鼻窦炎口服液指纹图谱的测定方法及其指纹图谱

摘要

本发明涉及一种鼻窦炎口服液指纹图谱的测定方法及其指纹图谱，属于中药检测领域，该方法通过梯度洗脱方法，能够将口服液中多个成分有效分离和检测，峰的分离效果好，无重叠峰，并且峰形好，能分离口服液中几乎所有药味的特征成分，并能实现鼻窦炎口服液最大可能的化学成分检测，因此能有效表征鼻窦炎口服液的质量，有利于产品质量的全面控制，具有简便、稳定性好、精密度高、重现性好等优点，可快速、准确地鉴别产品的真伪优劣。

说明书

技术领域

本发明属于中药检测领域，具体涉及一种鼻窦炎口服液指纹图谱的测定方法及其指纹图谱。

背景技术

中药指纹图谱是一种综合的，可量化的鉴定手段，它是建立在中药化学成分系统研究的基础上，主要用于评价中药材以及中药制剂半成品质量的真实性、优良性和稳定性。中药及其制剂均为多组分复杂体系，因此评价其质量应采用与之相适应的，能提供丰富鉴别信息的检测方法，建立中药指纹图谱将能较为全面地反映中药及其制剂中所含化学成分的种类与数量，进而对药品质量进行整体描述和评价。在此基础上，如果进一步开展谱效学研究，可使中药质量与其药效真正结合起来，有助于阐明中药作用机理。总之，中药指纹图谱的研究和建立，对于提高中药质量，促进中药现代化具有重要意义。

鼻窦炎口服液收载于2010年版《中国药典》(一部)，具有疏散风热，清热利湿，宣通鼻窍。用于风热犯肺、湿热内蕴所致的鼻塞不通、流黄稠涕；急慢性鼻炎、鼻窦炎见上述证候者。常规的重要质量评价通常采用单一成分进行控制和评价，不能体现鼻窦炎口服液中药物多成分，多靶点，多途径的特点。因此，对鼻窦炎口服液的质量控制方法有待进一步完善。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于：(1)提供一种鼻窦炎口服液指纹图谱的测定方法；(2)提供一种鼻窦炎口服液指纹图谱。

为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：

1、一种鼻窦炎口服液指纹图谱的测定方法，包括如下步骤：

(1)供试品溶液的制备：取鼻窦炎口服液样液，置容量瓶中，加稀释剂至刻度，摇匀，离心，取上清液，得供试品溶液；

(2)HPLC色谱条件的确定：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，柱温为25～30℃，流速为0.8～1.0mL/min，检测波长为220～400nm，流动相乙腈与体积分数为0.1～0.6％的甲酸在体积比为2～80:20～98范围内梯度洗脱；

(3)测定：精密吸取步骤(1)中供试品溶液注入高效液相色谱仪，按高效液相色谱法测定，得到指纹图谱。

进一步，步骤(1)中，所述稀释剂为甲醇、乙腈或乙醇中的一种。

进一步，步骤(1)中，所述供试品溶液的制备方法如下：精密移取鼻窦炎口服液样液1mL，置5mL棕色容量瓶中，加入体积分数为20～50％甲醇至刻度，摇匀，在10000r·min^-1条件下离心10min，取上清液，制得供试品溶液。

进一步，所述甲醇体积分数为50％。

进一步，步骤(2)中，所述HPLC色谱条件：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，所述色谱柱柱长250mm，柱内径4.6mm，填料粒径5μm；柱温30℃；流速1mL/min；检测波长254nm；流动相乙腈与体积分数为0.4％的甲酸进行梯度洗脱，所述梯度洗脱具体方法如下：

