckman)JA 25.5转子中以50,000x g在4℃下离心旋转30min来澄清细胞裂解物。所有后续纯化步骤均在4℃下进行。然后将澄清的裂解物施用到5ml HisTrap FF柱上，该柱在PBS(pH 7.4，10％甘油，20mM咪唑)中平衡。用20个柱体积的该缓冲液洗涤柱子并且然后在3.5个柱体积的PBS(pH 7.4，10％甘油，500mM咪唑)中洗脱结合的蛋白质。然后将洗脱的蛋白质进一步纯化并将缓冲液向下流过GE 26/60S200 SEC柱交换至150mM MOPS(pH 8.0，50mM NaCl，10％甘油)。合并含有目的蛋白的洗脱级分，并将样品在液氮中形成珠粒，随后在-80℃下储存。使用Nanodrop ME52070确定蛋白质浓度。根据用考马斯蓝染色的SDS PAGE，获得的蛋白质典型地作为单个主要条带(对应于约44kDa的预期分子量)运行(例如，对于N末端his标记的SEQ ID NO:13)，并典型地基于凝胶光密度测定法判断为>约90％的纯度。

聚异戊二烯基转移酶活性经由测量将异戊二烯基焦磷酸酯(IPP)掺入释放焦磷酸盐的香叶基香叶基焦磷酸(GGPP)中产生的磷酸盐来测定。将测定与无机焦磷酸酶(IPPase)偶联以释放无机磷酸盐(使用孔雀石绿试剂定量)。测定在96孔微量滴定板中运行。将除草剂以足够高的浓度溶解在二甲基亚砜(DMSO)中作为储备溶液。将2μl适当浓度的稀释除草剂转移至96孔透明微量滴定板中。将酶(典型地为约10mg/ml的储备液浓度)在100mMTricine缓冲液(pH 8.0，含有641mM IPP、12.8mM MgCl

在测定聚异戊二烯基转移酶活性的可替代的方法中，根据制造商的说明，使用赛默飞世尔公司(Thermo Fisher)EnzChek测定试剂盒来定量磷酸盐。该方法将无机磷酸盐的生产与通过嘌呤核苷磷酸化酶(PNP)将2-氨基-6-巯基-7-甲基嘌呤核苷(MESG)酶促转化为核糖1-磷酸酯和2-氨基-6-巯基-7-甲基嘌呤偶联。将除草剂以足够高的浓度溶解在DMSO中作为储备溶液。将4μl适当浓度的稀释除草剂转移至96孔透明微量滴定板中。将酶(典型地为约10mg/ml的储备液浓度)在100mM Tricine缓冲液(pH 8.0，含有570mM IPP、11.4mMMgCl

使用实例2中描述的测定来鉴定对除草剂化合物实例1和2具有增加的除草剂耐受性的SDPS变体。将SDPS序列(如SEQ ID NO.16)针对大肠杆菌表达进行密码子优化并在希望的氨基酸位置处创建了单位点饱和文库(特威斯特生物科学公司(Twist Bioscience)，美国)，从而在选择的氨基酸位置处产生了所有可能的氨基酸取代池。表1示出了经变化、测定和测序的选择的氨基酸位置(基于SEQ ID NO.5编号)。表1A示出了本发明示例性SDPS基序的氨基酸基序。

表1.

表1A

表2示出了在实例2描述的测定中证明对除草剂X和Y的耐受性高于亲本序列SEQID NO:16的SDPS变体。

很明显，一些突变提供了对选择除草剂中的一种或在一些情况下对两种除草剂的增加的耐受性。在许多情况下，将相同突变多次回收(针对每个文库)并证明对除草剂的持续耐受模式。显示了每个目的突变的单个实例的数据。

从此变体列表中，进一步选择对除草剂中的一种具有强耐受性的那些或对两种除草剂均具有耐受性的那些。如实例2所述，对这些变体进行测定以确定IC50值。表3示出了每个变体的IC50数据。数据清楚地显示，选择的实例对一种或多种目的除草剂具有显著增加的IC50值。

表3.

