京都酚逆序列修饰的脂肪胺/醇衍生物及其制备方法和应用

摘要

本发明公开了京都酚逆序列(Arg-Tyr)修饰的脂肪胺/醇衍生物及其制备方法和作为镇痛剂和抗炎剂的应用，京都酚逆序列修饰的脂肪胺/醇衍生物的结构为通式I即Arg-Tyr-XCH

说明书

技术领域

本发明涉及一种人工合成的多肽化合物，特别是涉及一种对二肽的羧基端用 脂肪胺、脂肪醇进行保护修饰而得到的化合物及其制备方法以及在制备镇痛抗炎 药物中的应用。

背景技术

疼痛作为人类主要生命指征之一，具有重要的生物学意义。世界疼痛大会将 疼痛确认为继呼吸、脉搏、体温和血压之后的“人类第5大生命指征”，众多患 者正在忍受着疼痛的折磨。目前，临床上使用的镇痛药物都存在各自的毒副作用， 例如阿片类镇痛药的成瘾性和水杨类镇痛药对胃肠道的刺激性，寻找镇痛药物是 新药研究的热点之一。在镇痛剂设计中发明人认识到京都酚逆序列(Arg-Tyr)是一 种有潜力的镇痛二肽，以及口服活性差。按照这种认识，发明人对二肽的羧基端 用脂肪胺、脂肪醇进行保护修饰，形成了本发明。

发明内容

本发明要解决的第一个技术问题是，提供通式I中的化合物(5a-l)： Arg-Tyr-XCH₂(CH₂)_nCH₃式中，X为NH或O；式中，n为6、8、10、12、14或 16。

对所合成的通式I中的化合物(5a-l)进行编号：5a中X＝NH，n＝6；5b中X＝NH， n＝8；5c中X＝NH，n＝10；5d中X＝NH，n＝12；5e中X＝NH，n＝14；5f中X＝NH， n＝16；5g中X＝O，n＝6；5h中X＝O，n＝8；5i中X＝O，n＝10；5j中X＝O，n ＝12；5k中X＝O，n＝14；5l中X＝O，n＝16。

以上编码号只是为了方便描述，并无任何对发明的限制意义。

本发明所要解决的第二个技术问题是提供通式化合物5a-l的制备方法，该方法 包括：

(1)浓硫酸、浓硝酸条件下，Arg硝基化得N^G-Arg(NO₂)；

(2)弱碱性水二氧六环条件下，N^G-Arg(NO₂)与(Boc)₂O反应制得N^α-Boc-N^G-Arg(NO₂)，L-Tyr与(Boc)₂O反应制得Boc-Tyr；

(3)在DCC和HOBt存在下，Boc-Tyr在无水THF中与脂肪胺(CH₃(CH₂)_nCH₂NH₂， n＝6，8，10，12，14，16)或脂肪醇(CH₃(CH₂)_nCH₂OH，n＝6，8，10，12，14，16)缩 合成Boc-Tyr-XCH₂(CH₂)_nCH₃；

(4)在含氯化氢的乙酸乙酯中，Boc-Tyr-XCH₂(CH₂)_nCH₃脱Boc保护，得Tyr-XCH₂-(CH₂)_nCH₃；

(5)在DCC和HOBt存在下，N^α-Boc-N^G-Arg(NO₂)在无水THF中与Boc-Tyr-X -CH₂(CH₂)_nCH₃缩合，制备得到N^α-Boc-N^G-Arg(NO₂)-Tyr-XCH₂(CH₂)_nCH₃；

(6)H₂/Pd条件下N^α-Boc-N^G-Arg(NO₂)-Tyr-XCH₂(CH₂)_nCH₃脱-NO₂保护，得Boc- Arg-Tyr-XCH₂(CH₂)_nCH₃；

(7)在含氯化氢的乙酸乙酯中，Boc-Arg-Tyr-XCH₂(CH₂)_nCH₃脱Boc保护，得 Arg-Tyr-XCH₂(CH₂)_nCH₃。

该制备方法可以用图1的路线概括。

本发明所要解决的第三个技术问题是提供了所述的化合物在制备镇痛和抗炎 药物中的应用。

本发明所要解决的第四个技术问题是在小鼠热甩尾法模型上评价本发明的化 合物的镇痛活性。

本发明的第五个目的是在小鼠耳肿胀模型上评价本发明的化合物的抗炎活 性。

附图说明

图1为本发明通式5a-l化合物的合成路线示意图。

i)DCC，HOBt，CH₃(CH₂)_nCH₂NH₂(n＝6，8，10，12，14，16)或CH₃(CH₂)_nCH₂OH，(n＝6，8， 10，12，14，16)；ii)EtoAc/HCl，冰浴；iii)DCC，HOBt，Boc-Tyr；iv)H₂，Pd/C；v)EtOAc/HCl， 冰浴；5a中X＝NH，n＝6；5b中X＝NH，n＝8；5c中X＝NH，n＝10；5d中X＝NH，n＝12； 5e中X＝NH，n＝14；5f中X＝NH，n＝16；5g中X＝O，n＝6；5h中X＝O，n＝8；5i 中X＝O，n＝10；5j中X＝O，n＝12；5k中X＝O，n＝14；5l中X＝O，n＝16。

具体实施方式

为了进一步阐述本发明，下面给出一系列实施例。这些实施例完全是例证性 的，它们仅用来对本发明进行具体描述，不应当理解为对本发明的限制。

实施例1制备N^G-Arg(NO₂)

冰盐浴搅拌条件下，向500ml茄瓶中加入80ml浓硝酸，然后缓慢加入80ml浓硫 酸。10min后，分批加入47.33g(272mmol)L-Arg，反应混合物冰盐浴下搅拌反应2h。 向反应混合物中缓慢加入冰水96ml，然后缓慢加入浓氨水，调pH＝8，再用冰醋酸调 pH＝6，有大量无色固体析出，放入4℃冰箱中继续析晶。减压过滤，弃去滤液，滤 饼用80℃热水溶解，放入4℃冰箱中重结晶。室温下减压过滤，收集不溶物52.5g，为 无色固体，产率88％.ESI-MS(m/e)：220[M+H]⁺.

实施例2制备N^α-Boc-N^G-Arg(NO₂)

称取1.752g N^G-Arg(NO₂)于反应瓶中，加入3ml水溶解，冰浴条件下，缓缓滴加1 N NaOH 8ml，将溶有1.92g(Boc)₂O的二氧六环缓缓倒入其中，调反应液pH为9，反 应48h，期间每隔2h用单通抽反应体系中CO₂一次。TLC检测反应完全后，调反应液 pH为7，旋除二氧六环，再调反应液pH为2，用乙酸乙酯萃取反应液三次，得到的乙酸 乙酯层再用饱和NaCl萃洗三次，得到乙酸乙酯层用无水NaSO₄干燥过夜，过滤除去 NaSO₄，旋干乙酸乙酯得到标题化合物2.4g，为无色固体，产率94％.ESI-MS(m/e)：320 [M+H]⁺.

实施例3制备Tyr-OMe

将120ml无水甲醇放入反应瓶中，冰浴搅拌下滴加10.4ml氯化亚砜，30min内滴 加完毕，分批加入7.24g(40mmol)L-Tyr，反应混合物室温搅拌24小时，薄层层析监 测至原料消失。水泵减压抽干反应液，加入甲醇溶解，抽干，重复3次；加入乙醚，抽 干，重复3次。用甲醇-乙醚重结晶，过滤得标题化合物8.78g，为无色固体，产率87％. ESI-MS(m/e)：196[M+H]⁺.

