甜杏仁油在制备治疗心肌缺血再灌注损伤药物中应用

摘要

一种甜杏仁油在制备治疗心肌缺血再灌注损伤药物中应用，有效成分用甜杏仁油制备预防和治疗心肌缺血再灌注损伤药物以软胶囊剂的形式来使用，软胶囊剂直接用甜杏仁油采用常规软胶囊的制备方法制成。甜杏仁油经过药效试验，表明甜杏仁油可以提高大鼠心肌组织的耐缺氧能力，增强心肌组织对缺血再灌心肌损伤的耐受能力，能提高缺血再灌大鼠心肌组织的抗氧化能力，降低缺血再灌对大鼠心肌组织的损伤程度。本发明的杏仁油是以不饱和脂肪酸为主要有效成分的天然可以食用的物质，在一定的用量范围内，长期服用不会对身体造成毒副作用。

说明书

技术领域

本发明属于含有原料或其与不明结构之反应产物的医用配制品技术领域，具体涉及到来源于植物的材料。

背景技术

甜杏仁油是蔷薇科(Rosaceae)李属植物杏(Prunus armeniaca L.)的干燥果实中提取得到的一种植物油。甜杏仁油是使用最广泛的植物油之一，呈淡黄色，它含有大约90％的不饱和脂肪酸，其中油酸60％，亚油酸30％，可降低人体血液中的甘油三酯，促进新陈代谢，对预防心脑血管疾病和保肝有较好的作用。另外，甜杏仁油还含有少量的维生素E等人体必需营养素，持续服用，不仅有益于脑血管和智力的发育，还对平衡体内分泌系统脑垂体、促进细胞更新、延缓衰老等有着特殊功效。甜杏仁油用于皮肤日常护理，具有润肤和美容的神奇功效，因此被人们誉为“天然植物黄金”。

贾凌云等探讨了野生山杏杏仁油对高血脂大鼠肝、心、肾组织抗氧化活性的作用，结果表明野山杏杏仁油对高血脂大鼠的肝、心、肾具有抗氧化保护作用(杏仁油对实验性高血脂大鼠抗氧化作用的研究，西北师范大学学报，自然科学版，2008，4(2)：92-98)。孔浩通过建立羟基自由基、超氧阴离子自由基清除体系来测定杏仁油清除自由基的能力并计算相应的IC50值，结果表明，当杏仁油浓度为0.1mg/mL时清除率可达到60％以上(杏仁油及葡萄籽油清除自由基能力研究，甘肃科技，2008，24(6)：57-58)。王建华等通过将200例宫颈糜烂患者随机分为治疗组108例(用杏仁油棉球阴道给药)和对照组92例(用干扰素栓阴道给药)，2组均治疗3个疗程后，发现杏仁油对宫颈糜烂有一定的疗效(杏仁油治疗宫颈糜烂的临床研究，江西中医药，2006(6)：32)。天津市河西医院王薇用杏仁油治疗“黄水泡”临床观察10例，取得了满意效果(巧用杏仁油治疗“黄水泡”，天津护理，1996，12(4)：167-168)。有报道，杏仁油对四氯化碳肝损伤具有明显的保护作用(FoodChem 2011；125：673-678)。

心血管疾病已经成为危害人类健康的第一杀手，随着人们生活水平的提高、生活节奏的加快，工作生活压力的加大，心血管疾病的发病率、死亡率呈明显上升趋势，严重危害人类的生存质量。心肌缺血再灌注损伤是指因供血障碍引起心肌缺血后重新恢复供血的一种病理过程。心肌损伤治疗的关键在于减轻心肌严重缺血缺氧后的损伤或增强心肌细胞对缺血缺氧损伤的抵抗能力。常用于心肌缺血再灌注损伤的药物可以分为五类：(1)抗凝血药物，如阿司匹林、华法林；(2)扩张冠状动脉类药物，如硝酸脂类、钙离子拮抗剂；(3)β-受体阻滞剂，如氨酰心安、美托洛尔；(4)肾上腺素能阻滞剂，如倍他乐克；(5)洋地黄类，如地高辛等；(6)其它还有抗高血压药物以及调节血糖、血脂类药物，如他汀类药。但是，这些药物的使用在一定程度上都会对身体产生一定的副作用。

