一种针对血管内皮生长因子的人源化抗体的药物组合物

摘要

本发明属于医药化工领域，涉及一种针对血管内皮生长因子的人源化抗体的药物组合物，具体而言涉及一种稳定性提高的贝伐珠单抗的药物组合物。所述药物组合物采用磷酸钠缓冲剂和第二缓冲剂的组合缓冲体系，以及采用甘露醇或氯化钠中的一种或两种作为渗透压调节剂；该药物组合物与仅采用磷酸钠缓冲剂以及采用α,α‑海藻糖作为渗透压调节剂的安维汀相比，聚合物和降解物明显降低，稳定性显著提高，因此本发明的药物组合物特别适应大规模生产和长期储藏的要求。

说明书

本申请为分案申请，原申请的申请日为2014年9月22日，申请号为201410487742.1，发明名称为“一种针对血管内皮生长因子的人源化抗体的药物组合物”。

技术领域

本发明属于医药化工领域，涉及一种针对血管内皮生长因子的人源化抗体的药物组合物，具体而言涉及一种稳定性提高的贝伐珠单抗的药物组合物。

背景技术

贝伐珠单抗(bevacizumab)为针对血管内皮生长因子(VEGF)的人源化单克隆抗体，联合以5-氟尿嘧啶为基础的化疗适用于转移性结直肠癌患者的治疗。罗氏公司生产的贝伐珠单抗注射液，商品名安维汀，已在美国、欧洲、中国等多地上市。

安维汀为静脉注射用无菌溶液，pH为6.1，无色至略带棕色的乳光至澄明液体，浓度为25mg/mL，有100mg和400mg两种规格，对应的体积分别为4mL和16mL，不含防腐剂，以一次性小瓶包装。

安维汀中辅料组成如下：α,α-海藻糖二水合物，磷酸二氢钠一水合物，无水磷酸氢二钠，吐温20和无菌注射用水。

安维汀的稳定性不理想，在加速和长期存放的过程中聚合物和降解物增长明显，尤其是聚合物显著增长。高分子量的聚合物进入体内易产生免疫原性，对临床使用安全存在潜在风险；同时活性低或无活性的降解物会影响产品的活性。因此，亟需开发稳定性更好的贝伐珠单抗药物组合物，以适应大规模生产和长期储藏的要求，本发明提供了这样的药物组合物。

发明内容

本发明的目的在于提供一种贝伐珠单抗的药物组合物，所述药物组合物包含：

(a)10～40mg/mL的贝伐珠单抗，

(b)0.1～200mg/mL的渗透压调节剂，

(c)0.1～10mg/mL的吐温20，和

(d)磷酸钠缓冲剂和第二缓冲剂组成的缓冲体系，

其中渗透压调节剂选自甘露醇或氯化钠中的一种或两种，

其中第二缓冲剂选自枸橼酸和枸橼酸钠的组合或者醋酸和醋酸钠的组合，

其中所述药物组合物的pH值为4.5～5.9。

术语“磷酸钠缓冲剂”为磷酸氢二钠和磷酸二氢钠的组合形成的缓冲剂。

应当理解，本发明的“磷酸钠缓冲剂”还可以是其他的磷酸或其药学上可接受盐或其水合物的组合形成的磷酸盐缓冲剂，其中磷酸药学上可接受盐包括但不限于磷酸的各种无机酸盐或有机酸盐，例如磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、磷酸钠、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、磷酸钾、磷酸氢二铵、磷酸二氢铵或磷酸铵中的一种或多种，具体的例子有磷酸氢二钾和磷酸二氢钾的组合，使用其他的磷酸或其药学上可接受盐或其水合物的组合仍属于本发明保护的范围。

