用于促进女性生育力的组合物

摘要

本申请描述一种用于促进女性生育力的协同组合物，其包含作为活性成分的L?肉碱、乙酰基L?肉碱；N?乙酰基半胱氨酸以及若干特定维生素、氨基酸、抗氧化剂和微量元素。

说明书

技术领域

本发明的领域涉及在激素或药理学刺激期间的女性生育力。

背景技术

女性不育症在全世界影响约4800万名女性。

在美国，约10％的育龄夫妇怀孕有困难。

用生育力激素或药物刺激排卵是用于因排卵障碍而不孕的女性的主要疗法，这些药物调节或诱发排卵。

用于刺激排卵的药物为：

氯米芬柠檬酸盐(Clomiphenecitrate)：该药物通过对垂体腺起作用引起排卵。其通常用于患有多囊性卵巢综合征(PCOS)或其它排卵问题的女性。氯米芬柠檬酸盐通过诱发超数排卵，即在给定月经周期中释放多个卵子而用作女性的生育药物。该药物为口服的。

溴麦角环肽(Bromocriptine)和卡麦角林(Cabergoline)：这些药物用于在由于高水平的催乳素而导致排卵问题的女性中减少垂体释放的催乳素的量。潜在的副作用包括恶心、呕吐、鼻充血、头痛、头晕、昏厥和血压降低。

美卓乐(Medrol)：一种在周期中持续四天每日提供以辅助胚前植入的类固醇。

用于刺激排卵的可注射激素为：

-人类绒毛膜促性腺激素(hCG)，通常与其它生育药物和营养补充剂组合以触发卵巢释放一个或多个成熟卵子；

-促卵泡激素(FSH)；

-人绝经期促性腺激素(hMG)。该药物组合FSH和LH(促黄体生成激素)二者。

-促性腺激素释放激素(GnRH)。该激素刺激从垂体腺释放FSH和LH。

这些激素在美国很少开具处方。

-促性腺激素释放激素激动剂(GnRH激动剂)；

-促性腺激素释放激素拮抗剂(GnRH拮抗剂)。

所有这些药物/激素可用于增加体内或体外卵母细胞受精。

体外受精(IVF)是一种卵母细胞在身体外部(体外)由精子受精的方法。当辅助生殖技术的其它方法已失败时，IVF为用于不育症的主要疗法。所述方法涉及监测和刺激女性排卵过程、从女性卵巢移出一个或多个卵母细胞以及在实验室中的液体培养基中通过精子使其受精。在生长培养基中培养2-6天的受精卵母细胞(受精卵)随后转移到患者子宫中，目的在于建立成功的怀孕。

在www.webmd.com/infertility-and.../fertility-drugs中报导了用于对具有排卵障碍的女性进行初步处理的生育激素和药物具有副作用。

在www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2749720/中报导了女性生育力受暴露于酒精、烟草烟雾和/或环境污染物引起的氧化应激影响。

在CurrOpinObstetGynecol.2009年6月；21(3):219–222中报导了氧化应激在女性生育力中的作用是正在研究和迫切的调查领域；并且鉴别减少妇科环境中的氧化应激的可更改因素可能是一种提高生育力的便宜且无创伤性疗法。为了改善女性(人类或动物)的生殖健康，已推荐供给良好的多种维生素制剂和在饮食中包括足够量的抗氧化剂和补充剂。

维生素E对女性的恰当生殖功能是至关重要的，实际上，维生素E的化学名称“生育酚”来源于希腊单词tokos，其意思是“后代”；和phero，其意思是“繁衍”。维生素E保护激素免受氧化。维生素E在硒加工食品和暴露于有害氧化剂中变得较不可获得，每日补充400-800IU的维生素E可以改善生育力。

