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法律状态
2023-03-24
未缴年费专利权终止 IPC(主分类):C07C 251/20 专利号:ZL2012101146285 申请日:20120418 授权公告日:20140423
专利权的终止
2014-04-23
授权
授权
2012-11-07
实质审查的生效 IPC(主分类):C07C251/20 申请日:20120418
实质审查的生效
2012-09-12
公开
公开
技术领域
本发明涉及一种紫外线吸收物质(类菌胞素氨基酸),特别是涉 及一种紫菜类菌胞素氨基酸(Porphyra-334)的提取制备方法。
背景技术
紫菜是我国的一种重要经济藻类,年产75万吨,紫菜中含有多种 营养成分,深受消费者喜爱。紫菜是红藻,其中含有多种类菌胞素氨 基酸,而且含量比较丰富。类菌胞素氨基酸(MAAs)是海藻中含有的 一类小分子的紫外线吸收物质,为水溶性化合物,由于共轭双键和侧 链上不同活性基团的影响,在310-360nm的紫外光区具有吸收能力,它 们具有极高的摩尔吸光系数,是最强的天然紫外线吸收物质。这类化 合物在食品、化妆品及其他产业中具有很大的潜在工业应用价值。 Porphyra-334是类菌胞素氨基酸的一种,在334nm处有最大吸收值,摩 尔吸收光系数为ε334=4.23×104M1cm1,Porphyra-334在海藻中分布很 广,也是紫菜中主要的类菌胞素氨基酸。
目前从海藻中制备类菌胞素氨基酸(Porphyra-334)主要有两种 方法,一种是通过极性溶液提取之后采用高效液相色谱法(HPLC)制 备,一种是采用甲醇溶液提取后,经过简单纯化后,再使用Sephadex G10、DEAE Sephadex A-25、Narit A、CM Sephadex C-25等多种硅胶柱 进行纯化,这两种方法得率低,产量很少,适合在实验室中制备纯化 Porphyra-334,但都不能应用于大量的制备类菌胞素氨基酸 (Porphyra-334)。
发明内容
本发明的目的是提供一种紫菜类菌胞素氨基酸的制备方法,即一 种低成本大量制备Porphyra-334的方法,从而弥补现有技术的不足。
本发明的方法,包括如下的步骤:
1)首先将紫菜进行粉碎,然后加入到1~10倍紫菜重量的、pH为1~ 5的盐酸水溶液中进行浸泡;浸泡结束后,将浸泡液进行过滤得到滤液; 并将残渣用1~5倍残渣重量的、pH为1~5的盐酸水溶液进行浸泡清洗、 过滤,过滤后的清洗液和滤液合并得到清液;
2)在步骤1)的清液中加入体积分数为50~100%的乙醇溶液进行 沉淀,并进行过滤;再将上清液低温浓缩后,得到类菌胞素氨基酸粗 品溶液;
3)将步骤2)制备的粗品溶液通过阴离子交换树脂进行吸附,吸 附结束后,采用NaOH溶液进行洗脱;将洗脱液低温浓缩后,再通过阳 离子交换树脂进行吸附;吸附结束后,用pH2~5的盐酸溶液进行洗脱, 最后将洗脱液低温干燥后得到类菌胞素氨基酸Porphyra-334。
上述步骤1)中用1~10倍(重量比)的pH1~5的盐酸水溶液进行 浸泡,是浸泡2个小时。
上述步骤3)中将粗品溶液通过阴离子交换树脂进行吸附,是将粗 品溶液在4~40℃通过阴离子交换树脂以50~500mL/h流速进行吸附。
用0.01N的NaOH溶液进行洗脱,洗脱流速为1~10mL/min。
上述步骤3)中的通过阳离子交换树脂进行吸附,是在4~40℃通 过阳离子交换树脂以50~500mL/h的流速进行吸附,吸附结束后,用 pH2~5的盐酸溶液洗脱,洗脱流速为1~10mL/min。
本发明采用工业大生产的离子交换树脂,通过控制类菌胞素氨基 酸在树脂上的吸附和解析过程,能够大量制备具有高纯度的类菌胞素 氨基酸Porphyra-334,能够满足工业生产的要求。