应当理解，本发明的枸橼酸钠也可以是其他枸橼酸盐或其水合物，包括但不限于枸橼酸的各种无机酸盐或有机酸盐，例如枸橼酸钾。

应当理解，本发明的醋酸钠也可以是其他醋酸盐或其水合物，包括但不限于醋酸的各种无机酸盐或有机酸盐，例如醋酸钾。

如前所述的贝伐珠单抗的药物组合物，其中贝伐珠单抗的浓度优选为20～30mg/mL，最优选为约25mg/mL。

如前所述的贝伐珠单抗的药物组合物，其中渗透压调节剂的浓度优选为1～50mg/mL，最优选为约4.7～25mg/mL。

如前所述的贝伐珠单抗的药物组合物，其中吐温20的浓度优选为0.2～2mg/mL，最优选为约0.4mg/mL。

如前所述的贝伐珠单抗的药物组合物的pH值优选为4.9～5.5，最优选为约5.2。

在本发明的一个具体实施方案中，所述药物组合物包含：

(a)约25mg/mL的贝伐珠单抗，

(b)约4.7～25mg/mL的渗透压调节剂，

(c)约0.4mg/mL的吐温20，和

(d)磷酸钠缓冲剂和第二缓冲剂组成的缓冲体系，

其中渗透压调节剂选自甘露醇或氯化钠中的一种或两种，

其中第二缓冲剂选自枸橼酸和枸橼酸钠的组合或者醋酸和醋酸钠的组合，

其中所述药物组合物的pH值为约5.2。

在本发明的又一个具体实施方案中，所述药物组合物包含：

(a)约25mg/mL的贝伐珠单抗，

(b)约25mg/mL的甘露醇，

(c)约0.4mg/mL的吐温20，和

(d)磷酸钠缓冲剂和第二缓冲剂组成的缓冲体系，

其中第二缓冲剂选自枸橼酸和枸橼酸钠的组合或者醋酸和醋酸钠的组合，

其中所述药物组合物的pH值为约5.2。

在本发明的再一个具体实施方案中，所述药物组合物包含：

(a)约25mg/mL的贝伐珠单抗，

(b)约9mg/mL的氯化钠，

(c)约0.4mg/mL的吐温20，和

(d)磷酸钠缓冲剂和第二缓冲剂组成的缓冲体系，

其中第二缓冲剂选自枸橼酸和枸橼酸钠的组合或者醋酸和醋酸钠的组合，

其中所述药物组合物的pH值为约5.2。

在本发明的还一个具体实施方案中，所述药物组合物包含：

(a)约25mg/mL的贝伐珠单抗，

(b)约12mg/mL的甘露醇，

(c)约4.7mg/mL的氯化钠，

(d)约0.4mg/mL的吐温20，和

(d)磷酸钠缓冲剂和第二缓冲剂组成的缓冲体系，

其中第二缓冲剂选自枸橼酸和枸橼酸钠的组合或者醋酸和醋酸钠的组合，

其中所述药物组合物的pH值为约5.2。

在本发明的一个更加具体实施方案中，所述药物组合物包含：

(a)约25mg/mL的贝伐珠单抗，

(b)约25mg/mL的甘露醇，

(c)约0.4mg/mL的吐温20，

(d)约0.48mg/mL的一水合磷酸二氢钠，

(e)约3.75mg/mL的十二水合磷酸氢二钠，

(f)约1.725mg/mL的三水合醋酸钠，和

(g)约0.02mg/mL的醋酸，

其中所述药物组合物的pH值为约5.2。

在本发明的又一个更加具体实施方案中，所述药物组合物包含：

(a)约25mg/mL的贝伐珠单抗，

(b)约25mg/mL的甘露醇，

(c)约0.4mg/mL的吐温20，

(d)约0.48mg/mL的一水合磷酸二氢钠，

(e)约3.75mg/mL的十二水合磷酸氢二钠，

(f)约1.21mg/mL的一水合枸橼酸，和

(g)约0.68mg/mL的二水合枸橼酸钠，

其中所述药物组合物的pH值为约5.2。

在本发明的再一个更加具体实施方案中，所述药物组合物包含：

(a)约25mg/mL的贝伐珠单抗，

(b)约9mg/mL的氯化钠，

(c)约0.4mg/mL的吐温20，

(d)约0.48mg/mL的一水合磷酸二氢钠，

(e)约3.75mg/mL的十二水合磷酸氢二钠，

(f)约1.21mg/mL的一水合枸橼酸，和

(g)约0.68mg/mL的二水合枸橼酸钠，

其中所述药物组合物的pH值为约5.2。

在本发明的还一个更加具体实施方案中，所述药物组合物包含：

(a)约25mg/mL的贝伐珠单抗，

(b)约12mg/mL的甘露醇，

(c)约4.7mg/mL的氯化钠，

(d)约0.4mg/mL的吐温20，

(e)约0.48mg/mL的一水合磷酸二氢钠，

(f)约3.75mg/mL的十二水合磷酸氢二钠，