发明内容

本发明从减轻心肌严重缺血缺氧后的损伤或增强心肌细胞对缺血缺氧损伤的抵抗能力出发，克服上述治疗心肌缺血再灌注损伤药物的缺点，为甜杏仁油提供一种新用途。

解决上述技术问题所采用的技术方案是：甜杏仁油在制备治疗心肌缺血再灌注损伤药物中的用途。

甜杏仁油在制备心肌损伤保护药物中的用途。

甜杏仁油，购于广州市绿香岛天然用品有限公司。用甜杏仁油制备治疗心肌缺血再灌注损伤的药物，将甜杏仁油以软胶囊剂的形式来使用，所述的软胶囊剂按照软胶囊剂常规的制备工艺制成，每粒软胶囊剂重0.8g。

甜杏仁油以软胶囊剂的用法用量：成人口服，预防心肌损伤剂量每次12粒，每天1次，治疗心肌缺血再灌注损伤剂量每次12粒，每天2次。

本发明药物经药效试验表明，甜杏仁油对缺血再灌大鼠心肌损伤具有明显的保护效应，可以提高大鼠心肌组织的耐缺氧能力，增强心肌组织对缺血再灌心肌损伤的耐受能力，提高缺血再灌大鼠心肌组织的抗氧化能力，降低缺血再灌对大鼠心肌组织的损伤程度。杏仁油是以不饱和脂肪酸为主要有效成分的天然可以食用的物质，在一定的用量范围内，长期服用不会对身体造成毒副作用。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明进一步详细说明，但本发明不限于这些实施例。

实施例1

以生产本发明软胶囊剂产品1000粒为例，不添加任何辅料，直接将800g甜杏仁油按照软胶囊剂的常规制备工艺制成软胶囊剂，每粒重0.8g。

用法用量：成人口服，预防剂量每次12粒，每天1次，治疗剂量每次12粒，每天2次。

为了验证有效成分甜杏仁油治疗心肌缺血再灌损伤的有益效果，发明人用甜杏仁油进行了药效试验，具体试验情况如下：

受试药物：甜杏仁油，购于广州市绿香岛天然用品有限公司。

实验材料：一氧化氮合酶(NOS)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、一氧化氮和丙二醛(MDA)测试盒由南京建成生物工程研究所提供。

实验仪器：DF-101S集热式恒温加热磁力搅拌器，由郑州长城科工贸有限公司生产；HR-120型精密电子天平，由日本生产；BI-90Plus激光粒度仪，由德国布鲁克海文仪器公司生产；TU-1810紫外可见分光光度计，由北京普析通用仪器有限责任公司生产；高速低温离心机UNIVERSAL320R，Hettich-zentrifugen，由德国生产。

受试动物：健康雄性SD大鼠，体重200～220g，由西安交通大学医学院实验动物中心提供，动物合格证为医动字第08-005号；大鼠固体饲料，由西安交通大学医学院实验动物中心提供，所有实验动物饲养条件一致。

1、实验动物及分组

将健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌组，甜杏仁油低剂量组、甜杏仁油中剂量组、甜杏仁油高剂量组，每组各12只，适应性饲养7天后进行实验。缺血再灌前，假手术组和缺血再灌组每天灌胃6mL/kg体重的自来水，甜杏仁油低剂量组、甜杏仁油中剂量组、甜杏仁油高剂量组每天分别灌胃2mL/kg、6mL/kg、10mL/kg体重的甜杏仁油，连续灌胃14天。

2、模型制备

第15天用质量分数为5％的戊巴比妥钠水溶液按30mg/kg体重腹腔麻醉大鼠，仰卧位固定，接小动物呼吸机，于胸骨左缘第三、四肋间隙开胸暴露心脏，保持胸膜完整。继之于肺动脉圆锥及左心耳间找出冠状动脉左前降支，并用圆形无创缝合针4/0丝线单股置于左冠状动脉前降支起始部下2mm处结扎，假手术组仅穿线不结扎。以心电图T波高耸与QRS波融合、QRS波变宽振幅加大为结扎成功的标志。结扎30分钟后松开结扎线再灌注120分钟。