实施例4制备Boc-Tyr

称取0.905g Boc-Tyr于反应瓶中，加入2ml水溶解，冰浴条件下，缓缓滴加1N NaOH 5ml，将溶有1.199g(Boc)₂O的二氧六环缓缓倒入其中，调反应液pH为9，反应48h， 期间每隔2h用单通抽反应体系中CO₂一次。TLC检测反应完全后，调反应液pH为7， 旋除二氧六环，再调反应液pH为2，用乙酸乙酯萃取反应液三次，得到的乙酸乙酯层 再用饱和NaCl萃洗三次，得到乙酸乙酯层用无水NaSO₄干燥过夜，过滤除去NaSO₄， 旋干乙酸乙酯得到标题化合物0.91g，为无色固体，产率65％.ESI-MS(m/e)：282[M+ H]⁺.

实施例5制备Boc-Tyr-NHCH₂(CH₂)₆CH₃  (1a)

将2.256g(8.03mmol)Boc-Tyr溶20ml无水四氢呋喃(THF)，冰浴下往里 加1.35g(10mmol)N-羟基苯并三唑(HOBt)和2.472g(12mmol)二环己基羰 二亚胺(DCC)的无水THF溶液。反应混合物冰浴搅拌30分钟，得对应的活泼酯 溶液，待用。

将1.29g(10mmol)CH₃(CH₂)₇NH₂溶于20ml无水四氢呋喃(THF)，然后与 上面待用的活泼酯溶液混溶，用N-甲基吗啉(NMM)调pH＝8～9。得到的反应混 合物室温反应24小时。TLC(展开剂CHCl₃∶CH₃OH＝30∶1)显示CH₃(CH₂)₇NH₂消失。反应混合物减压浓缩至干，残留物用乙酸乙酯溶解，滤除不溶物。滤液依 次用5％碳酸氢钠水溶液洗3次，饱和氯化钠水溶液洗3次；5％硫酸氢钾水溶液洗 3次，饱和氯化钠水溶液洗3次和饱和碳酸氢钠水溶液洗3次，饱和氯化钠水溶液 洗3次。分出的乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥、过滤、滤液32℃减压浓缩，重结 晶纯化，得到标题化合物2.0g，为无色固体，产率64％.ESI-MS(m/e)：415.7[M+ Na]⁺.

实施例6制备Boc-Tyr-NHCH₂(CH₂)₈CH₃  (1b)

按照实施例5的方法，3.472g(12mmol)Boc-Tyr与1.57g(10mmol)CH₃(C -H₂)₉NH₂反应，得到标题化合物3.1g，为无色固体，产率74％.ESI-MS(m/e)： 443.5[M+Na]⁺.

实施例7制备Boc-Tyr-NHCH₂(CH₂)₁₀CH₃  (1c)

按照实施例5的方法，3.372g(12mmol)Boc-Tyr与1.85g(10mmol)CH₃(C -H₂)₁₁NH₂反应，得到标题化合物3.45g，为无色固体，产率77％.ESI-MS(m/e)： 471.5[M+Na]⁺.

实施例8制备Boc-Tyr-NHCH₂(CH₂)₁₂CH₃  (1d)

按照实施例5的方法，5.48g Boc-Tyr(18mmol)与3.215g(15mmol)CH₃(C -H₂)₁₃NH₂反应，得到标题化合物5.81g，为无色固体，产率81％.ESI-MS(m/e)： 499.5[M+N4a]⁺.

实施例9制备Boc-Tyr-NHCH₂(CH₂)₁₄CH₃  (1e)

按照实施例5的方法，3.372g(12mmol)Boc-Tyr与2.42g(10mmol)CH₃(C -H₂)₁₅NH₂反应，得到标题化合物3.17g，为无色固体，产率63％.ESI-MS(m/e)： 527.7[M+Na]⁺.

实施例10制备Boc-Tyr-NHCH₂(CH₂)₁₆CH₃  (1f)

按照实施例5的方法，5.062g(18mmol)Boc-Tyr与4.035g(15mmol)CH₃-(CH₂)₁₇NH₂反应，得到标题化合物7g，为无色固体，产率88％.ESI-MS(m/e)：555.5 [M+Na]⁺.

实施例11制备Boc-Tyr-OCH₂(CH₂)₆CH₃  (1g)

将4.125g(15mmol)Boc-Tyr溶于30ml无水四氢呋喃(THF)，冰浴下往里 加0.525g(15mmol)N-羟基苯并三唑(HOBt)和3.708g(18mmol)二环己基 羰二亚胺(DCC)的无水THF溶液。反应混合物冰浴搅拌30分钟，得对应的活泼 酯溶液，待用。

将2.34g(18mmol)CH₃(CH₂)₇OH溶于20ml无水四氢呋喃(THF)，然后与 上面待用的活泼酯溶液混溶。得到的反应混合物室温反应24小时。TLC(展开剂 CHCl₃∶CH₃OH＝30∶1)显示Boc-Tyr消失。反应混合物减压浓缩至干，残留物用 乙酸乙酯溶解，滤除不溶物。滤液依次用5％碳酸氢钠水溶液洗3次，饱和氯化钠 水溶液洗3次；5％硫酸氢钾水溶液洗3次，饱和氯化钠水溶液洗3次和饱和碳酸 氢钠水溶液洗3次，饱和氯化钠水溶液洗3次。分出的乙酸乙酯层用无水硫酸钠 干燥、过滤、滤液32℃减压浓缩，柱层析纯化，得1.204g标题化合物，为无色 油状物，产率20％.ESI-MS(m/e)：416.7[M+Na]⁺.

实施例12制备Boc-Tyr-OCH₂(CH₂)₈CH₃  (1h)

按照实施例11的方法，3.372g(12mmol)Boc-Tyr与2.775g(15mmol)CH₃-(CH₂)₉OH反应，得到标题化合物2.5g，为无色油状物，产率49％.ESI-MS(m/e)： 444.7[M+Na]⁺.

实施例13制备Boc-Tyr-OCH₂(CH₂)₁₀CH₃  (1i)

按照实施例24的方法，2.81g(10mmol)Boc-Tyr与2.232g(12mmol)CH₃-(CH₂)₁₁OH反应，得到标题化合物1.4g，为无色油状物，产率31％.ESI-MS(m/e)： 472.8[M+Na]⁺.

实施例14制备Boc-Tyr-OCH₂(CH₂)₁₂CH₃  (1j)

按照实施例11的方法，5.058g(19.8mmol)Boc-Tyr与4.922g(23mmol)CH₃-(CH₂)₁₃OH反应，得到标题化合物2.2g，为无色油状物，产率23％.ESI-MS(m/e)： 500.7[M+Na]⁺.

实施例15制备Boc-Tyr-OCH₂(CH₂)₁₄CH₃  (1k)

按照实施例11的方法，5.06g(20mmol)Boc-Tyr与5.808g(24mmol)CH₃-(CH₂)₁₅OH反应，得到标题化合物2.4g，为无色油状物，产率24％.ESI-MS(m/e)： 528.8[M+Na]⁺.

实施例16制备Boc-Tyr-OCH₂(CH₂)₁₆CH₃  (1l)

按照实施例11的方法，6.744g(24mmol)Boc-Tyr与5.4g(20mmol)CH₃-(CH₂)₁₇OH反应，得到标题化合物2.9g，为无色油状物，产率27％.ESI-MS(m/e)： 556.8[M+Na]⁺.

实施例17制备HCl·Tyr-NHCH₂(CH₂)₆CH₃  (2a)

3.0g(7.65mmol)Boc-Tyr-NHCH₂(CH₂)₆CH₃溶于适量乙酸乙酯，加入约25ml 4N无水氯化氢-乙酸乙酯液，室温搅拌3小时，TLC(展开剂石油醚∶丙酮＝5∶1)显 示原料点消失。反应混合液在室温下减压浓缩，残留物再用乙酸乙酯溶解并室温 下浓缩，如此反复4次；然后向浓缩物中加入乙醚，室温下减压浓缩，如此反复3 次，直至除净游离的氯化氢，得标题化合物2.45g，为无色固体，产率97％.ESI-MS (m/e)：293.5[M+H]⁺.

