一种从枳实中提取新橙皮苷及对枳实综合利用的方法

摘要

本发明提供了一种从枳实中提取新橙皮苷及对枳实综合利用的方法。所述综合利用的方法包括：1)对枳实进行破碎，过筛；2)使用温度为55‑60℃的水对过筛后的物质进行浸提，分别收集浸提液和滤渣；3)对所述滤渣进行提纯得到橙皮苷；和/或，对所述浸提液进行分离，得到果胶粉、柚皮苷、新橙皮苷中的一种或多种。本发明提供的方法最大限度地利用了枳实，本发明的方法主要用温水提取，后续少量酒精分离纯化，最大限度减少有机溶剂的使用，工艺简单有效，具有广泛的应用价值。

说明书

技术领域

本发明涉及中药有效成分的分离纯化领域，更具体地，涉及一种从枳实中提取新橙皮苷及对枳实综合利用的方法。

背景技术

枳实是芸香科柑橘属酸橙或者甜橙变种的干燥幼果，味苦、性辛寒，具有破气、消积、化痰的功效，能够治疗积滞内停、大便秘结、泻痢、痞满腹胀、结胸、脱肛、胃下垂的功效。现代医学研究枳实提取物中的橙皮甙具有对心血管系统血压调节的作用，枳实提取物中辛弗林具有增加胃肠运动的作用，另外枳实提取物中的枳实黄酮具有抗血细胞凝聚、抗血栓形成、抗癌、抗真菌、抗炎等功效。

枳实含有10-15％果胶、7-8％柚皮苷、1％左右的橙皮苷、8％左右新橙皮苷，总黄酮含量25％左右，其他重要成分辛佛林、川橙皮素、槲皮素、芦丁、D-柠檬烯(精油的中药组成)、叶黄素、玉米黄质等等，这些物质都具有明显的保健功效和医疗效果，所以枳实具有良好的综合利用价值。

但是目前新橙皮苷价格低廉，原料及提取成本高，生产厂家单靠一项得不偿失，而且也造成资源的浪费和污染，同时目前对枳实中其它有效成分如果胶粉、柚皮苷、橙皮苷的有效分离及纯化的报道很少。

