聚乙二醇电解质制剂中阴阳离子含量的测定方法

摘要

本发明属于医药领域，具体提供了一种使用高效液相色谱法测定聚乙二醇电解质制剂中阴阳离子含量的方法，具体色谱条件为：阳离子淋洗液为2.3～2.7mM硝酸水溶液，并添加体积百分含量为5％～20％的水溶性有机溶剂，流速为0.8～1.2ml/min；阴离子淋洗液为3.2～3.8mM碳酸钠和0.9～1.1mM碳酸氢钠的水溶液，流速为0.6～0.8ml/min；检测器为电导检测器。该测定方法具有专属性强、操作简便快速、能延长色谱柱使用寿命且灵敏度高等诸多优点。

说明书

技术领域

本发明属于医药领域，具体涉及一种聚乙二醇电解质制剂中阴阳离子含量的测定方法。

背景技术

聚乙二醇(Polyethylene Glycol，PEG)是由环氧乙烷聚合得到的高分子聚合物。其在临床上具有通便和清肠的功效。具体作用机制为：聚乙二醇通过口服进入体内后，通过氢键结合并固定肠腔内固有的水分子，增加粪便的含水量，使粪便体积及重量增加，软化粪便，促进粪便在肠腔中的转运，改善便秘，恢复粪便体积和重量至正常，促进排便的最终完成，从而改善便秘症状；同时，由于其通便和清肠功效均为物理作用，因此，聚乙二醇对胃肠道表现为惰性(即不能被胃肠道吸收或代谢，不影响脂溶性维生素的吸收和电解质的代谢)，毒性小，大剂量服用聚乙二醇不仅仍表现出较高的安全性，而且还可起到冲刷、灌洗肠道的作用，因此聚乙二醇还是一种良好的术前肠道清洁剂。

目前临床使用的相关药物主要为聚乙二醇电解质制剂，其由聚乙二醇、能维持渗透压和电解质平衡的碱土金属盐，如氯化钠、氯化钾、碳酸氢钠等组成，是一种用于通便和清肠的药物组合物。

迄今为止关于聚乙二醇电解质制剂中阴阳离子定量分析方法的报道不多，其中，国家药典标准中的阳离子如钠离子、钾离子测定多采用火焰光度法和原子吸收分光光度法，阴离子如氯离子的测定采用滴定法。由于该类产品中碱土金属盐含量较低，测定方法的选取对其中阴阳离子定量结果有较大的影响。并且火焰光度法和原子吸收分光光度法稳定性较差，滴定法终点的判断也有误差，上述方法均会造成离子含量结果出现偏差的可能，进而造成制剂质量控制的风险；同时阴阳离子测定方法不同，操作复杂繁琐；同时因聚乙二醇的粘性特质使得色谱柱柱效降低明显从而影响色谱柱使用寿命。

鉴于此，聚乙二醇电解质制剂中阴阳离子的含量测定需要一种专属性强、操作简便快速、能延长色谱柱使用寿命且灵敏度高的测定方法。

发明内容：

本申请的目的是提供一种测定聚乙二醇电解质制剂中阴阳离子含量的方法，所述方法专属性强、操作简便快速、能延长色谱柱使用寿命且灵敏度高。

所述聚乙二醇电解质制剂是散剂或口服液。

进一步的，所述聚乙二醇电解质制剂中阴阳离子含量使用高效液相色谱法测定，具体的色谱条件为：

阳离子淋洗液为2.3～2.7mM硝酸水溶液，并添加5％～20％的水溶性有机溶剂，优选为2.7mM硝酸水溶液并添加10％乙腈，流速为0.8～1.2ml/min，优选为1.0ml/min，阴离子淋洗液为3.2～3.8mM碳酸钠和0.9～1.1mM碳酸氢钠的水溶液，优选为3.5mM碳酸钠和1.0mM碳酸氢钠的水溶液，流速为0.6～0.8ml/min，优选为0.7ml/min；色谱柱为离子交换色谱柱；检测器为电导检测器。

