一种尿液检测试剂及由其制备得到的尿液检测试纸

摘要

本发明提供一种尿液检测试剂及尿液检测试纸，用于检测尿液内酪氨酸类代谢物，所述尿液检测试纸由三层检测层组成，从上往下依次为第一层、第二层和第三层；第一层为过滤层，第二层为检测层，第三层为引流吸液体层。

说明书

技术领域

本发明涉及体外诊断试剂领域，进一步具体涉及一种尿液检测试剂，更加涉及一种用于检测尿液内酪氨酸类代谢物的尿液检测试纸。

背景技术

肿瘤是严重威胁人类健康的高发病率和高病死率疾病，大量研究和资料证实，早期诊断和治疗是防治肿瘤和降低病死率的最有效办法。目前，常规肿瘤标志物检测方法存在单项检出率低，不能早期发现等缺点。常常延误疾病的诊断和治疗，寻找一种能早期发现，检测准确且操作简便的标志物及试验方法，是医学研究者不断努力的方向。对羟基苯丙氨酸酪氨酸尿液检测试剂用于早期发现癌症。主要原理为：癌症患者尿液中异常升高的酪氨酸代谢产物与检测试剂发生特异性反，生成具有特征颜色的沉淀物。根据沉淀物颜色目测判断测试结果。

酪氨酸(Tyrosine，Tyr)属于芳香族氨基酸，可由苯丙氨酸(Phenylalaine，Phe)羟化而来，也可直接从食物中摄取，是人体重要的半必需氨基酸。酪氨酸的代谢紊乱可导致多种氨基酸代谢疾病的发生，如酪氨酸血症、尿黑酸症等，而且与肝肾疾病、神经系统变性性疾病，气恶性肿瘤等有一定的相关性。因此，对于酪氨酸及其代谢产物的研究不仅在蛋白质化学和评价病人的营养状况方面十分重要，而且在多种疾病的早期诊断、疗效检测和病因学研究等方面意义重大。

生物样品中存在的蛋白质会干扰酪氨酸及其代谢产物的测定，进而影响了检测的准确度。

本发明提供一种尿液检测试剂及尿液检测试纸，用于检测尿液内酪氨酸类代谢物。

发明内容

本发明提供一种尿液检测试剂，用于检测尿液内酪氨酸类代谢物，其特征在于，所述尿液检测试剂包含硝酸亚汞、硫酸汞、钨酸钠和硝酸。

本发明提供一种尿液检测试纸，用于检测尿液内酪氨酸类代谢物，其由三层检测层组成，从上往下依次为第一层、第二层和第三层；第一层为过滤层，第二层为检测层，第三层为引流吸液体层；

其中，所述第一层的制备原料包含滤纸和改性葡萄糖；

所述第二层的制备原料包含滤纸和尿液检测试剂；

所述尿液检测试剂包含硝酸亚汞、硫酸汞、钨酸钠和硝酸；

所述第三层的制备原料包含滤纸和丙烯酸改性壳聚糖。

作为本发明的一种实施方式，所述改性葡萄糖为苯并咪唑衍生物和苯甲酸衍生物共同改性葡聚糖。

作为本发明的一种实施方式，所述苯并咪唑衍生物选自3-(1H-苯并咪唑-2-基)-2,3-二羟基丙酸、[3-羧基甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并咪唑]乙酸、5,6-二羧基苯并咪唑、苯并咪唑中的一种。

作为本发明的一种实施方式，所述苯甲酸衍生物为苯二甲酸。

作为本发明的一种实施方式，所述尿液检测试剂还包含磷钼钨酸-壳聚糖-纳米二氧化硅复合物。

作为本发明的一种实施方式，所述引流吸液体层的底部设置有疏水层。

作为本发明的一种实施方式，所述疏水层上设置有储水槽。

作为本发明的一种实施方式，所述过滤层和检测层之间通过可剥离胶连接。

一种尿液中酪氨酸类代谢物的检测方法，至少包括以下步骤：

获取待测人体尿液；

将上述人体尿液滴在尿液检测试纸上，判断是否发生显色反应。

作为本发明的一种实施方式，所述检测方法还包括将过滤层撕下，进一步观测显色反应。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1：所述尿液检测试纸的示意图。

图2：所述尿液检测试纸的立体示意图。

符号说明：过滤层：1、检测层：2、引流吸液体层：3、疏水层：4、储水槽：4-1。

具体实施方式

参选以下本发明的优选实施方法的详述以及包括的实施例可更容易地理解本发明的内容。除非另有限定，本文使用的所有技术以及科学术语具有与本发明所属领域普通技术人员通常理解的相同的含义。当存在矛盾时，以本说明书中的定义为准。