在FertilSteril.2008年3月；89(3)：668-76.Epub2007年7月10日中报导了补充叶酸可以改善女性生育力。

在HumReprod.1999年7月；14(7)：1690-7中报导了在反应不良患者中口服补充L-精氨酸可以改善卵巢反应、子宫内膜容受性和怀孕率。

在Anim.Reprod.Sci.2012年9月；134(1-2)：69-75中报导了肉碱在体外或体内对卵母细胞和胚胎发育具有有益的影响。

在ActaObstetGynecolScand.2007；86(2)：218-22中报导了经证实N-乙酰基半胱氨酸在诱发或加强多囊性卵巢患者的排卵中有效。

在EurJEndocrinol.2012年5月；166(5)：765-78中报导了维生素D与女性生殖有关。

美国专利6,569,857教导了一种通过在怀孕之前至少两周之前开始的时段向动物给药特定剂量的维生素B6和叶酸来增加怀孕可能性，同时在怀孕之前和怀孕期间提高用于使胚胎或胎儿发育的营养储存的方法。

美国专利6,861,079教导了一种增强自然生育力的生育试剂盒，其包含特定剂量范围的L-精氨酸、L-半胱氨酸、硒、维生素C、维生素E、锌、维生素B-6、对氨基苯甲酸(PABA)、维生素A、叶酸、至少一种植物雌激素，以及若干用于促进排卵的装置。

如上文所报导，使用生育力激素/药物具有副作用，所述副作用可以是轻度或适度的。

因此，需要用于改善女性生育力同时减少由于使用生育力激素/药物导致的副作用的新的药物/营养化合物/组合物。

发明内容

本发明提供一种促进女性生育力的生物有效化合物的协同组合。也已经对所有组分进行了分开研究来确定其单独的效能。

具体来说，本发明涉及一种用于促进女性生育力的协同组合物，其包含作为活性成分的L-肉碱、乙酰基L-肉碱；N-乙酰基半胱氨酸，以及若干特定维生素、氨基酸、抗氧化剂和微量元素。

具体实施方式

现在已经发现包含作为活性成分的L-肉碱或其盐、乙酰基L-肉碱或其盐；N-乙酰基半胱氨酸；以及若干特定维生素、氨基酸、抗氧化剂和微量元素的联用组合物(combinationcomposition)具有对于在药物和/或激素刺激期间促进女性生育力方面的出人意料的协同效应。

因此，本发明的一个目标为一种联用组合物，其包含作为活性成分的L-肉碱或其盐、乙酰基-L-肉碱或其盐、维生素B9(叶酸)、维生素A、维生素B12、维生素B5(泛酸)、维生素B6(吡哆醇)、精氨酸、维生素C、维生素E(α-生育酚)、硒、锌、铜、铁、维生素D和N-乙酰基半胱氨酸。

上文所提及的组合物可进一步包含稀释剂和/或赋形剂，和/或用于促进女性生育力的其它活性成分。

本发明的另一目标为一种包含以下的组合物：

(a)L-肉碱富马酸盐，剂量为2589至287,6mg(对应于1500-166.6mgL-肉碱内盐)，优选剂量为1726至431,5mg(对应于1000-250mgL-肉碱内盐)，最优选剂量为863mg(对应于500mgL-肉碱内盐)；

