具有抗菌作用的中草药提取物及其制备方法

摘要

本发明公开了一种具有抗菌作用的中草药提取物，由以下重量份的原料药材经水煎醇提制成：辣蓼120～180份，广藿香120～180份，女贞子120～180份，黄芪80～120份。体外抑菌试验结果表明，本发明的中草药提取物具有良好的抗菌效果，具有广谱性，而且与水提物、微波提取物、乙醇分级提取物相比其抗菌效果更好。将本发明作为禽类替代抗生素和化学药物的抗菌药物，可有效避免抗药性和药物残留对禽畜产品的污染，减少禽畜有害排泄物、蛋白质用量和氮污染，具有广阔的市场前景。

说明书

技术领域

本发明属于抗菌药物技术领域，尤其涉及一种具有抗菌作用的中草药提取物及其制备 方法。

背景技术

随着养殖业的快速发展，抗生素应用越来越广泛，其在动物疾病预防、治疗等方面起 到了一定的积极作用。但是，近些年来，抗生素在养殖业中的滥用所引起的耐药性问题已 经不容忽视。而且，长期大量不科学使用抗生素还会使动物粪便含重金属残留，导致环境 污染，给人类健康带来严重危害，而养殖业的飞速发展不仅增加了动物产品的供应，同时 也带来了食品安全的问题。广谱、低毒、无残留的中药复方在兽医临床的应用越来越广泛， 其增强免疫力、广谱抗菌、促进生长的特点越来越得到养殖业的青睐。因此，研发一种具 有抗菌作用、无毒无残留、可替代抗生素的中草药产品是现代养殖业和社会发展的必然趋 势，具有重要意义和应用价值。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种抗菌谱广、无毒无残留的具有抗菌作用的中草药 提取物及其制备方法。

为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：具有抗菌作用的中草药提取物，由 以下重量份的原料药材经水煎醇提制成：辣蓼120～180份，广藿香120～180份，女贞子 120～180份，黄芪80～120份。

上述具有抗菌作用的中草药提取物的制备方法，将各原料药材混合后经水煎醇提制 成。

水煎醇提按以下操作进行：按重量份称取各原料药材共20g，粉碎，混合，加10倍水 煎煮3次，水温100℃，每次1.5小时；过滤，合并3次滤液后3000r/min离心30min收 集上清液；将上清液用旋转蒸发仪浓缩至小体积后加入95％乙醇使得乙醇含量为80％，静 置24h后过滤去除沉淀；滤液以3000r/min离心30min后收集上清液，用旋转蒸发仪回收 乙醇，将所得药液定容至20mL后4℃保存备用。

针对目前养殖业中药物滥用的问题，发明人以传统中兽医理论为指导，组方配制了一 种复方辣蓼散，包括以下重量份的原料药材：辣蓼120～180份，广藿香120～180份，女 贞子120～180份，黄芪80～120份，由以上重量份的原料药材经水煎醇提制成了一种具 有抗菌作用的中草药提取物。体外抑菌试验结果表明，本发明的中草药提取物具有良好的 抗菌效果，具有广谱性，而且与水提物、微波提取物、乙醇分级提取物相比其抗菌效果更 好。将本发明作为禽类替代抗生素和化学药物的抗菌药物，可有效避免抗药性和药物残留 对禽畜产品的污染，减少禽畜有害排泄物、蛋白质用量和氮污染，具有广阔的市场前景。

具体实施方式

实施例1具有抗菌作用的中草药提取物的制备

配方：辣蓼120～180份，广藿香120～180份，女贞子120～180份，黄芪80～120 份。各样品具体配方见表1。

表1具有抗菌作用的中草药提取物的配方表

样品配方序号 辣蓼 广藿香 女贞子 黄芪 1 120份 145份 180份 80份 2 180份 120份 125份 120份 3 150份 180份 165份 95份 4 120份 120份 120份 80份

制法：将各原料药材混合后经水煎醇提制成，水煎醇提按以下操作进行：按重量份称 取各原料药材共20g，粉碎，混合，加10倍水煎煮3次，水温100℃，每次1.5小时；过 滤，合并3次滤液后3000r/min离心30min收集上清液；将上清液用旋转蒸发仪浓缩至小 体积后加入95％乙醇使得乙醇含量为80％，静置24h后过滤去除沉淀；滤液以3000r/min 离心30min后收集上清液，用旋转蒸发仪回收乙醇，将所得药液定容至20mL后4℃保存备 用。

