一种CRISPR/Cas12a一步核酸检测方法

摘要

本发明提供了一种CRISPR/Cas12a一步核酸检测方法，包括以下步骤：步骤1，选取待检测病菌的靶标序列，设计RPA上下游引物并进行特异性筛选后扩增靶标序列，得到引物扩增子序列，利用NCBI BLAST对引物扩增子序列进行特异性验证；步骤2，设计特异性的crRNA；步骤3，设计单链DNA报告分子；步骤4，将单链DNA报告分子、RPA上下游引物、冻干RPA反应颗粒、醋酸镁、RPA水化缓冲液、NEB buffer2.1、RNase Inhibitor与待测靶标进行混合，得到反应混合物；步骤5，构建包括反应物放置管以及注射器的一步检测试剂盒，将反应混合物置于反应物放置管底部，将crRNA与Cas12a蛋白预装到注射器；步骤6，在反应混合物反应后，推动注射器的活塞使得crRNA和Cas12a蛋白与反应混合物混合进行反应，再通过蓝光激发，得到检测结果。