优选地，所述水溶性有机溶剂可以使用乙腈、甲醇或异丙醇，优选使用10％乙腈。

优选地，所述色谱柱为键合硅胶离子交换色谱柱，其中阳离子柱分离的钠钾在本申请的色谱条件下的分离度均较大，不同长度内径的色谱柱均能满足上述离子的检测要求。更优选阳离子柱4.6×150mm；其中阴离子柱只用于氯离子检测，故不同长度内径的色谱柱均能满足其检测要求。

更优选地，所述方法中柱温为35～45℃，优选为40℃。

优选地，所述方法中进样量为20μl。更进一步的，所述聚乙二醇电解质制剂中阴阳离子含量测定的方法，包括如下步骤：

(1)分别配制阴阳离子即钠、钾和氯离子对照品溶液和待测样品溶液；

(2)将所配钠、钾和氯离子对照样品溶液分别进行梯度稀释后进行高效液相色谱检测，制作标准曲线；将所配待测样品溶液进行高效液相色谱检测，得到待测样品高效液相色谱图；

(3)将所得待测样品高效液相色谱图利用外标法以峰面积计算，标准曲线作为对照，计算所述待测样品中钠、钾和氯离子的含量。

具体为，

(1)分别取已知含量的钠、钾、氯离子标准溶液，用水稀释配制为含钠10μg/ml、含钾1.25μg/ml、含氯12.5μg/ml的溶液作为各离子的对照品溶液；聚乙二醇电解质制剂适量用水稀释数倍，优选400-800倍，得待测样品溶液；

(2)分别精密量取钠、钾、氯离子标准溶液，配制成含钠5、8、10、12、15μg/ml，含钾0.63、1.0、1.25、1.5、1.88μg/ml，含氯6.25、10、12.5、15、18.75μg/ml的水溶液，作为各离子的标准曲线溶液，采用上述高效液相色谱检测，制作标准曲线；将所配待测样品溶液注入离子色谱仪，按上述高效液相色谱法检测，记录色谱图；

(3)根据所得待测样品高效液相色谱图，获取保留时间、峰面积等参数，按外标法以峰面积计算，标准曲线作为对照，即得待测样品中钠、钾和氯离子含量。

其中，上述各样品进样量均为各取20μl。

本发明的有益效果在于：

本申请提供了一种聚乙二醇电解质制剂中阴阳离子含量的测定方法，其与现有技术相比具有以下有益效果：

1、方法简便快速，准确性高：采用了配置电导检测器的高效液相色谱法对制剂中的各离子含量进行测定，而且采用的淋洗液成分简单易于配制。由色谱图中可以看出本申请方法在8min内即可测定阴阳离子含量，节约了检测时间，样品检测效率高。并且各离子回收率均在98％～101％之间，方法准确性高。

2、延长色谱柱使用寿命：聚乙二醇具有粘性特质会对色谱柱有吸附作用，影响离子保留时间，降低色谱柱柱效，缩短色谱柱的使用寿命。在阳离子淋洗液中添加了水溶性有机溶剂，能更好的去除聚乙二醇对色谱柱的吸附，使得阳离子保留时间稳定，同时避免柱效降低从而延长了色谱柱的使用寿命。

3、线性达到0.999：本申请方法测定聚乙二醇电解质制剂中阴阳离子含量时，依据每种离子在线性范围内的浓度和响应峰面积做线性回归，三种离子的线性相关系数均为0.999，相关性良好。