实施例18制备HCl·Tyr-NHCH₂(CH₂)₈CH₃  (2b)

按照实施例17的方法，以3.1g(7.38mmol)Boc-Tyr-NHCH₂(CH₂)₈CH₃为原料， 得标题化合物2.01g，为无色固体，产率97％.ESI-MS(m/e)：321.5[M+H]⁺.

实施例19制备HCl·Tyr-NH CH₂(CH₂)₁₀CH₃  (2c)

按照实施例17的方法，以2.75g(5.58mmol)Boc-Tyr-NHCH₂(CH₂)₁₀CH₃为原 料，得标题化合物2.05g，为无色固体，产率94％.ESI-MS(m/e)：349.5[M+H]⁺.

实施例20制备HCl·Tyr-NHCH₂(CH₂)₁₂CH₃  (2d)

按照实施例17的方法，以4.0g(8.4mmol)Boc-Tyr-NHCH₂(CH₂)₁₂CH₃为原料， 得标题化合物2.98g，为无色固体，产率86％.ESI-MS(m/e)：377.6[M+H]⁺.

实施例21制备HCl·Tyr-NHCH₂(CH₂)₁₄CH₃  (2e)

按照实施例17的方法，以3.17g(6.29mmol)Boc-Tyr-NHCH₂(CH₂)₁₄CH₃为原 料，得标题化合物2.67g，为无色固体，产率96％.ESI-MS(m/e)：405.6[M+H]⁺.

实施例22制备HCl·Tyr-NHCH₂(CH₂)₁₆CH₃  (2f)

按照实施例17的方法，以7.0g(13.2mmol)Boc-Tyr-NHCH₂(CH₂)₁₆CH₃为原 料，得标题化合物5.5g，为无色固体，产率89％.ESI-MS(m/e)：433.5[M+H]⁺.

实施例23制备HCl·Tyr-OCH₂(CH₂)₆CH₃  (2g)

按照实施例17的方法，以2.2g(5.6mmol)Boc-Tyr-OCH₂(CH₂)₆CH₃为原料， 得标题化合物1.8g，为无色固体，产率98％.ESI-MS(m/e)：294.7[M+H]⁺.

实施例24制备HCl·Tyr-OCH₂(CH₂)₈CH₃  (2h)

按照实施例17的方法，以2.5g(5.94mmol)Boc-Tyr-OCH₂(CH₂)₈CH₃为原料， 得标题化合物2.02g，为无色固体，产率95％.ESI-MS(m/e)：322.6[M+H]⁺.

实施例25制备HCl·Tyr-OCH₂(CH₂)₁₀CH₃  (2i)

按照实施例17的方法，以1.9g(4.23mmol)Boc-Tyr-OCH₂(CH₂)₁₀CH₃为原料， 得标题化合物1.53g，为无色固体，产率94％.ESI-MS(m/e)：350.5[M+H]⁺.

实施例26制备HCl·Tyr-OCH₂(CH₂)₁₂CH₃  (2j)

按照实施例17的方法，以2.2g(4.61mmol)Boc-Tyr-OCH₂(CH₂)₁₂CH₃为原料， 得标题化合物1.87g，为无色固体，产率98％.ESI-MS(m/e)：378.6[M+H]⁺.

实施例27制备HCl·Tyr-OCH₂(CH₂)₁₄CH₃  (2k)

按照实施例17的方法，以2.4g(4.75mmol)Boc-Tyr-OCH₂(CH₂)₁₄CH₃为原料， 得标题化合物2.02g，为无色固体，产率96％.ESI-MS(m/e)：406.6[M+H]⁺.

实施例28制备HCl·Tyr-OCH₂(CH₂)₁₆CH₃  (2l)

按照实施例17的方法，以2.9g(5.44mmol)Boc-Tyr-OCH₂(CH₂)₁₆CH₃为原料， 得标题化合物2.46g，为无色固体，产率97％.ESI-MS(m/e)：434.5[M+H]⁺.

实施例29制备N^α-Boc-N^G-Arg(NO₂)-Tyr-OMe

将2.807g(8.8mmol)N^α-Boc-N^G-Arg(NO₂)溶于20ml无水四氢呋喃(THF)， 冰浴下往里加1.08g(8mmol)N-羟基苯并三唑(HOBt)和1.978g(9.6mmol)二环 己基羰二亚胺(DCC)的无水THF溶液。反应混合物冰浴搅拌30分钟，得对应的活 泼酯溶液，待用。

将1.852g(6.57mmol)HCl·Tyr-OMe溶于30ml无水四氢呋喃(THF)，然后与 上面待用的活泼酯溶液混溶，用N-甲基吗啉(NMM)调pH＝8～9。得到的反应混合 物室温反应14小时。TLC显示HCl·Tyr-OMe消失。反应混合物减压浓缩至干，残 留物用乙酸乙酯溶解，滤除不溶物。滤液依次用5％碳酸氢钠水溶液洗3次，饱和 氯化钠水溶液洗3次；5％硫酸氢钾水溶液洗3次，饱和氯化钠水溶液洗3次和饱 和碳酸氢钠水溶液洗3次，饱和氯化钠水溶液洗3次。分出的乙酸乙酯层用无水 硫酸钠干燥、过滤、滤液32℃减压浓缩，柱层析纯化，得标题化合物1.7g，为 无色固体，产率52％.Mp 72℃，ESI-MS(m/z)： 519.6[M+Na]⁺.IR(KBr)：3325.14，2958.48，1657.85，1524.64，1260.73.¹H-NMR (300MHz，DMSO-d₆)：δ/ppm＝9.21(s，1H)，8.49(s，1H)，8.12-8.09(d，J＝9Hz，1 H)，7.90-7.88(m，1H)，6.70-6.97(d，J＝9Hz，2H)，6.83-6.81(d，J＝6Hz，1H)， 6.67-6.64(d，J＝9Hz，3H)，4.43-4.37(Q，J＝6Hz，1H)，3.95-3.93(m，1H)，3.13- 3.11(d，J＝6Hz，2H)，2.88-2.81(m，2H)，1.57-1.52(m，2H)，1.45(s，2H)，1.38 (s，9H).

实施例30制备N^α-Boc-N^G-Arg(NO₂)-Tyr-NHCH₂(CH₂)₆CH₃  (3a)

将1.914g(6mmol)N^α-Boc-N^G-Arg(NO₂)溶于20ml无水四氢呋喃(THF)， 冰浴下往里加0.599g(4.44mmol)N-羟基苯并三唑(HOBt)和1.098g(5.33mmol) 二环己基羰二亚胺(DCC)的无水THF溶液。反应混合物冰浴搅拌30分钟，得对应 的活泼酯溶液，待用。

将1.46g(4.44mmol)HCl·Tyr-NHCH₂(CH₂)₆CH₃溶于30ml无水四氢呋喃 (THF)，然后与上面待用的活泼酯溶液混溶，用N-甲基吗啉(NMM)调pH＝8～9。 得到的反应混合物室温反应14小时。TLC显示HCl·Tyr-NHCH₂(CH₂)₆CH₃消失。 反应混合物减压浓缩至干，残留物用乙酸乙酯溶解，滤除不溶物。滤液依次用5％ 碳酸氢钠水溶液洗3次，饱和氯化钠水溶液洗3次；5％硫酸氢钾水溶液洗3次， 饱和氯化钠水溶液洗3次和饱和碳酸氢钠水溶液洗3次，饱和氯化钠水溶液洗3 次。分出的乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥、过滤、滤液32℃减压浓缩，柱层析纯 化，得标题化合物1.5g，为无色固体，产率57％.Mp 87℃，ESI-MS(m/z)：592.9[M-H]^-.IR(KBr)：3318.41，2930.42，1650.26， 1529.87，1263.40，684.95.¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)：δ/ppm＝9.11(s，1H)，8.45 (s，1H)，7.78(m，1H)，7.70-7.67(d，J＝9Hz，2H)，6.97-6.94(d，J＝9Hz，2H)， 6.63-6.61(d，J＝6Hz，2H)，4.40-4.33(Q，J＝6Hz，1H)，3.86-3.84(m，1H)，3.10- 2.90(m，4H)，2.83-2.72(m，2H)，1.54-1.47(m，6H)，1.38(s，9H)，1.23(s，10H)， 0.88-0.84(t，J＝6.0Hz，3H).

