二陈丸方剂在制备抗衰老药物中的应用

摘要

本发明属中药领域，涉及二陈丸方剂在制药中的新用途，具体涉及二陈丸方剂在制备抗衰老药物中的应用。衰老是生命的自然过程，主要指随年龄增加，机体功能减退，内环境稳定能力与应激能力下降，机体的细胞、组织、器官在结构与功能上表现出来的种种退化。面对庞大的老年群体，要从根本上提高他们的生存质量，就要找到改善身体机能、延缓衰老的药物，使他们能够健康衰老。本发明提供了二陈丸方剂在制备抗衰老药物中的应用。动物实验表明二陈丸方剂可以显著延长正常群体的寿命。本发明提供了一种二陈丸方剂的新用途，可在制备抗衰老药物中应用，有望开发成新一代的抗衰老药物。

说明书

技术领域

本发明涉及二陈丸方剂在制药中的新用途，具体涉及二陈丸方剂在制备抗衰老药物中的应用，属于中药领域。

背景技术

二陈丸来源于《太平惠民合剂局方》，由半夏、陈皮、茯苓、甘草组方。燥湿化痰，理气和胃。用于痰湿停滞导致的咳嗽痰多、胸脘胀闷、恶心呕吐，具有行气和中，燥湿祛痰的功效（中国药典，2010）。研究表明二陈丸可治疗痰饮、咳嗽痰多、胸膈胀满、恶心呕吐、头眩、心悸等病症，并可有较治疗糖尿病。

衰老是生命的自然过程，主要指随年龄增加，机体功能减退，内环境稳定能力与应激能力下降，机体的细胞、组织、器官在结构与功能上表现出来的种种退化。衰老的结果是常常产生与衰老相关的疾病，直至死亡。面对庞大的老年群体，要从根本上提高他们的生存质量，就要找到改善身体机能、延缓衰老的方法，使他们能够健康衰老。

然而多数药物的功能和疗效不明确，产品寿命周期较短，其中适合于正常人群，如老年人的延寿药物很少，目前尚不能够满足该人群迫切的健康需求。衰老是由机体综合水平调控的复杂的、多因素的过程，相应地要求抗衰老药物对机体的作用应是整体水平的调节。而中药复方具有的多环节、多靶点的整体调节作用，这也正是中药抗衰老的特色和优势，在延缓衰老方面有着巨大的潜力。本发明摆脱了现有抗衰老药物功效验证思路的束缚，采用线虫模型直接证明了二陈丸方剂具有抗衰老的生物活性，可在制备抗衰老药物中应用。

发明内容

本发明的目的是提供二陈丸方剂在制药中的新用途，具体涉及二陈丸方剂制备抗衰老药物中的应用，以期提供一种功效明确的抗衰老药物。

所述二陈丸方剂含有半夏、陈皮、茯苓、甘草。

所述二陈丸方剂在制备抗衰老药物中的应用，其特征在于二陈丸方剂中所含的各味药的质量比为半夏：陈皮：茯苓：甘草=5：5：3：1.5。

本发明所述的二陈丸方剂，其组方比例可以根据中药组方原则合理改动，而不改变该方剂在制备抗衰老药物中的用途，这是本领域技术人员可以理解的。

本发明所述的二陈丸方剂在制备抗衰老药物中的应用，可以将二陈丸方剂添加药学上可接受的载体如填充剂、润滑剂、湿润剂、促进吸收剂、吸附载体、稀释剂、赋形剂等，必要时可加入甜味剂、香味剂等，制备成注射剂、散剂、颗粒剂、粉剂、丸剂、口服液、片剂等药物的多种剂型，这是本领域技术人员可以理解的。

本发明采用了秀丽隐杆线虫作为模式生物直接评价药物的抗衰老活性，秀丽隐杆线虫用于抗衰老模型具有以下优点：

1．由于线虫60-80%的基因与人类的相关基因高度保守，而且至今发现的17条信号传导途径，线虫具有其中的12条，因此本发明利用秀丽隐杆线虫作为筛选抗衰老药物的模型生物。可利用线虫丰富的遗传资源，根据研究目的选择合适的突变体，研究衰老及抗衰老机制，实质上衰老机制的几大理论都是在线虫中被证明。因此，对线虫有抗衰老作用的药物，通常也被认为对人类也具有同样功效。

2．秀丽隐杆线虫被用于寿命分析，至今已有30年的历程。因其独特的优势，成为衰老研究的首推模型。线虫世代周期短，通常为3天左右；寿命短，通常为3周左右。这使实验的重复稳定性成为可能。为了确保实验方法的可靠性和实验结果的准确性、药物筛选能得到更多准确的、可信的信息，重复实验是必要的。

