综合改善眼部活力的生物制剂及其制备方法

摘要

本发明公开了具有清爽使用感，快速获得紧致感，并能综合改善眼部活力的生物制剂及其制备方法。以人表皮生长因子(rhEGF)等多种功能活性多肽与多种药用植物提取物为主要的组分，通过提升肌肤细胞活力，加强胶原蛋白和弹性蛋白的表达，促进皮肤微循环，调节眼周神经递质，从而对眼部肌肤问题进行全面的调理和预防。本发明制剂结合传统护理方法还具有消除自由基，抑制炎症因子水平，活血化瘀，通经舒络等功能，综合改善眼部健康状况。

说明书

技术领域

本发明涉及眼部护理产品技术领域，尤其是综合改善眼部活力的生物制剂及其制备方法。

背景技术

眼部作为五官中的一部分,眼最能表达内心的情感,但是眼部周围的皮肤是人体中最纤细,最敏感的皮肤,厚度只有0.06毫米，仅是面部肌肤厚度的四分之一。由于眼部肌肉最少且运动较多,皮脂及汗腺分泌较少,易干燥等原因,皱纹容易出现在这里,是人体最早出现老化征象的区域。眼睛是心灵的窗户,没有人不想拥有明眸善睐，因此,眼部的及早护理非常重要。

随着现代人们生活节奏的日益加快，饮食不定时、经常熬夜、严重的空气污染、长时间凝视电脑屏幕、UV光刺激等导致了眼部微循环受阻，出现鱼尾纹、黑眼圈、眼袋、眼部浮肿、脂肪粒等眼部肌肤问题。这些问题影响自身形象,会产生无精打采、疲劳的精神状态,同时更加显得衰老,这严重影响他们的心理。据调查研究表明,中国50％以上的女性存在眼周肌肤状态不佳的烦恼,而且眼部肌肤问题的出现变得越来越年轻化。

科学研究表明：人体肌肤中弹性蛋白与胶原蛋白的比例约为1:19，由于年龄的增长，皮肤弹性蛋白和胶原蛋白的比例、数量和结构将发生变化，表皮细胞间粘多糖减少，皮肤便会失去弹性并变薄，同时真皮的纤维断裂、脂肪萎缩、汗腺及皮脂腺分泌减少，使皮肤出现松弛、色斑、皱纹等老化现象。简而言之，鱼尾纹的形成，是由于神经内分泌功能减退，蛋白质合成率下降，真皮层的纤维细胞活性减退或丧失，胶原纤维减少、断裂，导致皮肤弹性减退，眼角皱纹增多。

黑眼圈是眼眶部位的眼皮外观呈现较暗的颜色，与眼皮本身的色素多寡、眼皮内的血管血流等因素相关。随着年龄的增长，人体的激素会发生变化，代谢功能减弱，眼部血液含氧量减少，二氧化碳和酯类等代谢废物量增高，色素沉着在眼部产生黑眼圈，这表明微循环逐渐发生障碍，血管弹性变差。另外，眼周围皮下组织供血不良兼静脉回流不好导致眼部气血运行失常，血淤阻滞也会引起黑眼圈。现在生活作息不正常的人尤难避免，其微血管内血液流速缓慢，血液量增多而氧气消耗量提高，缺氧血红素大增，造成眼周肌肤淤血及浮肿现象，经过光线反射后显现出黑眼圈。

眼袋的出现是由于淋巴排泄不足、代谢减缓，导致体液过分留滞，脂肪细胞过分堆积，弹性变差所致，使得下眼睑内保护眼球的脂肪袋慢慢朝向眼窝外膨出而形成。另外，眼周皮肤有无数微细的分泌孔，如果身体内分泌失调，面部油脂分泌过多而微循环代谢障碍导致毛孔阻塞，皮肤分泌物就会更粘稠，逐渐堆积就形成脂肪粒。