实施例31制备N^α-Boc-N^G-Arg(NO₂)-Tyr-NHCH₂(CH₂)₈CH₃  (3b)

按照实施例30的方法，3.062g(9.6mmol)N^α-Boc-N^G-Arg(NO₂)与2.56g(7.18 mmol)HCl·Tyr-NH-CH₂(CH₂)₈CH₃反应，得标题化合物3.05g，为无色固体，产率 68％.Mp 98℃，ESI-MS(m/z)：644.3[M+Na]⁺. IR(KBr)：3312.67，2934.92，1646.79，1529.90，1262.13，1165.64，683.16.¹H-NMR (300MHz，DMSO-d₆)：δ/ppm＝9.15(s，1H)，8.49-8.47(m，1H)，7.91(s，1H)，7.81 (m，2H)，7.72-7.69(d，J＝9Hz，1H)，6.97-6.94(d，J＝9Hz，3H)，6.63-6.61(d，J ＝6Hz，2H)，4.39-4.34(m，1H)，3.84(s，1H)，3.09(m，2H)，3.03-2.89(m，1H)， 2.83-2.69(m，2H)，1.54-1.47(m，2H)，1.38(s，9H)，1.44-1.37(m，4H)，1.23(m， 10H)，0.86-0.82(t，J＝6.0Hz，3H).

实施例32制备N^α-Boc-N^G-Arg(NO₂)-Tyr-NHCH₂(CH₂)₁₀CH₃  (3c)

按照实施例30的方法，1.914g(6mmol)N^α-Boc-N^G-Arg(NO₂)与2.05g(5 mmol)HCl·Tyr-NH-CH₂(CH₂)₁₀CH₃反应，得标题化合物2.2g，为无色固体，产率 64％.Mp 104℃，ESI-MS(m/z)：672.3[M+Na]⁺. IR(KBr)：3319.46，2925.19，2855.17，1638.89，1520.02，1260.59，1166.98，684.44. ¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)：δ/ppm＝9.15(s，1H)，8.47(s，1H)，7.91(s，1H)，7.81 (s，2H)，7.72-7.70(d，J＝6Hz，1H)，6.96-6.93(d，J＝9Hz，3H)，6.63-6.60(d，J ＝9Hz，2H)，4.39(s，1H)，3.84(s，1H)，3.08(m，2H)，3.03-2.94(m，1H)，2.80- 2.72(m，1H)，1.37(m，15H)，1.22(s，18H)，0.86-0.82(t，J＝6.0Hz，3H).

实施例33制备N^α-Boc-N^G-Arg(NO₂)-Tyr-NHCH₂(CH₂)₁₂CH₃  (3d)

按照实施例30的方法，1.6g(5mmol)N^α-Boc-N^G-Arg(NO₂)与1.504g(3.6 mmol)HCl·Tyr-NH-CH₂(CH₁₂CH₃反应，得标题化合物0.81g，为无色固体，产率 33％.Mp 105℃，ESI-MS(m/z)：700.3[M+Na]⁺. IR(KBr)：3326.27，2930.89，2342.47，1652.85，1529.62，1263.94，672.84.¹H-NMR (300MHz，DMSO-d₆)：δ/ppm＝9.16(s，1H)，8.48(s，1H)，7.94(s，1H)，7.82(m，1H)， 7.72-7.70(d，J＝6Hz，1H)，7.00(s，2H)，6.96-6.93(d，J＝9Hz，2H)，6.63-6.60 (d，J＝9Hz，2H)，4.37-4.35(m，1H)，3.83(m，1H)，3.08(m，2H)，3.03-2.89(m，3 H)，2.86-2.67(m，1H)，1.37(s，9H)，1.22(m，28H)，0.86-0.82(t，J＝6.0Hz，3H).

实施例34制备N^α-Boc-N^G-Arg(NO₂)-Tyr-NHCH₂(CH₂)₁₄CH₃  (3e)

按照实施例30的方法，1.914g(6mmol)N^α-Boc-N^G-Arg(NO₂)与2.0g(5mmol) HCl·Tyr-NH-CH₂(CH₂)₁₄CH₃反应，得标题化合物1.96g，为无色固体，产率56％.Mp 110℃，ESI-MS(m/z)：728.5[M+Na]⁺.IR(KBr)： 3321.22，2931.61，1638.03，1533.06，1258.94，685.21.¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)： δ/ppm＝9.14(s，1H)，8.48(s，1H)，7.94-7.92(m，1H)，7.84-7.80(d，J＝6Hz，1H)， 7.72-7.70(d，J＝6Hz，1H)，7.00-6.98(d，J＝6Hz，1H)，6.96-6.93(d，J＝9Hz，2 H)，6.62-6.59(d，J＝9Hz，2H)，4.39-4.33(Q，J＝6Hz 1H)，3.85-3.83(m，1H)， 3.08-3.00(m，3H)，2.97-2.70(m，1H)，2.81-2.69(m，2H)，1.58-1.45(m，6H)， 1.37(s，9H)，1.22(s，26H)，0.87-0.83(t，J＝6.0Hz，3H).

实施例35制备N^α-Boc-N^G-Arg(NO₂)-Tyr-NHCH₂(CH₂)₁₆CH₃  (3f)

按照实施例30的方法，1.914g(6mmol)N^α-Boc-N^G-Arg(NO₂)与2.16g(4.6 mmol)HCl·Tyr-NH-CH₂(CH₂)₁₆CH₃反应，得标题化合物1.74g，为无色固体，产 率52％.Mp 108℃，ESI-MS(m/z)：756.4[M+ Na]⁺.IR(KBr)：3318.16，2934.39，2344.03，1648.16，1529.94，1262.19，678.71. ¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)：δ/ppm＝9.14(s，1H)，8.48(s，1H)，7.91(s，1H)， 7.82(m，1H)，7.72-7.69(d，J＝9Hz，1H)，7.21-7.19(m，1H)，7.00(m，1H)，6.96 -6.94(d，J＝6Hz，2H)，6.63-6.60(d，J＝9Hz，2H)，4.37-4.31(m，1H)，4.14- 4.08(Q，1H)，3.18-3.16(m，2H)，3.07-2.98(m，2H)，2.95-2.91(m，1H)，2.84- 2.67(m，1H)，1.38(m，15H)，1.22(m，30H)，0.86-0.82(t，J＝6.0Hz，3H).

实施例36制备N^α-Boc-N^G-Arg(NO₂)-Tyr-OCH₂(CH₂)₆CH₃  (3g)

按照实施例30的方法，1.914g(6mmol)N^α-Boc-N^G-Arg(NO₂)与1.64g(4.98 mmol)HCl·Tyr-O-CH₂(CH₂)₆CH₃反应，得标题化合物1.4g，为无色固体，产率47％. Mp 55℃，ESI-MS(m/z)：617.5[M+Na]⁺.IR(KBr)： 3326.55，2940.62，1652.29，1523.28，1262.36，574.71.¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)： δ/ppm＝9.24(s，1H)，8.13-8.11(d，J＝6Hz，1H)，7.00-6.97(d，J＝9Hz，2H)， 6.86-6.83(d，J＝9Hz，1H)，6.66-6.63(d，J＝9Hz，2H)，4.38-4.34(t，J＝6Hz，1 H)，3.97-3.93(t，J＝6Hz 3H)，3.11(s，2H)，2.86-2.84(m，2H)，1.62-1.58(m，2 H)，1.57-1.45(m，4H)，1.37(s，9H)，1.23(s，10H)，0.88-0.84(t，J＝6.0Hz，3H).