4、重复性和精密度较好：本申请方法的重复性和精密度较好，RSD值均小于2％，测得的试验结果偏差小。

5、灵敏度高：针对处方量最低的钾离子的最低检测限可达到0.01μg/ml，准确测量的最低定量限可达到0.02μg/ml。

附图说明：

图1为钠离子对照专属性图谱；

图2为钾离子对照专属性图谱；

图3为氯离子对照专属性图谱；

图4为阳离子淋洗液专属性图谱；

图5为聚乙二醇电解质散剂空白辅料图谱；

图6为钠离子标准曲线图；

图7为钾离子标准曲线图；

图8为氯离子标准曲线图；

图9为聚乙二醇电解质散剂样品图谱；

图10为钾离子最低定量限图谱；

图11为聚乙二醇电解质口服液空白辅料图谱；

图12为实施例2聚乙二醇电解质口服液样品图谱；

图13为实施例3聚乙二醇电解质口服液样品图谱；

图14淋洗液1条件下进样数1354针后的阳离子色谱图；

图15淋洗液2条件下进样数1354针后的阳离子色谱图。

具体实施方式：

下面，结合实施例对本发明的具体实施方式进一步进行说明，以便更清楚地描述本发明的优点和特点。但这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。

以下实施例中的试剂，除非特别说明均为色谱纯，且均从正规渠道商购获得。硝酸购自Sigma公司；碳酸钠和碳酸氢钠购自Merk公司；聚乙二醇电解质口服液是英国Norgine公司生产；聚乙二醇电解质散剂为舒泰神(北京)生物制药股份有限公司产品。

实施例1：外标法测定聚乙二醇电解质散剂中钠、钾、氯离子含量

一、色谱条件：

仪器：万通940型离子色谱仪；

色谱柱：万通离子交换色谱柱，阳离子柱4.6×150mm，阴离子柱4.6×100mm；

检测器：电导检测器；

淋洗液：阳离子2.7mM硝酸水溶液并添加10％乙腈，阴离子3.5mM碳酸钠和1.0mM碳酸氢钠的水溶液

流速：阳离子1.0ml/min，阴离子0.7ml/min；

柱温：40℃；

进样量：20μl。

二、实验步骤：

1、对照图谱的测定

分别取已知含量的钠、钾、氯离子标准溶液(购自中国计量科学研究院)，用水配制为含钠10μg/ml、含钾1.25μg/ml、氯12.5μg/ml的溶液作为各离子的对照品溶液，图1-3所示；分别取阴阳离子淋洗液、聚乙二醇电解质散剂中的辅料溶液(即将聚乙二醇电解质散剂A包用水溶于50ml容量瓶，摇匀倍数稀释400倍)作为空白对照，各20μl依次通过上述方法检测，以确定各成分的色谱峰位置。阳离子淋洗液色谱图如图4所示，阳离子淋洗液在各离子的出峰位置均无色谱峰，阴离子淋洗液色谱图无色谱峰，故阴阳离子淋洗液对聚乙二醇电解质散剂中各离子含量检测无干扰；空白辅料溶液的色谱图如图5所示，该制剂中的辅料均无色谱峰，其对各离子的含量测定均无干扰。

2、聚乙二醇电解质散剂中各离子含量的测定

分别精密量取钠、钾、氯离子标准溶液，配制成含钠约5、8、10、12、15μg/ml，含钾约0.63、1.0、1.25、1.5、1.88μg/ml，含氯约6.25、10、12.5、15、18.75μg/ml的溶液，作为各离子的标准曲线溶液，制作标准曲线，其R²值均为0.999，相关性良好，如图6-8所示。

聚乙二醇电解质散剂AB包用水溶于50ml容量瓶，摇匀，倍数稀释至钠钾氯离子终浓度分别为9.34、1.22、11.75μg/ml得样品溶液，分别取20μl注入离子色谱仪，按上述检测方法检测，记录色谱图，如图9所示；获取保留时间、峰面积等参数，按外标法以峰面积计算，即得钠、钾、氯离子含量。重复检测6次，结果见表1。