(g)约1.21mg/mL的一水合枸橼酸，和

(h)约0.68mg/mL的二水合枸橼酸钠，

其中所述药物组合物的pH值为约5.2。

术语“聚合物”是指贝伐珠单抗由于肽链上的氨基酸残基相互作用，发生聚合而产生的聚合物。

术语“降解物”是指贝伐珠单抗在水溶液中经脱酰胺或肽链断裂等反应中产生的比贝伐珠单抗分子量小的产物。

通过采用磷酸钠缓冲剂和所述的第二缓冲剂的组合缓冲体系，以及采用甘露醇或氯化钠中的一种或两种作为渗透压调节剂，所形成的本发明的药物组合物的聚合物和降解物明显降低，与仅采用磷酸钠缓冲剂以及采用α,α-海藻糖作为渗透压调节剂的安维汀相比，稳定性显著提高，这样的效果是本领域技术人员难以预料的。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进行进一步的描述，然而，本发明中这些实施例仅用于阐明而不限制本发明的范围。同样，本发明不限于本文描述的任何具体优选的实施方案。本领域技术人员应该理解，对本发明技术特征所作的等同替换，或相应的改进，仍属于本发明的保护范围之内。

实施例1贝伐珠单抗注射液的制备

处方：

制备方法：按照上述配方，配制不含贝伐珠单抗的空白溶液，pH值为5.2。将纯化后的贝伐珠单抗原液，采用空白溶液置换6次，制成上述配方的溶液，除菌过滤，无菌分装，视检合格，即得。

实施例2贝伐珠单抗注射液的制备

处方：

制备方法：按照上述配方，配制不含贝伐珠单抗的空白溶液，pH值为5.2。将纯化后的贝伐珠单抗原液，采用空白溶液置换6次，制成上述配方的溶液，除菌过滤，无菌分装，视检合格，即得。

实施例3贝伐珠单抗注射液的制备

处方：

制备方法：按照上述配方，配制不含贝伐珠单抗的空白溶液，pH值为5.2。将纯化后的贝伐珠单抗原液，采用空白溶液置换6次，制成上述配方的溶液，除菌过滤，无菌分装，视检合格，即得。

实施例4贝伐珠单抗注射液的制备

处方：

制备方法：按照上述配方，配制不含贝伐珠单抗的空白溶液，pH值为5.2。将纯化后的贝伐珠单抗原液，采用空白溶液置换6次，制成上述配方的溶液，除菌过滤，无菌分装，视检合格，即得。

实施例5与

处方：

制备方法：按照上述配方，配制不含贝伐珠单抗的空白溶液，pH值为6.1。将纯化后的贝伐珠单抗原液，采用空白溶液置换6次，制成上述配方的溶液，除菌过滤，无菌分装，视检合格，即得。

实施例6贝伐珠单抗注射液的高温加热稳定性

按实施例1～4和实施例5的方法制得贝伐珠单抗注射液5批。将每批注射液置于25℃恒温环境中，于0月、1月、2月、3月、6月取样检测，利用分子筛色谱(Size-Exclusionchromatography，SEC)考察贝伐珠单抗纯度的变化情况，以评价本发明药物组合物的稳定性。

分子筛色谱(SEC)测定方法：采用TSKgel G3000 SWXL分子筛色谱柱，以20mmol/LNa

表1贝伐珠单抗纯度变化情况

结果显示，实施例5的处方在25℃放置6月后聚合物增长5.1％，降解物增长0.73％，主峰下降5.8％，而实施例1～4的处方在25℃放置6月后聚合物仅增长1.5～1.8％，降解物仅增长0.16～0.42％，主峰仅下降1.7～2.2％。上述结果表明，本发明实施例1～4的处方均较稳定，而实施例5的处方稳定性较差，本发明的贝伐珠单抗注射液的稳定性显著提高。

实施例7贝伐珠单抗注射液的长期稳定性

按实施例1～4和实施例5制得贝伐珠单抗注射液5批。将每批注射液于2～8℃条件下保存，于0月、3月、6月、9月、12月取样检测，利用分子筛色谱(Size-Exclusionchromatography，SEC)考察贝伐珠单抗纯度的变化情况，以评价本发明药物组合物的稳定性。

分子筛色谱(SEC)测定方法：采用TSKgel G3000 SWXL分子筛色谱柱，以20mmol/LNa

表2贝伐珠单抗纯度变化情况

结果显示，实施例5的处方在2～8℃放置12月聚合物增长2.5％，降解物增长0.38％，主峰下降2.9％，而实施例1～4的处方在2～8℃放置12月聚合物仅增长0.2～0.5％，降解物仅增长0.06～0.12％，主峰仅下降0.4～0.6％。上述结果表明，本发明实施例1～4的处方较稳定，而实施例5的处方稳定性较差，本发明的贝伐珠单抗注射液的稳定性显著提高。