一种宽筋藤提取物及其提取方法与应用

摘要

本发明属于天然提取物技术领域，具体涉及一种宽筋藤提取物及其提取方法与应用。本发明所述宽筋藤提取物的制备方法，采用多次水提，再用乙醇洗脱的方法得到。本发明取药资源丰富，提取制备方法简单易行、原料来源方便易得、可用于宽筋藤提取物的大量制备；成本低、污染小，利于节能减排条件下的大规模生产，产业化前景十分明确。该宽筋藤提取物可用于多种目的，从食品、保健品用途到特殊疾病的药物制备用途，使其在预防或治疗高尿酸血症及其导致的痛风方面的临床应用具备科学依据。

说明书

技术领域

本发明属于天然提取物技术领域，具体涉及一种宽筋藤提取物及其提取方法与应用。

背景技术

痛风(gout)是长期嘌呤代谢障碍、血尿酸增高引致组织损伤的一种疾病，特指急性特征性关节炎和慢性痛风石疾病，主要包括急性发作性关节炎、痛风石形成、痛风石性慢性关节炎、尿酸盐肾病和尿酸性尿路结石；严重者在病程后期会出现肾尿酸结石和痛风性肾实质病变。据统计，痛风病人20％～25％患有尿酸性肾病，而经尸检证实，肾脏病变者几乎为100％，并且痛风还常伴腹型肥胖、高脂血症、高血压、2型糖尿病及心血管病等表现。

痛风典型发作常于深夜，其发作前无明显征兆，或仅有疲乏、全身不适和关节刺痛等，然而一旦发作一般会因关节痛而惊醒，疼痛进行性加剧，在12小时左右达高峰，呈撕裂样、刀割样或咬噬样，难以忍受，受累关节及周围组织红、肿、热、痛和功能受限，但很快，一般1-7天内痛就像“风”一样吹过去了，故称“痛风”。在痛风病程中，首次发作多侵犯人体最低部位的关节—第一跖趾关节，在以后的病程中，部分患者累及该部位，并其次发作于足背、足跟、踝、膝、腕和肘等关节，也可同时累及多个关节，表现为多关节炎，肩、髋、脊柱和颞颌等关节少受累；痛风发作持续数天至数周后可自行缓解，一般无明显后遗症状，然后进入无症状的间歇期，历时数月、数年或十余年后复发，多数患者1年内复发，越发越频，受累关节越来越多，症状持续时间越来越长，因此，寻找广谱、高效、低毒的抗痛风药已成为药物研究的热点。

有高尿酸血症的病人具有更高发生痛风的可能，这是由于尿酸在人体血液中浓度过高，在软组织如关节膜或肌腱里形成针状结晶，导致身体免疫系统过度反应(敏感)而造成痛苦的炎症，一般发作部位为大拇指关节，踝关节，膝关节等。

现代医学对高尿酸血症和痛风的治疗以西药为主，大多按照急性期治疗、间歇期和慢性期治疗进行，其中急性期治疗主要是迅速有效地终止急性关节炎的发作、减少尿酸生成，促进尿酸排泄，间歇期和慢性期治疗主要是控制血尿酸在正常水平，防治和保护已伤害的脏器功能。目前，临床常用抗痛风的药物主要以秋水仙碱、非甾体类抗炎药、激素、促进尿酸排泄药和抑制尿酸合成药为主，这些药物在治疗上都有缺陷，虽能达到控制症状的效果，但毒副作用较大、易产生耐药性、依从性差、治疗效果不理想等不足，再加上西药治疗成本昂贵。因此，传统的西药治疗方式已经遭遇显著瓶颈，因此，研制高效、低毒、经济的抗抑郁药物迫在眉睫；从中医中药中寻求治疗抗高尿酸血症及痛风病的安全有效的药物和制剂是一种趋势，也符合临床诊治的需要。

宽筋藤为防己科青牛胆属植物中华青牛胆Tinospora sinensis(Lour.)Merr的藤茎，味微苦，性凉，现有文献资料显示宽筋藤具丰富的药理活性，但未见有关抗高尿酸血症和治疗痛风作用的文献报道。