不少人常常是通过涂抹具有抗氧化、祛斑、祛皱等作用的眼部护肤产品或是对眼部肌肤采用按摩、注射美容产品等手段减轻以上症状。现有的眼部护理产品有凝胶、眼霜、眼部精华素、眼膜和乳液等，然而产品分布不均,主要集中于眼部皱纹和黑眼圈这两类常见问题,而缺少针对脂肪粒和眼袋等眼部问题的产品。加之由于眼部皮肤常见问题的产生机理尚不清楚,无法从根本原因上对眼部问题进行分析和解决,故产品存在使用效果不佳的问题,甚至会减弱皮肤的抵御能力及造成皮肤负担。

现有的眼部护理产品的研发也多倾向于以纯天然的植物提取物为主要成分。这些产品中许多也添加了一些植物提取物，包括中草药类有效成分萃取物或者植物精华油等。但此类提取物从使用和功效上来说存在不足，很多产品仅添加某一种植物提取物，难于实现功效的全面性和综合性，没有一种组合物像本发明一样着眼于眼部肌肤细胞，以重组人表皮生长因子(rhEGF)、类蛇毒素多肽等多种活性肽和多种药用植物提取物为主要成分，促进细胞新陈代谢，加强胶原蛋白和弹性蛋白的表达，改善眼部皮肤局部微循环及活化肌肤细胞，从根本上消除眼周幼小皱纹和假性皱纹，淡化黑眼圈，收紧眼袋，消除脂肪粒。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供综合改善眼部活力的生物制剂及其制备方法。

为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是，综合改善眼部活力的生物制剂，按重量百分比计，由以下组分制成：

A相物料：

B相物料：

C相物料：

(22)1,2-戊二醇 0.1-1.0％，

(23)寡肽-1 0.02-0.05％，

(24)芽孢杆菌发酵产物 0.5-1.5％。

在一些实施方法中，综合改善眼部活力的生物制剂，优选地，按重量百分比计，由以下组分制成：

A相物料：

B相物料：

C相物料：

(22)1,2-戊二醇0.4-0.8％，

(23)寡肽-10.03-0.04％，

(24)芽孢杆菌发酵产物0.8-1.5％。

一种上述综合改善眼部活力的生物制剂的制备方法，包括以下步骤：

(1)按上述重量百分比称量各相原料；

(2)将A相各组分混合搅匀后，加入乳化锅内加热至90℃，恒温灭菌25-30min，待用；

(3)待温度降至40℃时，加入B相组分，搅拌5-10min至混合均匀；

(4)冷却至38℃时，加入C相组分，搅拌5-10min混合均匀，出料。

随着年龄的增加，皮肤中的许多生物过程逐渐减弱，成纤维细胞失去增殖能力，功能丢失，所合成的皮肤基础成分减少；胶原蛋白和弹性纤维变得稀缺，逐步呈现无序状态，进而细胞外基质结构混乱，且不稳定。结果，皮肤密度下降，呈现松弛老化状态，皮肤微型结构混乱，弹性下降，出现皱纹、眼袋、黑眼圈连锁反应。当眼部肌肤老化到一定程度，就托不住淤积的脂肪，造成眼部肌肤肥厚突出，眼袋就出现了。同时眼部新陈代谢缓慢，血液循环不畅，毛细血管堵塞。引发炎症反应和色素沉着，形成了黑眼圈。