实施例37制备N^α-Boc-N^G-Arg(NO₂)-Tyr-OCH₂(CH₂)₈CH₃  (3h)

按照实施例30的方法，2.105g(6.6mmol)N^α-Boc-N^G-Arg(NO₂)与2.2g(6.15 mmol)HCl·Tyr-OCH₂(CH₂)₈CH₃反应，得标题化合物2.0g，为微黄色固体，产率 49％.Mp 65℃，ESI-MS(m/z)：645.6[M+Na]⁺. IR(KBr)：3328.67，2934.64，1648.66，1520.60，1263.29，566.41.¹H-NMR(300MHz， DMSO-d₆)：δ/ppm＝9.24(s，1H)，8.13-8.10(d，J＝9Hz，1H)，7.00-6.97(d，J＝9 Hz，2H)，6.86-6.83(d，J＝9Hz，2H)，6.66-6.63(d，J＝9Hz，2H)，4.38-4.34(t， J＝6Hz，1H)，3.97-3.93(t，J＝6Hz 3H)，3.11(s，2H)，2.86-2.84(m，2H)，1.57- 1.46(m，6H)，1.37(s，9H)，1.23(s，14H)，0.87-0.83(t，J＝6.0Hz，3H).

实施例38制备N^α-Boc-N^G-Arg(NO₂)-Tyr-OCH₂(CH₂)₁₀CH₃  (3i)

按照实施例30的方法，1.194g(6mmol)N^α-Boc-N^G-Arg(NO₂)与1.3g(3.37 mmol)HCl·Tyr-OCH₂(CH₂)₁₀CH₃反应，得标题化合物1.05g，为无色固体，产率48％. Mp 60℃，ESI-MS(m/z)：673.8[M+Na]⁺.IR (KBr)：3325.14，2932.24，1650.58，1524.25，1263.84，566.08.¹H-NMR(300MHz， DMSO-d₆)：δ/ppm＝9.23(s，1H)，8.12-8.09(d，J＝9Hz，1H)，7.00-6.97(d，J＝9 Hz，2H)，6.85-6.82(d，J＝9Hz，2H)，6.66-6.63(d，J＝9Hz，2H)，4.38-4.34(t，J ＝6Hz，1H)，3.97-3.93(t，J＝6Hz 3H)，3.11(s，2H)，2.86-2.84(m，2H)，1.57- 1.46(m，6H)，1.37(s，9H)，1.23(s，18H)，0.87-0.83(t，J＝6.0Hz，3H).

实施例39制备N^α-Boc-N^G-Arg(NO₂)-Tyr-OCH₂(CH₂)₁₂CH₃  (3j)

按照实施例30的方法，1.76g(5.52mmol)N^α-Boc-N^G-Arg(NO₂)与2.1g(5.08 mmol)HCl·Tyr-OCH₂(CH₂)₁₂CH₃反应，得标题化合物1.04g，产率32％.Mp 61℃， ESI-MS(m/z)：679.8[M+H]⁺.IR(KBr)： 3325.27，2933.53，1652.46，1524.26，1262.52，571.07.¹H-NMR(300MHz， DMSO-d₆)：δ/ppm＝9.23(s，1H)，8.51(s，1H)，8.11-8.09(d，J＝6Hz，1H)，6.99- 6.96(d，J＝9Hz，2H)，6.85-6.82(d，J＝9Hz，1H)，6.66-6.63(d，J＝9Hz，2H)， 4.39-4.35(t，J＝6Hz，1H)，3.97-3.93(t，J＝6Hz，3H)，3.11(s，2H)，2.86-2.84 (m，2H)，1.57(m，2H)，1.46(m，4H)，1.37(s，9H)，1.23(s，22H)，0.87-0.83(t，J＝ 6.0Hz，3H).

实施例40制备N^α-Boc-N^G-Arg(NO₂)-Tyr-OCH₂(CH₂)₁₄CH₃  (3k)

按照实施例30的方法，1.837g(5.76mmol)N^α-Boc-N^G-Arg(NO₂)与1.94g (4.39mmol)HCl·Tyr-OCH₂(CH₂)₁₄CH₃反应，得标题化合物1.8g，为无色固体， 产率58％.Mp 64.7℃，ESI-MS(m/z)：707.9[M+ H]⁺.IR(KBr)：3322.96，2933.28，2855.09，1659.90，1519.15，1264.00，569.82. ¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)：δ/ppm＝9.22(s，1H)，8.51(s，1H)，8.11-8.08(d，J ＝9Hz，1H)，6.99-6.96(d，J＝9Hz，2H)，6.85-6.82(d，J＝9Hz，1H)，6.66-6.63 (d，J＝9Hz，2H)，4.39-4.35(m，1H)，3.97-3.93(t，J＝6Hz，3H)，3.11(s，2H)， 2.86-2.85(m，2H)，1.58(m，2H)，1.46(m，4H)，1.38(s，9H)，1.23(s，26H)，0.87- 0.83(t，J＝6.0Hz，3H).

实施例41制备N^α-Boc-N^G-Arg(NO₂)-Tyr-OCH₂(CH₂)₁₆CH₃  (3l)

按照实施例30的方法，2.1g(6.58mmol)N^α-Boc-N^G-Arg(NO₂)与2.55g(5.44 mmol)HCl·Tyr-OCH₂(CH₂)₁₆CH₃反应，得标题化合物1.9g，为无色固体，产率48％. Mp 72℃，ESI-MS(m/z)：736.3[M+H]⁺.IR (KBr)：3323.01，2925.30，2854.27，1655.84，1518.10，1262.25，1126.54，567.18. ¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)：δ/ppm＝9.23(s，1H)，8.51(s，1H)，8.12-8.09(d，J ＝9Hz，1H)，6.99-6.96(d，J＝9Hz，2H)，6.86-6.83(d，J＝9Hz，1H)，6.66-6.63 (d，J＝9Hz，2H)，4.39-4.35(t，J＝6Hz，1H)，3.97-3.93(t，J＝6Hz，3H)，3.11(s， 2H)，2.98-2.89(m，2H)，1.58(m，2H)，1.45(m，4H)，1.37(s，9H)，1.23(m，30H)， 0.87-0.83(t，J＝6.0Hz，3H).