发明内容

针对上述问题，本发明提供了一种方法，最大限度利用了枳实，最大限度的分离出枳实中的有效成分如新橙皮苷、果胶粉、柚皮苷和/或橙皮苷，既创造价值又减少环境污染。

本发明提供了一种对枳实综合利用的方法，所述方法包括：

1)对枳实进行破碎，过筛；

2)使用温度为55-60℃的水对过筛后的物质进行浸提，分别收集浸提液和滤渣；

3)对所述滤渣进行提纯得到橙皮苷；和/或，对所述浸提液进行分离，得到果胶粉、柚皮苷、新橙皮苷中的一种或多种。

优选地，步骤1)所述过筛为过14目筛。

优选地，所述步骤2)中浸提次数为2-3次，所述水的总用量优选为原料药用量的12-16倍。

优选地，所述浸提的时间为4-6小时。

更优选步骤2)中浸提次数为2次：第一次浸提水的用量为原料药的8-10倍，第二次浸提水的用量为原料药的4-6倍。

优选地，所述橙皮苷的提纯方法如下：

对所述滤渣用饱和石灰水溶解，取上清液并将其调至酸性，冷却取沉淀，除杂，干燥后得到橙皮苷。

优选地，所述除杂包括将所述沉淀用碱液溶解，过滤后将滤液调至酸性，冷却过夜后即得；更优选将所述沉淀用pH值为10-12的碱液溶解，过滤后将滤液调至pH值为2-5。

最优选将所述沉淀用pH值为11的碱液溶解，过滤后将滤液调至pH值为4。

优选地，果胶粉的分离包括如下步骤：

将所述浸提液进行真空浓缩，在温度不低于55℃下进行醇沉，分离滤液和沉淀物，将所述沉淀物用水溶解，脱色，过滤，喷雾干燥即得果胶粉。

优选地，所述真空浓缩中真空度为-0.08--0.09MPA，温度为55-60℃，浓缩的比重不低于1.15。

优选地，所述醇沉中醇为浓度不低于80％的酒精，酒精的用量为浓缩浸膏的5倍及以上。

优选地，所述醇沉的温度为55℃-65℃，更优选为65℃。

优选地，所述柚皮苷和/或新橙皮苷的分离方法如下：

对所述滤液进行真空浓缩，在温度不低于70℃下进行水沉，离心后取上清液，冷却得到含有柚皮苷和新橙皮苷的沉淀物；

向含有柚皮苷和新橙皮苷的沉淀物中加入温度不高于5℃的酒精，离心后得到上清液和粗新橙皮苷沉淀物，将上清液浓缩后得到柚皮苷。

优选地，所述新橙皮苷的分离方法如下：

向所述粗新橙皮苷沉淀物中加入碱性溶液，充分混合，过滤后取滤液，再将滤液调至酸性，收集沉淀并重结晶，得到新橙皮苷。

优选地，所述真空浓缩中真空度为-0.08--0.09MPA，温度为55-60℃，浓缩的比重不低于1.15。

优选地，优选所述水沉的温度为70-80℃。

优选地，优选所述酒精的温度为0-5℃，酒精的浓度不低于80％。

优选地，碱性溶液的pH值为10-12，酸性滤液的pH值为2-5。

更优选地，碱性溶液的pH值为11，酸性滤液的pH值为4。

优选地，重结晶的溶剂为浓度不低于80％的乙醇，乙醇的温度不低于60℃。

本发明的另一个方面，还提供了一种从枳实中提取新橙皮苷的方法，所述方法包括：

对枳实进行破碎，过筛；

使用温度为55-60℃的水对过筛后的物质进行浸提，分别收集浸提液和滤渣；

将所述浸提液进行真空浓缩，在温度不低于55℃下进行醇沉，分离滤液和沉淀物；

对所述滤液进行真空浓缩，在温度不低于70℃下进行水沉，离心后取上清液，冷却得到含有柚皮苷和新橙皮苷的沉淀物；

向含有柚皮苷和新橙皮苷的沉淀物中加入温度为0-5℃的酒精，离心后得到上清液和粗新橙皮苷沉淀物；

向所述粗新橙皮苷沉淀物中加入碱性溶液，充分混合，过滤后取滤液，再将滤液调至酸性，收集沉淀并重结晶，得到新橙皮苷。

本申请提出的方法，具有以下优点：

1)本发明方法中使用的原料、设备均为常见的普通原料、设备，避免了工业化生产过程中对于昂贵原材料、设备的依赖，大大地降低了生产成本，本发明的方法最大限度利用了枳实，最大限度的分离出枳实中的有效成分如新橙皮苷、果胶粉、柚皮苷和/或橙皮苷。

2)本发明中主要采用温水浸提，温度控制在55-60度，极大减少了大分子水溶性杂质的提取，极大的提高了各物质的纯度，减少了提纯步骤，极大限度的利用了枳实。

3)全部采用普通提取、浓缩、干燥设备，投资低、操作简单对工人技术要求低，没有大孔树脂等搞投资提取纯化设备，有效防止大分子树脂等对环境的污染。

3)过程中只使用最常见的食用酒精作为分离纯化的有机溶剂，对环境污染很少，无毒性、成本低，回收容易。

4)本发明采取的是一种绿色环保经济的技术路线，该技术路线中采用的提取，浓缩，纯化等生产设备均可采用密闭的体系，操作的过程中，能最大限度的避免操作人员接触到试剂，有效地保障了人体的健康。该方法中采用的溶剂，等都能循环使用，能降低物料损失，提高产品得率。该技术路线于我国可持续发展的模式相呼应，有良好的社会效益。

具体实施方式

下面结合实施例，对本发明的具体实施方式作进一步详细描述。以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

本发明提供了一种对枳实综合利用的方法，该方法包括：

1)对枳实进行破碎，过筛。

对待处理物质进行挑选，除去泥沙腐烂霉变的等，有必要对水份过高的枳实进行烘干，然后破碎机对枳实进行破碎。

为了进一步提高纯度和回收率，优选地，要求破碎的粉末完全过14目筛。粉末太细提取后易板结，杂质进入提取液较多，增加分离纯化的难度，目标物的纯度减小；粉末过粗，提取时间会延长，杂质容易进入提取液中，提取相对不够充分，降低回收率。在完全过14目筛的粉末，能得到纯度较高的目标物，且回收率也较高。