0～10min，流动相A为2％的乙腈，流动相B为98％的0.4％的甲酸水溶液；

10～20min，流动相A为2～10％的乙腈，流动相B为98～90％的0.4％的甲酸水溶液；

20～35min，流动相A为10～20％的乙腈，流动相B为90～80％的0.4％的甲酸水溶液；

35～65min，流动相A为20～35％的乙腈，流动相B为80～65％的0.4％的甲酸水溶液；

65～75min，流动相A为35～60％的乙腈，流动相B为65～40％的0.4％的甲酸水溶液；

75～80min，流动相A为60～80％的乙腈，流动相B为40～20％的0.4％的甲酸水溶液；

80～85min，流动相A为80％的乙腈，流动相B为20％的0.4％的甲酸水溶液；

85～87min，流动相A为80～2％的乙腈，流动相B为20～98％的0.4％的甲酸水溶液；

87～102min，流动相A为2％的乙腈，流动相B为98％的0.4％的甲酸水溶液。

进一步，步骤(3)中，所述测定为精密吸取步骤(1)中供试品溶液10～30μL注入高效液相色谱仪，按高效液相色谱法测定，得到指纹图谱。

进一步，步骤(3)中，所述测定为精密吸取步骤(1)中供试品溶液10μL注入高效液相色谱仪，按高效液相色谱法测定，得到指纹图谱。

2、由所述的一种鼻窦炎口服液指纹图谱的测定方法所得的鼻窦炎口服液指纹图谱，其特征在于，所述指纹图谱中有17个特征共有峰，其平均保留时间依次分别为：6.176min、7.964min、11.576min、13.301min、19.759min、23.034min、23.659min、32.757min、40.736min、44.493min、45.148min、54.609min、58.790min、60.387min、62.825min、70.403min、76.668min。

本发明的有益效果在于：本发明提供一种鼻窦炎口服液指纹图谱的测定方法及其指纹图谱，通过梯度洗脱方法，能够将口服液中多个成分有效分离和检测，峰的分离效果好，无重叠峰，并且峰形好，能分离口服液中几乎所有药味的特征成分，并能实现鼻窦炎口服液最大可能的化学成分检测，因此能有效表征鼻窦炎口服液的质量，有利于产品质量的全面控制。该方法具有简便、稳定性好、精密度高、重现性好等优点，可快速、准确地鉴别产品的真伪优劣。

附图说明

为了使本发明的目的、技术方案和有益效果更加清楚，本发明提供如下附图进行说明：

图1为实施例1的方法检测鼻窦炎口服液的HPLC图谱；

图2为实施例2的方法检测鼻窦炎口服液的HPLC图谱；

图3为实施例3的方法检测鼻窦炎口服液的HPLC图谱；

图4为辛夷供试液的HPLC图谱；

图5为荆芥供试液的HPLC图谱；

图6为薄荷供试液的HPLC图谱；

图7为桔梗供试液的HPLC图谱；

图8为竹叶柴胡供试液的HPLC图谱；

图9为苍耳子供试液的HPLC图谱；

图10为白芷供试液的HPLC图谱；

图11为川芎供试液的HPLC图谱；

图12为黄芩供试液的HPLC图谱；

图13为栀子供试液的HPLC图谱；

图14为茯苓供试液的HPLC图谱；

图15为川木通供试液的HPLC图谱；

图16为黄芪供试液的HPLC图谱；

图17为龙胆叶供试液的HPLC图谱；

图18为黄芩苷对照品溶液的HPLC图谱；

图19为鼻窦炎口服液样品1的HPLC图谱；

图20为鼻窦炎口服液样品2的HPLC图谱；

图21为鼻窦炎口服液样品3的HPLC图谱；

图22为鼻窦炎口服液样品4的HPLC图谱；

图23为鼻窦炎口服液样品5的HPLC图谱；

图24为鼻窦炎口服液样品6的HPLC图谱；

图25为鼻窦炎口服液样品7的HPLC图谱；

图26为鼻窦炎口服液样品8的HPLC图谱；

图27为鼻窦炎口服液样品9的HPLC图谱；

图28为鼻窦炎口服液样品10的HPLC图谱；

图29为鼻窦炎口服液样品11的HPLC图谱；

图30为鼻窦炎口服液样品12的HPLC图谱；

图31为鼻窦炎口服液样品13的HPLC图谱；

图32为13个鼻窦炎口服液样液的HPLC图谱。

具体实施方式

下面将结合附图，对本发明的优选实施例进行详细的描述。

实施例1

鼻窦炎口服液指纹图谱的测定方法，包括如下步骤：

(1)供试品溶液的制备：精密移取鼻窦炎口服液样液1mL，置5mL棕色容量瓶中，加入体积分数为50％甲醇至刻度，摇匀，在10000r·min^-1条件下离心10min，取上清液，制得供试品溶液。

