包含他汀类药物的植物提取物及其制备技术和用途

摘要

提供了包含一种或多种他汀类药物且基本不含影响个体中药物的药物动力学的极性化合物的植物提取物。还提供了制备提取物的方法，其包括从包含一种或多种他汀类药物的植物材料中除去影响个体中药物的药物动力学的极性化合物的步骤。

说明书

技术领域

本发明一般涉及含他汀类药物的植物提取物。本发明还涉及获得 这类提取物的方法及其用途。

背景

草药辅助品为公知的且已应用于辅助传统饮食和医疗方案。通常 这类辅助品为提取物的形式，认为所述提取物提供了包括预防和治疗 疾病在内的健康和医疗益处。

已知用于制备提取物的许多植物合成了在维持人类健康方面有用 的化学品。然而，尽管增加了这类提取物的使用，但对植物药物相互 作用的了解仍处于初始阶段。对这类相互作用的了解的缺失能导致不 良反应，所述不良反应能危及生命或为最坏的情况，即致命。

此外，未完全确定这类提取物的准确组成，因为这类的许多植物 提取物可包含能不利地影响个体中药物动力学的化合物。

例如，常见的植物提取物为红曲米。该提取物具有许多用途，包 括食品着色以及作为米酒的成分。近来，红曲米提取物已用于降低酯 类和胆固醇水平。然而，红曲米的已知提取物包含大量的污染物。

因此，一种或多种这些污染物的去除将有利于增加消费者对提取 物的准确含量的信心以及向监管当局提供关于提取物组成的精确数 据。

亟需提供具有减少量的污染物的植物提取物，其克服或至少改善 一个或多个上述缺点。

亟需提供具有减少量的污染物的植物提取物，所述污染物对个体 中药物的药物动力学具有副作用。

概述

根据第一方面，提供了包含一种或多种他汀类药物且基本不含极 性化合物的植物提取物。

根据第二方面，提供了包含一种或多种他汀类药物且基本不含影 响个体中药物的药物动力学的极性化合物的植物提取物。

根据第三方面，提供了制备提取物的方法，其包括从植物材料中 除去极性化合物的步骤，其中所述植物材料包含一种或多种他汀类药 物。

根据第四方面，提供了制备植物提取物的方法，其包括从所述植 物提取物中除去影响个体中药物的药物动力学的一种或多种极性化合 物的步骤。

有利地，从植物提取物中除去一种或多种极性化合物基本上减少 了不利的或不需要的药物-草药相互作用。

本公开的方法的另一优点是提供了在植物提取物中的一致有效量 的一种或多种他汀类药物。

根据第五方面，提供了包含第一方面或第二方面的植物提取物以 及药物可接受的载体的组合物。

根据第六方面，提供了包含第一方面或第二方面的植物提取物以 及药物可接受的载体的剂型。

根据第七方面，提供了第一方面或第二方面的植物提取物在制备 用于治疗或预防高血脂的药物中的用途。

根据第八方面，提供了第一方面或第二方面的植物提取物在制备 用于降低个体中胆固醇的药物中的用途。

根据第九方面，提供了包含第一方面或第二方面的植物提取物以 及使用说明的包装的剂型。

根据第十方面，提供了第一方面或第二方面的植物提取物在制备 用于抑制个体中3-羟基-3-甲基戊二酰-辅酶A(HMG-CoA)还原酶的药 物中的用途。

根据第十一方面，提供了制备植物提取物的方法，其依次包括下 列步骤：

从植物材料中除去一种或多种毒素；

从植物材料中除去一种或多种极性化合物；

从植物材料中形成提取物。

定义

下列为一些可帮助理解本发明的描述的定义。这些旨在作为一般 定义且不应以任何方式将本发明的范围限制于这些单独的术语，而是 为了更好地理解下列描述所提出。

除非上下文另有需要或作出相反的具体声明，本文以单数形式引 用的本发明的整数、步骤或成分，步骤或成分清楚地包含所引用的整 数、步骤或成分的单数和复数形式二者。

在本说明书中，除非上下文另有需要，词语“包含(comprise)”或诸 如“包含(comprises)”或“包含(comprising)”的变体将理解为意味着包含 所述步骤或成分或整数或者步骤或成分或整数的组合，而不排除任何 其它的步骤或成分或整数或者成分或整数的组合。因此，在本说明书 的上下文中，术语“包含(comprising)”表示“主要包含，但不必须仅仅包 含”。

本领域技术人员应意识到本文所描述的发明易受变动和更改的影 响，除了具体描述的那些。应理解本发明包括所有这类变动和更改。 本发明还包括在本说明书中单独或共同地涉及或指出的所有步骤、特 征、组成和化合物，以及任何和所有的组合或任何两种或多种的所述 步骤或特征。

术语“药物动力学”被广泛解释为包括在人类或动物体中给予的药 物的作用。该术语特别地涉及药物吸收、分配、代谢和排泄；作用的 开始；效果的持续时间；生物转化；药物的代谢物的效能和排泄途径。