2)使用水对过筛后的枳实进行浸提，分别收集浸提液和滤渣；其中，水的温度为55-60℃，极大的减少了大分子水溶性杂质的提取。

在本发明中，当浸提温度高于60度时，橙皮苷大量进入浸提液中，容易造成新橙皮苷和橙皮苷的分离困难，温度越高三种物质越容易溶解在浸提液中，当浸提温度高于70度时，橙皮苷、新橙皮苷以及柚皮苷会大量溶于浸提液中，不易分开；另外，温度过低橙皮苷、新橙皮苷和柚皮苷都不能溶于浸提液中，且温度越低需要提取的时间越长，很难将三者分开，本发明将浸提液的温度控制在55-60℃，能很好的实现将三者分开，并且损失较少。

为了进一步提高目标分离物的溶出率，所述步骤2)中浸提为超声波辅助浸提，也进一步提高了浸提效果。

实验证明，使用超声波浸提能够使目标分离物的溶出率提高15－20％左右。

从成本角度以及浸提效果来看，所述浸提次数优选为2-3次。

所述浸提时间优选为4-6小时。

所述水的总用量优选为原料药用量的12-16倍。为了使有效成分得率高，步骤2)中浸提次数更优选为2次：

第一次浸提水的用量更优选为原料药的8-10倍，最优选为10倍，第二次浸提水的用量更优选为原料药的4-6倍，最优选为5倍。在该用量范围内可以尽可能将枳实粉末中新橙皮苷、柚皮苷、果胶充分溶解出来，又不增加后续工艺浓缩的能耗成本，水过少不能充分提取，影响回收效率，水过多增加设备负担，增加后续浓缩能耗。

其中，在本发明中，水的用量指体积量，原料药指重量值。

其中，在第二次浸提可以不使用超声，合并二次提取液并收集滤渣。

为了能更好的利用枳实，本发明的方法包括以下步骤3)：

对2)中所述滤渣进行提纯得到橙皮苷；和/或，对所述浸提液进行分离，得到果胶粉、柚皮苷、新橙皮苷中的一种或多种。

所述橙皮苷的提纯方法如下：

对2)中所述滤渣用饱和石灰水溶解，取上清液并将其调至酸性，冷却取沉淀，除杂，干燥后即可得到橙皮苷。

其中，饱和石灰水中碱性钙离子能够和一些鞣质蛋白质多糖结合产生沉淀，同时碱性温和，在较长条件下能维持黄酮类化合物的稳定。在该步骤中，使用饱和石灰水来溶解滤渣即可以起到溶解作用，也可起到除杂作用，使得除杂更充分，得到的橙皮苷更纯。

为了让橙皮苷充分的析出，酸性溶液的pH值优选为2-5，更优选为4。

其中，除杂可以使用本领域中常见的除杂方法。为了尽可能的减少杂质的引入以及提高除杂的效果，除杂优选使用碱溶酸沉的方法。优选地是，在pH为10-12的碱性溶液中充分溶解，过滤后得滤液，滤液用酸性溶液调节pH至2-5中冷却过夜，离心沉淀得沉淀物。

其中，碱性溶液的pH值更优选为11，酸性溶液的pH值更优选为4。其中，碱性溶液优选为本领域中最常用的氢氧化钠溶液。酸性溶液优选为本领域中最常用的盐酸溶液。

将上述沉淀物用水洗涤，烘干得98.2％-98.5％的橙皮苷白色针状结晶。

所述果胶粉、柚皮苷和新橙皮苷的分离方法如下：

将2)中所述浸提液进行进一步分离，可以得到果胶粉、柚皮苷、新橙皮苷中的一种或多种，从而能最大限度且有效的利用枳实。

其中，所述果胶粉的分离方法如下：

将所述浸提液进行真空浓缩，在温度不低于55℃下进行醇沉，分离滤液和沉淀物，将所述沉淀物用水溶解，脱色，过滤，喷雾干燥即得果胶粉。

其中，为了缩短浓缩时间，活性成分处于较低温度下不会失活或是少量失去活性，浓缩优选为真空浓缩，真空度优选为-0.08－-0.09MPA。同时，为了减少浓缩后的物质膨胀，浓缩过程中温度优选为55-60℃。

其中，为了减少能耗，通常浓缩后的浸膏大于1.15，更优选地为1.15-1.20。在本发明中，提取浸膏在比重为1.15-1.20时波美度在25-28之间，含水量在46-50％之间，一般情况下水份含量高时蒸发速度越快所需要的能耗越低，当比重达到1.15-1.20时刚好符合工艺的需要，如果再浓缩提高浸膏比重已经没有必要，在提高比重到浓膏或者清膏虽然对后续工艺比较好，但是时间能耗较高。

