快速检测禽流感和人流感易感人群的方法以及试纸条

摘要

本发明公开了一种快速检测禽流感和人流感易感人群的方法以及试纸条，包括沿层析方向依次设置的样品垫、金标垫、检控区以及用于吸收检测样品中多余液体的吸水垫；所述检控区包括依次设置的检测带和质控线；所述金标垫包括胶体金标记的凝集素MAL‑II或SNA；所述检测带包括与凝集素MAL‑II不结合的稳定内参凝集素或与凝集素SNA不结合的稳定内参凝集素。将试纸条的样品垫一端插入唾液样本中或含在口腔中，10～15分钟后，将试纸条取出，观察检测带以及质控线显色状态，得到检测结果，本发明真正实现无创、安全、简便地检测禽流感和人流感病毒易感人群。

说明书

技术领域

本发明涉及基于试纸条技术快速检测禽流感和人流感病毒易感人群，也可发展为基于酶标板检测的双凝集素夹心法快速检测禽流感和人流感病毒易感人群。

背景技术

凝集素是非免疫来源的、不具有酶活性的一类糖结合蛋白，能专一地识别某一特殊结构的单糖或聚糖中特定的糖链序列而与之结合。截至目前已经从自然界中发现100多种植物源的凝集素。凝集素有各种应用：如恶性肿瘤等疾病的诊断、设计抗菌抗病毒药物、设计“生物导弹”、以及进行糖链结构的识别和分析等。随着将芯片技术引入糖组学研究领域，凝集素作为解码糖链结构的重要工具越来越引人瞩目。凝集素芯片根据凝集素和糖链之间的特异性相互识别作用，将各种不同来源的凝集素固定于环氧化、醛基化或经其他方式修饰的片基上，再与标记后的糖蛋白、细胞和菌体等待检测样本孵育反应，经一系列后续处理后，才能得到待检测样本中的糖链结构和其识别的凝集素。

流感病毒在自然界中的宿主分布非常广泛，具有复杂的基因结构，且其基因发生重配和突变的概率很高，因此在全球范围内呈周期性流行。迄今，在人类历史上一共爆发了四次大规模的流感流行，包括西班牙大流感(1918年)、亚洲大流感(1957年)、香港大流感(1968年)以及新甲型H1N1流感(21世纪初)，其中在西班牙流感大流行中，死亡人数高达2000-4000万。流感具有发病率及病死率高、传播速度快、波及范围广等特点，一旦爆发起来，将会对人类造成严重的灾难。近年来，H5、H7和H9亚型流感病毒以及2009年出现的甲型H1N1流感病毒都引起了较大的疫情，H5N1和H7N9型的一些毒株能直接感染人类，高感染率和低致病力的H9亚型同样也能由禽类直接传染给人，虽然这几个亚型的病毒还没有引起人类流感大流行，但它们潜在的危害是巨大的。流感病毒血凝素(Hemagglutinin,HA)分子与流感病毒宿主细胞表面唾液酸(SA)α2-3半乳糖(Gal)或SAα2-6Gal糖链末端受体的结合，是流感病毒侵染机体的开始。不同流感病毒宿主细胞表面上的糖链受体结构是不同的，禽流感病毒HA主要识别和结合末端为SAα2-3Gal的糖链受体，而人流感病毒HA主要识别和结合末端为SAα2-6Gal的糖链受体。

新的研究报道指出人呼吸道上皮细胞上均有SAα2-6Gal和SAα2-3Gal糖链受体的分布，但以SAα2-6Gal糖链受体的分布为主；另外，SAα2-6Gal在人气管和支气管中呈高密度分布，且随着支气管分级的降低而逐渐减少，至肺泡分布最少；而SAα2-3Gal在气管、支气管以及细支气管中仅呈少量分布，其分布以呼吸细支气管和肺泡为主。人呼吸道上少量SAα2-3Gal的存在是部分H5N1亚型禽流感病毒直接感染人类的最有力证据。

人体唾液由腮腺、下颌下腺、舌下腺和其他一些小腺体分泌，包含核酸、蛋白质、脂类、矿物质和其他小分子物质。另外，唾液中还存在抑制和消灭细菌和病毒的物质。唾液含量和组成上的变化，不管是由口腔局部病变还是机体整体状况引起的，都可能会造成唾液功能缺陷。研究发现，唾液中除了含有一些唾液基本组成性蛋白质(在不同性别和不同年龄段都几乎无差别表达的蛋白质或糖蛋白)外，还含有一些可能反应人体身体健康和生理状况的一些蛋白质，这些蛋白质往往在不同年龄、性别、病理和生理状况的人群中出现差异性表达。

