十二卷类多肉植物的离体培养方法

摘要

本发明提供了一种十二卷类多肉植物的离体培养方法，其特征在于，步骤为：第一步：外植体的选择与消毒；第二步：无菌系的建立；第三步：无菌系丛生芽的继代增殖；第四步：生根培养；第五步：试管苗炼苗培养。本发明利用组织培养技术对十二卷属植物进行工厂化快速繁殖，具有用料少，繁殖快以及提纯复壮脱病毒等优点，可加快繁殖种苗速度，周年生产出优质种苗，对该品名花卉的开发生产具有积极意义。

说明书

技术领域

 本发明涉及一种百合科十二卷属性植物的组织培养快速繁殖方法。

背景技术

十二卷属植物（学名HaworthiafasciataHaw）又名锦鸡尾，为百合科十二卷属，原产非洲南部地区，世界各地广泛栽培，在我国干燥的沙漠地带亦有野生种类（耐寒性）分布。喜温暖干燥和阳光充足的环境，怕低温和阴暗潮湿，生长适期3-10月，最适温度15-25度，最高可忍受35-40度的高温。对土壤要求不严，但以疏松肥沃的沙壤土为宜。

该类植物在世界上有150个种，多年生肉质草本，无茎，叶片肉质厚实，其叶片上有条纹，名贵品种上分布有红色、白色、金黄色条纹，非常美丽，是不可多得的观赏植物，作盆栽观赏，在居室、阳台、办公桌上摆放呈现清新高雅之态。目前在日本、美国、以色列等非常盛行，我国上海、北京、广州等大城市从国外进口种苗或直接进口商品盆花，价格昂贵，售价从数十元至上万元不等。但此植物繁殖主要靠分株，每年繁殖量仅3-5株，名贵品种更少，故制约了应用推广，造成种苗奇缺，供不应求，名贵种苗或商品盆花价格高昂，普通百姓很难消费。有关十二卷属植物的生产国内有些零星报道，但未见利用花枝嫩茎段离体培养及规模化生产的报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种十二卷属植物的组织培养快速繁殖方法，以花枝嫩茎段为外植体，直接诱导无菌芽培育成试管苗。

为了达到上述目的，本发明的技术方案是提供了一种十二卷类多肉植物的离体培养方法，其特征在于，步骤为：

第一步：外植体的选择与消毒

在春夏季节，选取十二卷多肉植物刚抽生的呈半木质化的花枝，自基部整枝剪下，清洗干净后，消毒；

第二步：无菌系的建立

将消毒过的花枝切成0.5-1.5厘米的茎段，接种于发生培养基上，进行初始诱导培养；

第三步：无菌系丛生芽的继代增殖

将初始培养获得的无菌芽切下，接种于第二培养基进行增殖，待在基部叶腋间分化出腋芽后，该腋芽即为丛生芽，继续切割后不断增殖；

第四步：生根培养

将丛生芽切成单芽，接种于第三培养基进行生根培养，在基部分分化出不定根后，试管苗培育成功；

第五步：试管苗炼苗培养

将生根的十二卷试管苗在苗床上作炼苗培养。

优选地，第一步中所述清洗的步骤为：用洗洁精将剪下的花枝清洗两遍，用纱布包裹后用水冲洗3小时后沥干。

优选地，第一步中所述消毒在无菌室超净台上进行，其步骤为：先用质量百分比浓度为75%乙醇的对清洗后的花枝处理60秒，然后用与水的质量比为1:50的洁尔敏溶液处理15分钟，最后用质量百分比浓度为0.1%的氯化汞溶液处理15分钟，用无菌水冲洗三遍。

优选地，第二步中所述发生培养基及第三步中所述第二培养基的成份相同，为加入了0.5-2.0mg/L的6-氨基腺嘌呤、0.005-0.2mg/L的荼乙酸、0.05-0.1mg/L的赤霉素、质量百分比为3%的蔗糖及5.5g/L琼脂粉的MS培养基。

优选地，第二步中所述初始诱导培养、第三步中所述增殖及第四步中所述生根培养的培养温度为25度，光照强度为3000LX，光照时间为12小时/天。

优选地，第三步中所述第三培养为加入了0.1-0.2mg/L的荼乙酸、0.05-0.1mg/L的吲哚丁酸、质量百分比为2%的蔗糖及5.5g/L琼脂粉的1/2MS培养基。

优选地，第五步中所述炼苗培养的培养基质为泥炭和珍珠岩，泥炭与珍珠岩之间的质量比为1:1，其具体步骤为：将幼苗载入培养基质后浇足活棵水，用尼龙薄膜覆盖防止幼苗失水萎焉，3天后揭去尼龙薄膜逐步炼苗。

优选地，所述逐步炼苗的步骤为：在前7天内，每天叶面喷水2-3次，7天后早晚各喷一次，15天后用质量百分比浓度为0.1%的硝酸铵加质量百分比浓度为0.1%的磷酸二氢钾追肥，叶面及根际施肥同时进行，15天后根据基枝含水量适当浇水，保持不干不浇，浇则浇透，3个月后，试管苗可以移栽至各种容器内作盆栽培育。

本发明利用组织培养技术对十二卷属植物进行工厂化快速繁殖，具有用料少，繁殖快以及提纯复壮脱病毒等优点，可加快繁殖种苗速度，周年生产出优质种苗，对该品名花卉的开发生产具有积极意义。