其中，醇沉中醇优选为酒精，为了进一步提高新橙皮苷和柚皮苷的分离量，醇沉的温度不低于55℃，优选为55℃-65℃，更优选为60℃；为了提高醇沉的效果，酒精的浓度优选不低于80％，酒精的用量不低于浓缩后的浸膏的5倍。

其中，本文中乙醇和酒精等同。

其中，为了提高过滤效果、加快过滤时间和防止霉变，采用板宽压滤或是采用高速离心分离法来分离滤液和沉淀物。优选为板宽压滤。

其中，为了使沉淀物溶解充分，通常使用5倍沉淀物量的水溶解。脱色可以选用本领域中常用的脱色剂，如活性炭等。本发明使用5％活性炭为脱色剂来详述本发明的技术方案。

在本发明的一个具体实施方式中，沉淀物用5倍水溶解，并加5％活性炭脱色，过滤，喷雾干燥即得白色的含量91％-96.4％的果胶粉。

其中，柚皮苷的分离方法如下：

对所述滤液进行真空浓缩，在温度不低于70℃下进行水沉，离心后取上清液，冷却得到含有柚皮苷和新橙皮苷的沉淀物；

向含有柚皮苷和新橙皮苷的沉淀物中加入温度不高于5℃的酒精，离心后得到上清液和粗新橙皮苷沉淀物，将上清液浓缩后得到柚皮苷。

其中，为了缩短浓缩时间，活性成分处于较低温度下不会失活或是少量失去活性，浓缩优选为真空浓缩。其中，为了减少能耗，通常浓缩后的浸膏大于1.15，更优选地为1.15-1.20。

其中，为了更有利于新橙皮苷和柚皮苷的溶解，水沉的温度优选为70℃以上，从生产效益的角度温度优选为80℃。

其中，为了使浓缩后的浸膏中不溶性物质能更加充分的沉淀，优选使用至少5倍及以上的水。

其中，离心优选为高速离心取上清液，上清液自然冷却后进冷库过夜，得到含有新皮苷和柚皮苷的沉淀物。

其中，为了能更好的将柚皮苷和新橙皮苷分离开，酒精选用为冷酒精。所述酒精的温度优选为不高于5℃，更优选为0-5℃。在冷酒精中，柚皮苷能较易的进入酒精溶液中，而新橙皮苷在冷酒精溶液中的溶解度变小。

其中，为了提高分离效果，所述酒精的浓度优选为不低于80％，酒精的使用量优选为沉淀物量的5倍。为了分离充分，通常为向含有新橙皮苷和柚皮苷的沉淀物用5倍沉淀物量的冷的80％酒精充分搅拌2小时，柚皮苷进入酒精溶液，新橙皮苷不溶于冷酒精，洗涤高速离心后得到上清液和粗新橙皮苷沉淀物。

为了洗涤充分，将上述得到的沉淀物第二次用2倍量80％冷酒精洗涤，高速离心得到上清液和新橙皮苷沉淀物。将得到的沉淀物第三次用1倍量80％冷酒精洗涤，分离得到上清液和新橙皮苷沉淀物。

在本发明的一个优选的实施方式中，合并离心后的上清液，回收酒精浓缩干燥后可得到浅黄色92.3％-92.6％的柚皮苷。

在本发明的一个优选的实施方式中，新橙皮苷的分离方法如下：

向所述粗新橙皮苷沉淀物中加入碱性溶液，充分混合，过滤后取滤液，再将滤液调至酸性，收集沉淀并重结晶，得到新橙皮苷。

其中，新橙皮苷是一种带有酚羟基的弱酸性物质，在碱性溶液中能溶解，在酸性溶液中能沉淀出来，根据这一性质，通过碱溶酸沉达到除杂分离纯化的目的。

其中，为了能使新橙皮苷更加充分溶解，加入碱性溶液后使溶液的pH值优选为10-12，更优选为11。另外，为了使新橙皮完全充分沉淀，酸性滤液的pH值优选为2-5，更优选为4。