发明内容

为此，本发明所要解决的技术问题在于提供一种能够用于治疗高尿酸血症和痛风的高效、低毒且经济的中药提取物，为解决上述技术问题，本发明技术方案为：

本发明公开了一种宽筋藤有效提取物及其制剂在制备治疗痛风药物中的应用。

本发明还公开了一种宽筋藤有效提取物及其制剂在制备治疗高尿酸血症药物中的应用。

进一步的，所述应用中，所述提取物的提取方法，包括如下步骤：

a.取适量宽筋藤，过筛粉碎，加冷水浸泡后，进行煮沸，再滤过；

b.将步骤a中滤过所得的药渣加水继续煎煮至煮沸，再滤过；

c.将步骤b中滤过所得的药渣加水继续煎煮至煮沸，再滤过；合并煎出液，水浴浓缩成膏；

d.将浓缩膏放入树脂柱，先用水洗脱，再用乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩成膏，即得所述提取物。

所述应用中，所述提取物的提取方法中，所述乙醇的体积浓度为30％-100％。

所述应用中，所述提取物的提取方法中，所述的乙醇洗脱液乙醇的体积浓度为50％-70％。

所述应用中，所述提取物的提取方法，包括如下步骤：

a.取宽筋藤1000重量份，用5-20目的筛孔过筛粉碎，加5-9L的冷水浸泡60-120min，煮沸60-150min，再滤过； 

b.将步骤a中滤过所得的药渣药渣加4-7L水继续煎煮，煮沸40-120min，再滤过； 

c.将步骤b中滤过所得的药渣药渣加3-5L水继续煎煮，煮沸40-90min，再滤过；合并煎出液，水浴浓缩成膏；

d.将浓缩膏放入大孔树脂柱，先用水洗脱，再用30-100％乙醇体积浓度的洗脱液洗脱，收集50-70％乙醇体积浓度的洗脱液，浓缩成膏，即得所述提取物。

本发明还提供了一种所述应用中，采用所述提取方法提取得到的宽筋藤提取物。

本发明还提供了一种由所述的宽筋藤提取物选择性添加常规辅料，按照常规工艺制成的临床可接受的用于治疗高尿酸血症或痛风的药物制剂。

所述制剂包括片剂、胶囊剂、滴丸、颗粒剂、酊剂。

所述的常规辅料为淀粉、乳糖、微晶纤维素、糊精、磷酸钙、豆油、 蜂胶、聚乙二醇-4000、聚乙二醇-6000、羧甲基纤维素钠、羟丙纤维素或交联聚维酮中的一种或多种。

本发明所提供的上述技术方案首次发现宽筋藤提取物具有治疗高尿酸血症和痛风的作用，具有制备治疗高尿酸血症和痛风药物的成药潜力，为开发成为治疗高尿酸血症和痛风药物提供了新的物质基础，具有潜在巨大的社会效益和经济效益。

本发明所提供的宽筋藤有效提取物的取药资源丰富，提取制备方法简单易行、原料来源方便易得、可用于宽筋藤提取物的大量制备；成本低、污染小，利于节能减排条件下的大规模生产，产业化前景十分明确。

具体实施例方式

实施例1

取宽筋藤1000g，用12目的筛孔过筛粉碎，然后加7L的冷水进行100min的浸泡，之后再加热至煮沸，煮沸时长保持100min，滤过；在滤过所得的药渣中加5L水继续煎煮，煮沸时长保持100min，滤过；在滤过所得的药渣加5L水继续煎煮，煮沸时长保持70min，滤过；合并煎出液，水浴浓缩成膏。将浓缩膏放入树脂柱，先用水洗脱，再用30％-100％乙醇体积浓度的洗脱液洗脱，收集60％乙醇体积浓度的洗脱液，浓缩成膏，即得所述提取物。

实施例2

取宽筋藤1000g，用5目的筛孔过筛粉碎，加9L的冷水进行60min的浸泡，之后再加热至煮沸，煮沸时长保持150min，滤过；在滤过所得药渣中加4L水继续煎煮，煮沸时长保持120min，滤过；在滤过所得的药渣加3L水继续煎煮，煮沸时长保持90min，滤过；合并煎出液，水浴浓缩成膏。将浓缩膏放入树脂柱，先用水洗脱，再用30％-100％乙醇体积浓度的洗脱液洗脱，收集70％乙醇体积浓度的洗脱液，浓缩成膏，即得所述提取物。