当量、浓度、或者其它值或参数以范围、优选范围、或一系列上限优选值和下限优选值限定的范围表示时，这应当被理解为具体公开了由任何范围上限或优选值与任何范围下限或优选值的任一配对所形成的所有范围，而不论该范围是否单独公开了。例如，当公开了范围“1至5”时，所描述的范围应被解释为包括范围“1至4”、“1至3”、“1至2”、“1至2和4至5”、“1至3和5”等。当数值范围在本文中被描述时，除非另外说明，否则该范围意图包括其端值和在该范围内的所有整数和分数。

单数形式包括复数讨论对象，除非上下文中另外清楚地指明。“任选的”或者“任意一种”是指其后描述的事项或事件可以发生或不发生，而且该描述包括事件发生的情形和事件不发生的情形。

说明书和权利要求书中的近似用语用来修饰数量，表示本发明并不限定于该具体数量，还包括与该数量接近的可接受的而不会导致相关基本功能的改变的修正的部分。相应的，用“大约”、“约”等修饰一个数值，意为本发明不限于该精确数值。在某些例子中，近似用语可能对应于测量数值的仪器的精度。在本申请说明书和权利要求书中，范围限定可以组合和/或互换，如果没有另外说明这些范围包括其间所含有的所有子范围。

此外，本发明要素或组分前的不定冠词“一种”和“一个”对要素或组分的数量要求(即出现次数)无限制性。因此“一个”或“一种”应被解读为包括一个或至少一个，并且单数形式的要素或组分也包括复数形式，除非所述数量明显旨指单数形式。

如本文所用，以下术语的每一个具有与其在本部分中相关的含义。冠词"一个"和"一种"在本文用于指该冠词的一个或超过一个(即至少一个)的语法对象。例如，"要素"意指一个要素或超过一个要素。

如本文所用，术语“灵敏度”定义为测定(例如，方法，测试)性能的统计学量度，通过真阳性数除以真阳性和假阴性的和来计算。

如本文所用，术语“特异性”定义为测定(例如，方法，测试)性能的统计学量度，通过真阴性数除以真阴性和假阳性之和来计算。

本发明提供一种尿液检测试纸，用于检测尿液内酪氨酸类代谢物，其由三层检测层组成，从上往下依次为第一层、第二层和第三层；第一层为过滤层，第二层为检测层，第三层为引流吸液体层；

其中，所述第一层的制备原料包含滤纸和改性葡萄糖；

所述第二层的制备原料包含滤纸和尿液检测试剂；

所述尿液检测试剂包含硝酸亚汞、硫酸汞、钨酸钠和硝酸；

所述第三层的制备原料包含滤纸和丙烯酸改性壳聚糖。

过滤层

本发明中所述过滤层的制备原料包含滤纸和改性葡萄糖。

改性葡萄糖

所述改性葡萄糖为苯并咪唑衍生物和苯甲酸衍生物共同改性葡聚糖。

作为本发明的一种实施方式，所述苯并咪唑衍生物选自3-(1H-苯并咪唑-2-基)-2,3-二羟基丙酸、[3-羧基甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并咪唑]乙酸、5,6-二羧基苯并咪唑、苯并咪唑中的一种。

作为本发明的一种优选方式，所述苯并咪唑衍生物为[3-羧基甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并咪唑]乙酸。

作为本发明的一种实施方式，所述苯甲酸衍生物为苯二甲酸。

作为本发明的一种优选方式，所述苯甲酸衍生物为对苯二甲酸。

作为本发明的一种实施方式，所述苯并咪唑衍生物和苯甲酸衍生物共同改性葡聚糖的制备方法：

苯并咪唑衍生物(0.35g,2.160mmol)，苯二甲酸衍生物(0.166g,1mmol)，3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(0.825g,4.304mmol)，葡聚糖(0.5g,0.0125mmol)和4-二甲氨基吡啶(0.056g,0.459mmol)溶于装有40毫升二甲基亚砜的玻璃瓶中。在30℃温度下反应48小时。然后放置于透析袋中透析并除去杂质。

作为本发明的一种实施方式，所述葡聚糖的分子量为4500道尔顿至40000道尔顿。

本发明中，所述过滤层的制备方法如下：取滤纸放置在滤器上，并通过乙醇吸入进行湿润，再通过空气干燥15分钟；然后将上述制备得到的改性葡聚糖溶于乙醇的混合溶液中，经抽滤沉积到滤纸上，再通过空气干燥15分钟，即可制备得到第一层，过滤层。