皮肤由不同的结构组成，有许多因素参与到皮肤的组织中，如Ⅵ型胶原蛋白(微纤维胶原)、弹性蛋白、金属蛋白酶ADAMTS2。Ⅵ型胶原蛋白属于胶原大家族的成员之一，是普遍存在于胞外基质的功能蛋白，由α1、α2、α3三亚基组成，其中α1与胶原蛋白表达关系最为密切。Ⅵ型胶原蛋白主要存在于乳突真皮层，是秩序“组织者”，是细胞与基质之间的“调控者”，有着细胞粘附功能。弹性蛋白是一种细胞外基质蛋白，主要由成纤维细胞产生。主要功能是被动伸缩，赋予所在组织和器官以伸缩性和可逆的变形能力。ADAMTS2是原胶原转变为胶原过程中的剪切酶，只有经过剪切(去掉氨基端的前体肽)的胶原才能形成正常的单体并组装成圆柱形胶原纤维，即具有拉伸强度的纤维，维持皮肤的结构。所以，ADAMTS2通过对原胶原的切割而调节胶原蛋白的合成。为从根本上解决眼部肌肤问题，可通过加强胶原蛋白和弹性蛋白的表达，增加凝血时间促进毛细血管循环，同时抑制络氨酸酶的活性减少色素沉积。

本发明中的有效成分能从内部改善皮肤的健康状况，改善眼部皮肤局部微循环，降低血液粘滞性，增加深层毛细血管的通透量，从而使毛细血管血液流畅，淡化黑眼圈，并能预防减少眼部皱纹。加入的活性肽、植物提取物，通过“吸收”的方式迅速渗透至皮肤基底，增加皮肤的营养供给，提高皮肤免疫力，使其恢复弹力。有利于真皮层基质的蛋白多糖，构建许多微孔隙的分子筛立体构型，使小于孔隙的物质如水、电解质、营养物质和代谢产物可自由通过，进行生理物质交换。使大于孔隙的大分子物质如细菌、病原体则不能通过，被限制在局部，有利于吞噬细胞，消灭和吸收之，而起到收敛眼袋的目的。不含任何禁限用防腐剂，天然成分安全、温和，对皮肤无刺激作用。

本发明以寡肽-1、棕榈酰三肽-1、棕榈酰四肽-7、氨基丁酸、甜橙叶提取物、豨莶草提取物、葡萄柚籽提取物、黄瓜汁、北美金缕梅水、姜根提取物、β-葡聚糖、视黄醇棕榈酸酯、生育酚、芽孢杆菌发酵产物等活性多肽与多种药用植物提取物为主要成分。

寡肽-1即人表皮生长因子(rhEGF)，是调控人体皮肤细胞的生长、更新和代谢等生命活动最为重要的因子，是决定肌肤活力和健康的源泉。通过补充人表皮生长因子，刺激皮肤细胞的生理活性，促进皮肤细胞增殖分化，激活细胞再生，修复受损肌肤，改善皮肤微循环，使皮肤细胞的新生速度大于衰老速度。同时诱导表皮中的衰老细胞不断逆分化为年轻的表皮干细胞，使整个皮肤细胞年龄降低，可加速皮肤更新，修复受损肌肤，从根本上解决皮肤的健康问题。在衰老或长有皱纹的皮肤上，表皮细胞生长因子的增加可以提高胶原蛋白和弹性蛋白的生成，进而使皮肤的外观得以改善，并使细小的皱纹消失，还能促进朗格罕氏细胞增殖，增强皮肤的免疫能力。

棕榈酰三肽-1是一种卓越的抗皱活性类蛇毒素多肽，作用机制类似于蛇毒，可在短时间内平滑假性皱纹。其活性模仿了庙蝮(瓦氏蝮蛇)毒液中发现的蛋白质Waglerin 1的作用，可起到平滑表情纹和放松面部肌肉的功效。庙蝮在捕食时利用的蛇毒蛋白Waglerin 1，具有很强的松弛肌肉的效果。棕榈酰三肽-1模仿了其中具有活性的关键氨基酸序列，作用于突触后膜。这种肽是肌肉烟碱乙酰胆碱膜受体(mnAChR)的一种拮抗剂，当受体被阻断，离子通道保持关闭，无法摄取Na⁺，肌肉细胞保持松弛状态，替代颇具争议的肉毒杆菌毒素抗衰老方法。

