一种具有降血脂作用的原花青素组合物及其制备方法与应用

摘要

本发明公开了一种具有降血脂作用的原花青素组合物及其制备方法，它由下列重量份数的原料制成：原花青素1～10份，葡萄籽油5～50份，白果油2～10份，总丹参酮1～5份和或枸杞籽油、酸枣仁油、沙蒿籽油、紫苏籽油，亚麻籽油中的一种或几种。本发明提供的具有降血脂作用的原花青素组合物，通过大量试验筛选制备得到，采用具有多重保健功效的天然药食两用植物提取物制备而成，无毒副作用、健康安全，且所用原料为葡萄制酒或榨汁后产生的副产物，可实现葡萄资源的高效利用。实验结果表明，该组合物及其制剂能够安全有效地调节人体的血脂、预防动脉硬化，软化血管，可广泛应用于高胆固醇或高甘油三酯引起的高血脂人群。

说明书

技术领域

本发明涉及一种天然产物组合物，特别是涉及一种具有降血脂作用的原花青素组合物及其制备方法。

背景技术

随着人们生活水平的不断提高、饮食结构及生活方式发生重大变化，以血浆中胆固醇、甘油三酯、总脂等血脂成分的浓度异常增高为主要表现的高血脂症逐渐成为临床较为常见的疾病。据统计，正常人群高血脂症的患病率为20％至30％，中国目前约有血脂异常的患者近1.6亿人。高血脂症对身体的损害是隐匿、逐渐、进行性和全身性的，由高血脂导致的动脉硬化是引起心脑血管疾病的病理学基础。控制高血脂症引起的动脉硬化是防治中老年人心脑血管疾病的根本措施，也是预防糖耐量异常、糖尿病的一个重要途径。

因此，必须高度重视高血脂的危害，积极地进行预防和治疗。现有技术用于预防和治疗高血脂主要依靠降血脂药物和饮食调节。由于长时间应用降血脂类西药存在副作用严重、停药后易反弹等弊病，因此开发具有综合调节血脂功效，且无毒副作用，可长期服用的降血脂药物或保健食品成为本领域技术人员研究的热点，开发意义重大。

发明内容

发明目的：本发明的目的在于提供一种降血脂作用强，安全性高，无不良反应的原花青素组合物。本发明的另一目的是提供上述组合物的制备方法和应用。

技术方案：为了实现以上目的，本发明采取的技术方案为：

一种具有降血脂作用的原花青素组合物，它包括下列重量份数的原料：原花青素1～10份，葡萄籽油5～50份，白果油2～10份，总丹参酮0.5～5份。

作为优选方案，以上所述的具有降血脂作用的原花青素组合物，它包括下列重量份数的原料：原花青素1～5份，葡萄籽油10～40份，白果油3～6份，总丹参酮0.5～2份。

作为更优选方案，所述的具有降血脂作用的原花青素组合物，它包括下列重量份数的原料：原花青素2份，葡萄籽油20份，白果油5份，总丹参酮1份。

本发明所述的具有降血脂作用的原花青素组合物的制备方法，它包括以下步骤：

(1)取葡萄籽，经冷榨或CO₂超临界流体萃取，经分离得葡萄籽油和葡萄籽粕。

(2)取步骤(1)中的葡萄籽粕，加醇性溶剂，提取，固液分离，提取液回收溶剂后喷雾干燥，得原花青素。

(3)取白果，经CO₂超临界流体萃取，经分离得白果油。

(4)取丹参药材，经乙醇提取、纯化得总丹参酮。

(5)按重量份数分别取原花青素和葡萄籽油，置于不锈钢罐混合并搅拌均匀，混合油液经过胶体磨研磨2～3遍，使混合成均匀液体，降至室温，即得。

本发明提供另一种具有降血脂作用的原花青素组合物，它由原花青素，葡萄籽油，白果油，总丹参酮，枸杞籽油、酸枣仁油、沙蒿籽油、紫苏籽油，亚麻籽油中的一种或几种制成。

作为优选方案，它由原花青素1～10份，葡萄籽油5～50份，白果油2～10份，总丹参酮0.5～5份，枸杞籽油、酸枣仁油、沙蒿籽油、紫苏籽油，亚麻籽油中的一种或几种制成。