拟南芥SDPS或其直系同源物(参见全长SDPS序列，包括叶绿体转运肽)，例如在转基因烟草中表达的SEQ ID No.1-12。编码了这些多肽的DNA序列(对于烟草是优化的，或任选地根据目标作物如大豆进行密码子优化的)是合成地制备的。将每个序列设计为包括具有TMVΩ5’前导序列的5’融合，并且使得它们在5’端侧接XhoI，在3’端侧接KpnI以促进直接克隆到对基于农杆菌的植物转化适合的二元载体中。

在一个实例中，使用XhoI/KpnI切断表达盒(包含TMVΩ5’前导序列和目的SDPS编码基因)并将其克隆到类似地消化的pBIN 19(Bevan,Nucl.Acids Res.[核酸研究](1984))中(在一个双重增强的35S启动子之后，在一个NOS 3’转录终止子之前)并且然后转化到大肠杆菌DH5α感受态细胞中。使用从该大肠杆菌中回收的DNA来转化根癌农杆菌LBA4404，并且在含有利福平和卡那霉素的培养基上选择转化的细菌。使用本领域很好地描述的方法或如本文所述使烟草组织经受农杆菌介导的转化。例如，使用含有表达SDPS的二元载体的根癌农杆菌的母板来接种含有100mg/l利福平加50mg/l卡那霉素的10ml LB(L肉汤)(使用单一菌落)。在28℃在200rpm震荡下将这种培养物孵育过夜。使用这种整个的过夜培养物来接种50ml体积的含有相同抗生素的LB。再一次，在28℃下在200rpm震荡下将这种培养物培养过夜。通过在3000rpm下离心15分钟使这些农杆菌细胞沉淀，然后重悬于含有30g/l蔗糖、pH5.9的MS(Murashige and Skoog)的培养基中至OD(600nM)＝0.6。将这种悬浮液以25ml等分试样分配到皮氏培养皿中。

克隆地微繁殖的烟草嫩枝培养物被用来切除嫩叶(还没有完全展开)。将中脉和外叶缘移开并且弃去，并且将剩余的叶片切成1平方厘米。将这些叶片转移到农杆菌悬浮液中持续20分钟。然后将外植体移开，在无菌滤纸上轻拍以移除过量的悬浮液，然后转移到固体NBM培养基(在pH 5.9下的含有30g/l蔗糖、1mg/l BAP(苯甲酸嘌呤)以及0.1mg/l NAA(萘乙酸)并且用8g/l植物琼脂进行固化的MS培养基)上，使各外植体的背轴面与该培养基相接触。每个平板转化约7个外植体，然后将平板密封并在光照培养箱中在25℃下保持16小时光周期持续3天。

然后将这些外植体转移到含有100mg/l卡那霉素加上抗生素的NBM培养基上以进一步阻止农杆菌的生长(具有250mg/l羧苄青霉素的200mg/l特美汀)。然后每2周在这种相同的培养基上进行进一步的传代培养。

当嫩枝开始从愈伤组织叶外植体再生时，将这些移到嫩枝伸长培养基中(MS培养基，30g/l蔗糖、8g/l植物琼脂、100mg/l卡那霉素、200mg/l特美汀、250mg/l羧苄青霉素、pH5.9)。在2周内这些稳定的转基因植物容易地生根。为了对每个事件提供多种植物，以最终允许对每种转基因植物的一种以上的除草剂测试，将所有生根的嫩枝进行微繁殖从而产生3个或更多个生根的克隆。

使用引物(这些引物扩增了对目的SDPS转基因特异性的500bp片段)通过PCR对在结合卡那霉素的培养基上正在生根并且显示出旺盛的枝生长的推定的转基因植物进行分析。在未转化的烟草上的这种相同的引物集的评估结论性地显示出这些引物不会扩增来自天然烟草基因组的任何序列。

将转化的嫩枝分成2或3个克隆并且从卡那霉素抗性愈伤组织进行再生。这些嫩枝在含有卡那霉素的MS琼脂上生根。使存活的生根的外植体再生根从而提供了来自每个事件的约40-50个卡那霉素抗性的并且PCR阳性的事件。

一旦生根，将这些小植株从琼脂转移并且盆栽到具有50％泥炭、具有缓释肥料的50％John Innes Soil No.3的3英寸圆形盆中，有规律地浇水从而在温室中建立8至12天。温室条件是白天约24℃-27℃；夜间18℃-21℃并且约14h的光周期。将湿度调节到约65％并且使用的光水平是在台式水平(bench level)下高达2000μmol/m

因此产生了包含编码全长SDPS基因(例如Seq ID No 2)的基因的约四十种烟草植物的转基因群体。基于相同的大小从每个群体中选择植物，并进行ELISA或Mass Western测试以监测蛋白质转基因SDPS表达水平。选择最高表达的T0品系以正常方式进行自交(self)并产生T1种子和T2品系和种子。将来自最高表达品系的种子在含有一系列浓度的SDPS抑制性除草剂的琼脂平板上测试芽发，如本文实例所教导的，并且抗性植物品系被选为在最高浓度的除草剂下对根生长和形态的损害最小。与类似生长和处理的野生型和无效分离植物相比，抗性植物品系表现出关于SDPS抑制剂的除草损害的剂量响应，该剂量响应向右移动。