棕榈酰四肽-7是源于免疫球蛋白IgG中的一个片段，此片段被棕榈酰修饰后脂溶性增加，能显著降低炎症因子白介素IL-6的水平，从而起到消除皮肤炎症，减轻皱纹，恢复肌肤活力的作用。还能明显促进胶原蛋白Ⅰ、纤维连接蛋白合成，对透明质酸的合成也有促进作用。这些功能缓解了肌肤老化过程中相关因子的流失，使得肌肤呈现最佳状态。

氨基丁酸(GABA)，又名γ-氨基丁酸、氨络酸，是广泛分于动植物体内的一种非蛋白质氨基酸，对生物体生命活动的调节起着不可替代的作用。GABA是人体内固有成分，它参与多种代谢活动，在大脑皮质、海马、丘脑、基底神经节和小脑起重要作用，并对机体的多种功能具有调节作用，包括促进脑的活化性，健脑益智，促进睡眠，美容润肤，延缓脑衰老机能；参与产生镇静、镇痛效应、抗焦虑、防治惊厥、舒缓血管和降血压、防止动脉硬化调节心律失常以及调节生殖生理激素的分泌的功能。随着年龄增长或精神压力加大，GABA含量会逐渐减少。当人体内缺乏GABA时，会产生焦虑、不安、疲倦、忧虑等负面情绪。GABA通过放松紧张的表情肌，能够显著减少表情纹、鱼尾纹，达到“减压美容”的效果。GABA作为小分子物质，能穿透皮肤并与皮肤细胞中GABAA受体结合，并激活GABAA受体。GABAA受体的抑制性或兴奋性依赖于细胞膜内外氯离子浓度，当GABAA受体被GABA激活后，氯离子通道开放，细胞膜对氯离子通透性增加，氯离子流入神经细胞内，抑制神经元细胞激动。神经元细胞受到抑制后，皮肤细胞收缩的兴奋程度减缓，细胞得到放松，肌肤暂时失去“记忆”，从而达到减少细纹和淡化皱纹的效果。

甜橙叶提取物，源自甜橙茎尖分生组织中提取的干细胞，可使胶原蛋白Ⅵ-α1、弹性蛋白、ADAMTS2基因表达增加，从而加强细胞外基质结构。植物干细胞是拥有生命力的细胞，可刺激成纤维细胞的增殖，增加胶原蛋白和其他细胞外基质关键成分的合成。通过调控皮肤结构，恢复细胞外网络结构，加强细胞的粘附性。

豨莶草主要含萜和苷类，有研究表明豨莶草提取物对成纤维细胞有显著的增殖作用；另一方面，豨莶草能降低血小板凝集，降低血液粘度，对凝血活酶时间、凝血酶原时间有明显延长作用，改善血液流变功能，从而改善微循环。

葡萄柚籽提取物富含酚类、生物碱类等活性物质，具有很好的抗氧化效果，帮助皮肤增强氧气交换的能力，还能修复受损胶原蛋白和弹性纤维，能够滋养组织细胞，调理肤质，改善干燥引起的紧绷感，激发肌肤修护能力，深度滋养，充盈肌肤，减轻细纹和松弛，令眼部肌肤具有弹力与光润。

黄瓜汁含有较多维生素E可有效地抗皮肤氧化和抗衰老，减少皱纹的产生，黄瓜汁还含有丰富的黄瓜酶，能促进机体新陈代谢，舒展皱纹，美白润肤消斑,可增强眼部肌肤细胞水化能力和代谢能力。

北美金缕梅水内含多种单宁质，具有很强的抗氧化作用及消炎收敛作用，能缓和受刺激的皮肤，具有镇静、安抚的效果，可促进淋巴血液循环，治疗肿胀肌肤，能有效消除黑眼圈、眼袋、眼部浮肿。