血液中有的蛋白质成分也存在于唾液中，唾液能反映出血液中部分蛋白质水平的变化。通过对唾液和血浆与人类全蛋白质组的GO(gene ontology)注释比较，发现唾液和血浆蛋白质组中细胞外基质组分较多，而细胞内液组分较少，提示唾液和血浆蛋白质组具有分泌蛋白质组的特征；在生物学过程和分子功能方面的分析结果提示，唾液蛋白质组和血浆蛋白质组具有相似性。不过，唾液和血浆的蛋白质组比较结果显示，有些蛋白质只在唾液蛋白质组中出现，而没有出现在血浆蛋白质组中，表明两者并不能够等同。

唾液作为人体抵御呼吸道病毒感染的第一道天然屏障，其中的糖蛋白发挥着重要的作用，如唾液中的α-2巨球蛋白，粘蛋白5B和唾液糖蛋白340等可通过其上(α2-3/α2-6)连接末端唾液酸糖链结构与流感病毒HA结合以中和并抑制流感病毒的感染。

应用高覆盖率凝集素芯片对三个年龄段健康志愿者的唾液进行了分析，发现了一些与年龄和性别相关的唾液糖蛋白糖链，其中：(1)儿童男性唾液中的糖蛋白糖链结构较女性更为丰富；(2)成年男性与女性之间唾液糖蛋白糖链表达差异最为显著；(3)老年男性与女性之间唾液糖蛋白糖链表达差异不显著。并发现唾液中Siaα2-3Galβ1-4Glc(NAc)和α-1,3连接Man结构随着年龄的增长而表达增加；Fucα1-2Galβ1-4Glc(NAc)结构随着女性年龄的增长表达减少，但在男性唾液中Fucα1-2Galβ1-4Glc(NAc)结构随着年龄增长呈反抛物线型表达。

通过对不同年龄段不同性别健康志愿者的唾液蛋白质及其上糖链的比较研究发现，随着年龄的增长，健康人唾液中的蛋白质含量无明显改变，而其上的糖链结构和数量却发生了显著的变化，如唾液蛋白质上的唾液酸糖链表达明显增多，而其蛋白质表达并无显著改变。同时发现健康老年人唾液通过提供更多的α2-3和α2-6连接末端唾液酸糖链结构与流感病毒血凝素结合，中和并抑制了流感病毒对人体上呼吸道细胞表面特异受体的相互识别。从而推测这一分子机制可以部分解释健康老年人具有更强抵抗流感的能力这一事实。

然而，流感暴发时被传染的人反而多为老年人，目前对其根本原因尚未见明确的解释。根据各类人群流感病毒易感性的临床观察统计，2型糖尿病、高血压和心脏病、癌症、慢性肺部、关节炎和孕妇等较易感染流感病毒(尚未区分禽流感或是人流感)；对于这类情况的老年人，通常解释是慢性病损害了老年人的免疫系统，降低了老年人的免疫抵抗力，除此常识性的因素外，是否还有其它的生理或病理因素的影响，使得这部分老年人易感染流感病毒，其他易感人群又作何解释？因此，为了能够有效指导临床诊断和提高社会公众对自身患病风险的认知，亟需一种简单检测(筛查)方法，无需借助大型仪器和工具就可以及时获得个体禽流感和人流感病毒易感特质的评估信息。

中国专利“一种用于筛查禽流感和人流感病毒易感人群的检测工具”(公开号：CN103884834A，公开日：2014.06.25)披露了凝集素MAL-II与禽流感易感性以及凝集素SNA与人流感病毒易易感性的相关关系，并指出，易感人群唾液中与对应凝集素MAL-II或SNA结合的α2-3或α2-6连接末端唾液酸糖链结构表达水平显著下调，但是该专利仅应用于芯片试剂盒，检测的简便性、速度和成本均有待改进。

