一种优质肉鸡用添加剂的制备及其应用

摘要

本发明提供了一种优质肉鸡用添加剂的制备及其应用方法。本产品由以下原料组分制成：苜蓿黄酮5-15份，松针多糖2-10份，玉米淀粉25-40份。其中松针多糖由烘干－粉碎－超声波辅助热水浸提－浓缩纯化－冷冻干燥制成。苜蓿黄酮由烘干－粉碎－超临界CO

说明书

技术领域：本发明属于肉鸡饲料添加剂领域，具体涉及一种松针多糖和苜蓿黄酮复合添 加剂的制备和应用方法。

背景技术：

随着集约化养殖业的发展，抗生素残留和鸡肉品质下降成为影响肉鸡生产发展的关键问 题。植物提取物因其天然、低毒、残留少，效果明确而受到生产者的关注，在当今优质肉鸡 生产研究中得到重视。

松针为马尾松、黄山松等松树的针叶，在我国每年的产量超亿吨。松针的粗蛋白质、粗 脂肪含量丰富，还有动物所需的9种必需氨基酸和不饱和脂肪酸，以及多种维生素、微量元 素。松叶以除邪气为主，邪去则正安，疾病不生，从而获得不饥延年的实效。《本草纲目》 言，松针长期服用，治百病，安五脏，生毛发，耐寒暑，耐风吹雨打，轻身益气，守中而辟 谷延年。早在上个世纪70年代末松针粉就被应用在饲料添加剂生产中，并取得了较好的生 产成绩。苜蓿系豆科苜蓿属多年生草本植物，素有“牧草之王”的美誉。其栽培广泛，营养价 值丰富，所受化学污染少，一直被用作家畜和家禽的优质饲料。但是，松针和苜蓿高达30％ 以上的粗纤维，以及特殊气味抑制了单胃动物对松针和苜蓿的采食，降低了猪、鸡等单胃动 物对其的消化利用，限制了这类饲料在畜禽生产中的进一步利用。

松针多糖和苜蓿黄酮是分别从松针和苜蓿中提取的一类生物活性物质，是松针和苜蓿中 重要的活性功能成分。研究表明，植物多糖具有促生长、抗氧化、抗衰老、抗病毒及促进免 疫功能等功能，植物黄酮在促进动物生长、提高机体免疫机能、调节动物脂质代谢、提高畜 产品品质方面也有其独特功效。本产品从松针中提取多糖类化合物，再从苜蓿中提取黄酮类 化合物，然后结合松针多糖和苜蓿黄酮两者的优点，通过复配技术制备的肉鸡饲料添加剂产 品。本产品优点是原料来源广泛而稳定，具有提高动物免疫力，促进鸡只生长，减少肉鸡腹 脂率，提高肉鸡肉质的作用，而且对机体的毒副作用小。

发明内容：

本发明的目的在于提供一种优质肉鸡用松针多糖苜蓿黄酮型添加剂制备方法及应用方 法。所述苜蓿黄酮制备方法能够提高黄酮得率和纯度。所述添加剂能够提高肉鸡免疫力、提 高饲料利用率，调节肉鸡脂代谢，提高鸡肉品质。

为实现上述发明目的，本发明采用的技术方案为：一种优质肉鸡用添加剂的制备，由以 下重量份的原料组成制成：苜蓿黄酮5～15份，松针多糖2～10份，玉米淀粉25～40份。

2、松针多糖的制备方法：

第一步：采集新鲜的松针枝叶放置在阴凉通风处，脱叶并切碎，70～80℃烘干，至水分 降至18％～22％时，出料粉碎过40目筛。

第二步：将松针粉和热水按1：10～20的料液比混合，在提取温度90～100℃，pH值为 8～9的条件下，20KHz超声波辅助提取40～60min，真空抽滤后，得到含有松针多糖的滤液。

第三步：将上述所得滤液经过旋转式蒸发器浓缩后，采用大孔树脂法纯化，得到松针多 糖提取液。

第四步：将得到的松针多糖提取液分装到冷冻盘中，在-80℃的冰箱中冷冻24～36h。将 预冻好的样品放在干燥架上，设定预冻温度-40℃，干燥室压力18～20pa，干燥时间24～30h。 得到松针多糖干粉。