姜根提取物味辛、微温，归肺、脾、胃经，能扩血管、抑制血小板聚集，降低血黏度及改善血液流变性，增加药物的渗透吸收，改善微循环作用。并有抗氧化、消除自由基、抗炎作用。

β-葡聚糖是纯天然的抗衰老添加剂，可促进皮肤细胞增殖代谢，减少皮肤衰老、高效修护皮肤。具细胞免疫激活特性，能吸引免疫活性细胞和其它白血细胞，从而促进伤口愈合和产生正常组织。

生育酚可有效清除肌肤中的自由基，同时还可以对酪氨酸酶具有明显抑制作用，因而减轻皮肤色素沉着；可抑制眼睛晶状体内的过氧化脂反应，使末梢血管扩张，改善血液循环，保护皮肤免受紫外线和污染的伤害，减少疤痕与色素的沉积，加速伤口的愈合。

芽孢杆菌发酵产物是一种来自于枯草芽孢杆菌的天然原料，具有保湿、增强皮肤免疫功能、抗氧化修复、减少皱纹、增加皮肤弹性、活化肌肤、延缓衰老等多重功效。①杀菌抑菌：作为抗菌肽液，能有效抑制细菌和真菌，添加到产品中温和无刺激，代替传统的禁限用防腐剂。②保湿：含有大量的氨基、肽键等极性基团，可与水分子形成分子内或分子间氢键，形成一个网状结构，将游离的水结合在网内，从而结合大量的水分，锁住皮肤水分，赋予肌肤滋润。③抗氧化、消除自由基作用：有很强的抗氧化能力，可抑制自由基反应，预防皮肤刺激和炎症。④增强皮肤免疫，修复皮肤：可显著增强巨吞噬细胞的吞噬能力，增强皮肤自身的免疫保护能力，高效修复皮肤屏障。⑤减少皱纹、增强皮肤弹性、延缓衰老：可明显抑制皮肤变薄及弹性降低，可有效降低皮肤的粗糙程度，祛除细纹，减缓各类皮肤皱纹的形成，活化肌肤。

现有技术中的任意葡萄柚籽提取物、甜橙叶提取物、豨莶草提取物、姜根提取物都可用于本发明，例如可以使用以下现有产品：

本发明与现有技术相比，其有益效果在于通过加强胶原蛋白和弹性蛋白的表达，促进微循环，活化肌肤细胞，对眼部肌肤问题具有综合调理和预防形成的作用。迅速渗透到人体皮肤内，抑制凝血酶活性及清除自由基，促进眼部细胞代谢能力和毛细血管循环的增强，增加皮肤的营养供给，有效抑制炎症因子水平。调节皮肤的水分平衡，提高眼部胶原蛋白和弹性纤维的含量，使眼部皮肤具有良好的亲和性及弹性，达到消除皱纹、淡化黑眼圈、收紧眼袋、消除脂肪粒，舒缓眼部肌肤疲劳的效果。同时本发明采用无防腐技术，用微生物发酵产物滤液代替传统的禁限用防腐剂，性质温和，对皮肤安全、无刺激。

具体实施方式

实施例1

原料总量为100公斤。其中，A相物料是：甘油2.5公斤、丁二醇2.5公斤、丙烯酸(酯)类/C10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物1.0公斤；B相物料是：三乙醇胺0.5公斤、泛醇1.5公斤、透明质酸钠1.9公斤、葡萄柚籽提取物1.5公斤、黄瓜汁2.5公斤、北美金缕梅水2.0公斤、甜菜碱1.0公斤、丙二醇2.0公斤、甜橙叶提取物2.0公斤、豨莶草提取物2.0公斤、姜根提取物2.0公斤、β-葡聚糖2.0公斤、棕榈酰三肽-1 1.0公斤、棕榈酰四肽-7 1.0公斤、视黄醇棕榈酸酯0.05公斤、生育酚(维生素E)0.05公斤、氨基丁酸0.05公斤；C相物料是：1,2-戊二醇0.1公斤、寡肽-1 0.02公斤、芽孢杆菌发酵产物0.8公斤。余量为A相的去离子水。