试纸检测技术在疾病诊断和检测中应用逐渐增多，其具有快速、低价的特点，但目前尚未见到用于检测禽流感和人流感易感人群的试纸条及检测方法的报道。试纸条通常包括样品垫、金标垫、印制有检测带和控制线的醋酸纤维膜以及吸水末端。对于唾液而言，不同个体间其所含有的糖链结构既有相似性也有特异性，从检测的可靠性角度加大了样品垫、检测带和控制线的设计和制备难度。

发明内容

本发明的目的在于提供一种快速检测禽流感和人流感易感人群的方法以及试纸条，从而真正实现无创、安全、简便地检测禽流感和人流感病毒易感人群。

为达到上述目的，本发明采用了以下技术方案：

快速检测流感易感人群的试纸条，包括用于检测禽流感易感人群的A型试纸条和/或用于检测人流感易感人群的H型试纸条，所述A型试纸条和H型试纸条包括沿层析方向依次设置的样品垫、纳米颗粒标记垫、检控区以及吸水垫；所述检控区包括依次设置的检测带和质控线；所述A型试纸条的纳米颗粒标记垫包括胶体金、磁流体或纳米荧光颗粒标记的凝集素MAL-II，H型试纸条的纳米颗粒标记垫包括胶体金、磁流体或纳米荧光颗粒标记的凝集素SNA；所述A型试纸条的检测带包括与凝集素MAL-II不结合的稳定内参凝集素，H型试纸条的检测带包括与凝集素SNA不结合的稳定内参凝集素。

所述A型试纸条的检测带固化有凝集素WFA、STL、RCA120、PHA-E、DBA中的至少一种，质控线固化有凝集素ConA。

所述H型试纸条的检测带固化有凝集素GNA、ECA、HHL、PHA-E、DBA中的至少一种，质控线固化有凝集素STL。

所述纳米颗粒标记垫选自金标垫，该金标垫是通过溶液浸渍以及干燥将标记胶体金的凝集素MAL-II或SNA结合在玻璃纤维上而制成的；所述检测带以及质控线是通过划线、干燥以及封闭将相应的凝集素固定在硝酸纤维素膜上而制成的。

凝集素MAL-II或SNA的标记浓度为10～12μg/mL，检测带以及质控线中凝集素的划线浓度为1～4mg/mL。

所述溶液浸渍是指采用分散有浓度为4～10倍浓缩度的胶体金标记的凝集素的溶液浸泡玻璃纤维；所述浓缩度的倍数按照以下方式确定：将120μg的凝集素MAL-II或SNA按照10～12μg/mL的标记浓度于胶体金溶液中进行标记后分散于1mL溶液I中，得到10倍浓缩度的胶体金标记凝集素溶液，采用溶液I进一步稀释后，则得到其他较低浓缩度的胶体金标记凝集素溶液，所述溶液I为含0.15mol/L NaCl和0.2％BSA的0.01mol/L pH7.5～8.5的HEPES溶液，所述胶体金溶液的pH为7.5～8.5；所述划线是指将相应一种或多种凝集素按照总浓度1～4mg/mL溶解于0.01mol/L pH6.5～8.0的PBS，得到凝集素溶液，利用该溶液在硝酸纤维素膜上涂敷线型条带。

优选的，采用分散有浓度为5倍浓缩度的胶体金标记的凝集素的溶液浸泡玻璃纤维；划线中采用的凝集素溶液的浓度为2mg/mL。

上述快速检测流感易感人群的试纸条的制备方法，包括以下步骤：

(1)胶体金制备

采用氯金酸水溶液制备得到胶体金溶液；

(2)胶体金标记

将胶体金溶液的pH值调节至7.5～8.5后加入凝集素MAL-II或SNA，混匀，凝集素MAL-II或SNA的浓度为10～12μg/mL；反应后，低速离心，去沉淀，对上清液高速离心，然后弃上清，沉淀分散于1mL的含0.15mol/L NaCl和0.2％BSA的0.01mol/L且pH7.5～8.5的HEPES溶液中，即为10倍浓缩度的胶体金标记凝集素溶液，将玻璃纤维在5～10倍浓缩度的胶体金标记凝集素溶液中浸泡5～8小时后取出，冷冻干燥，得到金标垫；

(3)凝集素包被

将检测带凝集素以及质控线凝集素分别用0.01mol/L pH6.5～8.0的PBS稀释至浓度为1～4mg/mL；分别在硝酸纤维素膜上划线，干燥后对硝酸纤维素膜进行封闭、清洗和干燥，得到具有检测带和质控线的硝酸纤维素膜；所述检测带凝集素为WFA、STL、RCA120、PHA-E、DBA中的至少一种或GNA、ECA、HHL、PHA-E、DBA中的至少一种，所述质控线凝集素对应为ConA或STL；