本发明中，所述改性葡萄糖和硫酸汞的重量份比为1.3：1。

检测层

本发明中，所述检测层的制备原料包含滤纸和尿液检测试剂。

所述尿液检测试剂包含硝酸亚汞、硫酸汞、钨酸钠和硝酸；

所述尿液检测试剂还磷钼钨酸-壳聚糖-纳米二氧化硅复合物。

作为本发明的一种实施方式，所述尿液检测试剂的制备原料的重量份如下：

本申请中，硝酸亚汞的含量为15mol/L，是指硝酸亚汞在整个检测试剂中的含量为15mol/L，体积计算基准以检测试剂的体积为准。硫酸汞的含量为1mol/L；是指硫酸汞在整个检测试剂的含量为1mol/L，体积计算基准以检测试剂的体积为准；钨酸钠的含量为2.5mol/L；是指钨酸钠在整个检测试剂的含量为2.5mol/L，体积计算基准以检测试剂的体积为准；硝酸的含量为10mol/L；是指硝酸在整个检测试剂的含量为10mol/L，体积计算基准以检测试剂的体积为准；磷钼钨酸-壳聚糖-纳米二氧化硅复合物的含量为0.3g/L，体积计算基准以检测试剂的体积为准。

本申请中，术语“磷钼钨酸-壳聚糖-纳米二氧化硅复合物”是指壳聚糖与纳米二氧化硅进行接枝后，得到壳聚糖-纳米二氧化硅复合物，然后再将壳聚糖-纳米二氧化硅复合物，进行负载磷钼钨酸，得到磷钼钨酸-壳聚糖-纳米二氧化硅复合物。

本申请中，磷钼钨酸、壳聚糖、纳米二氧化硅均为市售获得。

所述磷钼钨酸购于厦门海标科技有限公司；

所述壳聚糖购于西安瑞林生物科技有限公司；

所述纳米二氧化硅购于赢创德固赛；

在一种优选的实施方式中，所述磷钼钨酸-壳聚糖-纳米二氧化硅复合物的制备方法，至少包括以下步骤：

(1)纳米二氧化硅溶于乙醇溶液中，室温下超声分散60min后，并加入硅烷偶联剂K560，45℃下搅拌3h，得到纳米二氧化硅溶液；再将壳聚糖溶于醋酸溶液中，室温下搅拌3h，得到壳聚糖溶液；将壳聚糖溶液加入到纳米二氧化硅溶液中，搅拌反应8h后，离心水洗3次，乙醇洗涤2次，60℃下真空干燥得到壳聚糖-纳米二氧化硅复合物。

(2)先将磷钼钨酸溶于去离子水中，配制出质量分数为10％磷钼钨酸溶液，再加入步骤(1)中得到的壳聚糖-纳米二氧化硅复合物，恒温回流搅拌20h，真空抽滤，干燥后得到磷钼钨酸-壳聚糖-纳米二氧化硅复合物。

所述尿液检测试剂的制备方法如下：将硝酸亚汞、硫酸汞、钨酸钠、硝酸混合均匀后，然后再加入磷钼钨酸-壳聚糖-纳米二氧化硅复合物搅拌均匀后得到尿液中酪氨酸代谢物的检测试剂。

本发明中，所述检测层的制备方法如下：取滤纸放置在滤器上，并通过乙醇吸入进行湿润，再通过空气干燥15分钟；然后将上述制备得到的尿液检测试剂经抽滤沉积到滤纸上，再通过空气干燥15分钟，即可制备得到第二层，检测层。

引流吸液体层

本发明中所述引流吸液体层的制备原料包含滤纸和丙烯酸改性壳聚糖。

丙烯酸改性壳聚糖

称取1.0g壳聚糖充分溶解于6mL 5w％的甲酸溶液中，用蒸馏水将其稀释至50mL，待其充分溶胀后转移至150mL三口烧瓶中，移入常规油浴反应装置中，持续搅拌，加热至80℃，恒温。将50mL烧杯置于冰水混合物中，移取定量丙烯酸置于烧杯中，用5w％NaOH溶液调节其pH＝6～6.5，然后缓慢加入三口烧瓶内，在预定温度下反应一定时间后得到接枝产物溶液，用5w％NaOH溶液调节其pH至碱性，产物以絮状析出，用pH＝4～5的盐酸溶液洗至中性，抽滤，烘干，粉碎过100目筛，即得到产物。