具体实施方式

为使本发明更明显易懂，兹以优选实施例作详细说明如下。

实施例1

本发明提供了一种十二卷类多肉植物的离体培养方法，其步骤为：

第一步：外植体的选择与消毒

在春夏季节，选取十二卷多肉植物刚抽生的呈半木质化的花枝，自基部整枝剪下，用洗洁精清洗两遍，用纱布包裹后置于自来水龙头下冲洗3小时后沥干。在无菌室超净台上消毒，先用质量百分比浓度为75%的乙醇处理60秒，然后用与水的质量比为1:50的洁尔敏溶液处理15分钟，最后用质量百分比浓度为0.1%的氯化汞处理15分钟，用无菌水冲洗三遍。

第二步：无菌系的建立

在超净台上将消毒过的花枝切成1厘米左右的茎段，接种于发生培养基上，进行初始诱导培养。培养基为加入了0.5mg/L的6-氨基腺嘌呤（英文简称为6-BA）、0.005mg/L荼乙酸（英文简称为NAA）、0.05mg/L的赤霉素（英文简称为GA）、质量百分比为3%的蔗糖及5.5g/L琼脂粉的MS培养基，PH值为5.8，培养温度为25度（24小时恒温），光照强度为3000LX，光照时间为12小时/天；

第三步：无菌系丛生芽的继代增殖

将初始培养获得的无菌芽切下，接种于第二培养基，30天后在基部叶腋间分化出腋芽（丛生芽），继续切割后不断增殖，以后每30天增殖一次，增值率为1:2.5-3。第二培养基为加入了0.5mg/L的6-BA、0.05mg/L的GA、0.005mg/L的NAA、质量百分比为3%的蔗糖及5.5g/L的琼脂粉的MS培养基，PH值为5.8，培养温度为25度，光照强度为3000LX，光照时间为12小时/天。

第四步：生根培养

将丛生芽切成单芽，接种于第三培养基，越3-4周后在基部分分化出不定根，试管苗培育成功。第三培养基为加入了0.1mg/L的NAA、0.05mg/L的吲哚丁酸（英文简称为IBA）、质量百分比为2%的蔗糖、5.5g/L的琼脂粉的1/2MS培养基，PH值为5.8，培养温度为25度，光照强度为3000LX，光照时间为12小时/天。

第五步：试管苗炼苗培养

将生根的十二卷试管苗在苗床上作炼苗培养。培养基质为泥炭和珍珠岩，泥炭和珍珠岩之间的质量比为1:1，将幼苗载入后浇足活棵水，用尼龙薄膜覆盖防止幼苗失水萎焉，3天后揭去尼龙薄膜逐步炼苗。前7天内，每天叶面喷水2-3次，7天后早晚各喷一次，15天后用质量百分比浓度为0.1%的硝酸铵加质量百分比浓度为0.1%的磷酸二氢钾追肥（叶面及根际施肥同时进行）。15天后可根据基枝含水量适当浇水，保持不干不浇，浇则浇透。3个月后，试管苗可以移栽至各种容器内作盆栽培育。

实施例2

本发明提供了一种十二卷类多肉植物的离体培养方法，其步骤为：

第一步：外植体的选择与消毒

在春夏季节，选取十二卷多肉植物刚抽生的呈半木质化的花枝，自基部整枝剪下，用洗洁精清洗两遍，用纱布包裹后置于自来水龙头下冲洗3小时后沥干。在无菌室超净台上消毒，先用质量百分比浓度为75%的乙醇处理60秒，然后用与水的质量比为1:50的洁尔敏溶液处理15分钟，最后用质量百分比浓度为0.1%的氯化汞处理15分钟，用无菌水冲洗三遍。

第二步：无菌系的建立

在超净台上将消毒过的花枝切成1厘米左右的茎段，接种于发生培养基上，进行初始诱导培养。培养基为加入了2.0mg/L的6-BA、0.2mg/L的 NAA、0.05-0.1mg/L的GA、质量百分比为3%的蔗糖及5.5g/L琼脂粉的MS培养基，PH值为5.8，培养温度为25度（24小时恒温），光照强度为3000LX，光照时间为12小时/天；

第三步：无菌系丛生芽的继代增殖

将初始培养获得的无菌芽切下，接种于第二培养基，30天后在基部叶腋间分化出腋芽（丛生芽），继续切割后不断增殖，以后每30天增殖一次，增值率为1:2.5-3。第二培养基为加入了2.0mg/L的6-BA、0.1mg/L的GA、0.2mg/L的NAA、质量百分比为3%的蔗糖及5.5g/L的琼脂粉的MS培养基，PH值为5.8，培养温度为25度，光照强度为3000LX，光照时间为12小时/天。

第四步：生根培养

将丛生芽切成单芽，接种于第三培养基，越3-4周后在基部分分化出不定根，试管苗培育成功。第三培养基为加入了0.2mg/L的NAA、0.1mg/L的IBA、质量百分比为2%的蔗糖、5.5g/L的琼脂粉的1/2MS培养基，PH值为5.8，培养温度为25度，光照强度为3000LX，光照时间为12小时/天。

第五步：试管苗炼苗培养

将生根的十二卷试管苗在苗床上作炼苗培养。培养基质为泥炭和珍珠岩，泥炭和珍珠岩之间的质量比为1:1，将幼苗载入后浇足活棵水，用尼龙薄膜覆盖防止幼苗失水萎焉，3天后揭去尼龙薄膜逐步炼苗。前7天内，每天叶面喷水2-3次，7天后早晚各喷一次，15天后用质量百分比浓度为0.1%的硝酸铵加质量百分比浓度为0.1%的磷酸二氢钾追肥（叶面及根际施肥同时进行）。15天后可根据基枝含水量适当浇水，保持不干不浇，浇则浇透。3个月后，试管苗可以移栽至各种容器内作盆栽培育。