在本说明书的上下文中的术语“极性化合物(polar compound)”、“极 性化合物(polar compounds)”及其语法变体是指作为整体具有非零偶极 矩的植物提取物中的化合物，典型地为有机化合物。

在本说明书的上下文中的术语“天然存在的”是指在植物材料中天 然存在的诸如他汀类药物的化合物。

术语“植物材料”被广泛解释为包括植物领域、菌类领域和藻类的 所有成员。植物材料可包括植物材料的固体团或提取液。

在本公开的上下文中，术语“给药(administering)”及其包括“给药 (administer)”和“给药(administration)”的术语的变体包括通过适当方法 向有机体或表面接触、涂覆、递送或提供本发明的化合物或组合物。

在本公开的上下文中，术语“治疗”涉及任何和所有的用途，其以 任何方式治疗疾病状态或症状、预防疾病的形成或用其它方法预防、 阻碍、阻滞或改变疾病或其它不期望症状的发展。

在本说明书的上下文中，术语“治疗有效量”包括充足但无毒量的 本公开的化合物或组合物以提供期望的治疗效果。需要的精确量将根 据诸如治疗的物种、个体的年龄和一般的病情、治疗的病情的严重性、 给予的特定制剂、给药方式等因素在个体与个体间变化。因此，不可 能指定确切的“有效量”。然而，对于给定的情况，可以仅使用实验途 径由本领域技术人员确定适当的“有效量”。

在本说明书的上下文中，术语“个体”包括人类和社会、经济或研 究重要的任何物种的个体，其包括但不限于绵羊属动物、牛科动物、 马科动物、猪科动物、猫科动物、犬科动物、灵长目动物(包括人类和 非人类灵长目动物)、啮齿目动物、鼠科动物、山羊属动物、兔属动物 和鸟纲动物的成员。

本文所用的“剂型”是指适合作为用于待治疗的个体的单一剂量的 物理离散单位；计算包含预定量的植物提取物的各个单位以结合所需 的药物载体来产生期望的治疗效果。可以配制植物提取物以便以可接 受的剂量单位与合适的药物可接受的载体一起以有效量来便利且有效 地给药。当组合物包含辅助活性成分时，通过参考所述成分的常用给 药剂量和方式来确定剂量。

词语“药物可接受的载体”旨在包含溶剂、分散介质、涂层、抗菌 剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延缓剂(absorption delaying agent)等。这 类介质和试剂在药物活性物质中的用途在本领域中公知。除了任何常 规介质或试剂与化合物不相容，可预期它们在治疗组合物以及治疗和 预防的方法中的用途。

词语“基本上”不排除“完全地”，例如，“基本上不含”Y的组合物 可以完全不含Y。另外，组合物仍可含1％至10％的Y。若需要，可从 本发明的定义中忽略词语“基本上”。

如本文所用，在制剂组分浓度的上下文中的术语“约”通常表示规 定值的+/-5％，更通常表示规定值的+/-4％，更通常表示规定值的+/-3％， 更通常表示规定值的+/-2％，甚至更通常表示规定值的+/-1％，以及甚 至更通常表示规定值的+/-0.5％。

在本公开中，可能以范围形式公开某些实施方案。应理解范围形 式的描述仅为了便利和简洁，并且不应解释为对公开范围的范围的不 可改变的限制。因此，范围描述应认为已具体公开了所有可能的子范 围以及该范围内的单个数值。例如，诸如从1至6的范围描述应认为 已具体公开了诸如1至3、1至4、1至5、2至4、2至6、3至6等子 范围以及诸如1、2、3、4、5和6的该范围内的单个数值。这适用于 不考虑范围的幅度。

本文还可宽泛地和概括地描述某些实施方案。落在一般公开内容 内的各个较窄的种类和子种类也形成了本公开的一部分。这包括从一 般种类中除去任何主题的具有附带条件或相反限制的实施方案的一般 描述，而不管所删除的材料是否在本文具体详述。

任选实施方案的公开

现将公开包含一种或多种他汀类药物的植物提取物的示例性且非 限制性的实施方案。

植物提取物基本上不含影响个体中药物的药物动力学的极性化合 物。

在一个实施方案中，一种或多种他汀类药物为天然存在的他汀类 药物且可选自洛伐他汀、辛伐他汀、普伐他汀和美伐他汀。

优选地，一种或多种洛伐他汀选自一种或多种莫那呵啉。在优选 的实施方案中，一种或多种莫那呵啉选自莫那呵啉K、莫那呵啉J、 莫那呵啉L和莫那呵啉M。优选地，一种或多种莫那呵啉选自莫那呵 啉K和莫那呵啉J。在最优选的实施方案中，莫那呵啉为莫那呵啉K。

在另一个实施方案中，莫那呵啉K以每克植物提取物约0.01mg 至500mg、约0.1mg至400mg、约0.2mg至300mg、约0.2mg至 200mg、约0.2mg至100mg、约0.2mg至50mg、约0.2mg至25mg、 约0.2mg至10mg、约0.2mg至5mg和约0.2mg至2mg的量存在 于植物提取物中。优选地，莫那呵啉K以每克提取物0.2mg至1mg 的量存在于植物提取物中。