(b)乙酰基-L-肉碱，剂量为750至25.0mg，优选剂量为500至125mg，最优选剂量为250mg；

(c)叶酸(维生素B9)，剂量为600至66.6mcg，优选剂量为400至100mcg，最优选剂量为200mcg；

(d)来自β胡萝卜素的维生素A，剂量为2400至266.6mcg，优选剂量为1600至400mcg，最优选剂量为800mcg；

(e)维生素B12，剂量为7.5至0.833mcg，优选剂量为5.0至1.250mcg，最优选剂量为2.5mcg；

(f)维生素B5(泛酸)，剂量为18.0至2.0mg，优选剂量为12.0至3.0mg，最优选剂量为6mg；

(g)维生素B6(吡哆醇)，剂量为6.0至0.666mg，优选剂量为4.0至1.0mg，最优选剂量为2mg；

(h)精氨酸，剂量为1500至166.6mg，优选剂量为1000.0至250.0mg，最优选剂量为500mg；

(i)维生素C，剂量为270.0至30.0mg，优选剂量为180.0至45.0mg，最优选剂量为90mg；

(j)维生素E(α-生育酚)，剂量为90.0至10.0mg，优选剂量为60.0至15.0mg，最优选剂量为30mg；

(k)硒，剂量为150至16.6mcg，优选剂量为100.0至25.0mcg，最优选剂量为50mcg；

(l)锌，剂量为30.0至3.33mg，优选剂量为20.0至5.0mg，最优选剂量为10mg；

(m)铜，剂量为4.95至0.55mg，优选剂量为3.3至0.825mg，最优选剂量为1.65mg；

(n)铁，剂量为42.0至4.66mg，优选剂量为28.0至7.0mg，最优选剂量为14mg；

(o)维生素D，剂量为15.0至1.66mcg，优选剂量为10.00至2.50mcg，最优选剂量为5mcg；

(p)N-乙酰基半胱氨酸，剂量为150至16.6mg，优选剂量为100.0至25.0mg，最优选剂量为50mg。

本发明的另一目标为用于促进女性生育力的上文所提及的组合物。

本发明的另一目标为与药物和/或激素刺激结合的用于促进女性生育力的上文所提及的组合物。

本发明的另一目标为与用于支持排卵的药物和/或激素刺激结合的用于促进女性生育力的上文所提及的组合物。

本发明的另一目标为在用于支持卵母细胞受精的药物和/或激素刺激期间用于促进女性生育力的上文所提及的组合物。

本发明的另一目标为在用于促进卵母细胞体内受精的药物和/或激素刺激期间用于促进女性生育力的上文所提及的组合物。

本发明的另一目标为在用于促进卵母细胞体外受精的药物和/或激素刺激期间用于促进女性生育力的上文所提及的组合物。

本发明的另一目标为用于减少由于使用用于促进女性生育力的激素和/或药物导致的副作用的上文所提及的组合物。

本发明的组合物可以在开始药物和/或激素刺激之前至少一个月向有需要的受试者给药；所述给药必须在开始药物和/或激素刺激之前至少一周开始；所述给药可以在卵母细胞受精之后在医生控制下继续。

本发明的另一目标为上文所提及的组合物作为膳食补充剂的用途。

本发明的组合物可以进一步包含辅酶、其它矿物质、抗氧化剂、维生素以及用于促进女性生育力或辅助治疗不育症的药物。

L-肉碱或乙酰基L-肉碱的盐的是指L-肉碱或乙酰基L-肉碱与不产生毒性或副作用的酸的任何盐。

所述盐的非限制性实例为：氯化物、溴化物、乳清酸盐、天冬氨酸盐、酸性天冬氨酸盐、酸性柠檬酸盐、柠檬酸镁、磷酸盐、酸性磷酸盐、富马酸盐和酸性富马酸盐、富马酸镁、乳酸盐、马来酸盐和酸性马来酸盐、草酸盐、酸性草酸盐、双羟萘酸盐、酸性双羟萘酸盐、硫酸盐、酸性硫酸盐、葡萄糖磷酸盐、酒石酸盐和酸性酒石酸盐、甘油磷酸盐、粘酸盐、酒石酸镁、2-氨基-乙磺酸盐、2-氨基-乙磺酸镁、甲磺酸盐、胆碱酒石酸盐、三氯乙酸盐和三氟乙酸盐。

FDA批准的药用盐的列举在出版物Int.J.ofPharm.33(1986),201-217中给出。

根据本发明的L-肉碱、乙酰基-L-肉碱、维生素B9、维生素A、维生素B12、维生素B5(泛酸)、维生素B6(吡哆醇)、精氨酸、维生素C、维生素E(α-生育酚)、硒、锌、铜、铁、维生素D和N-乙酰基半胱氨酸可以“同等方式(co-ordinatedmanner)”给药。前述化合物的“同等方式”是指共同给药(即实质上并行给药)或先后补充L-肉碱和至少一种乙酰基-L-肉碱、维生素B9、维生素A、维生素B12、维生素B5(泛酸)、维生素B6(吡哆醇)、精氨酸、维生素C、维生素E(α-生育酚)、硒、锌、铜、铁、维生素D和N-乙酰基半胱氨酸，或给药包含前述活性成分的组合的组合物和任选地还包含一种或多种药用赋形剂或稀释剂的混合物的组合物。

以下非限制性实施例进一步示例说明本发明。

实施例1

材料和方法

动物

研究使用CD1小鼠，60只雌性和60只雄性；6周龄；体重≥16.2g；5只小鼠/组。在称重之前使小鼠适应环境一周。雌性小鼠在达到恰当体重之后的2至3天开始超数排卵。将所有小鼠保持在21至24℃的温度在12:12-h的亮:暗循环(光照，0700至1900)下的SPF条件下。将小鼠在随意获取食物和水的情况下圈养在静态微量分离笼中。