其中，为了加快溶解，碱性溶液优选为氢氧化钠溶液。通常加入的碱性溶液为5倍的沉淀物的量。另外，为了进一步加快溶解，可以适当提高温度，在此过程中，温度不能低于5℃。

其中，重结晶使用的溶剂优选为乙醇。乙醇的温度优选为60℃。为了提高溶解－重结晶效果，乙醇的浓度优选不低于80％，更优选为80％。

重结晶步骤优选为：在酸性环境下结晶后的沉淀用80％、60℃的乙醇溶液溶解过滤再冷却重结晶，收集结晶干燥可得到98.5％-98.7％的新橙皮苷。

在本发明的技术方案中，所有步骤中的水优选为纯水，乙醇、盐酸、氢氧化钠、饱和石灰水均优选为分析纯或食用级。

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

实施例1:

1)取枳实500千克(反向高效液相色谱法分析柚皮苷7.72％、橙皮苷0.93％、新橙皮苷8.61％，分光光度法果胶含量10.3％)，破碎至100％过14目筛；

2)温水超声波浸提：500公斤枳实粉投入提取罐，第一次浸提，提取罐加入5000公斤纯化水，加温至60度保持稳定，开启超声波震荡，浸提6小时，第二次浸提加入纯化水2500公斤，加温至60度，浸提4小时，第一次和第二次浸提液合并得到浸提液6992公斤，滤渣991公斤；

3)对合并提取液的分离纯化：

a)浓缩：在真空度度负压-0.08--0.09MPA，对浸提合并液进行真空浓缩，温度不超过60度，浓缩至比重1.15-1.20，得浸膏570公斤；

b)醇沉：570公斤浸膏，3000公斤的80％酒精充分搅拌，并加热至60度，保温过夜；

c)过滤：板宽压滤得3239公斤滤液和320公斤沉淀物；

d)滤液再浓缩：对3239公斤滤液真空浓缩至比重1.15-1.20的浓缩浸膏，真空度采用负压-0.08—0.09MPA，得到浸膏435公斤；

e)水沉：对上一步的435公斤浓缩浸膏用2200公斤的纯水，加热至80度充分搅拌；

f)高速离心分离：对上步进行高速离心，离心时温度不得低于70度，得上清液2370公斤和离心沉淀物，弃沉淀，上清液自然冷却后进冷库过夜，得到含有新橙皮苷和柚皮苷得沉淀物138公斤；

g)酒精洗涤：对含有新橙皮苷和柚皮苷得沉淀物138公斤用700公斤冷的80％酒精充分搅拌2小时，柚皮苷进入酒精溶液，新橙皮苷不溶于冷酒精，洗涤高速离心后得到上清液760公斤和粗新橙皮苷沉淀物62公斤，62公斤沉淀物第二次用120公斤80％冷酒精洗涤、高速离心得上清液131公斤和新橙皮苷沉淀物51公斤，50公斤酒精第三次洗涤得上清液53公斤和新橙皮苷沉淀47.6公斤，合并三次离心后的上清液944公斤，回收酒精浓缩干燥后得到浅黄色92.6％的柚皮苷35.77公斤；

h)分离纯化：47.6公斤新橙皮苷沉淀物用250公斤纯水和氢氧化钠溶液调接PH至11过滤沉淀收集滤液，再用盐酸调节PH至4.0收集结晶沉淀得40.35公斤白色结晶新橙皮苷，结晶用80％温度60的乙醇溶解过滤再冷却重结晶，收集结晶干燥得98.7％的白色针状新橙皮苷结晶36.55公斤。

i)分离果胶：对c)过滤：板宽压滤得3230公斤滤液和320公斤沉淀物，320公斤沉淀物用1600公斤水溶解加5％活性炭脱色，过滤，真空喷雾干燥即得白色的含量96.2％的果胶粉48.76公斤；

4)分离纯化橙皮苷：对温水超声波浸提后的滤渣991公斤再用5000公斤的饱和石灰水提取3小时，过滤后得滤液5120公斤用浓盐酸调节PH至4.0，冷藏过夜沉淀得沉淀物126公斤，126公斤沉淀物再用600公斤水氢氧化钠调节PH11.0的溶液，过滤后得滤液625公斤，滤液用盐酸调节PH至4.0冷却过夜，离心沉淀得沉淀物4.17公斤，将沉淀物纯水洗涤、烘干得98.2％得橙皮苷白色针状结晶4.07公斤。