本发明中，所述引流吸液体层的制备方法如下：取滤纸放置在滤器上，并通过乙醇吸入进行湿润，再通过空气干燥15分钟；然后将上述制备得到的丙烯酸改性壳聚糖经抽滤沉积到滤纸上，再通过空气干燥15分钟，即可制备得到第三层，引流吸液体层。

所述丙烯酸改性壳聚糖的重量份和钨酸钠的重量份比为1：1。

本发明中，所述引流吸液体层的底部设置有疏水层。

疏水层

本发明中所述疏水层的制备材料为聚四氟乙烯。

本发明中，所述疏水层上设置有储水槽；当尿液量过多时，存储尿液。

本发明中，所述过滤层和检测层之间通过可剥离胶连接，所述可剥离胶为水性可剥离胶，具体购买自盖德化工网，型号GMY-628。

本发明的第二方面提供一种尿液中酪氨酸类代谢物的检测方法，至少包含以下步骤：

获取待测人体尿液；

将上述人体尿液滴在尿液检测试纸上，判断是否发生显色反应。

作为本发明的一种实施方式，所述检测方法的步骤还包括将过滤层撕下，进一步观测显色反应。

机理解释：本发明提高的所述尿液检测试剂和尿液检测试纸，可以排除尿液中蛋白质的影响，使得检测结果准确，且显色效果明显；在尿液滴入到检测试纸上后，将过滤层撕下，能够准确的判断出阳性、弱阳性、阴性，阳性呈现为红色；弱阳性呈现为粉红色；阴性呈现为白色或者浅黄色，解决了人们对于颜色色差误判的技术问题。

本发明中，所述尿液检测试纸由过滤层1、检测层2和引流吸液体层3组成，所述引流吸液体层的底部设置有疏水层4，所述疏水层4上设置有储水槽4-1。

实施方式1：本实施方式提供一种尿液检测试纸，用于检测尿液内酪氨酸类代谢物，其由三层检测层组成，从上往下依次为第一层、第二层和第三层；第一层为过滤层，第二层为检测层，第三层为引流吸液体层；

其中，所述第一层的制备原料包含滤纸和改性葡萄糖；

所述第二层的制备原料包含滤纸和尿液检测试剂；

所述尿液检测试剂包含硝酸亚汞、硫酸汞、钨酸钠和硝酸；

所述第三层的制备原料包含滤纸和丙烯酸改性壳聚糖。

实施方式2：实施方式1所述的一种尿液检测试纸，所述改性葡萄糖为苯并咪唑衍生物和苯甲酸衍生物共同改性葡聚糖。

实施方式3：实施方式2所述的一种尿液检测试纸，所述苯并咪唑衍生物选自3-(1H-苯并咪唑-2-基)-2,3-二羟基丙酸、[3-羧基甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并咪唑]乙酸、5,6-二羧基苯并咪唑、苯并咪唑中的一种。

实施方式4：实施方式2所述的一种尿液检测试纸，所述苯甲酸衍生物为苯二甲酸。

实施方式5：实施方式1所述的一种尿液检测试纸，所述尿液检测试剂还包含磷钼钨酸-壳聚糖-纳米二氧化硅复合物。

实施方式6：实施方式1所述的一种尿液检测试纸，所述引流吸液体层的底部设置有疏水层。

实施方式7：实施方式6所述的一种尿液检测试纸，所述疏水层上设置有储水槽。

实施方式8：实施方式1所述的一种尿液检测试纸，所述过滤层和检测层之间通过可剥离胶连接。

实施方式9：一种尿液中酪氨酸类代谢物的检测方法，至少包括以下步骤：

获取待测人体尿液；

将上述人体尿液滴在尿液检测试纸上，判断是否发生显色反应。

实施方式10：实施方式9所述的一种尿液中酪氨酸类代谢物的检测方法，所述检测方法还包括将过滤层撕下，进一步观测显色反应。

下面通过实施例对本发明进行具体描述。有必要在此指出的是，以下实施例只用于对本发明作进一步说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，该领域的专业技术人员根据上述本发明的内容做出的一些非本质的改进和调整，仍属于本发明的保护范围。

另外，如果没有其它说明，所用原料都是市售的，且以下物料所用份数均为重量份。

实施例1：本实施例提供一种尿液检测试纸，用于检测尿液中酪氨酸类代谢物，所述尿液检测试纸由三层检测层组成，从上往下依次为第一层、第二层和第三层；第一层为过滤层1，第二层为检测层2，第三层为引流吸液体层3，