实施例42制备Arg-Tyr

取1.8g(3.63mmol)N^α-Boc-N^G-Arg(NO₂)-OMe于反应瓶中，加入适量甲醇溶 解，冰浴搅拌条件下缓慢加入1N NaOH水溶液至pH＝12，冰浴下搅拌反应2h。 TLC监测Boc-Arg(NO₂)-Tyr-OMe消失后，用饱和KHSO₄调节反应液pH为7，蒸 去甲醇，再将反应液pH调节为2，用乙酸乙酯萃洗反应液三次，得到的乙酸乙酯 层用饱和NaCl洗涤三次，随后用无水硫酸钠干燥过夜。滤除硫酸钠，旋除乙酸乙 酯得Boc-Arg(NO₂)-Tyr 1.2g，为无色固体。

将800mg(1.66mmol)N^α-Boc-N^G-Arg(NO₂)-Tyr用10ml CH₃OH溶解，再加入 240mg Pd/C(5％)，减压排出反应瓶中的空气，通入氢气置换，反复置换三次后， 通氢气室温搅拌反应，直至TLC显示Boc-Arg(NO₂)-Tyr消失。停止反应，滤除Pd/C， 滤液减压浓缩至干，得Boc-Arg-Tyr 704mg，为无色固体。

取704mg(1.61mmol)N^α-Boc-N^G-Arg-Tyr溶于适量乙酸乙酯，加入约20ml 4N 盐酸乙酸乙酯液，室温搅拌3小时，TLC显示原料点消失。反应混合液在室温下 减压浓缩，残留物再用乙酸乙酯溶解并室温下浓缩，如此反复5次；然后向浓缩 物中加入乙醚，室温下减压浓缩，如此反复5次，直至除净游离的氯化氢，得标 题化合物480mg，为白色固体，产率59％.Mp 123-124℃，ESI-MS(m/z)：338.2[M+H]⁺.IR(KBr)：3174.85，1665.97，1513.64， 1233.75，826.70，565.01.¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)：δ/ppm＝9.38(s，1H)，9.17- 9.15(m，1H)，8.98-8.95(m，1H)，8.42-8.38(m，1H)，7.95-7.91(m，1H)，7.58- 7.53(m，1H)，7.42-7.39(m，1H)，7.25-7.22(m，1H)，7.09-7.06(d，J＝9Hz，2H)， 6.69-6.67(d，J＝6Hz，2H)，4.39-4.35(dd，J＝3Hz，J＝9Hz，1H)，3.88-3.86(m， 1H)，3.16(m，2H)，3.05-2.84(m，2H)，1.77-1.76(m，2H)，1.56(m，2H).

实施例43制备Arg-Tyr-NHCH₂(CH₂)₆CH₃  (5a)

取430mg(0.73mmol)N^α-Boc-N^G-Arg(NO₂)-Tyr-NHCH₂(CH₂)₆CH₃溶于适量乙 酸乙酯，加入约15ml 4N盐酸乙酸乙酯液，室温搅拌3小时，TLC显示原料点消 失。反应混合液在室温下减压浓缩，残留物再用乙酸乙酯溶解并室温下浓缩，如 此反复5次；然后向浓缩物中加入乙醚，室温下减压浓缩，如此反复5次，直至 除净游离的氯化氢，得标题化合物320mg，为无色固体90％.Mp 126-127℃， ESI-MS(m/z)：449.4[M+H]⁺.IR(KBr)：3182.43， 2936.06，1656.07，1514.07，1239.21，567.11.¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)：δ/ppm＝ 9.34(s，1H)，8.80-8.77(d，J＝9Hz，1H)，8.44-8.43(d，J＝3Hz，1H)，8.39-8.38 (m，1H)，8.10(s，1H)，7.92(s，1H)，7.62-7.59(m，1H)，7.51-7.40(m，1H)，7.29- 7.23(m，1H)，7.07-7.04(d，J＝9Hz，2H)，6.68-6.65(d，J＝9Hz，2H)，4.37-4.36 (m，1H)，3.82(s，1H)，3.13-3.02(m，3H)，2.93-2.88(m，1H)，2.83-2.72(m，2H)， 1.78-1.76(m，2H)，1.54-1.51(m，2H)，1.31-1.27(m，2H)，1.22(s，9H)，0.87- 0.83(t，J＝6.0Hz，3H).

实施例44制备Arg-Tyr-NHCH₂(CH₂)₈CH₃  (5b)

按照实施例43的方法，以800mg(1.29mmol)N^α-Boc-N^G-Arg(NO₂)-Tyr-NH -CH₂(CH₂)₈CH₃为原料，得标题化合物620mg，为无色固体，产率94％.Mp 127-128 ℃，ESI-MS(m/z)：477.5[M+H]⁺.IR(KBr)： 3101.92，2932.95，1657.55，1515.14，1357.76，1239.89，564.88.¹H-NMR(300MHz， DMSO-d₆)：δ/ppm＝9.34(s，1H)，8.79-8.76(d，J＝9Hz，1H)，8.43-8.41(d，J＝6 Hz，1H)，8.38-8.36(m，1H)，8.12-8.08(t，J＝6Hz，1H)，7.91(m，1H)，7.51(m，2 H)，7.07-7.04(d，J＝9Hz，2H)，6.68-6.65(d，J＝9Hz，2H)，4.40-4.34(m，1H)， 3.82-3.81(m，1H)，3.13-3.09(m，2H)，3.07-3.02(m，1H)，2.94-2.87(m，1H)， 2.83-2.71(m，2H)，1.78-1.73(m，2H)，1.54-1.49(m，2H)，1.32-1.28(m，2H)， 1.27(s，10H)，0.86-0.82(t，J＝6.0Hz，3H).

实施例45制备Arg-Tyr-NHCH₂(CH₂)₁₀CH₃  (5c)

按照实施例43的方法，以700mg(1.08mmol)N^α-Boc-N^G-Arg(NO₂)-Tyr-NH -CH₂(CH₂)₁₀CH₃为原料，得标题化合物520mg，为无色固体，产率89％.Mp 132- 133℃，ESI-MS(m/z)：505.5[M+Na]⁺.IR(KBr)： 3186.92，2931.65，1656.99，1535.35，1472.93，1241.65，821.43，569.81.¹H-NMR(300 MHz，DMSO-d₆)：δ/ppm＝9.34(s，1H)，8.80-8.77(d，J＝9Hz，1H)，8.44-8.42(d， J＝6Hz，1H)8.39-8.38(m，1H)，8.11(m，1H)，7.92(s，1H)，7.50(m，1H)，7.54- 7.42(m，1H)，7.29-7.25(m，1H)，7.07-7.04(d，J＝9Hz，2H)，6.68-6.65(d，J＝9 Hz，2H)，4.38-4.34(m，1H)，3.82(s，1H)，3.13-3.03(m，3H)，2.92-2.86(Q，J＝6 Hz，1H)，2.83-2.72(m，2H)，1.78-1.76(m，2H)，1.51(m，2H)，1.31-1.27(m，2H)， 1.22(s，9H)，0.87-0.83(t，J＝6.0Hz，3H).

实施例46制备Arg-Tyr-NHCH₂(CH₂)₁₂CH₃  (5d)

按照实施例43的方法，以540mg(0.8mmol)N^α-Boc-N^G-Arg(NO₂)-Tyr-NH -CH₂(CH₂)₁₂CH₃为原料，得标题化合物340mg，为无色固体，产率75％.Mp 138-139 ℃，ESI-MS(m/z)：533.5[M+H]⁺.IR(KBr)： 3254.80，2930.14，1657.35，1532.19，1240.84，686.11.¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)： δ/ppm＝9.36(s，1H)，8.78-8.76(d，J＝6Hz，1H)，8.53-8.50(m，1H)，8.41-8.37 (m，1H)，8.10(m，1H)，7.91(s，1H)，7.44-7.14(m，1H)，7.07-7.04(d，J＝9Hz，2 H)，7.02(s，1H)，6.68-6.65(d，J＝9Hz，2H)，4.38-4.36(m，1H)，3.15(m，2H)， 3.13-3.11(m，1H)，2.95-2.88(m，1H)，2.86-2.72(m，2H)，1.78-1.76(m，2H)， 1.51(m，2H)，1.33-1.29(m，2H)，1.23(s，22H)，0.86-0.82(t，J＝6.0Hz，3H).