作为更加优选方案，它由原花青素1～10份，葡萄籽油5～50份，白果油2～10份，总丹参酮0.5～5份，枸杞籽油1～10份、酸枣仁油1～10份、沙蒿籽油1～10份、紫苏籽油1～10份，亚麻籽油1～10份中的一种或几种制成。

本发明所述的具有降血脂作用的原花青素组合物的制备方法，它包括以下步骤：

(1)取葡萄籽，经冷榨或CO₂超临界流体萃取，经分离得葡萄籽油和葡萄籽粕。

(2)取步骤(1)中的葡萄籽粕，加醇性溶剂，提取，固液分离，提取液回收溶剂后喷雾干燥，得原花青素。

(3)取白果，经CO₂超临界流体萃取，经分离得白果油。

(4)取丹参药材，经乙醇提取、纯化得总丹参酮。

(5)按重量份数配比分别取原花青素、葡萄籽油、白果油和总丹参酮，然后加入枸杞籽油、酸枣仁油、沙蒿籽油、紫苏籽油，亚麻籽油中的一种或几种，置于不锈钢罐，混合并搅拌均匀，混合油液经过胶体磨研磨2～3遍，使混合成均匀液体，降至室温，即得。

作为优选方案，以上所述的具有降血脂作用的原花青素组合物的制备方法，步骤(1)所述的超临界萃取条件为：粉碎过40目筛，装料、密封，CO₂超临界流体萃取，萃取压力40MPa，萃取温度50℃，萃取时间60min。

作为优选方案，以上所述的具有降血脂作用的原花青素组合物的制备方法，步骤(2)中所述的醇性溶剂优选乙醇，提取方法为浸渍或超声提取法。

作为优选方案，以上所述的具有降血脂作用的原花青素组合物的制备方法，步骤(2)所述的用于制备原花青素的葡萄籽粕也可为葡萄皮。

本发明根据生产葡萄汁或酿酒后产生的葡萄皮及籽中活性原花青素及不饱和脂肪酸的理化性质和其它杂质的理化性质，通过大量实验筛选提取工艺，其中葡萄籽油经冷榨或CO₂超临界流体萃取方法进行萃取，具有萃取效率高，不会破坏其活性成分脂肪酸组成及相对构型，杂质成分溶出率低等优点。

经过大量实验研究表明，本发明提供的天然原花青素组合物能够有效降低高血脂小鼠血清中的甘油三酯、胆固醇和低密度脂蛋白水平，提高高密度脂蛋白水平，表明本发明提供的原花青素组合物对大鼠高血脂症有显著的改善作用，可用于制备具有改善血脂功能异常的药品或保健食品。

本发明所述的具有降血脂作用的原花青素组合物在制备防治高血脂病症中的应用，将原花青素组合物和药学上可接受的载体制成软胶囊剂、滴丸剂、硬胶囊剂、乳剂、片剂、丸剂、微丸、散剂、汤剂、糖浆剂、合剂、煎膏剂或浸膏剂剂型的药物。

本发明提供的具有降血脂作用的原花青素组合物制成软胶囊剂时，把原花青素组合物直接或与富含不饱和脂肪酸的枸杞籽油、酸枣仁油、沙蒿籽油、紫苏籽油，亚麻籽油中的一种或几种稀释剂混合均匀后，以明胶、甘油等为囊壳材料，使用软胶囊机压制成软胶囊剂。

本发明提供的具有降血脂作用的原花青素组合物制成乳剂时，把原花青素组合物直接或与富含不饱和脂肪酸的枸杞籽油、酸枣仁油、沙蒿籽油、紫苏籽油，亚麻籽油中的一种或几种稀释剂混合均匀后，加乳化剂及水性溶剂后经高速混匀或研磨制成乳剂。

本发明提供的具有降血脂作用的原花青素组合物制成硬胶囊剂时，把原花青素组合物和乳糖或玉米淀粉混合均匀，或使用环糊精包合后再与乳糖或玉米淀粉混合均匀，经整粒，然后装胶囊制成硬胶囊剂。

本发明提供的具有降血脂作用的原花青素组合物制成颗粒剂时，把原花青素组合物和乳糖或玉米淀粉混合均匀，或使用环糊精包合后再与乳糖或玉米淀粉混合均匀，整粒，干燥，制成颗粒剂。