其中，所述第一层的制备原料包含滤纸和改性葡萄糖；

所述改性葡萄糖的制备方法如下：[3-羧基甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并咪唑]乙酸(0.35g,2.160mmol)，对苯二甲酸(0.166g,1mmol)，3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(0.825g,4.304mmol)，葡聚糖(0.5g,0.0125mmol)和4-二甲氨基吡啶(0.056g,0.459mmol)溶于装有40毫升二甲基亚砜的玻璃瓶中。在30℃温度下反应48小时。然后放置于透析袋中透析并除去杂质。

本实施例中，所述葡聚糖的分子量为10000道尔顿。

本发明中，所述过滤层的制备方法如下：取滤纸放置在滤器上，并通过乙醇吸入进行湿润，再通过空气干燥15分钟；然后将上述制备得到的改性葡聚糖溶于乙醇的混合溶液中，经抽滤沉积到滤纸上，再通过空气干燥15分钟，即可制备得到第一层，过滤层。

本发明中，所述改性葡萄糖和硫酸汞的重量份比为1.3：1。

本实施例中，所述第二层的制备原料包含滤纸和尿液检测试剂。

所述尿液检测试剂包含硝酸亚汞、硫酸汞、钨酸钠和硝酸、磷钼钨酸-壳聚糖-纳米二氧化硅复合物。

所述尿液检测试剂的制备原料的重量份如下：

本实施例中，磷钼钨酸、壳聚糖、纳米二氧化硅均为市售获得。

所述磷钼钨酸购于厦门海标科技有限公司；

所述壳聚糖购于西安瑞林生物科技有限公司；

所述纳米二氧化硅购于赢创德固赛。

所述磷钼钨酸-壳聚糖-纳米二氧化硅复合物的制备方法，至少包括以下步骤：

(1)纳米二氧化硅溶于乙醇溶液中，室温下超声分散60min后，并加入硅烷偶联剂K560，45℃下搅拌3h，得到纳米二氧化硅溶液；再将壳聚糖溶于醋酸溶液中，室温下搅拌3h，得到壳聚糖溶液；将壳聚糖溶液加入到纳米二氧化硅溶液中，搅拌反应8h后，离心水洗3次，乙醇洗涤2次，60℃下真空干燥得到壳聚糖-纳米二氧化硅复合物。

(2)先将磷钼钨酸溶于去离子水中，配制出质量分数为10％磷钼钨酸溶液，再加入步骤(1)中得到的壳聚糖-纳米二氧化硅复合物，恒温回流搅拌20h，真空抽滤，干燥后得到磷钼钨酸-壳聚糖-纳米二氧化硅复合物。

所述尿液检测试剂的制备方法如下：将硝酸亚汞、硫酸汞、钨酸钠、硝酸混合均匀后，然后再加入磷钼钨酸-壳聚糖-纳米二氧化硅复合物搅拌均匀后得到尿液中酪氨酸代谢物的检测试剂。

本发明中，所述检测层的制备方法如下：取滤纸放置在滤器上，并通过乙醇吸入进行湿润，再通过空气干燥15分钟；然后将上述制备得到的尿液检测试剂经抽滤沉积到滤纸上，再通过空气干燥15分钟，即可制备得到第二层，检测层。

本发明中所述引流吸液体层的制备原料包含滤纸和丙烯酸改性壳聚糖。

丙烯酸改性壳聚糖

称取1.0g壳聚糖充分溶解于6mL 5w％的甲酸溶液中，用蒸馏水将其稀释至50mL，待其充分溶胀后转移至150mL三口烧瓶中，移入常规油浴反应装置中，持续搅拌，加热至80℃，恒温。将50mL烧杯置于冰水混合物中，移取定量丙烯酸置于烧杯中，用5w％NaOH溶液调节其pH＝6～6.5，然后缓慢加入三口烧瓶内，在预定温度下反应一定时间后得到接枝产物溶液，用5w％NaOH溶液调节其pH至碱性，产物以絮状析出，用pH＝4～5的盐酸溶液洗至中性，抽滤，烘干，粉碎过100目筛，即得到产物。

本发明中，所述引流吸液体层的制备方法如下：取滤纸放置在滤器上，并通过乙醇吸入进行湿润，再通过空气干燥15分钟；然后将上述制备得到的丙烯酸改性壳聚糖经抽滤沉积到滤纸上，再通过空气干燥15分钟，即可制备得到第三层，引流吸液体层。