表1聚乙二醇电解质散剂中钠、钾、氯离子含量重复性结果

表2：各离子对称因子等参数结果

上述实验结果表明：该方法的重复性良好，测定多份样品的含量准确可靠。

3.精密度实验

聚乙二醇电解质散剂AB包用水溶于50ml容量瓶，摇匀，倍数稀释至钠钾氯离子终浓度分别为9.34、1.22、11.75μg/ml，取20μl注入离子色谱仪，按上述检测方法检测，连续进样6次，记录色谱图，获取保留时间、峰面积等参数，计算RSD值，结果见表3。

表3聚乙二醇电解质散剂中钠、钾、氯离子含量精密度结果

上述实验结果表明：该方法的进样精密度良好。

4、聚乙二醇电解质散剂回收率实验结果

1)回收率样品溶液的制备：分别精密量取氯化钠、氯化钾对照品(购自中国计量科学研究院)，再加入处方比例的空白辅料(PEG4000)，加水稀释至刻度，分别配置为含钠离子、氯离子和钾离子80％、100％、120％的溶液，每个浓度平行配制三份。

2)将上述的对照品溶液和回收率样品溶液，每份精密量取20μl注入液相色谱仪，按上述检测方法检测，记录色谱图，采用外标法进行计算，得出含量，根据加入量，计算回收率，结果见表4。

表4聚乙二醇电解质散剂回收率实验结果

上述实验结果表明：该方法回收率合格，可以准确测定各离子含量。

5、灵敏度实验

选取处方量最低的钾离子进行灵敏度实验。

1)检测限的测定

分别取已知含量的钾离子标准溶液(购自中国计量科学研究院)，加水稀释配制系列浓度的钾离子对照品溶液，分别量取20μl注入色谱仪，记录色谱图，选取峰高约为3倍基线噪音的色谱峰对应的对照品溶液，所述对照品溶液钾离子浓度为0.01μg/ml。

2)定量限的测定

分别取已知含量的钾离子标准溶液(购自中国计量科学研究院)，加水稀释配制系列浓度的钾离子对照品溶液，分别量取20μl注入色谱仪，记录色谱图，如图10所示，选取峰高约为10倍基线噪音的色谱峰对应的对照品溶液，所述对照品溶液大于钾离子浓度为0.02μg/ml的钾离子可以被准确检出。另配制6份定量限浓度的溶液验证。

实施例2：外标法测定聚乙二醇电解质口服液中钠、钾、氯离子含量

一、色谱条件：

仪器：万通940型离子色谱仪；

色谱柱：万通离子交换色谱柱，阳离子柱4.6×150mm，阴离子柱4.6×100mm；

检测器：电导检测器；

淋洗液：阳离子2.3mM硝酸水溶液+5％乙腈，阴离子3.2mM碳酸钠和0.9mM碳酸氢钠的

水溶液

流速：阳离子0.8ml/min，阴离子0.8ml/min；

柱温：35℃；进样量：20μl。

二、实验步骤：

1、对照图谱的测定

实验步骤同实施例1。阴阳离子淋洗液对各离子含量检测均无干扰，聚乙二醇电解质口服液辅料(即将聚乙二醇、安赛蜜、三氯蔗糖、尼泊金甲酯、尼泊金乙酯、橙味香料按照聚乙二醇电解质口服液的浓度配制成溶液后取5ml，倍数稀释800倍)色谱图如图11所示，其对各离子的含量测定均无干扰。

2、聚乙二醇电解质口服液中各离子含量的测定

标准曲线制备同实施例1，其R²值均为0.999，相关性良好。

精密量取聚乙二醇电解质口服液5ml，倍数稀释至钠钾氯离子终浓度分别为9.34、1.22、11.75μg/ml得样品溶液，取20μl注入离子色谱仪，按上述检测方法检测，记录色谱图，如图12所示；获取保留时间、峰面积等参数，按外标法以峰面积计算，即得钠、钾、氯离子含量。重复检测6次，结果见表5。