本发明提供的原花青素组合物制成其它剂型时，可按药学常规方法制备得到。

有益效果：本发明提供的具有降血脂作用的原花青素组合物，依据现代药理研究成果，通过大量实验筛选得到，以生产葡萄汁或酿酒后产生的葡萄皮渣及籽、白果等天然药食两用资源为主要原料制成。其中，原花青素具有抗氧化、保护血管内皮细胞防止氧化损伤，预防动脉硬化等作用；葡萄籽油含有大量的亚油酸及亚麻酸等不饱和脂肪酸，且经冷榨法或超临界流体萃取法制备，不经加热，最大限度地保证了原有成分不被破坏，具有降低血中甘油三酯、胆固醇和低密度脂蛋白水平，预防动脉粥样硬化作用；白果油富含不饱和脂肪酸、二萜内酯类及双黄酮类活性成分具有较强的抗氧化、预防动脉粥样硬化作用；总丹参酮具有具有抗氧化作用，可防止LDL的氧化，从而保护血管内皮细胞，维持其分泌PGL2的正常功能，抗动脉粥样硬化形成。

并且，本发明提供的原花青素、葡萄籽油、白果油和总丹参酮，加入枸杞籽油、酸枣仁油、沙蒿籽油、紫苏籽油，亚麻籽油中的一种或几种，一方面起到制剂成型所需的稀释剂的作用，另一方面上述植物物油均富含不同类型的不饱和脂肪酸及活性成分，可与原花青素、葡萄籽油、白果油、总丹参酮从多个方面协同起到降低血脂、软化血管，防治心脑血管疾病的作用。

本发明通过大量实验筛选各组分的配比，科学合理，并且整个制备工艺，自动化程度高，制备效率高，能很好地保留原料中的有效成分，不带入任何杂质，无毒副作用，适合高胆固醇或高甘油三酯引起的高血脂人群。

具体实施方式

下面结合具体实施例进一步阐明本发明，应理解这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，在阅读了本发明之后，本领域技术人员对本发明的各种等价形式的修改均落于本申请所附权利要求所限定的范围。

实施例1一种具有降血脂作用的原花青素组合物的制备方法，包括如下步骤：

(1)取酿酒后产生的葡萄籽渣，粉碎过40目筛，装料、密封，CO₂超临界流体萃取，萃取压力40MPa，萃取温度50℃，萃取时间60min，经分离得葡萄籽油和葡萄籽粕。

(2)取步骤(1)中的葡萄籽粕，加10倍量的乙醇，冷浸24h后，固液分离，提取液回收乙醇后喷雾干燥，得原花青素。

(3)取白果，经CO₂超临界流体萃取，萃取压力42MPa，萃取温度50℃，萃取时间60min，经分离得白果油。

(4)取丹参药材，经乙醇提取，回收乙醇浓缩至干后，加重量比15倍量的8％碳酸钠水溶液洗涤3次后，干燥，得总丹参酮。

(5)分别取步骤(1)制得的葡萄籽油200g，步骤(2)制得的原花青素20g，步骤(3)制得的白果油50g，步骤(4)制得的总丹参酮10g，置于不锈钢罐混合并搅拌均匀，混合油液经过胶体磨研磨2～3遍，使混合物料成均匀液体，降至室温，得天然原花青素组合物。

实施例2一种具有降血脂作用的原花青素组合物的制备方法，包括如下步骤：

(1)取生产葡萄汁后产生的葡萄籽渣，冷榨，经分离得葡萄籽油和葡萄籽粕。

(2)取步骤(1)中的葡萄籽粕，加10倍量的80％乙醇，超声提取2h后，固液分离，提取液回收乙醇后喷雾干燥，得原花青素。

(3)取白果，经CO₂超临界流体萃取，萃取压力42MPa，萃取温度50℃，萃取时间60min，经分离得白果油。

(4)取丹参药材，经乙醇提取，回收乙醇浓缩至干后，加重量比15倍量的8％碳酸钠水溶液洗涤3次后，干燥，得总丹参酮。。

(5)分别取步骤(1)制得的葡萄籽油180g，步骤(2)制得的原花青素20g，步骤(3)制得的白果油60g，步骤(4)制得的总丹参酮15g，加入酸枣仁油5g，亚麻籽油5g，置于不锈钢罐混合并搅拌均匀，混合油液经过胶体磨研磨2～3遍，使混合物料成均匀液体，降至室温，得天然原花青素组合物。