(4)试纸条的组装

经过步骤3后，将金标垫、硝酸纤维素膜与样品垫、吸水垫组装构成试纸条。

一种快速检测流感易感人群的方法，包括以下步骤：

将上述A型试纸条和/或H型试纸条的样品垫插入唾液样本中或含在口腔中，唾液出现在检控区上后将试纸条取出，观察检测带以及质控线显色状态，得到对于禽流感和/或人流感易感性的检测结果。

对于A型试纸条，检测结果如下：

(1)检测带以及质控线均显现颜色变化，则表明具有较强抵抗禽流感病毒的能力；

(2)仅质控线显现颜色变化，则表明易感禽流感病毒；

(3)无任何颜色变化显现；则表明试纸条失效；

对于H型试纸条，检测结果如下：

(1)检测带以及质控线均显现颜色变化，则表明具有较强抵抗人流感病毒的能力；

(2)仅质控线显现颜色变化，则表明易感人流感病毒；

(3)无任何颜色变化显现；则表明试纸条失效。

本发明具有以下有益效果：

本发明通过取唾液样本作为检测对象，具有科学性和可行性，并具非常简便检测的优势。较之于芯片技术，本发明更易于使用，无创，安全简便，成本低且易于保存，检测唾液中α2-3和α2-6连接末端唾液酸糖链结构的丰度得出的定性结论即可及时获得个体禽流感和人流感病毒易感特质的评估信息。

附图说明

图1为针对唾液样本快速检测禽流感和人流感易感人群的试纸条结构示意图，图1中：1为PVC底板，2为检测带，3为质控线，4为吸水垫，5为NC膜，6为金标垫，7为指示线，8为样品垫。

图2为MAL-II双夹心多角度分析Venn图。

图3为SNA双夹心多角度分析Venn图。

具体实施方式

下面结合附图和实施例对本发明做进一步详细说明。

(一)试纸条特征分析

本发明首先通过含有37种凝集素的芯片对唾液样本进行检测，筛选出人唾液中稳定表达的糖蛋白糖型及其识别的凝集素，作为候选的稳定内参(或管家)凝集素(在所有测试的唾液样本中，荧光信号值没有显著的变化，或不同唾液样本中，荧光信号值的比值等于或接近于1)，然后分别将候选的稳定内参凝集素中能够识别含α2,3-SA样本的凝集素与MAL-II进行相互作用分析，并分别将候选的稳定内参凝集素中能够识别含α2,6-SA样本的凝集素与SNA进行相互作用分析，筛选出与MAL-II或SNA不结合的稳定内参凝集素，最后将这些稳定内参凝集素作为检测带，用于试纸条的制备或固定于酶标板，分别进行禽流感和人流感病毒易感人群的检测。

(1)全唾液样本采集：

健康人：10～70周岁240例；乳腺癌患者：200例；肺癌患者：200例；确诊的男性乙肝患者100例，肝硬化患者和肝癌患者各100例；2型糖尿病男性和女性患者各100例；胃癌男性患者100例。饭后两小时，约9点到10点之间，生理盐水漱口三次后迅速采集自然分泌的全唾液。唾液采集至少1mL并立即置于冰上，加入蛋白酶抑制剂(每毫升唾液加入10μL)防止蛋白降解。图2、3中“唾液个例评级出稳定内参”所提及的个例是指上述除肝病(乙肝、肝硬化和肝癌)的例子。

(2)处理唾液样本和凝集素的芯片分析

将采集到的唾液样本在4℃、12000rpm条件下离心1h，收集上清并使用0.45μm针头式滤器进行过滤；向过滤后的唾液样本上清中加入蛋白酶抑制剂(每10mL加入1μL蛋白酶抑制剂)，使用BCA试剂盒进行蛋白定量，计算唾液样本中的蛋白含量，并将唾液样本储存于-80℃冰箱备用。按实验室常规方法对唾液样本进行荧光标记，然后用凝集素芯片对标记有荧光的唾液样本进行检测和数据分析。