表5聚乙二醇电解质口服液中钠、钾、氯离子含量重复性结果

表6：各离子对称因子等参数结果

样品保留时间峰面积对称因子理论塔板数钠离子3.522.0510.926512钾离子5.030.1120.907645氯离子4.273.5101.124538

上述实验结果表明：该方法的重复性良好，测定多份样品的含量准确可靠。

3.精密度实验

同上方法制备聚乙二醇电解质口服液的样品溶液，取20μl注入离子色谱仪，按上述检测方法检测，连续进样6次，记录色谱图，获取保留时间、峰面积等参数，计算RSD值，结果见表7。

表7聚乙二醇电解质口服液中钠、钾、氯离子含量精密度结果

上述实验结果表明：该方法的进样精密度良好。

4、聚乙二醇电解质口服液回收率实验结果

实验步骤同实施例1。实验结果表明：该方法回收率在98％～101％之间，可以准确测定各离子含量。

5、灵敏度实验

实验步骤同实施例1。钾离子最低检测限及定量限分别为0.01μg/ml、0.02μg/ml。

实施例3：外标法测定聚乙二醇电解质口服液中钠、钾、氯离子含量

一、色谱条件：

仪器：万通940型离子色谱仪；

色谱柱：万通离子交换色谱柱，阳离子柱4.6×150mm，阴离子柱4.6×100mm；

检测器：电导检测器；

淋洗液：阳离子2.5mM硝酸水溶液+20％异丙醇，阴离子3.8mM碳酸钠和1.1mM碳酸氢钠的水溶液

流速：阳离子1.2ml/min，阴离子0.6ml/min；

柱温：45℃；

进样量：20μl。

二、实验步骤：

实验步骤同实施例2，按照上述检测条件检测得到的色谱图，如图13。测得的钠、钾、氯离子含量结果如表8所示，对称因子等考察结果如表9所示。

表8聚乙二醇电解质散剂中钠、钾、氯离子含量重复性结果

表9各离子的对称因子等考察结果

保留时间峰面积对称因子理论塔板数钠离子3.201.9980.886058钾离子4.490.1080.887030氯离子4.943.4021.154318

实施例4：阳离子淋洗液中加入乙腈前后对于色谱柱的使用寿命的影响

一、色谱条件同实施例1，其中：

阳离子淋洗液分为两种：

阳离子淋洗液1：2.7mM硝酸水溶液并添加10％乙腈；

阳离子淋洗液2：2.7mM硝酸水溶液；

二、实验步骤：

实验步骤同实施例1，其中：

1、一根色谱柱在阳离子淋洗液1条件下对钠、钾离子含量测定，比较进样数在32针和1354针时离子峰形、保留时间等的改变，结果见表10，进样数3354针后阳离子色谱图见图14。2、一根色谱柱在阳离子淋洗液2条件下对钠、钾离子含量测定，比较进样数在32针和1354针时离子峰形、保留时间等的改变，结果见表11，进样数3354针后阳离子色谱图见图15。

表10淋洗液1阳离子参数考察结果

样品溶液阳离子淋洗液1保留时间峰面积对称因子理论塔板数钠离子进样32针4.002.1320.957156钠离子进样1354针4.062.1080.946741钾离子进样32针5.600.1380.968395钾离子进样1354针5.700.1211.057605

表11淋洗液2阳离子参数考察结果

样品溶液阳离子淋洗液2保留时间峰面积对称因子理论塔板数钠离子进样32针3.501.9820.886198钠离子进样1354针3.081.8020.582974钾离子进样32针5.010.1090.876933钾离子进样1354针4.440.0980.522298

从图14、15及表10、11可以看出：采用两种阳离子淋洗液时，在进样针数相近的情况下，加入乙腈的阳离子淋洗液体系测得的峰形好，色谱柱的寿命长。在不添加乙腈的阳离子淋洗液时，进样1354针后，保留时间偏差明显，测得的峰型也不是很好，所以在此种情况下视为该色谱柱已失效不能再继续使用。