实施例3一种具有降血脂作用的原花青素组合物的制备方法，包括如下步骤：

(1)取酿酒后产生的葡萄籽渣，冷榨，经分离得葡萄籽油和葡萄籽粕。

(2)取生产葡萄汁后产生的葡萄皮渣，加10倍量的乙醇，超声提取2h后，固液分离，提取液回收乙醇后喷雾干燥，得原花青素。

(3)取白果，经CO₂超临界流体萃取，萃取压力42MPa，萃取温度50℃，萃取时间60min，经分离得白果油。

(4)取丹参药材，经乙醇提取，回收乙醇浓缩至干后，加重量比15倍量的8％碳酸钠水溶液洗涤3次后，干燥，得总丹参酮。。

(5)分别取步骤(1)制得的葡萄籽油220g，步骤(2)制得的原花青素20g，步骤(3)制得的白果油50g，步骤(4)制得的总丹参酮10g，加入沙蒿籽油5g，枸杞籽油50g，置于不锈钢罐混合并搅拌均匀，混合油液经过胶体磨研磨2～3遍，使混合物料成均匀液体，降至室温，得天然原花青素组合物。

实施例4一种具有降血脂作用的原花青素组合物

(1)分别取实施例1步骤(1)制得的葡萄籽油200g，步骤(2)制得的原花青素50g，步骤(3)制得的白果油100g，步骤(4)制得的总丹参酮50g，加入沙蒿籽油50g，紫苏籽油20g，亚麻籽油30g，置于不锈钢罐混合并搅拌均匀，混合油液经过胶体磨研磨2～3遍，使混合物料成均匀液体，降至室温，得天然原花青素组合物。

(2)取步骤(1)中制得的天然原花青素组合物，以明胶、甘油等为囊壳材料，使用软胶囊机压制成软胶囊剂，每粒0.5g。

实施例5一种具有降血脂作用的原花青素组合物

分别取实施例2制得的原花青素组合物500g，使用环糊精包合后再与乳糖混合均匀，经整粒，然后装胶囊制成硬胶囊剂。

实施例6一种具有降血脂作用的原花青素组合物

分别取实施例3步骤(1)制得的葡萄籽油250g，步骤(2)制得的原花青素20g，步骤(3)制得的白果油45g，步骤(4)制得的总丹参酮10g，加入酸枣仁油50g，紫苏籽油50g，亚麻籽油50g，置于不锈钢罐混合并搅拌均匀，混合油液经过胶体磨研磨2～3遍，使混合物料成均匀液体，降至室温，以明胶、甘油为囊壳材料，使用软胶囊机压制成软胶囊剂。

实施例7一种具有降血脂作用的原花青素组合物

分别取实施例2步骤(1)制得的葡萄籽油150g，步骤(2)制得的原花青素20g，步骤(3)制得的白果油50g，步骤(4)制得的总丹参酮8g，置于不锈钢罐混合并搅拌均匀，混合油液经过胶体磨研磨2～3遍，使混合物料成均匀液体，降至室温，加入乳化剂、去离子水后置于胶体磨中继续研磨2～3遍，使混合物料成均匀液体，灌装后得乳剂。

实施例8降血脂实验研究

一、实验材料与药物

1.药物和试剂

甘油三酯(TG)、总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)测定试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。降脂宁颗粒(天津太平洋制药有限公司生产)。高脂饲料配方：胆固醇4％、猪油10％、甲基硫氧嘧啶0.2％、胆酸盐0.5％％、基础饲料85％。

2.实验仪器

UV-2000型紫外分光光度计(北京莱柏泰科仪器有限公司)；酶联免疫仪(美国Bio-Tech公司)；BT125型电子天平(赛多利斯科学仪器有限公司)；KQ-250E型超声波清洗器(昆山禾创超声仪器有限公司)；AnkeGL-16GII型离心机(上海安亭科学仪器厂)。