如实例4中所述产生每个植物转化构建体包含20-30个转基因事件的转基因烟草群体。将这些品系克隆繁殖，并用1000g/ha的除草剂化合物1喷洒1个克隆/事件。对整个群体的除草损害进行目视评估，并在第7天和14天给出除草剂损害评分。1分表示无可目视的损害或发育迟缓，而100分表示植物完全死亡。

图3中的结果显示了表达以下的4个植物群体的损害评分：拟南芥SDPS2基因(SEQID NO.2)、拟南芥SDPS2 F240L突变基因(SEQ ID NO.3)、小球藻SDPS基因(SEQ ID NO.10)或小球藻SDPS F227L突变基因(SEQ ID NO.11)。还评估了野生型萨姆松(Samsun)烟草对照种群的除草剂损害。表4中给出了针对每个构建体整个转基因植物群体的平均损害评分。很明显，小球藻SDPS(SEQ ID NO.10)基因的过表达不增加对除草剂化合物实例1的耐受性，然而，携带F227L突变(SEQ ID NO.11)的基因的突变版本确实显示出增加的耐受性。拟南芥基因(SEQ ID NO.2)在除草剂耐受性方面比小球藻野生型基因表现更好，并且通过添加F240L突变(SEQ ID NO.3)再次提高了该耐受性。

如上所述产生另一组过表达拟南芥SDPS F240L基因(SEQ ID NO.3)的转基因烟草。用75g/ha苯草醚或25g/ha除草剂Z喷洒这些植物。在处理后7天评估植物的除草剂损害并与野生型烟草植物进行比较。表5中示出了除草剂损害评分。

表5：

与对照植物上看到的损害相反，许多表达拟南芥SDPS2 F240L基因(SEQ ID NO.3)的转基因烟草事件显示没有来自除草剂处理的损害。

表6中示出了转基因烟草群体相对于对照野生型植物的平均除草剂损害评分。

结果显示在表达拟南芥SDPS2 F240L基因(SEQ ID NO.3)的转基因品系中明显增加了对除草剂的耐受性。

种子灭菌：

通过将烟草(Nicotiana tabacum)萨姆松野生型和转基因品系放入含有约15ml新鲜制备的2％Virkon的30ml通用容器(Universals)中进行灭菌并在滚筒上旋转15min。使用延长的细尖微型pastette吸掉Virkon，并将种子用1％PPM(植物防腐剂混合物，P820，250ml，阿波罗科技公司(Apollo Scientific Ltd.))洗涤4次。

种子发芽：

将种子在含有1/3MS+0.8％琼脂糖(SPI，Duchefa#DU 0463)，pH 5.7(用于WT)和1/3MS+0.8％琼脂糖+100ug/ml卡那霉素(用于转基因)的90mm皮氏培养皿中发芽。每约100粒种子分散在每个皮氏培养皿上。注意：转基因种子不是纯合的，因此接种在卡那霉素上以进行选择。(MS＝Murashige和Skoog MS培养基，#M0221，Melford实验室)。

将平板置于透明塑料“培养箱”(盖在板下)中，并在具有以下条件的受控环境室中孵育：

温度：白天25℃/夜间25℃

光照设置：光周期16小时，光照水平约50μmol/m

剂量响应测试：

将7天大的烟草小植株(每孔3株小植株)无菌转移到每孔含有2ml 1/2MS+30mM蔗糖(Fisher#10638403)，pH 5.7的24孔板(有盖的平底细胞培养多孔板)(康宁科斯塔公司(Corning Costar)#3524)中。将除草剂2从10ppm开始在DMSO中连续稀释两倍并添加到培养基中。仅将DMSO添加到零化合物对照孔中。注意：DMSO的最终浓度不超过0.5％，因为这对小植株有抑制作用。

将平板置于透明塑料“培养箱”(盖在板下)中，并在具有以下条件的受控环境室中孵育2周：

温度：白天24℃/夜间18℃

光照设置：光周期16小时，光照水平600μmol/m

评估：

7天后目视评估小植株的漂白症状并为每个孔给出损害评分。重复每个板并在表3中给出两个损害评分。

表3：

F240L突变的存在减少了5ppm除草剂处理下的损害，尽管在10ppm下未看到显著优势。

应当理解的是，本文描述的实例和实施例仅是出于说明性的目的，并且根据其说明书的不同修改或变化将提示本领域的技术人员并且将会包含在本申请的精神和范围内以及所附权利要求的范围内。

在本说明书中提到的所有公开物和专利申请均指示本发明所属领域中的技术人员的技术水平。所有公开物和专利申请均通过援引并入本文，其程度如同每个单独的公开物或专利申请被明确地并单独地指示通过援引而并入。