制备工艺：

(1)称量各相原料；

(2)将A相各组分混合搅匀后，加入乳化锅内加热至90℃，恒温灭菌25-30min，待用；

(3)待温度降至40℃时，加入B相组分，搅拌5-10min至混合均匀；

(4)冷却至38℃时，加入C相组分，搅拌5-10min混合均匀，出料。

实施例2

原料总量为100公斤。其中，A相物料是：甘油3.5公斤、丁二醇3.5公斤、丙烯酸(酯)类/C10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物0.6公斤；B相物料是：三乙醇胺0.5公斤、泛醇3.5公斤、透明质酸钠3.5公斤、葡萄柚籽提取物3.5公斤、黄瓜汁2.9公斤、北美金缕梅水2.7公斤、甜菜碱2.5公斤、丙二醇4.5公斤、甜橙叶提取物2.5公斤、豨莶草提取物2.5公斤、姜根提取物3.2公斤、β-葡聚糖4.6公斤、棕榈酰三肽-1 2.1公斤、棕榈酰四肽-7 2.5公斤、视黄醇棕榈酸酯0.21公斤、生育酚(维生素E)0.29公斤、氨基丁酸0.25公斤；C相物料是：1,2-戊二醇0.46公斤、寡肽-1 0.03公斤、芽孢杆菌发酵产物1.0公斤。余量为A相去离子水。

制备工艺同实施例1。

实施例3

原料总量为1000公斤。其中，A相物料是：甘油50公斤、丁二醇50公斤、丙烯酸(酯)类/C10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物10公斤；B相物料是：三乙醇胺5公斤、泛醇50公斤、透明质酸钠50公斤、葡萄柚籽提取物55公斤、黄瓜汁35公斤、北美金缕梅水30公斤、甜菜碱30公斤、丙二醇60公斤、甜橙叶提取物28公斤、豨莶草提取物32公斤、姜根提取物40公斤、β-葡聚糖60公斤、棕榈酰三肽-1 30公斤、棕榈酰四肽-7 30公斤、视黄醇棕榈酸酯5公斤、生育酚(维生素E)5公斤、氨基丁酸5公斤；C相物料是：1,2-戊二醇10公斤、寡肽-1 0.5公斤、芽孢杆菌发酵产物12公斤。余量为A相去离子水。

制备工艺同实施例1。

本发明实施例2产品的使用案例及效果：

(一)临床实例：

临床实例1、汪女士，35岁，因工作需要经常化妆上镜、生活无规律、情绪变化大，所以几年下来眼部皱纹增多，从面部看似乎已经到35-40岁的年龄。使用本发明生物制剂，每日两次，3个月后，脸部肌肤明显紧实，皱纹减少，从面部看年龄在25岁左右。3个月后调查，眼部肌肤依然紧实，富有弹性。使用过程无任何刺激皮肤等不良症状出现。

临床实例2、梅女士，51岁，眼部皮肤松弛，细纹和皱纹较多，并伴有轻度眼袋。使用本发明生物制剂，每日两次，3个月后，眼袋基本祛除，更少细纹和皱纹，眼部周围肌肤明显变得紧实。使用过程无任何刺激皮肤等不良症状出现。

临床实例3、林女士，30岁，产后情绪焦躁，内分泌紊乱造成毒素堆积，眼部周围肌肤暗沉，眼袋较突出。使用本发明生物制剂，每日两次，3个月后，色素沉着显著降低，眼袋全无，肌肤更有光泽。使用过程无任何刺激皮肤等不良症状出现。

临床实例4、任女士，43岁，眼部肌肤松弛，有较多鱼尾纹。使用本发明生物制剂，每日两次，3个月后，显示更少的细纹和皱纹，皮肤也更加紧实有弹性。使用过程无任何刺激皮肤等不良症状出现。