在另一实施方案中，植物提取物为微生物发酵的产物。优选地， 在微生物发酵中使用的微生物为紫红曲霉(Monascus purpureus)。或 者，在微生物发酵中使用的微生物选自红色红曲霉(Monascus rubber) 和丛毛红曲霉(Monascus pilosus)。

在一个实施方案中，从属于禾本科的植物中提取植物提取物。

在优选实施方方案中，植物为选自玉米、大米、小麦、大麦、高 粱、小米、燕麦、黑麦、黑小麦和荞麦的谷类植物。

或者，植物选自豆科。在优选实施方案中，植物为选自菜豆属的 豆科植物。优选地，豆科植物可选自菜豆(P.vulgaris)、P.filiformis、 红花菜豆(P.coccineus)、棉豆(P.lunatus)、P.maculatus和宽叶菜豆(P. acutifolius)。

在另一优选实施方案中，谷类植物为大米。优选地，大米为红曲 米。

在另一实施方案中，从真菌中提取植物提取物。优选地，真菌为 侧耳属真菌。优选地，侧耳属真菌为平菇。

在一个实施方案中，从所述提取物中除去至少50％的极性化合物。 优选地，从所述提取物中除去至少60％或至少70％或至少80％或至少 90％的极性化合物。最优选地，从所述提取物中除去至少95％的极性 化合物。或者，植物提取物中每克植物提取物除去的极性化合物可多 达0.26g。

在一个实施方案中，植物提取物具有少于30％重量比的极性化合 物，优选少于25％重量比的极性化合物，优选少于20％重量比的极性 化合物，优选少于15％重量比的极性化合物，优选少于10％重量比的 极性化合物，优选少于5％重量比的极性化合物，优选少于4％重量比 的极性化合物，优选少于3％重量比的极性化合物，优选少于2％重量 比的极性化合物，优选少于1％重量比的极性化合物，优选少于0.5％ 重量比的极性化合物。

还提供了制备提取物的方法，其包括从植物材料中除去极性化合 物的步骤，其中所述植物材料包含一种或多种他汀类药物。

还提供了制备提取物的方法，其包括从包含一种或多种他汀类药 物的植物材料中除去影响个体中药物的药物动力学的一种或多种极性 化合物的步骤。

在一个实施方案中，植物材料为固体植物物质。

在另一实施方案中，植物材料的尺寸为约0.1cm至1cm、约0.2cm 至0.9cm，和0.3cm至0.9cm。优选地，植物材料的尺寸为0.3cm至 0.9cm。

在一个实施方案中，在制备提取物之前可研磨植物材料。

优选地，研磨的植物材料的粒径为约0.1mm至2mm、约0.2mm 至1mm、约0.3mm至1mm、约0.4mm至1mm，和约0.5mm至1mm。 优选地，研磨的植物材料的粒径为0.5mm至1mm。

在任选的实施方案中，在制备提取物之前可超声波处理研磨的植 物材料。

在一个实施方案中，所述方法还包括在除去所述一种或多种极性 化合物的步骤之前从植物材料中除去一种或多种包括桔霉素和单宁酸 在内的毒素的步骤。

在一个实施方案中，通过将植物材料暴露在选择来溶解所述一种 或多种毒素的溶剂中来除去所述一种或多种毒素。在一个实施方案中， 用于溶解所述一种或多种毒素的溶剂为弱酸性，即用于溶解所述一种 或多种毒素的溶剂的pH为约5至小于7，更优选为约6至小于7，还 更优选为约6.5至小于7。优选地，溶剂包含盐，例如碱金属的有机盐。 示例性的盐可选自磷酸钠、乙酸钠和碳酸氢钠。此外，在所述溶剂中 还存在有机酸以溶解所述一种或多种毒素。

有机酸优选为羧酸。最优选地，羧酸为乙酸。

盐溶液的合适浓度选自0.05M、0.1M、0.15M和0.2M。优选地， 盐溶液包含0.1M的乙酸钠。乙酸优选为0.5％的溶液。

在优选实施方案中，所用盐溶液的量选自0.5ml/g、1ml/g、1.5 ml/g、2ml/g、2.5ml/g、3ml/g、3.5ml/g、4ml/g、4.5ml/g、5ml/g、 5.5ml/g、6ml/g、6.5ml/g、7ml/g、7.5ml/g、8ml/g、8.5ml/g、9ml/g、 9.5ml/g和10ml/g的植物材料。优选地，所用盐溶液的量为4ml/g的 植物材料。

在一个实施方案中，在20℃至60℃的温度下进行将植物材料暴 露于包含一种或多种盐和有机酸的溶液中的步骤约8至36小时。最优 选地，暴露植物材料持续约8小时至34小时、约10小时至32小时、 约12小时至30小时、约14小时至28小时、约16小时至26小时、 约18小时至26小时、约20小时至26小时，和约22小时至26小时。 在最优选的实施方案中，将植物材料暴露于包含一种或多种盐和有机 酸的溶液中12小时。