实施例2对照样品的制备

水提物对照

按配方4称取各原料共20g，粉碎，混合，加10倍水煎煮3次，水温100℃，每次1.5 小时；过滤，合并3次滤液后，3000r/min离心30min收集上清液，将上清液用旋转蒸发 仪浓缩并定容至20ml后4℃保存备用。

微波提取物对照

按配方4称取各原料共20g，粉碎，混合，加10倍水充分混合后，置于微波样品处理 系统100℃处理15min。

乙醇分级提取物对照

按配方4称取各原料共20g，粉碎，混合，分别加入10倍体积的95％、70％、45％乙醇 浸提3次，浸提时间为48h、24h、24h。

实施例3具有抗菌作用的中草药提取物的应用试压

1.试验材料

取实施例1中配方4的样品(以下简称复方辣蓼水煎醇提物或水煎醇提物)和实施例 2中的对照样品用于以下试验。

2.体外抑菌效果测定

菌液的制备：将鸡白痢沙门氏菌、鸡大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌以及绿 脓杆菌等受试细菌充分复苏后接种于营养琼脂平板，37℃下培养24h，挑取典型菌落接种 于营养肉汤培养基中，37℃下培养18h，将细菌浓度调成3×10⁸个/mL备用。

测定方法：用纸片法测定各提取物的体外抑菌效果，以青霉素、链霉素作为对照。将 受试菌液均匀涂布于分好区的营养琼脂平板上，稍置片刻，将充分吸取各受试药液的纸片 贴于区域中央，倒扣平皿，于37℃下培养12h～18h后量取抑菌圈直径并记录(结果见表 2)。

抑菌强度判定标准：无抑菌圈判为不敏感；抑菌圈直径小于10mm者判为低度敏感； 在10～15mm之间者判为中度敏感；16～20mm之间者判为高度敏感；20mm以上者判为极敏 感。

表2各提取物体外抑菌圈测定结果

由上表可知，鸡白痢沙门氏菌对复方辣蓼水煎醇提物高度敏感；鸡大肠杆菌对复方辣 蓼水煎醇提物高度敏感；金黄色葡萄球菌对复方辣蓼水煎醇提物高度敏感；白色念珠菌对 复方辣蓼水煎醇提物低度敏感；绿脓杆菌对复方辣蓼水煎醇提物低度敏感。

3.最小抑菌浓度的测定

用试管二分法测定上述各提取物对鸡白痢沙门氏菌、鸡大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、 白色念珠菌及绿脓杆菌的最小抑菌浓度MIC。无菌操作向1至10号EP管中加入0.5mL营 养肉汤，吸取0.5mL各提取物加入1号管，充分混匀，从1号管中吸取0.5mL液体加入2 号管，充分混匀后吸取0.5mL加入3号，依次类推直至稀释至9号管。10号作为对照不加 提取物。各管加入0.5mL备用菌液后放入培养箱37℃下培养24h，观察并记录结果(结果 见表3)。

表3各提取物最小抑菌浓度测定结果

由上表可知，复方辣蓼水煎醇提物对鸡白痢沙门氏菌、鸡大肠杆菌以及金黄色葡萄球 菌均有较好的抑菌效果，MIC均为15.625mg/mL，此外复方辣蓼水煎醇提物相较于其他提 取物，对于白色念珠菌与绿脓杆菌也有较高的抑菌表现，MIC均为31.25mg/mL。

试验结果表明：复方辣蓼水煎醇提物对鸡白痢沙门氏菌与鸡大肠杆菌均有较强的体外 抑制效果，而青霉素这类临床常用的抗生素可能因为耐药性的产生已经不能起到抑菌效 果。并且，复方辣蓼水煎醇提物对金黄色葡萄球菌与绿脓杆菌均表现不同程度的体外抑菌 效果。此外，白色念珠菌这一养鸡业常见致病性真菌对复方辣蓼水煎醇提物也呈现敏感。

取实施例1中其他配方重复上述试验，结果类似，在此不再赘述。

综上可见，本发明的具有抗菌作用的中草药提取物对养鸡业常见5种致泻菌都表现良 好的体外抑菌活性，具有广谱性。