具体实施方式
实施例1:类菌胞素氨基酸(Porphyra-334)粗品提取
取20g的粉碎紫菜,用20g~200g(重量比)的pH1~5的盐酸水溶 液在20℃分别提取0.5、1、1.5、2、2.5、3、4小时,过滤,残渣(约 18g)用1~5倍(重量比18~90g)的pH1~5的盐酸水溶液清洗,过滤 后合并清液。在清液中加入清液体积5倍的50~100%的乙醇溶液沉淀, 过滤之后,清液经过低温浓缩,得到的类菌胞素氨基酸粗品溶液。
通过对类菌胞素氨基酸(Porphyra-334)的提取率的分析表明, 提取2小时已经基本提取完全,再延长提取时间,提取率没有明显变化。
实施例2:通过阴离子交换树脂进行纯化
取50mL的粗品溶液在4~40℃通过阴离子交换树脂D284(南开大学 化工厂产,也可以采用其它厂家的、不同型号的产品),以50~500mL/h 的流速进行吸附,吸附结束后,采用0.005、0.01、0.15、0.2、0.3、 0.4N的NaOH溶液进行洗脱,洗脱流速为1~10mL/min,洗脱液低温浓缩。
通过对类菌胞素氨基酸(Porphyra-334)在阴离子交换树脂的洗 脱率的分析表明,0.01N的NaOH溶液具有良好的洗脱效果,浓度低于 0.01N,洗脱效果不好,得率低;而NaOH溶液浓度过高,会引起类菌 胞素氨基酸(Porphyra-334)的破坏,反而降低了洗脱率。
实施例3:通过阳离子交换树脂进行纯化
取50mL的经过阴离子树脂的溶液,在4~40℃通过阳离子交换树脂 D113(南开大学化工厂产,也可以采用其它厂家的、不同型号的产品), 以50~500mL/h的流速进行吸附,吸附结束后,分别用pH 1、2、3、4的 盐酸溶液洗脱,洗脱流速为1~10mL/min,洗脱液体积为1~10倍。洗 脱液低温干燥得到类菌胞素氨基酸(Porphyra-334)。
通过对类菌胞素氨基酸(Porphyra-334)的洗脱率的分析,表明 用pH为2的盐酸水溶液洗脱效果最好。过高或过低都会降低类菌胞素氨 基酸Porphyra-334的得率。
对制备的类菌胞素氨基酸(Porphyra-334)的检测首先采用质谱 法进行鉴定:对制得的产品进一步用HPLC进行纯化,收集分离的334nm 处有吸收的组分,对它进行质谱分析,通过与类菌胞素氨基酸 (Porphyra-334)标准品比对,确定制得的产品中吸光成分是类菌胞 素氨基酸(Porphyra-334)。采用紫外分光光度法,通过与类菌胞素 氨基酸(Porphyra-334)标准品溶液比较,测出产品中类菌胞素氨基 酸(Porphyra-334)的纯度为85.4%。
本发明的提取方法及确定的最佳工艺条件,可以大量的低成本的 制备类菌胞素氨基酸(Porphyra-334),所制备的类菌胞素氨基酸 (Porphyra-334)可以用于化妆品中。
机译: 杀真菌组合物,其包含活性成分的至少三种组分:(a)一种或多种三唑类杀真菌剂,(b)一种或多种嗜球果伞素类杀真菌剂。和(c)一种或多种苯并咪唑类杀真菌剂;预防和/或抵抗植物中病原体或害虫损害的程序;及其作为植物农药的用途。
机译: 生产液体氨基酸的方法,用于联动和分批同时生产除一类谷氨酰胺或谷氨酸之外的至少三种纯正添加氨基酸,以及至少一种来自阿糖胺酸或天麻素氨基酸的一类氨基酸不分离每个氨基酸的变性花岗岩
机译: 治疗有效量的(a)(i)维生素c和/或硒和(ii)二十二碳六烯酸,二十碳五烯酸和十二碳五烯酸或其酯中的至少一种的用途和组合;或(b)(i)维生素c和/或硒,以及(iii)尿苷和胞苷,它们的盐,磷酸盐,酰基衍生物或酯中的一种或多种; (c)(i),(ii)及(iii)的组合;用于治疗有需要的人类患者的认知和/或记忆功能的治疗性组合物,以及(非治疗)增强有需要的健康人类患者的认知功能和/或记忆功能的方法。