在另一实施方案中，在20℃至60℃的温度下，将植物材料暴露 于包含一种或多种盐和有机酸的溶液中。优选地，在选自21℃至55℃、 22℃至50℃、23℃至45℃、24℃至40℃、25℃至35℃、25℃至30℃ 的温度下暴露植物材料。在最优选的实施方案中，在23℃的温度下， 将植物材料暴露于包含一种或多种盐和有机酸的溶液中12小时。

优选地，提取物具有每克红曲米提取物少于500μg、更优选少于 450μg、更优选少于400μg、更优选少于350μg、更优选少于更优选 少于300μg、更优选少于250μg、更优选少于200μg、更优选少于150 μg、更优选少于100μg的桔霉素。在最优选的实施方案中，提取物的 桔霉素水平为每克红曲米提取物332μg至133μg的桔霉素。

在一个实施方案中，一旦已经除去一种或多种毒素，在20℃至 60℃的温度下，将植物材料暴露于水溶液中约8小时至36小时以除 去一种或多种极性化合物。最优选地，将植物材料暴露于水溶液中约 8小时至34小时、约10小时至32小时、约12小时至30小时、约14 小时至28小时、约16小时至26小时、约18小时至26小时、约20 小时至26小时，和约22小时至26小时。在最优选的实施方案中，将 植物材料暴露于水溶液中12小时。

在另一实施方案中，在20℃至60℃的温度下将植物材料暴露于 水溶液中。优选在21℃至55℃、22℃至50℃、23℃至45℃、24℃ 至40℃、25℃至35℃、25℃至30℃的温度下将植物材料暴露于水溶 液中。在最优选的实施方案中，在23℃的温度下将植物材料暴露于水 溶液中12小时。

在优选实施方案中，所用水溶液的量为0.5ml/g、1ml/g、1.5ml/g、 2ml/g、2.5ml/g、3ml/g、3.5ml/g、4ml/g、4.5ml/g、5ml/g、5.5ml/g、 6ml/g、6.5ml/g、7ml/g、7.5ml/g、8ml/g、8.5ml/g、9ml/g、9.5ml/g 和10ml/g的植物材料。优选地，所用水溶液的量为4ml/g的植物材 料。

在最优选的实施方案中，水溶液为水。

有利地，该步骤不仅除去极性化合物而且除去存在于植物材料中 的任何残留的盐溶液。

期望不被任何特定理论所限制，应相信在植物提取物中存在的一 种或多种极性化合物通过抑制个体中的某些酶来干扰给予的药物的药 物动力学。认为这些酶包括但不限于包括1A2、2C9和3A4亚型在内 的细胞色素P450以及p-糖蛋白。p-糖蛋白为具有广泛底物特异性的 ATP-依赖性流出泵。p-糖蛋白运送各种底物穿过细胞膜，所述底物包 含诸如秋水仙碱、他克莫司和奎尼丁的药物；诸如依托泊苷、阿霉素 和长春碱的化学治疗剂；脂质、类固醇、异生物质、多肽、胆红素、 诸如地高辛的强心苷、免疫抑制剂、诸如地塞米松的糖皮质激素以及 诸如蛋白酶抑制剂和非核苷逆转录酶抑制剂的HIV-1型抗逆转录病毒 治疗剂。因此，极性化合物的除去降低了不利的药物-草药相互作用的 发生率。

因此，在优选的实施方案中，一种或多种极性化合物通过与细胞 色素P450和p-糖蛋白的相互作用来影响给予的药物的药物动力学。

期望不受任何特定理论的限制，认为极性化合物通过结合细胞色 素P450和/或p-糖蛋白来影响给予的药物的药物动力学。

在另一实施方案中，所述方法还包括从所述固体植物材料中形成 液体提取物的步骤。

优选地，一旦已除去一种或多种极性化合物，在20℃至50℃的 温度下将植物材料暴露于有机溶液中约8小时至36小时。最优选地， 将植物材料暴露于有机溶剂中约8小时至34小时、约10小时至32 小时、约12小时至30小时、约14小时至28小时、约16小时至26 小时、约18小时至26小时、约20小时至26小时以及约22小时至 26小时。在最优选的实施方案中，将植物材料暴露于有机溶液中12 小时。

在另一实施方案中，在20℃至50℃的温度下将植物材料暴露于 有机溶液中。优选在21℃至50℃、22℃至45℃、23℃至40℃、24℃ 至35℃、25℃至30℃的温度下将植物材料暴露于有机溶液中。在最 优选的实施方案中，在25℃的温度下将植物材料暴露于有机溶液中 12小时。

在优选实施方案中，所用有机溶液的量为0.5ml/g、1ml/g、1.5 ml/g、2ml/g、2.5ml/g、3ml/g、3.5ml/g、4ml/g、4.5ml/g、5ml/g、 5.5ml/g、6ml/g、6.5ml/g、7ml/g、7.5ml/g、8ml/g、8.5ml/g、9ml/g、 9.5ml/g和10ml/g的植物材料。优选地，所用有机溶液的量为4ml/g 的植物材料。