处理

用具有以下组成的本发明组合物(DNC064)对所有雌性小鼠进行口服处理(0.5ml，胃管饲，一天两次)持续7天(包括用激素处理小鼠以超数排卵的天数)，“对照”组除外：

L-肉碱富马酸盐0.4mg+

乙酰基-L-肉碱HCl.0.12mg+

维生素B120.0012mcg+

维生素B90.09mcg+

维生素B60.0009mg+

维生素B50.003mg+

维生素A0.4mcg+

维生素D0.0022mcg+

硒0.022mcg+

维生素C0.04mg+

维生素E0.014mg+

锌0.004mg+

铜0.0008mg+

铁0.007mg+

L-精氨酸0.24mg+

N-乙酰基半胱氨酸0.24mg，

它们的组合，如表1中所报导。

超数排卵和配对

所用的超数排卵技术描述于J.Am.Assoc.Lab.Anim.Sci.2011年7月50(4)；471-478中。简单地说，用5IU(0.1mL，腹膜内)孕马血清促性腺激素(PMSG)处理雌性小鼠。这些小鼠在最后一次注射PMSG之后的47至49h接受5IU(0.1mLIP)的人类绒毛膜促性腺激素(HCG)。在HCG注射之后，立即将雌性小鼠与雄性小鼠1:1配对。所有雌性小鼠均进行此超数排卵处理。

卵母细胞采集和分析

在配对后的第二天，通过颈脱位法对所有雌性供体实施安乐死并从所有雌性小鼠收集输卵管，并置于35-mm培养皿(FisherScientific)中的2mLM2培养基(Sigma-Aldrich)中。随后将各输卵管移至含有2mLM2培养基(Sigma-Aldrich)和75μL透明质酸酶(10mg/mL；Sigma-Aldrich)的培养皿中，在其中撕开壶腹以释放卵母细胞。

在处理了所述组的所有输卵管之后，收集所有卵母细胞并置于已经在5％CO₂平衡到37℃的处于胚胎测试矿物油(Sigma-Aldrich)的100-μLKSOM液滴(Millipore，BillericaMA)中。孵育卵母细胞24h，随后对液滴进行关于受精卵母细胞的2-细胞数目的评分。

获得的结果在下表1中报导。

表1

统计分析

使用Studentt-检验计算显著性，将p<0.05的值视为代表显著性差异。

表1中报导的结果显示关于单一组分或其不同组合的本发明的处理在统计学上增加受精卵母细胞的数目。

本发明的组合物可以用于口服给药的任何适当形式来给药。

给药形式的实例为药囊、丸剂、小瓶、凝胶或脂质体中的液体、半液体或固体形式。

L-肉碱和乙酰基L-肉碱为已知化合物且其制备方法描述于US4,254,053中。

市场上很长时间广泛出售维生素A、维生素B9、维生素B12、维生素B5(泛酸)、维生素B6(吡哆醇)、精氨酸、维生素C、维生素E(α-生育酚)、硒、锌、铜、铁、维生素D和N-乙酰基半胱氨酸以供人类使用。

本发明的组合物由医学领域的操作人员熟悉并且已在使用中的活性成分组成。

因此其采购非常容易，这是因为这些成分为目前已较长时间在市场上出售的产品并且具有适于人类给药的级别。

对于任何化合物，最初可以在细胞培养测定或动物模型(通常为小鼠或大鼠)中评估其治疗有效剂量。

动物模型也可以用于确定适当的浓度范围和给药途径。所述信息随后可以用于确定在人类中给药的适用剂量和途径。

用于人类受试者的精确有效剂量将取决于疾病状态的严重程度、受试者的一般健康状况、受试者的年龄、体重和性别、饮食、给药时间和频率、药物组合、反应灵敏度以及对治疗的耐受性/反应。该量可以通过常规试验确定并且在临床医师的判断范围内。

在下文中，报导了本发明的组合物的非限制性实例。

组合物1

组合物2

组合物3

组合物4