(3)与MAL-II不结合的稳定内参凝集素

通过步骤(2)筛选出人唾液中稳定表达的糖蛋白糖型及其识别的凝集素，作为候选的稳定内参(或管家)凝集素，然后分别将候选的稳定内参凝集素中能够识别含α2,3-SA样本的凝集素与MAL-II进行相互作用分析，再筛选出与MAL-II不结合的稳定内参凝集素WFA，STL，RCA120，PHA-E，DBA(图2)。

(4)与SNA不结合的稳定内参凝集素

通过步骤(2)筛选出人唾液中稳定表达的糖蛋白糖型及其识别的凝集素，作为候选的稳定内参(或管家)凝集素，然后分别将候选的稳定内参凝集素中能够识别含α2,6-SA样本的凝集素与SNA进行相互作用分析，再筛选出与SNA不结合的稳定内参凝集素GNA，ECA，HHL，PHA-E，DBA(图3)。

基于以上分析以及实验结论，本发明设计了一种针对唾液样本快速检测禽流感和人流感易感人群的方法以及采用的试纸条，试纸条分两种(A型或H型试纸条)：两种试纸条均包括沿层析方向依次设置的样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜，以及用于吸收检测样品中多余液体的吸水垫，样品垫上粘附标有指示线的胶带；所述金标垫是吸附有胶体金标记的凝集素MAL-II(A型试纸条)或SNA(H型试纸条)的玻璃纤维；硝酸纤维素膜上依次标识有检测带和质控线；其中，所述检测带固化有凝集素WFA，STL，RCA120，PHA-E，DBA中的至少一种(A型试纸条)或GNA，ECA，HHL，PHA-E，DBA中的至少一种(H型试纸条)，质控线C固化有凝集素ConA(A型试纸条)或STL(H型试纸条)，用于结合MAL-II(A型试纸条)或SNA(H型试纸条)。所述A型试纸条用于检测禽流感易感人群，H型试纸条用于检测人流感易感人群。

(二)试纸条制备

1)胶体金制备：氯金酸(HAuCl₄)配成质量分数1％的氯金酸水溶液，取1mL加入99mL去离子水，加热至沸腾立即加入2mL质量分数1％的枸掾酸钠水溶液，迅速搅拌均匀，继续加热10分钟，冷却至室温，补充去离子水至100mL，得胶体金溶液。

2)确定最佳标记pH值：用0.1mol/L的碳酸钾溶液将胶体金溶液的pH值分别调节到6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5和9.0，各取1mL加入20μg凝集素(MAL-II或SNA)，混合均匀，室温反应10分钟，静置2小时，观察溶液颜色变化。然后，12000rpm离心10分钟，去掉上清，加入0.01mol/L含体积分数1％BSA(牛血清白蛋白)的PBS(磷酸盐缓冲溶液，pH8.0)溶解沉淀，以沉淀完全分散悬浮呈均匀的透明紫红色溶液管的pH值为最佳。结果显示胶体金标记的最佳pH为8.0。

3)确定最佳标记凝集素MAL-II或SNA浓度：将胶体金溶液的pH调节到最佳值，在5支试管中各加入1mL胶体金溶液，分别加入2.5～40μg凝集素(MAL-II或SNA)，反应10分钟后，各管加入10％氯化钠溶液100μL，静置2小时，观察各管颜色变化。然后，12000rpm离心20分钟，去掉上清，加入0.01mol/L含1％BSA的PBS(pH8.0)溶解沉淀，以沉淀完全分散悬浮呈均匀的紫红色溶液管的最低蛋白(MAL-II或SNA)浓度加20％的误差为最佳蛋白浓度。结果显示，10μg/mL以后各管沉淀完全溶解，故最佳标记凝集素浓度为12μg/mL。

4)胶体金标记：将10mL制备好的胶体金溶液的pH值调节到最佳值，加入凝集素(MAL-II或SNA)120μg混匀(即标记浓度为12μg/mL)，室温反应10分钟，4℃2000rpm离心20分钟，去沉淀(这是除去形成的团块聚合物)。上清液4℃12000rpm离心20分钟，弃上清，沉淀(是疏松暗红色的沉淀物)分散悬浮于1mL的HEPES溶液(羟乙基哌嗪乙硫磺酸，0.01mol/LpH7.5，并含0.15mol/L NaCl和体积分数0.2％BSA)中，即为10倍浓缩度的胶体金标记凝集素溶液，然后用上述HEPES溶液将其稀释为5或4倍浓缩度的胶体金标记凝集素溶液，将玻璃纤维浸泡于10或5或4倍浓缩度的胶体金标记凝集素溶液中(5倍浓缩度最佳)，充分浸泡(5～8小时)后取出，冷冻干燥6小时以上，作为金标垫。