3.实验动物

清洁级雄性ICR小鼠，体重18～22g，购自浙江省实验动物中心，合格证号SCXK(浙)2008-0033。

二、实验方法

1.小鼠高血脂模型的建立

健康小鼠适应性喂养5d后，随机分为空白组、高脂模型组、阳性对照组和受试原花青素组合物低、中、高浓度剂量组，每组8只，经称重显示各组间体重差异无统计学意义。除空白组外，其余各组喂食高脂饲料以诱导高血脂症的形成。造模20d后，随机从空白组和高血脂组各抽取4只小鼠，取血测定甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平，比较两组间差异，以确定高血脂模型建立成功与否。

2.高血脂实验方法

确认造模成功后，空白组小鼠喂食普通鼠粮，已建立高血脂症的小鼠继续喂食高脂饲料，动物自由摄食和饮水。取本发明实施例1和实施例4制备得到的原花青素组合物高、中、低剂量组每日分别以20g/kg、10g/kg、5g/kg灌胃相应的受试药物，空白组和高脂模型组灌胃等量蒸馏水，阳性药组以0.25g/kg的降脂宁颗粒灌胃，每日灌胃1次，连续灌胃20d。末次给药后禁食24h，称重后摘眼球取血液及肝脏，按照试剂盒说明书操作步骤测定TC、TG和HDL-C各项指标的浓度。

3.统计学处理

所有实验数据均采用SPSS18.0统计处理软件进行统计学处理，结果以表示，组间差异采用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

三、实验结果

1.降血脂实验结果

高脂饲料喂养小鼠20d后，抽样测定小鼠血脂水平的变化。由表1可以看出小鼠经高脂饲料喂养20d后，血清TG、TC含量显著升高(P<0.01)，HDL-C含量显著降低(P<0.01)，表明高血脂症小鼠模型建立成功。

表1高血脂小鼠模型建立效果评价(mmol/L)

注：^##P<0.01，表示与空白对照组比较。

小鼠分别给予阳性药、实施例1和实施例4制备得到的原花青素组合物后，测定其血清中TC、TG和HLD-C的含量。结果如表2所示，高脂饲料组与空白对照组比较，模型组小鼠血清TC和TG含量均显著高于空白对照组(P<0.01)，HLD-C含量均显著低于空白对照组(P<0.01)，表明本实验中的高血脂动物模型是成功的。与高血脂模型组相比较，给予实施例1和实施例4所得原花青素组合物高、中、低剂量组和阳性对照组小鼠，其血清TC和TG含量均低于高血脂模型组，血清HLD-C含量均高于阳性对照组。其中，组合物高、中剂量组与高血脂模型组相比，TC、TG和HLD-C水平差异有统计学意义(P<0.05)，表明本发明所提供的原花青素组合物具有很好的降血脂作用。

表2原花青素组合物对高血脂模型小鼠TC、TG和HDL-C含量的影响(n＝8)

注：^##P<0.01，表示与空白对照组比较；*:P<0.05,**P<0.01，表示与模型组比较。

2.动脉硬化指数(AI)的计算

现代研究证明，高TC和LDL-C，低HDL-C是动脉粥样硬化的重要危险因素。因此，在医学上常用动脉硬化指数AI表示动脉粥样硬化的危险性，AI值升高提示机体发生动脉粥样硬化的可能性增加。按下式计算AI值，结果见表3。

AI＝(TC﹣HDL-C)/HDL-C

表3原花青素组合物对高血脂模型小鼠动脉硬化指数(AI)的影响(n＝8)

建议把实施例4的效果比实施例1好，因为实施例组份多，将来对比文件公开的可能性小，如效果又能协调增效，就能争取到授权的创造性。

注：^##P<0.01，表示与空白对照组比较；*:P<0.05,**P<0.01，表示与模型组比较。

由表3可以看出，各组的AI值均显著低于高血脂对照组值，均达到显著水平(P<0.05)。表明本发明所提供的原花青素组合物对动脉粥样硬化具有较好的预防作用。

以上实验结果表明，本发明提供的天然原花青素组合物可有效降低高血脂模型小鼠的总胆固醇和甘油三酯水平，升高高密度脂蛋白胆固醇水平，且可有效预防动脉硬化指数的升高，表明本发明提供的天然原花青素组合物具有很好的降血脂作用及预防动脉粥样硬化作用。且与现有药物相比，该组合物以具有多重保健功效的天然药食两用资源为原料，更加安全，无不良反应，可实现葡萄产业过程中废弃物的有效利用，变废为宝，具有较高的推广价值。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。