临床实例5、许女士，28岁，工作压力大，经常熬夜，所以眼睛疲劳，黑眼圈较明显。使用本发明生物制剂，每日两次，3个月后，肤色均匀度上有提高，眼圈黑色素明显褪去。使用过程无任何刺激皮肤等不良症状出现。

临床实例6、左女士，18岁，学生，眼周出现较多脂肪粒。使用本发明生物制剂，每日两次，3个月后，眼部周围的疲倦迹象明显淡化，脂肪粒基本消除。至今已3年仍未复发。使用过程无任何刺激皮肤等不良症状出现。

(二)为了进一步证实其治疗效果及安全性，取本发明实施例2的生物制剂进行功效试验，具体试验方法和试验结果如下：

将450例存在黑眼圈、眼袋、脂肪粒、眼部皮肤粗糙、肤色暗沉和眼部疲劳等眼部肌肤问题的志愿者随机分成两组，治疗组400，例外用本发明所述生物制剂，进行每天2次护理；对照组的50例不使用任何眼部护理产品。两组志愿者年龄、眼部肌肤问题无明显差异，具有可比性。在450例中：男性225例，女性225例，年龄最小的17岁，最大的52岁，试验观察期为3个月。试验结果如表1所示。

判定疗效标准如下：

显效——皮肤光滑富有弹性，皱纹明显淡化，小细纹消失，肤色润泽，无黑眼圈、眼袋，脂肪粒消失，无疲劳感。

有效——皮肤较为光滑，弹性有所改善，小细纹明显淡化，但皱纹依然存在，肤色有所改善，黑眼圈、眼袋淡化，脂肪粒有改善。

无效——小细纹、皱纹依然存在，甚至有加深的趋势，眼部皮肤粗糙、肤色暗沉黑眼圈、眼袋明显，脂肪粒毫无减少。

表1治疗组和对照组的功效试验结果

根据试验统计显示：400例治疗者外用本发明的生物制剂进行眼部护理期间并无出现任何毒性及皮肤过敏现象。3个月的护理后，治疗组400例中总有效率达到95％，而对照组基本无变化。

上述试验表明：本发明的生物制剂能解决眼部脂肪粒、眼袋和黑眼圈，达到消除皱纹、平滑肌肤、恢复肌肤弹力的效果，同时对皮肤无任何不良副作用。

(三)抑制凝血酶活性和自由基清除率测定

采用纤维蛋白原作为底物，用琼脂糖与纤维蛋白原制作成纤维蛋白原平板，以凝血酶标准品分别在该平板上的扩散反应，对实施例2的生物制剂抑制凝血酶活性作测定，与空白作对比。

取0.05mol/L pH8.2的Tris-HCl缓冲液4.5mL，置于25℃水浴中预热20min，分别加入1mL的实施例2的生物制剂和0.4mL，25mmol/L的邻苯三酚溶液，混匀后于25℃水浴中反应5min，加入8mol/LHCl 1.0mL终止反应，以Tris-HCl缓冲液作参比液，测算自由基清除率，与空白作对比，结果如表2所示。

表2实施例2的生物制剂抑制凝血酶活性和自由基清除率测定结果

组分抑制凝血酶活性自由基清除率测定(％)实施例2的生物制剂强抑制作用87空白无0

上述试验表明：本发明抑制凝血酶活性及清除自由基，促进眼部细胞代谢能力的增强和毛细血管循环的增强。

(四)刺激性测试

参照Red Blood Cell(RBC)Test System测试产品刺激性，人体刺激性及斑贴实验研究结果显示，本发明安全无刺激，对人体无不良反应。刺激性试验表明，本发明(所测试体系浓度为4000μg/ml及8000μg/ml)在RBC Test System测试体系下均无刺激性。人体斑贴实验所有受试者均无不良反应，说明本发明对人体无不良反应。