实施例47制备Arg-Tyr-NHCH₂(CH₂)₁₄CH₃(5e)

按照实施例43的方法，以400mg(0.57mmol)N^α-Boc-N^G-Arg(NO₂)-Tyr-NH -CH₂(CH₂)₁₄CH₃为原料，得标题化合物300mg，为无色固体，产率88％.Mp 141- 142℃，ESI-MS(m/z)：561.6[M+H]⁺.IR(KBr)： 3171.12，2928.33，1656.44，1514.55，1410.90，1241.34，821.01，572.80.¹H-NMR(300 MHz，DMSO-d₆)：δ/ppm＝9.31(s，1H)，8.78-8.76(d，J＝6Hz，1H)，8.43-8.41(d， J＝6Hz，1H)，8.38-8.37(d，J＝3Hz，1H)，8.12-8.08(t，J＝6Hz，1H)，7.91(s，1 H)，7.63-7.57(t，J＝9Hz，1H)，7.46-7.40(t，J＝9Hz，1H)，7.26-7.20(t，J＝9Hz， 1H)，7.07-7.04(d，J＝9Hz，2H)，6.68-6.65(d，J＝9Hz，2H)，4.39-4.34(dd，J＝ 6Hz，J＝9Hz，1H)，3.82-3.81(m，1H)，3.13-3.03(m，3H)，2.94-2.86(m，1H)， 2.83-2.71(m，2H)，1.78-1.73(m，2H)，1.54-1.49(m，2H)，1.30-1.29(m，2H)， 1.22(s，9H)，0.86-0.82(t，J＝6.0Hz，3H).

实施例48制备Arg-Tyr-NHCH₂(CH₂)₁₆CH₃  (5f)

按照实施例43的方法，以500mg(0.69mmol)N^α-Boc-N^G-Arg(NO₂)-Tyr-NH -CH₂(CH₂)₁₆CH₃为原料，得标题化合物340mg，为无色固体，产率79％.Mp 143- 144℃，ESI-MS(m/z)：589.7[M+H]⁺.IR(KBr)： 3303.15，2926.49，1653.90，1536.20，1237.58，820.90，687.79，558.56.¹H-NMR(300 MHz，DMSO-d₆)：δ/ppm＝8.78-8.75(d，J＝9Hz，1H)，8.44-8.42(d，J＝6Hz，1H)， 8.39-8.35(m，2H)，8.10-8.06(t，J＝6Hz，1H)，7.93(m，1H)，7.53(m，1H)，7.45- 7.25(m，1H)，7.07-7.04(d，J＝9Hz，2H)，6.68-6.65(d，J＝9Hz，2H)，4.40-4.34 (m，1H)，3.82-3.81(m，1H)，3.13(m，2H)，3.07-3.03(m，1H)，2.94-2.91(m，1 H)，2.86-2.77(m，2H)，1.79-1.74(m，2H)，1.58-1.49(m，2H)，1.31-1.27(m，2 H)，1.22(s，30H)，0.86-0.82(t，J＝6.0Hz，3H).

实施例49制备Arg-Tyr-OCH₂(CH₂)₆CH₃(5g)

按照实施例43的方法，以750mg(1.26mmol)N^α-Boc-N^G-Arg(NO₂)-Tyr-OC -H₂(CH₂)₆CH₃为原料，得标题化合物510mg，为无色固体，产率83％.Mp 109-110 ℃，ESI-MS(m/z)：450.4[M+H]⁺.IR(KBr)： 3194.15，2936.20，1660.13，1524.89，1358.14，1231.17，833.14，661.54.¹H-NMR(300 MHz，DMSO-d₆)：δ/ppm＝9.41(s，1H)，9.19-9.17(d，J＝6Hz，2H)，8.46-8.44(d， J＝6Hz，1H)，8.41-8.39(m，2H)，8.00(s，1H)，7.81(s，1H)，7.07-7.05(d，J＝6 Hz，2H)，6.70-6.67(d，J＝9Hz，2H)，4.42-4.34(m，1H)，4.01-3.96(m，2H)，3.94 -3.89(m，1H)，3.18-3.14(t，J＝6Hz，2H)，2.92-2.89(d，J＝9Hz，2H)，1.80-1.74 (m，2H)，1.60-1.54(m，2H)，1.48-1.44(m，2H)，1.23(s，10H)，0.87-0.83(t，J＝ 6.0Hz，3H).

实施例50制备Arg-Tyr-OCH₂(CH₂)₈CH₃  (5h)

按照实施例43的方法，以800mg(1.29mmol)N^α-Boc-N^G-Arg(NO₂)-Tyr-OC -H₂(CH₂)₈CH₃为原料，得标题化合物570mg，为无色固体，产率86％.Mp 112-113 ℃，ESI-MS(m/z)：478.5[M+H]⁺.IR(KBr)： 3340.48，3191.91，2843.74，1669.32，1359.81，1238.80，834.75，671.82.¹H-NMR(300 MHz，DMSO-d₆)：δ/ppm＝9.22-9.20(d，J＝6Hz，2H)，8.49-8.47(d，J＝6Hz，1H)， 8.43-8.39(m，2H)，8.00(s，1H)，7.54(s，1H)，7.07-7.04(d，J＝9Hz，2H)，6.71- 6.68(d，J＝9Hz，2H)，4.42-4.35(m，1H)，4.03-3.91(m，3H)，3.17(s，2H)，2.92- 2.89(d，J＝9Hz，2H)，1.80-1.76(m，2H)，1.60-1.55(m，2H)，1.48-1.46(m，2H)， 1.23(s，14H)，0.86-0.82(t，J＝6.0Hz，3H).

实施例51制备Arg-Tyr-OCH₂(CH₂)₁₀CH₃  (5i)

按照实施例43的方法，以500mg(0.77mmol)N^α-Boc-N^G-Arg(NO₂)-Tyr-OC -H₂(CH₂)₁₀CH₃为原料，得标题化合物320mg，为无色固体，产率77％.Mp 116-117 ℃，ESI-MS(m/z)：506.4[M+H]⁺.IR(KBr)： 3401.62，3135.64，1660.13，1527.30，1222.44，826.64，565.08.¹H-NMR(300MHz， DMSO-d₆)：δ/ppm＝9.38(s，1H)，9.19-9.160(d，J＝9Hz，2H)，8.46-8.44(d，J＝6 Hz，1H)，8.41-8.39(m，2H)，7.97(m，1H)，7.61-7.44(m，2H)，7.07-7.04(d，J＝9 Hz，2H)，6.70-6.67(d，J＝9Hz，2H)，4.42-4.37(m，1H)，4.08-4.02(m，2H)， 3.98-3.89(m，2H)，3.18-3.14(t，J＝6Hz，2H)，2.92-2.89(d，J＝9Hz，2H)，1.79- 1.75(m，2H)，1.59-1.54(m，2H)，1.51-1.46(m，2H)，1.23(s，18H)，0.87-0.83(t， J＝6.0Hz，3H).

实施例52制备Arg-Tyr-OCH₂(CH₂)₁₂CH₃  (5j)

按照实施例43的方法，以580mg(0.86mmol)N^α-Boc-N^G-Arg(NO₂)-Tyr-OC -H₂(CH₂)₁₂CH₃为原料，得标题化合物430mg，为无色固体，产率88％.Mp 139-140 ℃，ESI-MS(m/z)：534.4[M+H]⁺.IR(KBr)： 3336.49，3171.37，2932.91，1658.63，1504.92，1218.19.¹H-NMR(300MHz， DMSO-d₆)：δ/ppm＝9.34(s，1H)，9.20-9.18(d，J＝6Hz，1H)，8.38(s，3H)，8.01- 7.97(t，J＝6Hz J＝6Hz，1H)，7.80(m，1H)，7.53(m，1H)，7.07-7.05(d，J＝6Hz， 2H)，6.70-6.67(d，J＝9Hz，2H)，4.42-4.36(Q，J＝6Hz 1H)，4.04-3.97(m，2H)， 3.94-3.88(m，1H)，3.18-3.16(m，2H)，2.92-2.89(d，J＝9Hz，2H)，1.80(m，2H)， 1.59-1.57(m，2H)，1.47(m，2H)，1.23(s，22H)，0.87-0.83(t，J＝6.0Hz，3H).