(2)黄芩苷对照品制备：精密称取黄芩苷对照品，用甲醇配制成每1mL含黄芩苷0.060mg的溶液，作为对照品溶液；

(3)色谱检测：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，填料粒径5μm，柱长250mm，柱内径4.6mm；柱温30℃；流速1mL/min；检测波长254nm；进样量为10μL；流动相乙腈与体积分数为0.4％的甲酸按如下条件进行梯度洗脱：

0～10min，流动相A为2％的乙腈，流动相B为98％的0.4％的甲酸水溶液：

10～20min，流动相A为2％的乙腈，流动相B为98％的0.4％的甲酸水溶液；

20～35min，流动相A为10％的乙腈，流动相B为90％的0.4％的甲酸水溶液；

35～65min，流动相A为20％的乙腈，流动相B为80％的0.4％的甲酸水溶液；

65～75min，流动相A为35％的乙腈，流动相B为65％的0.4％的甲酸水溶液；

75～80min，流动相A为60％的乙腈，流动相B为40％的0.4％的甲酸水溶液；

80～85min，流动相A为80％的乙腈，流动相B为20％的0.4％的甲酸水溶液；

85～87min，流动相A为80％的乙腈，流动相B为20％的0.4％的甲酸水溶液；

87～102min，流动相A为2％的乙腈，流动相B为98％的0.4％的甲酸水溶液。

获得如图1所示的色谱图。

实施例2

鼻窦炎口服液指纹图谱的测定方法，包括如下步骤：

(1)供试品溶液的制备：精密移取鼻窦炎口服液样液1mL，置5mL棕色容量瓶中，加入体积分数为20％甲醇至刻度，摇匀，在10000r·min^-1条件下离心10min，取上清液，制得供试品溶液。

(2)黄芩苷对照品制备：精密称取黄芩苷对照品，用甲醇配制成每1mL含黄芩苷0.060mg的溶液，作为对照品溶液；

(3)色谱检测：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，填料粒径5μm，柱长250mm，柱内径4.6mm；柱温25℃；流速0.8mL/min；检测波长220nm；进样量为20μL；流动相乙腈与体积分数为0.1％的甲酸按如下条件进行梯度洗脱：

0～10min，流动相A为2％的乙腈，流动相B为98％的0.4％的甲酸水溶液：

10～20min，流动相A为4％的乙腈，流动相B为96％的0.4％的甲酸水溶液；

20～35min，流动相A为12％的乙腈，流动相B为88％的0.4％的甲酸水溶液；

35～65min，流动相A为22％的乙腈，流动相B为78％的0.4％的甲酸水溶液；

65～75min，流动相A为40％的乙腈，流动相B为60％的0.4％的甲酸水溶液；

75～80min，流动相A为65％的乙腈，流动相B为35％的0.4％的甲酸水溶液；

80～85min，流动相A为80％的乙腈，流动相B为20％的0.4％的甲酸水溶液；

85～87min，流动相A为70％的乙腈，流动相B为30％的0.4％的甲酸水溶液；

87～102min，流动相A为2％的乙腈，流动相B为98％的0.4％的甲酸水溶液。

获得如图2所示的色谱图。

实施例3

鼻窦炎口服液指纹图谱的测定方法，包括如下步骤：

(1)供试品溶液的制备：精密移取鼻窦炎口服液样液1mL，置5mL棕色容量瓶中，加入体积分数为20％甲醇至刻度，摇匀，在10000r·min^-1条件下离心10min，取上清液，制得供试品溶液。