在一个实施方案中，有机溶液选自醇、醚、卤仿、酮和亚烷基二 醇。优选地，有机溶液包含易于水混合的有机化合物。在水中，有机 溶液可包含至少50％的有机化合物。优选地，在水中，有机溶液包含 至少70％的有机化合物。在优选的实施方案中，有机溶液为醇。最优 选地，醇为70％的乙醇。

在其它优选的实施方案中，所述方法包括从液体提取物中分离植 物材料以及将液体提取物的溶剂蒸发以形成干燥植物提取物的步骤。

优选地，使用旋转式蒸发器蒸发提取液。

可优选采用搅动以增加提取法的效率。可在提取法多个步骤中的 一个步骤进行搅动。优选地，由超声处理来提供搅动。

在另一个实施方案中，提供了包含本公开的植物提取物以及药物 可接受的载体的组合物。

在又一个实施方案中，提供了包含本公开的植物提取物以及药物 可接受的载体的剂型。

根据本公开，可单独给予植物提取物。另外，可给予提取物以作 为包含至少一种本发明植物提取物的药物制剂、营养制剂、兽医制剂、 农业制剂或工业制剂。

可以与其它已知治疗结合的形式使用植物提取物，所述治疗包括 抗真菌治疗、抗生素、化学治疗剂等。例如在默克索引(Merck Index) 中的An Encyclopaedia of Chemicals(化学百科全书)，Drugs and  Biologicals(药物和生物制品)，第12版，1996中列举的合适的制剂，其 全部内容以引用的方式并入本文。

包括本发明植物提取物的活性剂的组合可以为协同作用的。

给药的方便方式包括口服给药、吸入、经皮应用、局部乳膏或凝 胶或粉末、或者直肠给药。优选地，口服给予提取物。

根据给药途径，可使用材料涂覆制剂和/或提取物以使化合物免受 可使化合物治疗活性失活的酶、酸和其它天然条件的作用。本领域技 术人员已知诸如肠溶衣的这类涂层。

还可在甘油、液体聚乙二醇及其混合物以及油中制备植物提取物 的分散体。在通常的贮存和使用条件下，药物制剂可包含防腐剂以防 止微生物的生长。

在一个实施方案中，例如使用惰性稀释剂或可同化的食用载体来 口服给予植物提取物。还可将植物提取物和其它成分封闭在硬壳或软 壳明胶胶囊中、压缩成为片剂或直接加入个体的饮食中。对于口服治 疗给药，可将植物提取物并入赋形剂，并且以可吸收片剂、口含片、 锭剂、胶囊、酏剂、悬浮液、糖浆、糯米纸(wafer)等的形式使用。适 当地，这类组合物或制剂可包含至少1％重量比的植物提取物。或者， 植物提取物的组合物和制剂当然可以变化，例如可方便地为剂量单位 重量的约2％至约90％、约5％至约80％、约10％至约75％、约15％至 约65％、约20％至约60％、约25％至约50％、约30％至约45％或约 35％至约45％。在治疗有用的组合物中的植物提取物的量为将获得的 合适剂量的量。

辅助活性化合物还可并入本发明的组合物中。

在一个实施方案中，载体可为可口服给予的载体。

药物组合物的另一种形式为配制为适于口服给药的肠溶颗粒剂、 片剂或胶囊剂的剂型。

本发明的范围内还包括缓释剂型。

片剂、锭剂、丸剂、胶囊剂等还能包含：诸如黄蓍胶(gum  gragacanth)、阿拉伯胶、玉米淀粉或明胶的粘合剂；诸如磷酸二钙的 赋形剂；诸如玉米淀粉、马铃薯淀粉、藻酸等的崩解剂；诸如硬脂酸 镁的润滑剂；以及诸如蔗糖、乳糖或糖精的甜味剂或者诸如薄荷、鹿 蹄草油或樱桃香料的调味剂。当剂量单位形式为胶囊剂时，其除了上 述类型的材料之外还能包含液体载体。可存在各种其他的材料作为涂 层或另外修饰剂量单位的物理形式。例如，能使用紫胶、糖或二者涂 覆片剂、丸剂或胶囊剂。糖浆剂或酏剂能包含类似物、作为甜味剂的 蔗糖、作为防腐剂的对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯、染料和 诸如樱桃或橙子味的调味剂。当然，在制备任何剂量单位形式中使用 的任何材料应为药物纯净的且在所用的量中为基本无毒的。此外，能 将类似物并入缓释的制剂和剂型。

优选地，药物组合物还可包含合适的缓冲剂以将酸解降到最低。 本领域技术人员已知合适的缓冲剂且其包括但不限于磷酸盐、柠檬酸 盐、碳酸盐及其混合物。

可以进行本发明药物组合物的单独给药或多重给药。本领域技术 人员应能够通过常规实验测定植物提取物和/或组合物的有效无毒剂 量水平以及给药方式。

此外，使用常规疗程确定试验能确定最优化疗程，例如你对于限 定的天数每天给予的植物提取物或组合物的剂量数，这对本领域技术 人员而言是显而易见的。

通常，每24小时植物提取物的有效剂量可为约0.0001mg至约 1000mg每kg体重；适当地为约0.001mg至约750mg每kg体重；约 0.01mg至约500mg每kg体重；约0.1mg至约500mg每kg体重； 约0.1mg至约250mg每kg体重；或者约1.0mg至约250mg每kg 体重。更合适地，每24小时的有效剂量可为约1.0mg至约200mg每 kg体重；约1.0mg至约100mg每kg体重；约1.0mg至约50mg每 kg体重；约1.0mg至约25mg每kg体重；约5.0mg至约50mg每 kg体重；约5.0mg至约20mg每kg体重；或者约5.0mg至约15mg 每kg体重。