其工艺为松针－烘干－粉碎－超声波辅助热水浸提－浓缩纯化－冷冻干燥－松针多糖。

3、苜蓿黄酮的制备方法：

第一步：将新鲜的苜蓿茎叶120℃灭酶15～20min，60～80℃烘干24～30h，粉碎后过40 目筛。

第二步：粉碎的紫花苜蓿草粉采用索式提取法进行脱脂和脱色处理。将处理好的紫花苜 蓿装入超临界CO₂流体萃取设备的原料桶中，调节好各个阀门，使萃取压力为30MPa，萃 取温度为40～50℃，分离压力为8～10MPa，分离温度为40～50℃。CO₂流量控制在30～40kg/h， 加入无水酒精作为夹带剂，在此条件下萃取1.5～2h，得到苜蓿黄酮萃取液。

第三步：将获得的苜蓿黄酮萃取液转入旋转式蒸发器中进行浓缩，浓缩温度调为 90～100℃，转速140～150转/min，获得黄酮浓缩液。

第四步：将上述浓缩好的苜蓿黄酮浓缩液加入装有处理好DM130树脂的分离柱中，在 pH为4～5、径高比为1:20～25、上样液流速为2mL/min、解吸流速为1.5mL/min的条件下， 用1.5～2倍70％的乙醇溶液洗脱，经过四级纯化后，收集洗脱液。

第五步：将收集的洗脱液经过冷冻干燥，预冻温度-40℃，干燥室压力15～20pa，干燥 时间30～36h。得到苜蓿黄酮干粉。

其工艺为苜蓿茎叶－烘干－粉碎－超临界CO₂流体萃取－浓缩－四级纯化－冷冻干燥 －苜蓿黄酮。

4、将苜蓿黄酮5-15份，松针多糖2-10份，玉米淀粉25-40份粉碎并均匀混合，过60 目筛。

5、制成的添加剂预混料产品以0.5％的剂量添加到肉鸡饲料中去。

与现有技术相比，本发明的优点和积极效果是：

1、本发明采用的CO₂超临界萃取结合大孔树脂四级纯化技术提取苜蓿黄酮，省时，省 提取剂，黄酮得率和纯度都得到提高。

2、本发明选用的松针多糖和苜蓿黄酮，都是天然植物提取物，不含有抗生素，无毒无 残留，不存在耐药性。

3、本发明通过松针多糖和苜蓿黄酮复配，发挥植物多糖和植物黄酮的联合效应，可以 提高鸡只免疫力、降低料重比、调节动物脂代谢，提高肉质。

具体实施方式：

下面结合具体实施方式对本发明的技术方案作进一步详细的说明

实施例1：

第一步：采集新鲜的松针枝叶放置在阴凉通风处，脱叶并切碎，70℃烘干，至水分降至 18％～22％时，出料粉碎过40目筛。

第二步：将松针粉和热水按1：10的料液比混合，在提取温度100℃，pH值为9的条 件下，20KHz超声波辅助提取40min，真空抽滤后，得到含有松针多糖的滤液。

第三步：将上述所得滤液经过旋转式蒸发器浓缩后，采用大孔树脂法纯化，得到松针多 糖提取液。

第四步：将得到的松针多糖提取液分装到冷冻盘中，在-80℃的冰箱中冷冻24h。将预 冻好的样品放在干燥架上，设定预冻温度-40℃，干燥室压力18pa，干燥时间30h。得到松 针多糖干粉。此方法得到的松针多糖纯度大于70％。

第五步：将新鲜的苜蓿茎叶120℃灭酶15min，70℃烘干24h，粉碎后过40目筛。

第六步：粉碎的紫花苜蓿草粉采用索式提取法进行脱脂和脱色处理。将处理好的紫花苜 蓿装入超临界CO₂流体萃取设备的原料桶中，调节好各个阀门，使萃取压力为30MPa，萃 取温度为50℃，分离压力为8MPa，分离温度为40℃。CO₂流量控制在30kg/h，加入无水 酒精作为夹带剂，在此条件下萃取2h，得到苜蓿黄酮萃取液。此方法的苜蓿黄酮得率大于 13mg/g。

第七步：将获得的苜蓿黄酮萃取液转入旋转式蒸发器中进行浓缩，浓缩温度调为95℃， 转速150转/min，获得黄酮浓缩液。

第八步：将上述浓缩好的苜蓿黄酮浓缩液加入装有处理好DM130树脂的分离柱中，在 pH为5、径高比为1:25、上样液流速为2mL/min、解吸流速为1.5mL/min的条件下，用 1.5倍70％的乙醇溶液洗脱，经过四级纯化后，收集洗脱液。