(2)黄芩苷对照品制备：精密称取黄芩苷对照品，用甲醇配制成每1mL含黄芩苷0.060mg的溶液，作为对照品溶液；

(3)色谱检测：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，填料粒径5μm，柱长250mm，柱内径4.6mm；柱温30℃；流速1mL/min；检测波长400nm；进样量为30μL；流动相乙腈与体积分数为0.6％的甲酸按如下条件进行梯度洗脱：

0～10min，流动相A为2％的乙腈，流动相B为98％的0.4％的甲酸水溶液：

10～20min，流动相A为6％的乙腈，流动相B为94％的0.4％的甲酸水溶液；

20～35min，流动相A为14％的乙腈，流动相B为86％的0.4％的甲酸水溶液；

35～65min，流动相A为26％的乙腈，流动相B为74％的0.4％的甲酸水溶液；

65～75min，流动相A为50％的乙腈，流动相B为50％的0.4％的甲酸水溶液；

75～80min，流动相A为70％的乙腈，流动相B为30％的0.4％的甲酸水溶液；

80～85min，流动相A为80％的乙腈，流动相B为20％的0.4％的甲酸水溶液；

85～87min，流动相A为50％的乙腈，流动相B为50％的0.4％的甲酸水溶液；

87～102min，流动相A为2％的乙腈，流动相B为98％的0.4％的甲酸水溶液。

获得如图3所示的色谱图。

实施例2

分别精密称取辛夷、荆芥、薄荷、桔梗、竹叶柴胡、苍耳子、白芷、川芎、黄芩、栀子、茯苓、川木通、黄芪、龙胆叶14味药材的粉末1.0g，精密加入25mL体积分数为40％的甲醇，塞紧，称定重量，在超声功率为250W，超声频率为40kHz条件下超声30min，放冷，再称定重量，用体积分数为40％的甲醇补足失去的重量，摇匀，在10000r·min^-1条件下离心10min，取上清液，分别制得各药材的供试液。

按照实施例1中步骤(2)的方法制备黄芩苷对照品溶液，同时按照实施1中步骤(3)的色谱检测条件对上述14中药材的供试液及黄芩苷对照品溶液进行HPLC检测，分别获得色谱图(图4～18)。

取13个鼻窦炎口服液样品，按表1分别配制13个供试品溶液，按照实施1中步骤(3)的色谱检测条件对上述13个供试品溶液进行HPLC检测，分别获得色谱图(图19～31)。

对13个鼻窦炎口服液样品的HPLC图谱中的色谱峰进行比较和编号，并结合14味药材的HPLC图谱中的色谱峰的信息，最终选定具有代表性的17个色谱峰作为共有峰，共有峰的保留时间见表2，以样品13(批号201301001)中17个色谱峰为参照，比较17个色谱峰折算后峰面积相对值的差异，结果见表3。

表1 13个供试品溶液配置表

注：配置过程中以体积分数为50％的甲醇为稀释液

表2共有峰的保留时间表

表3共有峰折算后峰面积表

实施例3

指纹图谱分析

运用国家药典委员会推荐的中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版对13个鼻窦炎口服液样品的指纹图谱进行了相似度分析，首先将色谱工作站的数据导人中药指纹图谱相似度计算软件中，选定上述17个特征峰进行谱峰匹配，并以样品13(批号201301001)为参照谱(图31)，通过均值法计算得出样品指纹图谱的共有模式，并依此共有模式为标准，进行整体相似度评价，13个鼻窦炎口服液样品指纹图谱见图32，相似度评价结果见表4。

表4 13个鼻窦炎口服液样品相似度结果

从表4可知，13个鼻窦炎口服液样品的相似度值均在91％以上，表明相似度良好，各批次样品具有相同的色谱特征峰，因此化学成分一致性较好，所建立的指纹图谱具有稳定性和可控性，可作为控制补肾益寿胶囊质量的评价依据。

本发明中，制备供试品溶液时，所用稀释液除了甲醇，还可以为乙腈或乙醇中的一种。

最后说明的是，以上优选实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管通过上述优选实施例已经对本发明进行了详细的描述，但本领域技术人员应当理解，可以在形式上和细节上对其作出各种各样的改变，而不偏离本发明权利要求书所限定的范围。