提供了本公开植物提取物在制备用于治疗或预防高血脂的药物中 的用途。

提供了本公开植物提取物在制备用于减少个体中胆固醇的药物中 的用途。

提供了本公开植物提取物在制备用于减少个体中胆固醇的药物中 的用途。

提供了本公开植物提取物在制备用于抑制个体中3-羟基-3-甲基 戊二酰-辅酶A(HMG-CoA)还原酶的药物中的用途。

还提供了包含本公开的植物提取物以及使用说明的包装的剂型。

附图简述

附图示例了公开的实施方案并用来解释公开的实施方案的原理。 然而，应当理解设计附图仅为了示例的目的而不作为限制本发明的定 义。

图1a图示在除去极性化合物之前红曲米提取物的HPLC曲线。图 1b为在除去极性化合物之后按照本公开的方法获得的干燥红曲米提 取物的HPLC曲线；

图2图示使用红曲米提取物的细胞色素P450抑制研究的结果；

图3图示极性化合物对P-糖蛋白的活性与负对照(NaVO₄)的结果。

图4图示使用红曲米提取物的P-糖蛋白活性测试的结果；

图5图示使用红曲米提取物使用戊脉安的CaCO-2吸收研究的结 果；以及

图6图示使用红曲米提取物使用戊脉安的动物吸收研究的结果。

实施例

通过参考具体的实施例将更详细地进一步描述包括最佳实施方式 和比较例在内的本发明的非限制性实施例，其不应被解释为以任何方 式限制本发明的范围。

实施例1

红曲米(RYR)的发酵

制备方法：

1.在23℃下，将大米(Oryza sativa var.Japonica)浸泡在水(4ml/g) 中1小时。

2.然后在100℃下将大米保持在烘箱中2小时。

3.然后添加5％(w/w)的紫红曲霉(M.purpureus)。

4.然后在24℃至30℃下，每两天使用物理搅拌抚育大米，持续 7天至14天。

实施例2

提取方法

1.在23℃下，将全部红曲米(RYR)暴露于0.1M的乙酸钠(4ml/g 的红曲米)中12小时。使用该步骤从RYR中除去桔霉素和其它毒素。 然后通过在滤纸或粗棉布上过滤来除去盐溶液。

2.然后在23℃下，将RYR提取物暴露于水(4mg/l的红曲米)中 12小时。该步骤除去了来自上述步骤1的RYR制剂中的极性化合物 和任何残留的盐溶液。然后通过在滤纸或粗棉布上过滤来除去盐溶液。

3.最后，23℃下，最终提取步骤使用70％的乙醇(4ml/g的红曲 米)12小时以产生富集的莫那呵啉K RYR提取物。

最终提取详述

桔霉素水平为0.3μg/g至0.7μg/g的红曲米提取物。

通过提取方法除去的极性化合物的百分比约为94.5％。在图1中 显示了干燥的提取物的高效液相色谱(HPLC)的色谱分析。HPLC的条 件为：3μm孔径柱；两种溶剂，溶剂A为0.01％甲酸以及溶剂B为100％ 乙腈；7ml/min的流速；梯度流量使得在0分钟时溶剂A为97％且在 50分钟时溶剂B为100％。在0分钟至10分钟的面积内的峰将表示在 干燥的提取物中极性化合物的百分比。

如能在图1a的HPLC色谱分析中所见，RYR材料在使用水进行 处理之前包含由165896201所标示的面积所示的极性部分。

图1b说明RYR在使用水进行处理之后具有由9534468所标示的 面积所示的基本上减少的极性部分(如图1b上红线所示)。在该面积中 锋的缺失表示从R材料中除去了极性化合物。这表示约95％的极性化 合物在使用水进行处理之后已从RYR材料中被除去。

莫那呵啉K(洛伐他汀)水平为0.5mg/g至2mg/g的红曲米提取物。

实施例3

对RYR提取物的药物动力学确认

细胞色素(CYP)P-450抑制研究

使用CYP1A2A、CYP2C9和CYP3A4活性测试(CYP1A2、CYP2C9 和CYP3A4 P450-Glo^TM，Promega)，其采用为甲虫荧光素衍生物的产生 荧光(luminogenic)的P450探针底物，所述底物为用于荧光素酶的底物。 衍生物不是用于荧光素酶的底物，但是由CYP转化至荧光素，其反过 来与荧光素酶反应以产生与P450活性直接成正比的可检测量的光。