实施例3

取宽筋藤1000g，用20目的筛孔过筛粉碎，加5L的冷水进行100min的浸泡，之后再加热至煮沸，煮沸时长保持60min，滤过；在滤过所得药渣中加7L水继续煎煮，煮沸时长保持40min，滤过；在滤过所得的药渣加5L水继续煎煮，煮沸时长保持40min，滤过；合并煎出液，水浴浓缩成膏。将浓缩膏大孔树脂柱，先用水洗脱，再用30％-100％体积浓度的洗脱液洗脱，收集50％乙醇体积浓度的洗脱液，浓缩成膏，即得所述提取物。

实验例1

实验例1宽筋藤提取物对高尿酸血症小鼠尿酸的影响

1、供试品： 

1.1试验药物：本实验例中所述宽筋藤提取物均由实施例1中所述方法提取得到。

1.2动物：昆明种小鼠，清洁级，由广西医科大学实验动物中心提供，动物合格证证号:SCXK桂2009-0003。

1.3试剂：次黄嘌呤，Sigma公司产品；别嘌醇片，重庆科瑞制药有限责任公司，批号：319002。

1.4仪器：722型分光光度计，上海第三分析仪器厂。

2、方法：选取体重18g～22g昆明种小鼠90只，雄性，随机分为9组，每组10只，即对照组，模型组，阳性对照组(别嘌醇片，20mg/kg体重)，宽筋藤提取物高、中、低剂量组(分别相当于药材10.0、5.0、2.5g/kg体重，下同)，宽筋藤水提物高、中、低剂量组(分别相当于药材10、5.0、2.5g/kg体重，下同)。i.g.给药，1次/d，正常对照组和模型对照组ig给予等容量蒸馏水，连续10d。末次给药1h后腹腔注射次黄嘌呤600mg/kg，1h后眼球取血，3000r/min离心10min，取上清液，磷钨酸比色法测血清尿酸水平。

3、结果：和对照组比较，模型对照组小鼠血清尿酸水平显著增高 (P<0.05)，说明高尿酸血症小鼠模型造模成功。和模型对照组比较，宽筋藤提取物和水提物均可显著降低高尿酸血症小鼠血清尿酸水平(P<0.05，P<0.01)，提取物低剂量组还可显著降低高尿酸血症小鼠血清尿酸水平(P<0.05)，而水提物的低剂量组不能，结果见表1。

表1宽筋藤提取物对高尿酸血症小鼠血清尿酸的影响(n＝10)

与模型组比较：*P＜0.05,**P＜0.01

实验例2

宽筋藤提取物对MSU致大鼠足跖肿胀的影响

1、供试品： 

1.1试验药物：本实验例中所述宽筋藤提取物均由实施例1中所述方法提取得到。

1.2动物：Wistar大鼠，清洁极，均由广西医科大学实验动物中心提 供，动物合格证证号:SCXK桂2009-0003。

1.3试剂：尿酸，Sigma公司产品；别嘌醇片，重庆科瑞制药有限责任公司，批号：319002。

2、方法：MSU的制备：将5g尿酸置1000mL沸水中，用NaOH调pH至7.4，加热至95℃。放室温条件冷却并轻轻搅拌，过滤即得MSU，将MSU置于200℃高温灭菌，临用时用无菌生理盐水配成100mg.mL^-1的混悬液备用。

选取体重180g～220g Wistar雄性大鼠80只，随机分为8组，每组10只，即对照组，模型组，阳性对照组(别嘌呤醇20mg/kg体重)，宽筋藤提取物高、低剂量组(分别相当于药材10.0、2.5g/kg体重)，宽筋藤水提物高、低剂量组(分别相当于药材10.0、2.5g/kg体重)。i.g.给药，1次/d，正常对照组和模型对照组i.g.给予等容量蒸馏水，连续10d。末次给药1h后，于大鼠右后足跖皮下注射0.15mL MSU(100g/L),。观察并测定注射前和注射后第1，2，3，4，5,6h大鼠右后足跖肿胀情况及其周径，计算其肿胀度。

足跖肿胀度＝(t时间周径-t0时间周径)/t₀时间周径×100％

3、结果：和对照组比较，模型对照组大鼠足跖显著肿胀(P<0.01)，提示MSU致大鼠足跖肿胀模型造模成功。和模型对照组比较，宽筋藤提取物和水提物均可显著降低MSU所致大鼠足跖肿胀的程度(P<0.05，P<0.01)，提取物高剂量组在造模后2h,低剂量组在造模后5h、6h、7h、8h还可显著抑制MSU致大鼠足跖肿胀，而水提物的相应剂量组不能。结果见表2。

