狼毒大戟中松香烷型二萜类化合物及制备方法

摘要

本发明公开一种抑制结核菌活性强的狼毒大戟中松香烷型二萜类化合物及制备方法，化合物的具体结构如下：。

说明书

技术领域

本发明涉及来源于药用植物狼毒大戟（Euphorbia>Steud.）的松香烷型二萜化合物，特别是一种抑制结核菌活性强的狼毒大戟中松香烷型二萜类化合物及制备方法。

背景技术

狼毒大戟为大戟科(Euphorbiaceae)大戟属植物狼毒大戟（Euphorbia>fischerianaSteud.）根部，属于多年生草本植物，主要分布在中国东北、河北和河南等省区资源丰富,药源充足。狼毒大戟始载于《神农本草经》,在很早以前，狼毒大戟在民间就用于医学和防治疾病，主要用于抗癌和治疗结核。目前，已有关于狼毒大戟中化合物的相关报道，如有文献记载狼毒大戟中富含二萜类化合物，结构类型主要有松香烷型、异海松烷型和巴豆烷型等。下示所列化合物均是已经公开的从狼毒大戟中分离提取的松香烷型二萜类化合物：

。

如何从狼毒大戟中分离提取出药理活性更强的化合物是目前需要解决的技术问题。

发明内容

本发明是为了解决现有技术所存在的上述技术问题，提供一种抑制结核菌活性强的狼毒大戟中松香烷型二萜类化合物及制备方法。

本发明的技术解决方案是：一种狼毒大戟中松香烷型二萜类化合物，其特征在于结构式如下：

上述狼毒大戟中松香烷型二萜类化合物的制备方法，其特征在于按照如下步骤进行：

a. 取狼毒大戟干燥根茎，粉碎后用95%乙醇回流提取3次，每次2小时，合并提取液，减压浓缩至乙醇完全蒸出，得到水提取液；

b. 加水稀释提取液，再用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物，乙酸乙酯萃取物，正丁醇萃取物及水层粗提物；

c. 合并石油醚萃取物及乙酸乙酯萃取物，依次通过大孔树脂、硅胶柱层析、中压液相制备色谱、制备型高效液相色谱分离得到：

所述中压液相制备色谱的分离条件如下：

Falsh柱；

流速：20 ml/min；

检测波长：210nm、280nm；

柱温：30℃；

流动相（1）：0-30min甲醇：水=35：65；30-180min甲醇：水=35:65-80:20；流动相（2）：0-30min甲醇：水=45:55；30-180min甲醇：水=45:55-80:20；流动相（3）：0-30min甲醇：水=40:60；30-180min甲醇：水=40:60-60:40；

所述高效液相色谱的分离条件如下：

色谱柱：YMC C₁₈(2)；

流速：8 ml/min；

检测波长：210nm、280nm；

柱温：30℃；

流动相：0-30min甲醇：水=10:90-45:55；30-65min甲醇：水=45:55-90:10；65-70min甲醇：水=90:10。

本发明从狼毒大戟中分离提取出多种松香烷型二萜类化合物，通过波谱数据分析鉴定，化合物中有四种（A1~A4）为未见报道的新化合物，而新化合物中有两种（A3, A4）抑制结核菌的活性明显高于现有技术，可作为抗结核病的首选药物。

附图说明

图1.本发明实施例中二萜类成分高效液相色谱图。

图2.本发明实施例所得产物与狼毒大戟对结核杆菌抑制作用对比图。

具体实施方式

实施例1：

按照如下步骤进行：

a. 取大戟科(Euphorbiaceae)大戟属植物狼毒大戟（Euphorbia>Steud.）干燥根茎25 Kg，粉碎后用95%乙醇回流提取3次，每次2小时，合并提取液，减压浓缩至乙醇完全蒸出，得到水提取液（LDJ-6）；

b. 加水稀释提取液，再用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物，乙酸乙酯萃取物，正丁醇萃取物及水层粗提物；

c. 合并石油醚萃取物及乙酸乙酯萃取物（共1959g），依次通过大孔树脂、硅胶柱层析、中压液相制备色谱（RpC-18）、制备型高效液相色谱（Ultimate 3000 高效液相色谱仪、DAD检测器）分离得到9种产物（A1~A9），高效液相色谱图如图1所示。

所述中压液相制备色谱的分离条件如下：

Falsh柱；

流速：20 ml/min；

检测波长：210nm、280nm；

柱温：30℃；

流动相（1）：0-30min甲醇：水=35：65；30-180min甲醇：水=35:65-80:20；流动相（2）：0-30min甲醇：水=45:55；30-180min甲醇：水=45:55-80:20；流动相（3）：0-30min甲醇：水=40:60；30-180min甲醇：水=40:60-60:40；

所述高效液相色谱的分离条件如下：

色谱柱：Diamonsil C₁₈(2)（5μm,>

流速：8 ml/min；

检测波长：210nm、280nm；

柱温：30℃；

流动相：0-30min甲醇：水=10:90-45:55；30-65min甲醇：水=45:55-90:10；65-70min甲醇：水=90:10。

进一步通过MS、HRMS、¹H>13C>1H-¹H>

1．新结构化合物A1~A4的波谱数据如下：

质谱参数见表1。

表1

核磁共振碳谱数据（125 MHz）见表2。

表2

核磁共振氢谱数据 (500 MHz)见表3。

表3

2. 已知结构化合物A5~A9的核磁共振碳谱数据见表4。

最终，本发明所提取分离得到的9种产物结构如下：

以结核杆菌为模式菌对化合物进行活性评价。

本发明以结核杆菌为模式菌，对所得9种（A1~A9）松香烷型二萜类化合物及狼毒大戟水提取液（LDJ-6）进行了抗结核杆菌活性评价。针对全菌体初筛，0.1 mg/ml终末浓度条件下有抑制效果的单体，抑制作用见图2。

从图2中可以看出松香烷型二萜类化合物A3、A4对结核杆菌的抑制作用明显高于其他对比物。可以本发明的松香烷型二萜类化合物A3或A4制成适于人或动物使用的任何剂型，在其药物组合物中的含量通常为0.1~95质量百分比。

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