在白色不透明96孔板(Costar)中以不同的浓度(1.25mg/ml、2.5 mg/ml和5mg/ml，处理的药物)使用20μl的无水荧光素(未处理的对照)、 柚皮素(CYP抑制剂，负对照)或RYR水提取物处理CYP膜。在37℃ 下，将板预孵育10分钟，然后通过添加NADPH再生溶液启动反应， 并且在37℃下孵育20分钟。然后停止反应，并且通过向所有孔添加 ATP检测试剂开始发光检测，并且由Infinite F200型酶标仪(Tecan)测 量所有样品的发光。

CYP活性测试中观察到的发光信号与酶活性直接成正比。来自未 处理的CYP反应的净信号表示总的CYP活性。添加100μg/ml的柚皮 素(CYP抑制剂)作为实验的负对照。用于与测试化合物(RYR水提取物) 反应的未处理CYP反应的平均净信号的变化说明由化合物调节CYP 活性。测试化合物的发光信号高于未处理的样品，说明该化合物能增 加CYP活性；发光信号低于未处理样品，意味着该化合物能抑制CYP 的活性。结果(图2)说明RYR水提取物诱发CYP1A2、CYP2C9和 CYP3A4的抑制。EYS-NYP产物说明了非常低的CYP活性抑制，所 述EYS-NYP产物为除去极性化合物后获得的RYR提取物。

P-糖蛋白(P-gp)活性研究

使用酶试剂盒Pgp-Glo^TM检验系统(Promega，美国)分析RYR水提 取物对P-gp活性的影响。该检验测定化合物对细胞膜部分中重组人类 P-gp的影响，并且该测试依赖于萤火虫荧光素酶的光产生反应的ATP 依赖性。首先使用P-gp孵育ATP，然后停止P-gp ATP酶反应并且测 定剩余的未代谢ATP作为荧光素酶产生的发光信号。发光中P-gp依 赖性减少反映了由P-gp消耗ATP，因此信号降低越大，P-gp活性越 高。因此，包含刺激P-gp ATP酶的化合物的样品将具有比未处理样品 显著更低的信号。P-gp、反应混合物和ATP检测试剂的制备按照制造 商的操作说明。以不同浓度(1.25mg/ml、2.5mg/ml和5mg/ml)制备20μl 的RYR水提取物，分别将戊脉安(正对照，0.5mM)和Na₃VO₄(P-gp抑 制剂，0.25mM)加入白色不透明96孔板(具有透明平底，Costar Inc.， NY)。然后将P-gp加入包含测试化合物的孔中，并且在37℃下孵育5 分钟。通过添加Mg-ATP溶液开始反应，在37℃下孵育96孔板40 分钟。然后停止反应，通过向所有孔添加ATP检测试剂开始发光测定， 并且在Infinite F200型酶标仪(Tecan，奥地利)上检测产生的发光。

在P-gp活性检验中，通过将未处理样品(基底的)和用RYR水提 取物处理的样品与Na₃VO₄(原钒酸钠)处理的对照进行比较来检测 RYR水提取物对Pgp ATP酶活性的影响(参见图3)。Na₃VO₄为P-gp 的选择性抑制剂，且用Na₃VO₄处理的样品不具有P-gp ATP酶活性。 在缺少Na₃VO₄时，能检测到基底的和药物刺激的P-gp ATP酶活性。 在Na₃VO₄存在时的ATP消耗归因于存在于膜制剂中的较少的非P-gp  ARP酶活性。在Na₃VO₄处理的样品和未处理的样品间发光信号的差 异代表基底P-gp ATP酶活性，而在Na₃VO₄处理的样品和使用测试化 合物(RYR水提取物)处理的样品间发光型号的差异代表在测试化合物 存在时的P-gp ATP酶活性。

如图4中所示，RYR水提取的添加显著提高了P-gp活性并且活 化作用是剂量依赖性的。这些结果意味着RYR水提取物包含P-gp底 物，当使用P-gp膜对其进行孵育时，由P-gp消耗ATP，并且当与 Na₃VO4处理的样品进行比较时，观察到发光的强烈变化。EYS-NYP 产物表明P-gp活性的较低活化，这意味着通过所述方法有效地除去了 能影响P-gp活性的RYR中的化合物。

CaCo-2吸收检验

使用胰岛素/EDTA收集为90％至100％汇合的烧瓶，使用含血清 的培养基中和并且离心分离。在由接种基础培养基(Basal Seeding  medium)(BD Biosciences)和Mito⁺Serum Extender(BD Biosciences)组 成的无血清培养基中再悬浮细胞团块(cell pellet)，并以6×10⁵细胞 /cm²将该细胞团块接种在6孔插入式细胞培养皿(Cell Culture Inserts) (Corning，NY)中。嵌入物包含具有胶原I型的聚酯0.4μm微孔膜。在 实验中，在接种后24小时使用肠上皮细胞分化培养基(Enterocytes  Differentiation medium)(BD Biosciences)替换接种培养基，这需要使用 分化培养基，此后每48小时替换培养基，并且在37℃、95％相对湿度 和5％CO₂中保持细胞。在Enterocytes分化培养基中孵育三天之后， 用于渗透性研究的CaCo-2单层准备就绪。