由于秀丽隐杆线虫具有以上独特的优势，而成为衰老研究的首推模型。因此线虫可以被用于评价组合物的抗衰老作用，进而判断组合物被用于制备抗衰老药物的可能性。

本发明提供了一种二陈丸方剂在制备抗衰老药物的新用途,二陈丸方剂可以显著延长正常群体的寿命，有望开发成新一代的抗衰老药物。

附图说明

图1为本发明中药复方对正常型N2线虫寿命的影响的寿命分析图。

其中图中的实线为空白对照组，虚线为二陈丸药物组。

具体实施方式

以下提供具体实施例以实现本发明所述的二陈丸方剂在制备抗衰老药物中应用，但不限于这些实施例。

实验材料

1.实验生物

秀丽隐杆线虫株系：正常型秀丽隐杆线虫N2，购自CaenorhabditisGeneticsCenter（CGC），用于评价药物对于正常群体的抗衰老效果。

细菌株：尿嘧啶渗漏突变型大肠杆菌OP50（E.coli），购自CaenorhabditisGeneticsCenter（CGC）。

2.培养基、药品

NGM培养基：NaCl1.5g，K₂HPO₄1.3g，KH₂PO₄8.5g，蛋白胨1.4g，琼脂粉8.5g，蒸馏水500mL。灭菌后加入过滤除菌的500μL胆固醇（5mg/ml，无水乙醇配制），高压蒸汽灭菌的500μL1mol/LMgSO₄，500μL1mol/LCaCl₂。

M9缓冲液：NaCl1.98g，Na₂HPO₄2.38g，KH₂PO₄1.20g，MgSO₄0.048g，蒸馏水400mL。

LB液体培养基：NaCl2g，蛋白胨2g，酵母膏1g，蒸馏水200mL。溶解后用1MNaOH调节pH为7.0，高压蒸汽灭菌。

药品：二陈丸，所用复方药材购自兰州惠仁堂大药房。

3.仪器

高压灭菌锅（上海申安医疗器械厂）

单人单面超净工作台（苏州净化设备厂）

生化培养箱（宁波江南仪器厂）

隔水式恒温培养箱（上海一恒科学仪器有限公司）

连续变倍体视显微镜（上海一恒科学仪器有限公司）

电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）

台式离心机（CT15E，日立）

实施例一中药复方二陈丸水提液的制备

法水半夏5g、陈皮5g、茯苓3g、炙甘草1.5g。先用蒸馏水浸泡20分钟，然后文火煮沸，煎熬30min，将终体积定容至100mL，离心，弃去沉淀，将上清无菌过滤，至4℃冰箱待用。

实施例二中药复方二陈丸对正常型N2线虫寿命的影响

1.秀丽隐杆线虫同步化

将N2株系秀丽隐杆线虫的孵卵成虫用M9缓冲液冲洗到1.5mL离心管中，静置或离心弃掉上清，每个离心管中加入500μL1MNaOH和500μL6.4%NaClO，于涡旋仪上震荡裂解约7min，4000rpm离心4min，吸去上清后，用M9冲洗2次后加500μL的M9，置于20℃培养箱孵化后，将其接种于涂有OP50的NGM固体培养皿中，经20℃培养可得到同步生长的秀丽隐杆线虫。

2.含中药复方二陈丸NGM板的制备

将实施例一制备好的中药复方二陈丸的提取液按下列方法配制：

二陈丸药物组：将0.2mL原液加入1.8mL蒸馏水后，加入18mLNGM中，摇匀，倒板。

空白对照组：2mL蒸馏水加入18mLNGM中，摇匀，倒板。

3.寿命分析实验方法

将L4期同步化的N2株系秀丽隐杆线虫，用铂丝挑针转移到空白对照组、二陈丸药物组培养皿中，每组三个平行，每个平行25条秀丽隐杆线虫，置于20℃培养，每天观察并计数存活数和死亡数，至线虫全部死亡。为防止世代交叠，NGM培养基中含有浓度为50μM的氟脲苷。秀丽隐杆线虫死亡的判断标准是用挑针轻触，线虫无反应。爬到培养皿边缘或皿盖干死、钻到琼脂里面的线虫从实验中排除。

4.结果

实验数据分析采用SPSS17.0软件的SurvivalAnalysis处理、分析。结果如下：

图1为本发明中药复方对正常型N2线虫寿命影响的寿命分析图。

其中图中的实线为空白对照组，虚线为二陈丸药物组。

表1中药复方作用下N2线虫的半数存活时间和平均寿命

组别中位生存时间中位生存时间×100/空白对照中位生存时间（%）平均寿命平均寿命×100/空白对照平均寿命（%） P空白对照组19.04±0.4010018.19±0.41100二陈丸药物组21.83±1.16114.6522.16±0.77121.830.000

从图1、表1可以看出，二陈丸方剂显著延长了正常型N2线虫的寿命（P<0.05），相比空白对照组分别将正常型N2线虫的平均寿命延长了21.8%，相比空白对照组分别将正常型N2线虫的半数存活天数延长了14.7%。

从以上实施例可以看出，二陈丸方剂能显著延长正常型N2线虫的寿命，直接证明了二陈丸方剂具有抗衰老的生物活性，可被应用于制备抗衰老药物。