实施例53制备Arg-Tyr-OCH₂(CH₂)₁₄CH₃  (5k)

按照实施例43的方法，以800mg(1.13mmol)N^α-Boc-N^G-Arg(NO₂)-Tyr-OC -H₂(CH₂)₁₄CH₃为原料，得标题化合物520mg，为无色固体，产率77％.Mp 143-144 ℃，ESI-MS(m/z)：562.5[M+H]⁺.IR(KBr)： 3184.48，2929.63.1721.03.1661.55，1513.36，1357.11，1227.39，825.79，570.18.

¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)：δ/ppm＝9.22-9.19(d，J＝9Hz，1H)，8.48-8.47(d， J＝3Hz，1H)，8.43-8.42(m，1H)，8.39(s，1H)，8.00(m，1H)，7.55(s，1H)，7.22(m， 1H)，7.07-7.04(d，J＝9Hz，2H)，6.70-6.67(d，J＝9Hz，2H)，4.42-4.35(m，1H)， 4.07-3.96(m，2H)，3.94-3.91(m，1H)，3.17(s，2H)，2.91-2.89(d，J＝6Hz，2H)， 1.80-1.78(m，2H)，1.60-1.57(m，2H)，1.46(m，2H)，1.22(s，26H)，0.86-0.82(t， J＝6.0Hz，3H).

实施例54制备Arg-Tyr-OCH₂(CH₂)₁₆CH₃  (5l)

按照实施例43的方法，以850mg(1.17mmol)N^α-Boc-N^G-Arg(NO₂)-Tyr-OC -H₂(CH₂)₁₆CH₃为原料，得标题化合物640mg，为无色固体，产率87％.Mp 146-147 ℃，ESI-MS(m/z)：590.6[M+H]⁺.IR(KBr)： 3186.89，2928.04，1739.68，1661.65，1513.79，1356.93，1225.64，1111.31，825.40， 565.51.¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)：δ/ppm＝9.38(s，1H)，9.19-9.17(d，J＝6Hz， 2H)，8.47-8.45(d，J＝6Hz，1H)，8.42-8.41(m，1H)，8.00(m，1H)，7.63-7.57(t， J＝9Hz，1H)，7.46-7.40(t，J＝9Hz，1H)，7.30-7.23(m，1H)，7.07-7.04(d，J＝9 Hz，2H)，6.70-6.68(d，J＝6Hz，2H)，4.42-4.37(m，1H)，4.07-4.00(m，2H)，3.98 -3.93(m，1H)，3.26(m，2H)，2.92-2.89(d，J＝9Hz，2H)，1.80-1.75(m，2H)， 1.56-1.55(m，2H)，1.49-1.46(m，2H)，1.23(s，30H)，0.86-0.82(t，J＝6.0Hz，3 H).

试验例1本发明的化合物5a-l的镇痛活性实验

1)受试化合物：本发明的化合物5a-l

阳性对照品：阿司匹林；

2)实验动物：ICR小鼠，雄性，体重20±2g；每12只小鼠一组，空白及阳性对照 各一组。

3)剂量设置：阿司匹林165μmol/kg，Arg-Tyr 100μmol/kg，5a-l 10μmol/kg，均 单次灌胃。

药物配制：生理盐水(NS)溶解。

4)给药方案：0.2ml溶液/鼠。

5)动物模型

ICR雄性小鼠使用前静息1天，操作间保持室内温度22℃，每组小鼠12只。基 础痛阈的测定是在开始时，先测三次，每次间隔5分钟，取其平均值为基础痛阈。 每次试验设生理盐水组为平行对照。

6)痛阈提高率的测定

灌胃后每30min测定一次痛阈值，共测定6组180min。痛阈改变以下列公式表 示：痛阈提高％＝[(给药后痛阈-基础痛阈)/基础痛阈]×100％。

7)统计方法

本实验数据统计均采用t检验和方差分析，以X±SD表示。

8)实验结果

受试化合物热辐射甩尾实验痛阈提高结果如表1所示。在10μmol/kg剂量下受试化 合物经灌胃给药后对疼痛有显著的抑制作用。

表1化合物5a-l的镇痛作用

Aspirin剂量：165μmol/kg；Arg-Tyr剂量：100μmol/kg；5a-l剂量：10μmol/kg. a)与NS组比较P＜0.01；b)与NS组比较P＜0.05；c)与NS组比较P＜0.01，与 Arg-Tyr组比较P＜0.01；d)与NS组比较P＜0.01，与Arg-Tyr组比较P＜0.05；e)与 NS组比较P＜0.01，与Arg-Tyr组比较P＜0.01，与Aspirin比较P＜0.01；f)与NS 组比较P＜0.01，与Arg-Tyr组比较P＜0.01，与Aspirin比较P＜0.05；g)与NS组 比较P＜0.01，与Arg-Tyr组比较P＜0.05，与Aspirin比较P＜0.01；h)与NS组比 较P＜0.01，与Aspirin比较P＜0.01；i)与NS组比较P＜0.01，与Aspirin比较P ＜0.05；j)与NS组比较P＜0.05；与Arg-Tyr组比较P＜0.05

试验例2本发明化合物5c，5l的镇痛活性剂量和效应的关系

试验方法同试验例1，受试化合物为5c，5l；将受试化合物分别按10μmol/kg，1 μmol/kg和0.1μmol/kg剂量，均采用灌胃单次给药。试验结果见表2。结果表明， 本发明化合物5c，5l的镇痛活性呈现剂量依赖关系。

表2不同剂量5c，5l的镇痛活性

n＝12；受试化合物5c，5l的剂量分别为H＝10μmol/kg，M＝1μmol/kg或L＝ 0.1μmol/kg.a)与NS组比较p＜0.01；b)与NS组比较p＜0.05；c)与NS组比较p ＜0.01，与M组比较p＜0.01；d)与NS组比较p＜0.01，与1μmol/kg组比较p ＜0.05.

实验例3本发明化合物5a-l的抗炎活性评价

化合物5a-l或阿司匹林用生理盐水配成溶液，雄性ICR小鼠(20±2g)随机分 为空白对照组、阿司匹林组、Arg-Tyr及5a-l组，每组12只小鼠。分别灌胃给予 化合物5a-l(剂量为10μmol/kg)或Arg-Tyr(剂量为100μmol/kg)或阿司匹林(剂 量为165μmol/kg)溶液0.2ml/只，给药30分钟后，往小白鼠的左耳外廓涂0.03ml 二甲苯。2小时后将小白鼠颈椎脱臼处死、两耳用直径7mm的打孔器取圆形耳片、 称重、把两圆耳片的重量差作为肿胀度。结果列入表3。实验结果表明，本发明的 化合物5a-l具有明确的抗炎活性

表3化合物5a-l对小鼠耳肿胀的抑制作用

阿司匹林剂量为165μmol/kg，Arg-Tyr剂量为100μmol/kg；5m-x剂量10μmol/kg；

n＝12，a)与NS组比较P＜0.01；b)与NS组比较P＜0.01，与Aspirin组比较p＜ 0.05；c)与NS组比较P＜0.01，与Arg-Tyr组比较p＜0.05；d)与NS组比较P＜0.01， 与Aspirin组比较p＜0.05，与Arg-Tyr组比较p＜0.05

实验例4不同剂量5c，5l的抗炎活性评价

按照实验例3的方法，5c，5l均按10μmol/kg、1μmol/kg、0.1μmol/kg三种剂 量给雄性ICR小鼠灌胃，两圆耳片的重量差列入表4。结果表明本发明的化合物 5c，5l的抗炎活性具有剂量依赖性。

表4不同剂量5c，5l对小鼠耳肿胀的抑制作用

a)与NS组比较p＜0.01；b)与NS组比较p＜0.01，与1μmol/kg组比较p ＜0.01.

以上所述的实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明 的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本 发明的技术方案作出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护 范围内。