使用跨上皮电阻(TEER)值大于300Ωcm²的生理学和形态学完备 的CaCo-2细胞单层进行研究。

含10mM HEPES的Han缓冲液改进了用于这些研究的运输培养 基。顶部和基底外侧的格的pH值均为7.5。在所有实验之前，使用缓 冲液洗涤各个单层两次并测量TEER，从而保证单层的完整。在缺少 以及存在测试化合物的情况下测量戊脉安从顶部至基底外侧(A至B) 的运输。使用的戊脉安的浓度为100μM，这远低于其～60μM的K_m值。在该测试中，将测试化合物的浓度选择为10μM。所述研究通过 向单层侧面的顶部(A至B传送)或基底外侧(B至A传送)添加适当量 的含地高辛的缓冲液开始。顶部和基底外侧的格的体积分别为1.6ml 和2.8ml，并且以10μM的浓度向单层的两侧添加测试化合物(作为抑 制剂)。然后在37℃下孵育单层3小时。在孵育期间分别在0分钟、 10分钟、30分钟、60分钟、90分钟、120分钟和180分钟从基底外 侧格采集样品以及在0分钟从顶部格采集样品，并且由HPLC分析戊 脉安浓度。在存在和缺少测试化合物的情况下，计算戊脉安从A至B 的渗透系数(P_eff)。

在RYR水提取物对酶水平的影响的调查(P-gp和CYP检验)之后， 采用CaCo-2吸收检验以分析RYR水提取物在细胞水平中的影响。针 对CaCo-2细胞单层的体外研究对预测人体内肠渗透性是有价值的手 段。在实验中，以各种浓度(20mg/ml和50mg/ml，处理的药物)将50μl 的1×PBS(对照)或RYR水提取物添加到具有100μg/ml戊脉安的组织 培养皿的顶部格中。从校准曲线(数据未示出)中计算从基底外侧和顶 部格采集的样品的浓度，通过测量从注射戊脉安基准(259μg/ml、 125μg/ml、30μg/ml、15μg/ml、7.5μg/ml和3μg/ml)获得的峰面积构成 所述校正曲线，并且回归分析线性方程为y＝27043x-11153(r²＝ 0.098)。在CaCo-2研究中，RYR水提取物增加了戊脉安的净吸收量(2 倍)。然而，EYS-NYP产物(按照公开的方法制备的)示出与对照类似的 结果。这说明所述方法能在RYR中有效地除去影响个体中药物的药物 动力学的极性化合物(图5)。

动物研究

从新加坡国立大学(NUS，Singapore)的动物屋购买重为200g至 270g的雄性Sprague-Dawley大鼠。按照机构指导护理大鼠。在具有 调温(25℃)的暗/光(12小时/12小时)控制循环下的常规条件中饲养动 物。将八只大鼠分配为两组(2×4只动物)，每个组进行四次试验。

使用1ml的100mg/ml RYR极性提取物(预处理组)或1ml的盐水 (对照组)预处理大鼠30分钟，然后口服给予动物10mg/kg的戊脉安。 使用克他命和甲苯噻嗪(二者均为100mg/ml)麻醉大鼠。在药物给予之 后，在0分钟、30分钟、60分钟、120分钟、240分钟、360分钟和 480分钟从颈静脉将血液样品收集入1.5ml的埃彭道夫管中，并且立 即进行13000rpm的离心2分钟。将透明的血浆层转移至清洁的管中， 然后添加等体积的乙腈以从样品中除去蛋白质。在具有涡流的暂短混 合后，以13000rpm离心样品2分钟，将上清液转移至HPLC瓶中， 然后通过HPLC分析它们的戊脉安含量。通过参考由无药物合并的大 鼠血浆样品构成的戊脉安校正曲线将未知样品的峰面积比转换为浓 度。

RYR水提取物的添加显著提高了动物模型中戊脉安的吸收。在30 分钟的时点上，药物处理的动物中戊脉安的水平表明其吸收比对照组 和已除去极性化合物的RYR提取物(EYS-NYP样品)高约1.6倍(图6)。

总结

公开的方法说明有效除去了影响个体中药物的药物动力学的一种 或多种极性化合物。在上述实施例中，已说明了一种或多种极性化合 物显著增加戊脉安的摄入。戊脉安为苯基烷基胺类的L型钙通道阻断 剂。其用于治疗高血压、心绞痛、心律失常。戊脉安用药过量的症状 包括：低的血压(低血压)、缓慢的心率(心动过缓)、不规则心律(心律 失常)和肺部流体。

因此，该不期望的药物-草药相互作用对于尝试通过降低脂质和胆 固醇来改善心血管健康而服用RYR提取物的个体而言是潜在的生命 威胁。

应用

应清楚本发明的各种其它修改和改变对于阅读前述公开之后的本 领域技术人员而言是显而易见的，而没有背离本发明的精神和范围， 其旨在将所有这样的修改和改变包括在附属权利要求的范围内。