所述丙烯酸改性壳聚糖的重量份和钨酸钠的重量份比为1：1。

本发明中，所述引流吸液体层的底部设置有疏水层4。

本发明中所述疏水层的制备材料为聚四氟乙烯。

本发明中，所述疏水层4上设置有储水槽4-1；当尿液量过多时，存储尿液。

本发明中，所述过滤层和检测层之间通过可剥离胶连接，所述可剥离胶为水性可剥离胶，具体购买自盖德化工网，型号GMY-628。

本实施例的第二方面提供一种尿液中酪氨酸类代谢物的检测方法，至少包含以下步骤：

获取待测人体尿液；

将上述人体尿液滴在尿液检测试纸上，判断是否发生显色反应。

所述检测方法的步骤还包括将过滤层撕下，进一步观测显色反应。

其中，尿液与检测试剂的体积比为1：3。

实施例2：本实施例与实施例1的区别在于，所述尿液检测试剂不包含磷钼钨酸-壳聚糖-纳米二氧化硅复合物。

实施例3：本实施例与实施例1的区别在于，所述第一层的制备原料无改性葡萄糖。

实施例4：本实施例与实施例1的区别在于，所述第一层的制备原料改性葡萄糖更改为未经过改性的葡萄糖，所述葡萄糖购买自国药集团化学试剂有限公司。

实施例5：本实施例与实施例1的区别在于，所述第一层的改性葡萄糖添加到第二层的尿液检测试剂中，即第二层的尿液检测试剂的制备原料包含：改性葡萄糖、硝酸亚汞、硫酸汞、钨酸钠和硝酸。

实施例6：本实施例与实施例1的区别在于，所述尿液中酪氨酸类代谢物的检测过程中，未将过滤层撕下，直接观测显色反应。

实施例7：本实施例与实施例1的区别在于，所述第一层过滤层与第二层检测层替换位置，所述检测试纸，从上往下依次为检测层、过滤层、引流吸液体层。

实施例8：本实施例与实施例1的区别在于，所述改性葡萄糖为苯并咪唑衍生物改性葡萄糖，所述改性葡萄糖的制备方法如下：[3-羧基甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并咪唑]乙酸(0.35g,2.160mmol)，3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(0.825g,4.304mmol)，葡聚糖(0.5g,0.0125mmol)和4-二甲氨基吡啶(0.056g,0.459mmol)溶于装有40毫升二甲基亚砜的玻璃瓶中。在30℃温度下反应48小时。然后放置于透析袋中透析并除去杂质。

实施例9：本实施例与实施例1的区别在于，所述改性葡萄糖为苯甲酸衍生物改性葡萄糖，所述改性葡萄糖的制备方法如下：对苯二甲酸(0.166g,1mmol)，3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(0.825g,4.304mmol)，葡聚糖(0.5g,0.0125mmol)和4-二甲氨基吡啶(0.056g,0.459mmol)溶于装有40毫升二甲基亚砜的玻璃瓶中。在30℃温度下反应48小时。然后放置于透析袋中透析并除去杂质。

实施例10：本实施例与实施例1的区别在于，所述第三层的制备原料无丙烯酸改性壳聚糖。

实施例11：本实施例与实施例1的区别在于，所述第三层的制备原料包含滤纸和壳聚糖。

测试：

选取1000名癌症病人早晨空腹，分别取尿液10mL，作为待测人体尿液。

检测方法：

1、将待测人体尿液分别与实施例1～11中尿液检测试纸接触，判断是否发生显色反应。

其中，阳性呈现为红色；弱阳性呈现为粉红色；阴性呈现为白色或者浅黄色。

表1表征测试

分别选用实施例1、实施例2、实施例3、实施例5、实施例6、实施例7分别对100名宫颈癌、100名胃癌、100名乳腺癌、100名肝癌、100名肺癌患者进行测试检出率，结果如表2所示。

表2癌症检出率

前述的实例仅是说明性的，用于解释本公开的特征的一些特征。所附的权利要求旨在要求可以设想的尽可能广的范围，且本文所呈现的实施例仅是根据所有可能的实施例的组合的选择的实施方式的说明。因此，申请人的用意是所附的权利要求不被说明本发明的特征的示例的选择限制。而且在科技上的进步将形成由于语言表达的不准确的原因而未被目前考虑的可能的等同物或子替换，且这些变化也应在可能的情况下被解释为被所附的权利要求覆盖。