第九步：将收集的洗脱液经过冷冻干燥，预冻温度-40℃，干燥室压力15pa，干燥时间 36h。得到苜蓿黄酮干粉。此方法得到的苜蓿黄酮纯度大于27％。

实施例2：

第一步：采集新鲜的松针枝叶放置在阴凉通风处，脱叶并切碎，80℃烘干，至水分降至 18％～22％时，出料粉碎过40目筛。

第二步：将松针粉和热水按1：10的料液比混合，在提取温度90℃，pH值为9的条件 下，20KHz超声波辅助提取60min，真空抽滤后，得到含有松针多糖的滤液。

第三步：将上述所得滤液经过旋转式蒸发器浓缩后，采用大孔树脂法纯化，得到松针多 糖提取液。

第四步：将得到的松针多糖提取液分装到冷冻盘中，在-80℃的冰箱中冷冻24h。将预 冻好的样品放在干燥架上，设定预冻温度-40℃，干燥室压力20pa，干燥时间24h。得到松 针多糖干粉。此方法得到的松针多糖纯度大于70％。

第五步：将新鲜的苜蓿茎叶120℃灭酶15min，75℃烘干24h，粉碎后过40目筛。

第六步：粉碎的紫花苜蓿草粉采用索式提取法进行脱脂和脱色处理。将处理好的紫花苜 蓿装入超临界CO₂流体萃取设备的原料桶中，调节好各个阀门，使萃取压力为30MPa，萃 取温度为40℃，分离压力为10MPa，分离温度为50℃。CO₂流量控制在40kg/h，加入无水 酒精作为夹带剂，在此条件下萃取1.5h，得到苜蓿黄酮萃取液。此方法的苜蓿黄酮得率大于 13mg/g。

第七步：将获得的苜蓿黄酮萃取液转入旋转式蒸发器中进行浓缩，浓缩温度调为95℃， 转速140转/min，获得黄酮浓缩液。

第八步：将上述浓缩好的苜蓿黄酮浓缩液加入装有处理好DM130树脂的分离柱中，在 pH为5、径高比为1:20、上样液流速为2mL/min、解吸流速为1.5mL/min的条件下，用2 倍70％的乙醇溶液洗脱，经过四级纯化后，收集洗脱液。

第九步：将收集的洗脱液经过冷冻干燥，预冻温度-40℃，干燥室压力20pa，干燥时间 30h。得到苜蓿黄酮干粉。此方法得到的苜蓿黄酮纯度大于27％。

验证效果：

将实施例1和实施例2与热水浸提法和超声波辅助醇提法比较，对本发明的苜蓿黄酮的 提取和纯化效果进行验证。

以普通水提法和超声波辅助醇提法为对比，通过实施例1和2对本发明的黄酮提取得率 进行研究：

组I：将烘干粉碎并脱脂、脱色处理好的苜蓿草粉加40倍的热水，在90℃下提取4h。 得到苜蓿黄酮提取液。将黄酮提取液经旋转蒸发浓缩，得到的浓缩液装入已装有处理好的聚 酰胺粉的层析柱中，用3倍体积的70％乙醇以0.5mL/min的流速洗脱，洗脱液经冷冻干燥 成粉末。

组II：将烘干粉碎并脱脂、脱色处理好的苜蓿草粉，加40倍70％的乙醇，于200W功 率下，以30kHz超声波作用，80℃条件下提取3小时。得到苜蓿黄酮提取液。将黄酮提取 液经旋转蒸发浓缩，得到的浓缩液装入已装有处理好的聚酰胺粉的层析柱中，用4倍体积的 70％乙醇以0.5mL/min的流速洗脱，洗脱液经冷冻干燥成粉末。

组III：按实施例1得到苜蓿黄酮干粉。

组Ⅳ：按实施例2得到苜蓿黄酮干粉。

以芦丁为标准品，采用比色法测定黄酮含量，并计算黄酮得率及纯度。

表1不同方法对苜蓿黄酮得率和纯度的影响(mg/mL)

表1的结果表明，与热水浸提聚酰胺层析技术和超声波辅助醇提聚酰胺层析技术相比， 实施例1和实施例2的黄酮得率提高0.5～1.3倍，纯度提高0.61～1.1倍。而且节约了时间， 节省了试剂。