实施例2

1)取枳实500千克(反向高效液相色谱法分析柚皮苷7.64％、橙皮苷0.88％、新橙皮苷8.33％，分光光度法果胶含量10.1％)，破碎至100％过14目筛；

2)温水超声波浸提：500公斤枳实粉投入提取罐，第一次浸提，提取罐加入5000公斤纯化水，加温至60度保持稳定，开启超声波震荡，浸提6小时，第二次浸提加入纯化水2500公斤，加温至60度，浸提4小时，第一次和第二次浸提液合并得到浸提液7039公斤，滤渣951公斤；

3)对合并提取液的分离纯化：

a)浓缩：在真空度度负压-0.08--0.09MPA，对浸提合并液进行真空浓缩，温度不超过60度，浓缩至比重1.15-1.20，得浸膏551公斤；

b)醇沉：551公斤浸膏，3000公斤的80％酒精充分搅拌，并加热至60度，保温过夜；

c)过滤：板宽压滤得3227公斤滤液和316公斤沉淀物；

d)滤液再浓缩：对3227公斤滤液真空浓缩至比重1.15-1.20的浓缩浸膏，真空度采用负压-0.08—0.09MPA，得到浸膏426公斤；

e)水沉：对上一步的426公斤浓缩浸膏用2050公斤的纯水，加热至80度充分搅拌；

f)高速离心分离：对上步进行高速离心，离心时温度不得低于70度，得上清液2290公斤和离心沉淀物，弃沉淀，上清液自然冷却后进冷库过夜，得到含有新橙皮苷和柚皮苷得沉淀物132公斤；

g)酒精洗涤：对含有新橙皮苷和柚皮苷得沉淀物132公斤用650公斤冷的80％酒精充分搅拌2小时，柚皮苷进入酒精溶液，新橙皮苷不溶于冷酒精，洗涤高速离心后得到上清液717公斤和粗新橙皮苷沉淀物58公斤，58公斤沉淀物第二次用120公斤80％冷酒精洗涤、高速离心得上清液128公斤和新橙皮苷沉淀物49公斤，50公斤酒精第三次洗涤得上清液52公斤和新橙皮苷沉淀46.5公斤，合并三次离心后的上清液897公斤，回收酒精浓缩干燥后得到浅黄色92.3％的柚皮苷34.6公斤；

h)分离纯化：46.5公斤新橙皮苷沉淀物用240公斤纯水和氢氧化钠溶液调接PH至11过滤沉淀收集滤液，再用盐酸调节PH至4.0收集结晶沉淀得40.11公斤白色结晶新橙皮苷，结晶用80％温度60的乙醇溶解过滤再冷却重结晶，收集结晶干燥得98.5％的白色针状新橙皮苷结晶34.79公斤。

i)分离果胶：对c)过滤：板宽压滤得3190公斤滤液和316公斤沉淀物，316公斤沉淀物用1600公斤水溶解加5％活性炭脱色，过滤，真空喷雾干燥即得白色的含量96.4％的果胶粉47.87公斤；

4)分离纯化橙皮苷：对温水超声波浸提后的滤渣951公斤再用4800公斤的饱和石灰水提取3小时，过滤后得滤液5050公斤用浓盐酸调节PH至4.0，冷藏过夜沉淀得沉淀物117公斤，117公斤沉淀物再用600公斤水氢氧化钠调节PH11.0的溶液，过滤后得滤液631公斤，滤液用盐酸调节PH至4.0冷却过夜，离心沉淀得沉淀物4.13公斤，将沉淀物纯水洗涤、烘干得98.3％得橙皮苷白色针状结晶3.85公斤。

实施例3:

1)取枳实500千克(反向高效液相色谱法分析柚皮苷7.81％、橙皮苷0.86％、新橙皮苷8.72％，分光光度法果胶含量9.7％)，破碎至100％过14目筛；

2)温水超声波浸提：500公斤枳实粉投入提取罐，第一次浸提，提取罐加入5000公斤纯化水，加温至60度保持稳定，开启超声波震荡，浸提6小时，第二次浸提加入纯化水2500公斤，加温至60度，浸提4小时，第一次和第二次浸提液合并得到浸提液7013公斤，滤渣980公斤；

