Fe2+和α-酮戊二酸依赖型羟化酶的筛选方法及异亮氨酸羟化酶

摘要

本发明涉及一种高活性Fe2+和α‑酮戊二酸依赖型羟化酶的筛选方法，该方法首先构建α‑酮戊二酸脱氢酶编码基因和异柠檬酸裂解酶编码基因缺失菌株，采用易错PCR技术扩增Fe2+和α‑酮戊二酸依赖型羟化酶编码基因获得其突变体并连接至表达载体，然后将其转化至上述α‑酮戊二酸脱氢酶编码基因和异柠檬酸裂解酶编码基因缺失菌株并于含α‑酮戊二酸和相应底物的培养基中筛选生长速度快的菌株，提取其质粒并扩增羟化酶编码基因突变体。实现了高活性Fe2+和α‑酮戊二酸依赖型羟化酶的高通量筛选，加快了该类酶的应用进程。