实施例3：根据实施例1或例2的方法得到的松针多糖干粉和苜蓿黄酮干粉，将苜蓿黄 酮10份，松针多糖5份，玉米淀粉35份混合均匀，过60目筛得到添加剂产品。

实施例4：根据实施例1或例2的方法得到的松针多糖干粉和苜蓿黄酮干粉，将苜蓿黄 酮5份，松针多糖5份，玉米淀粉40份混合均匀，过60目筛得到添加剂产品。

实施例5：根据实施例1或例2的方法得到的松针多糖干粉和苜蓿黄酮干粉，将苜蓿黄 酮15份，松针多糖10份，玉米淀粉20份混合均匀，过60目筛得到添加剂产品。

验证效果：

将实施例3以0.5％的比例添加到优质肉鸡饲料中去，采取饲养试验和代谢试验，以无 抗饲料和普通肉鸡饲料为对比，对本发明添加剂的促生长作用进行研究。

试验动物：体重相近的30日龄健康崇仁麻鸡杂交配套系母雏360只，随机分成三组， 每组4个重复，每个重复30只。试验预饲期为一周，饲喂基础日粮，基础日粮为：玉米64.56％， 豆粕24.80％，鱼粉3.00％，麦麸3.32％，菜籽油1.00％，磷酸氢钙0.74％，石粉1.38％，食 盐0.20％，预混料1.00％。正饲期为28天。整个试验期间自由采食和饮水。

组I：对照组，基础日粮中未加入抗生素及本发明产品。

组II：抗生素对照组，基础日粮中加含硫酸抗敌素0.5％，未加入本发明产品。

组III：试验组，基础日粮中加入实施例3产品0.5％。

表2崇仁麻鸡的生产性能

从表2看，与对照组相比，实施例3提高了崇仁麻鸡的体重和日增重，降低了料重比， 其效果接近抗生素对照组。

表3崇仁麻鸡的养分代谢率(％)

由表3可见，饲喂实施例3的鸡能够提高饲料中干物质、粗蛋白质的代谢率，其代谢率 的提高程度接近抗生素组，对饲料中脂肪的代谢率甚至高于抗生素组，但差异均不显著 (P>0.05)。

表4崇仁麻鸡的血清生化指标

血液生化指标与鸡只的代谢有关。饲喂实施例3的鸡血清中总蛋白和球蛋白含量极显著 高于对照组和抗生素组(P<0.01)，而高密度脂蛋白含量显著高于对照组(P<0.05)，低密度 脂蛋白极显著低于对照组和抗生素组(P<0.01)，脂蛋白脂酶也显著低于对照组(P<0.05)。 说明本产品在提高免疫力、调节脂代谢方面有作用。

表5崇仁麻鸡的免疫器官指数

表6崇仁麻鸡的体液免疫指标

由表5和表6可知，实例例3对崇仁麻鸡的免疫器官指数没有显著影响(P>0.05)，但 极显著(P<0.01)和显著(P<0.05)地提高了血液中白细胞介素2和肿瘤坏死因子的浓度， 说明本产品对鸡免疫力的提高主要在血液免疫指标上。

表7崇仁麻鸡的胴体脂肪含量

表8崇仁麻鸡的肌肉化学成分

由表7和表8可见，实施例3极显著降低了鸡只的腹脂率(P<0.01)，显著降低了胴体 皮下脂肪厚度和肌间脂肪宽度(P<0.05)，极显著(P<0.01)和显著地(P<0.05)降低了胸 肌和腿肌中的脂肪含量。

以上的试验结果表明，添加本发明饲料添加剂，日增重略低于抗生素组，但高于对照组。 料重比低于对照组，略高于抗生素组。与对照组相比，本发明产品对免疫器官指数没有影响， 主要通过提高血液中球蛋白、白细胞介素2和肿瘤坏死因子等的含量，来起到提高机体免疫 力的作用。本发明产品还能够调节鸡只脂代谢，显著地提高高密度脂蛋白、降低低密度脂蛋 白，降低血清中胆固醇含量，进而减少胴体脂肪沉积，降低胸肌、腿肌中脂肪含量，提高肉 质。本发明经试验证明能够替代抗生素药物，显著提高肉鸡的血液免疫机能，提高饲料利用 率，提高日增重，降低料重比，调节肉鸡的脂代谢，减少胴体脂肪沉积，提高肉质。