3)对合并提取液的分离纯化：

a)浓缩：在真空度度负压-0.08--0.09MPA，对浸提合并液进行真空浓缩，温度不超过60度，浓缩至比重1.15-1.20，得浸膏573公斤；

b)醇沉：573公斤浸膏，3000公斤的80％酒精充分搅拌，并加热至60度，保温过夜；

c)过滤：板宽压滤得3219公斤滤液和331公斤沉淀物；

d)滤液再浓缩：对3219公斤滤液真空浓缩至比重1.15-1.20的浓缩浸膏，真空度采用负压-0.08—0.09MPA，得到浸膏435公斤；

e)水沉：对上一步的435公斤浓缩浸膏用2200公斤的纯水，加热至80度充分搅拌；

f)高速离心分离：对上步进行高速离心，离心时温度不得低于70度，得上清液2427公斤和离心沉淀物，弃沉淀，上清液自然冷却后进冷库过夜，得到含有新橙皮苷和柚皮苷得沉淀物143公斤；

g)酒精洗涤：对含有新橙皮苷和柚皮苷得沉淀物143公斤用720公斤冷的80％酒精充分搅拌2小时，柚皮苷进入酒精溶液，新橙皮苷不溶于冷酒精，洗涤高速离心后得到上清液793公斤和粗新橙皮苷沉淀物67.7公斤，67.7公斤沉淀物第二次用140公斤80％冷酒精洗涤、高速离心得上清液147公斤和新橙皮苷沉淀物58.9公斤，60公斤酒精第三次洗涤得上清液60.8公斤和新橙皮苷沉淀54.7公斤，合并三次离心后的上清液1000.8公斤，回收酒精浓缩干燥后得到浅黄色92.6％的柚皮苷37.26公斤；

h)分离纯化：54.7公斤新橙皮苷沉淀物用280公斤纯水和氢氧化钠溶液调接PH至11过滤沉淀收集滤液，再用盐酸调节PH至4.0收集结晶沉淀得43.16公斤白色结晶新橙皮苷，结晶用80％温度60的乙醇溶解过滤再冷却重结晶，收集结晶干燥得98.6％的白色针状新橙皮苷结晶37.57公斤。

i)分离果胶：对c)过滤：板宽压滤得3219公斤滤液和331公斤沉淀物，331公斤沉淀物用1650公斤水溶解加5％活性炭脱色，过滤，真空喷雾干燥即得白色的含量96.2％的果胶粉46.55公斤；

4)分离纯化橙皮苷：对温水超声波浸提后的滤渣980公斤再用5000公斤的饱和石灰水提取3小时，过滤后得滤液5111公斤用浓盐酸调节PH至4.0，冷藏过夜沉淀得沉淀物121公斤，121公斤沉淀物再用600公斤水氢氧化钠调节PH11.0的溶液，过滤后得滤液619公斤，滤液用盐酸调节PH至4.0冷却过夜，离心沉淀得沉淀物3.97公斤，将沉淀物纯水洗涤、烘干得98.2％得橙皮苷白色针状结晶3.76公斤。

对比例1：

本对比方法采用枳壳黄酮粗提物中分离纯化高纯度新橙皮苷的方法，主要包括用水和乙醇从枳壳中提取枳壳提取物，用大孔树脂柱层析法获取枳壳黄酮类粗提物，用正丁醇萃取及溶剂重结晶方法纯化制备高纯度的新橙皮苷。

具体实施：500公斤枳实(本次枳实采购江西，经反向高效液相色谱分析新橙皮苷含量8.43％)破碎后第一次5000公斤80％酒精提取3小时，第二次用2500公斤酒精提取2小时，大孔树脂D101吸附并洗脱得到枳实黄酮提取物粗粉132.6公斤，再用正丁醇及酒精溶剂重结晶方法分离纯化得到98.5％的新橙皮苷37.97公斤。

新橙皮苷、橙皮苷、柚皮苷、果胶含量检测

1、反相高效液相色谱法测定新橙皮苷、橙皮苷、柚皮苷含量的方法，具体为：采用Promosil C 18(250mm×4.6mm，5μm)色谱柱，流动相为乙腈-水(22：78)，流速为1.0mL·min－1，检测波长283nm，柱温为25℃。

2、分光光度法测定果胶含量的方法：水果及其制品中果胶含量的测定NY/T2016-2011中华人民共和国农业行业标准

3、结果见表1：

表1:新橙皮苷、橙皮苷、柚皮苷、果胶含量及回收率

表1结果表明：与对比例比较本方法实施例1-3提供的新橙皮苷纯度没有显著差别，回收率稍微低于对比例5-6％的差别，考虑到对比例使用的方法复杂，有机溶剂是实施例的2倍，而且对比例使用了大孔树脂，大孔树脂对环境污染及维护成本都很高，所以综合分析本方法利于推广，经济性明显好于对比例。

虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。