表2宽筋藤提取物对MSU致大鼠足跖肿胀的影响(n＝10)

与模型组比较：*P＜0.05,**P＜0.01

实验例3

宽筋藤提取物对二甲苯引起耳廓肿胀的影响

1、供试品： 

1.1试验药物：本实验例中所述宽筋藤提取物均由实施例1中所述方法提取得到。

1.2动物：昆明种小鼠，清洁级，由广西医科大学实验动物中心提供，动物合格证证号:SCXK桂2009-0003。

1.3试剂：醋酸地塞米松片，重庆西部制药有限责任公司，批号：20100803。

2、方法：取昆明小鼠80只，雄性，体重(20±2)g。随机分为8组，每组10只，即对照组，阳性对照组(地塞米松，5mg/kg体重)，宽筋藤提取物高、中、低剂量组，宽筋藤水提物高、中、低剂量组。i.g.给药，1次/d，对照组和模型对照组i.g.给予等容量生理盐水，连续10d。第10天给药后1h，于各组小鼠左耳前后两面均匀涂抹二甲苯，30min后脱颈处死小鼠，沿耳廓基线剪下两耳，用直径8mm的打孔器分别在同一部位打下圆耳片，称重，计算肿胀度和抑制率，肿胀度以每只鼠左右耳片重量之差来表示，肿胀率＝(左耳重-右耳重)/右耳重。

3、结果：和对照组比较，宽筋藤提取物和水提物均可显著抑制由二甲苯引起的耳廓肿胀(P＜0.05)。提取物低剂量组可显著抑制由二甲苯引起的耳廓肿胀，而水提物的低剂量组不能。结果见表3。

表3宽筋藤提取物对二甲苯引起耳廓肿胀的影响(n＝10)

与对照组比较：*P＜0.05,**P＜0.01

实验例4

宽筋藤提取物对小鼠热板痛阈的影响

1、供试品： 

1.1试验药物：本实验例中所述宽筋藤提取物均由实施例1中所述方法提取得到。

1.2动物：昆明种小鼠，清洁级，由广西医科大学实验动物中心提供，动物合格证证号:SCXK桂2009-0003。

1.3试剂：罗通定片，山西云鹏制药有限公司生产,批号:A090702。

2、方法：将80只预先经筛选的雌性小鼠(除去反应过敏<5s及迟钝>30s的小鼠),随机分成8组，即对照组,阳性对照组(罗通定,60mg/kg),宽筋藤提取物大、中、小剂量组，宽筋藤水提物大、中、小剂量组。ig给药，对正常照组给予等容量生理盐水。于给药后60min测痛阈值。

3、结果：和对照组比较，宽筋藤提取物和水提物均可显著提高小鼠热板痛阈(P<0.05，P<0.01)。提取物低剂量组可显著提高小鼠热板痛阈， 而水提物的低剂量组不能。结果见表4。

表4宽筋藤提取物对小鼠热板痛阈的影响(n＝10)

与对照组比较：*P＜0.05,**P＜0.01

实验例5

宽筋藤提取物对醋酸引起小鼠扭体反应的影响

1、供试品： 

1.1试验药物：本实验例中所述宽筋藤提取物均由实施例1中所述方法提取得到。

1.2动物：昆明种小鼠，清洁级，由广西医科大学实验动物中心提供，动物合格证证号:SCXK桂2009-0003。

1.3试剂：罗通定片，山西云鹏制药有限公司生产,批号:A090702。

2、方法：取昆明种小鼠80只,雌雄各半,随机分为8组，每组10只。分组、给药同1.5.6。给药后1h，各鼠腹腔注射0.6％醋酸溶液0.2ml/只,5min后计数10min内各小鼠出现的扭体反应次数。

统计学方法：数据采用SPSS l1.0系统软件处理，计量资料用表示表示，组间比较采用单因素方差分析，P<0.05为有统计学意义。

3、结果：和对照组比较，宽筋藤提取物和水提物均可显著减少醋酸引起小鼠扭体次数(P<0.05)。提取物低剂量组可显著减少醋酸引起小鼠扭体次数，而水提物的低剂量组不能。结果见表5。

表5宽筋藤提取物对醋酸引起小鼠扭体反应的影响(n＝10)

与对照组比较：*P＜0.05,**P＜0.01

显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。