一种米老排杂交授粉方法

摘要

本发明公开了一种米老排杂交授粉方法，包括下述步骤：选择米老排优良父本、母本；待父本生长至盛花期时，采集二级花枝，将花枝基部剪成45°斜口后插入装MS营养液的营养管中；选择携带即将开花的母本花序的枝条，剪去部分叶片，得母本花枝；将带有父本花枝的营养管绑在母本花枝上，引入传粉昆虫，授粉后，对母本进行套袋并扎紧袋口；授粉套袋1个月后，进行揭袋，2个月后调查坐果数。本发明基于花解剖结构观察和长期的开花物候观测，开发出了一种有效的米老排杂交授粉方法，授粉成功率达81.5％，对于米老排新品种创制以及金缕梅科植物杂交育种具有重要的意义。

说明书

技术领域

本发明涉及杂交授粉技术领域，更具体地说是涉及一种米老排杂交授粉方法。

背景技术

杂交育种是植物新品种创制的重要手段，主要包括亲本选择、杂交方式和操作技术等。通过杂交能够使不同亲本的优良性状综合表达，从而创造和选育出新的品种。然而，林木树体高大、且具有高度分化的繁育系统和传粉模式，因此林木杂交育种进展较慢，仅局限于杨树、松树和杉木等少数树种中。

米老排又名壳菜果(Mytilaria laosensis Lec.)，为金缕梅科壳菜果属植物，花序为肉穗状花序，花序轴长4厘米，花序柄长2厘米，花小、花丝极短、花药隐藏于药隔中，收集花粉或去雄难度大，故杂交控制授粉一直处于空白。

因此，如何提供一种米老排杂交授粉方法是本领域技术人员亟需解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明基于花解剖结构观察和长期的开花物候观测，开发出了一种有效的米老排杂交授粉方法，授粉成功率达81.5％，对于米老排新品种创制以及金缕梅科植物杂交育种具有重要的意义。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种米老排杂交授粉方法，包括下述步骤：

1)父母本选择：选择米老排优良父本、母本；

2)父本处理：待父本生长至盛花期时，采集二级花枝，将花枝基部剪成45°斜口后插入装MS营养液的营养管中；

3)母本处理：选择携带即将开花的母本花序的枝条，剪去部分叶片，得母本花枝；

4)授粉：将带有父本花枝的营养管绑在母本花枝上，引入传粉昆虫，进行套袋并扎紧袋口；

5)统计：授粉套袋1个月后，进行揭袋，2个月后调查坐果率和结果数。

作为本发明优选的技术方案，步骤3)中，所述剪去部分叶片为在不影响套袋的情况下保留1-2个较小的叶片。

作为本发明优选的技术方案，步骤4)中，传粉昆虫为蓟马。

经由上述的技术方案可知，本发明基于花解剖结构观察和开花物候观测，采用父本花序离体培养和传粉昆虫引进的方法，免除了花粉收集和去雄环节，解决了米老排杂交控制授粉技术难题；利用该技术，采用全双列杂交(5*5)和析因交配设计(5*8)，开展了65个优良父母本组合的米老排杂交控制授粉试验。经分析，授粉成功率达81.5％，获得了53个杂交组合的种子，培育苗木2000余株，创制了一批米老排新种质。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。

图1附图为对父本进行处理后的实物图；

图2附图为对父本和母本套袋授粉后的实物图；

图3附图为授粉成功后果实的实物图；

图4附图为授粉成功后，子代生长情况图。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

一种米老排杂交授粉方法，包括下述步骤：

1)父母本筛选

根据已建种源家系试验林的生长和形质数据，结合候选亲本实地开花物候观察，最终筛选出优良母本5个(M1-M5)和优良父本8个(F1-F8)；采用全双列杂交(5个母本*5个父本)和析因交配(5个母本*8个父本)进行控制授粉，共65个杂交组合，每个组合授粉10-15个花序；杂交亲本见表1；

表1父母本编号及杂交组合名称

2)控制授粉方式

鉴于米老排花粉难收集，为省去花粉收集环节，试图探索新的控制授粉方式。通过实地踏查，观测父母本不同花枝的显蕾期、即将开花期、盛花期，而后确定母本可授粉的适宜花期，最后再选择适宜的父本花枝进行授粉，其操作工序大致如下：

(1)适宜和适量父本花枝的采集：在花序进入盛花期时，采集父本二级花枝若干根(图1)，并送至授粉母树附近；为尽量减少对花枝的损伤，在剪取花枝后要轻拿轻放；

(2)父本花枝的修剪和装管：用枝剪将花枝叶片修除，并将花枝基部剪成45°斜口；而后将花枝插入已装MS营养液的塑料管中，之后根据管口孔径与花枝吻合情况考虑是否需要加塞棉花，以防止营养液流(渗)出；最后，将带花枝的营养管放入试管架中，并进行编号与装箱；

(3)控制授粉和套袋：选择即将开花的母本花序1个(也可考虑2-3个)，剪去绝大部分叶片，在不影响套袋的情况下保留1-2个较小的叶片；而后将带花枝的营养管绑在母本花枝的适宜部位，保证父本花序和母本花序尽可能接近；最后，引入传粉昆虫，并进行套袋和袋口绑扎，并在套袋口处进行挂签(图2)；

(4)设置两种空白对照套袋：对照1：在同一母本上，选择介于显蕾期和即将开放期的花序进行套袋，但未引入传粉昆虫，每个母本套袋10个花序,；对照2：在对照1的基础上，采集同株的已进入盛花期的花序1-2条，用胶带绑扎在介于显蕾期和即将开放期的花序进行套袋，但未引入传粉昆虫，每个母本套袋10个花序；

3)杂交效率统计

授粉套袋后1个月进行揭袋，观察穗状花序子房膨大数量；2个月后，调查坐果率和结果数(图3)，结果发现两种空白对照的母本花序均枯萎，而采用本技术授粉的母本花序为绿色并开始膨大，授粉成功率达81.5％(53/65)，授粉成功组合见表2；

表2授粉成功53个杂交组合

4)杂交子代生长发育观察

收集杂交授粉成功获得的果实，统计种子数量和重量；将种子沙播于苗床中，1个月后统计发芽率和苗高等指标(图4)。结果表明，杂交子代发芽率平均为34.4％，苗高平均为4.4cm。

本说明书中各个实施例采用递进的方式描述，每个实施例重点说明的都是与其他实施例的不同之处，各个实施例之间相同相似部分互相参见即可。

对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。