以上关于对胶体金标记的凝集素在金标垫上的含量和固化于检测带上的凝集素含量的限定，本申请采用了本领域惯常的描述方式，较之于其他限定方式，这种限定对于本领域技术人员(包括试纸条的使用者)不仅是清楚的，而且在明确该试纸条的成分和效果方面更有意义。

5)稳定内参凝集素以及质控凝集素包被：上述与MAL-II或SNA不结合的稳定内参凝集素(WFA、STL、RCA120、PHA-E、DBA中的至少一种或GNA、ECA、HHL、PHA-E、DBA中的至少一种，若使用多种则按照等质量混合)用0.01mol/L的PBS(pH7.2)稀释至浓度为1～4mg/mL各1mL(以2mg/mL为最佳)。在NC膜上划线(使相应稳定内参凝集素固化在NC膜上，作为检测带)。在离稳定内参凝集素划线6毫米处，用0.01mol/L的PBS(pH7.2)稀释至浓度为4mg/mL的凝集素ConA或STL再划一条线(作为质控线)。膜干燥后完全浸泡于含1％BSA的pH7.2的PBS中，4℃1小时，进行封闭。然后取出NC膜用PBS洗涤3次，悬挂于室温中干燥3小时以上，再放于30℃通风干燥箱内通风干燥1小时。

6)试纸条的组装(如图1)。

试纸条由样品垫8、金标垫6、硝酸纤维素膜(NC膜5)和吸水垫4组成，按层析方向依次排列，相邻的两部分之间紧密结合。上段为手持部位(吸水垫：为吸水滤纸，吸收检测样品中多余液体)，中段为检测区和质控区(硝酸纤维素膜：包括判读结果的检测带2以及质控线3)，在中下段之间放置吸附有胶体金标记的凝集素MAL-II或SNA的金标垫；下段为样品垫(吸水玻璃纤维，接触待检测样品)，样品垫粘附作为指示线7的胶带，用指示线标识加样的样品区。整个试纸条贴附于PVC底板1中央。裁切成4mm宽的条形带。密封干燥保存，备用。

(三)使用试纸条检测禽流感和人流感易感人群

1)试纸条的使用方法：将样品垫的样品区(指示线位置之前)插入待测唾液样品中或含在口腔中，待10～15分钟样品出现在NC膜上时，将试纸条取出，平放在桌面上，以便于观察结果，观察检测线颜色深浅的变化。

2)结果判断：

针对禽流感易感人群的检测(采用A型试纸条)

将层析试纸条的样品垫一端插入唾液样本中或含在口腔中，10～15分钟后唾液样本出现在NC膜上；将试纸条取出，观察检测带以及质控线显色状态，得到以下三种检测结果之一：

(1)检测带以及质控线均显现，呈紫红色；则表明唾液样本中含有的α2-3连接末端唾液酸糖链结构丰度较高，具有较强抵抗禽流感病毒的能力；

(2)仅质控线显现，呈紫红色；则表明唾液样本中的α2-3连接末端唾液酸糖链结构丰度较低，易感禽流感病毒；

(3)无紫红色条带显现；则表明试纸条失效，该检测过程无效。

针对人流感易感人群的检测(采用H型试纸条)

将层析试纸条的样品垫一端插入唾液样本中或含在口腔中，10～15分钟后唾液样本出现在NC膜上；将试纸条取出，观察检测带以及质控线显色状态，得到以下三种检测结果之一：

(1)检测带以及质控线均显现，呈紫红色；则表明唾液样本中含有的α2-6连接末端唾液酸糖链结构丰度较高，具有较强抵抗人流感病毒的能力；

(2)仅质控线显现，呈紫红色；则表明唾液样本中的α2-6连接末端唾液酸糖链结构丰度较低，易感人流感病毒；

(3)无紫红色条带显现；则表明试纸条失效，该检测过程无效。

(四)检测结果分析

经分析，本发明通过利用“肝病中稳定内参”与“唾液个例评级出稳定内参”这两个“候选的稳定内参凝集素”的筛选条件，提高了易感人群检测的准确性和可靠性。