3、检测指标和方法

再灌注120分钟后经腹腔动脉取血，制备血清，测定血清肌酸激酶(CK)和谷草转氨酶(AST)的活性。取血毕迅速摘取心脏，部分用冰生理盐水洗净血液投入液氮保存备用，测定一氧化氮合酶(NOS)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性及一氧化氮(NO)和丙二醛(MDA)的含量，测定结果见表1～4。部分摘取的心脏立即从主动脉弓插管并用生理盐水冲洗至心脏发白，再用质量分数为5％的氯代三苯基四氮唑(TTC)水溶液灌注至心脏变红，立即投入液氮，20分钟后取出切片放进质量分数为10％的甲醛水溶液中固定12小时，梗死部位呈苍白色，其他部位为红色，拍照后用滤纸吸干，分离梗死部位称重，计算梗死与总重量比率。

计算结果见表1。

4、统计学处理

各组数据以平均值±标准差表示，采用t-检验判断各组之间差异的显著程度，用统计软件SPSS处理数据。

5、实验结果与分析

(1)甜杏仁油对血清酶活性和心肌梗死程度的影响

由表1可见，缺血再灌组血清CK和AST活性明显高于假手术组(p＜0.05)，升高幅度分别为23.81％和22.61％；服用甜杏仁油的各组大鼠血清酶活性明显降低，均有显著性差异(p＜0.05)，随着灌胃剂量的增加大鼠血清酶活性分别下降了7.69％、35.90％、82.05％，说明甜杏仁油对心肌缺血再灌损伤可能具有一定的保护作用。

TTC染色结果表明，假手术组、缺血再灌组、甜杏仁油低剂量组、甜杏仁油中剂量组、甜杏仁油高剂量组大鼠心肌损伤或梗死重量比率分别为5.14％、20.41％、19.65％、14.60％、7.35％，缺血再灌组重量比几乎是假手术组的4倍，服用甜杏仁油各组随着灌胃剂量的升高梗死重量比逐渐降低，低剂量组与假手术组相比没有显著性差异(P＞0.05)，高剂量组效果最明显，比缺血再灌组降低了近3倍。本实验进一步证实了甜杏仁油对心肌缺血再灌损伤的保护作用。

表1各组大鼠血清酶活性和心肌梗死重量比率

  组别  CK活性(U/ml)  AST活性(U/ml)  梗死重量比率(％)  假手术组  0.63±0.08  44.68±3.94  5.14±0.37  缺血再灌组  0.78±0.10^▲  54.78±2.40^▲  20.41±1.04^▲  甜杏仁油低剂量组  0.72±0.04^▲  39.14±3.75^★  19.65±0.60^▲  甜杏仁油中剂量组  0.50±0.06^▲★#  39.86±2.43^★  14.60±0.62^▲★#  甜杏仁油高剂量组  0.14±0.02^▲#★＊  40.79±4.22^★  7.35±0.43^▲★#＊

表中▲表示与假手术组有显著性差异(P＜0.05)；★表示与缺血再灌组有显著性差异(P＜0.05)；#表示与甜杏仁油低剂量组有显著性差异(P＜0.05)；＊表示与甜杏仁油中剂量组有显著性差异(P＜0.05)。

(2)甜杏仁油对心肌CK和AST酶活性的影响

表2各组大鼠心肌CK和AST酶活性

表中▲表示与假手术组有显著性差异(P＜0.05)；★表示与缺血再灌组有显著性差异(P＜0.05)。

由表2可见，缺血再灌后心肌组织中CK和AST酶活性均呈上升趋势，上升幅度分别为6.24％和13.68％，AST酶活性变化与假手术组相比具有显著性差异(P＜0.05)。CK活性升高的原因可能是在缺血/缺氧状态下心肌组织为了获得更多的三磷酸腺苷而发生的一种生物代偿性反应。另外，在缺血/缺氧状态下，有氧代谢受阻，心肌组织还会通过糖酵解途径获得更多的三磷酸腺苷，造成有氧代谢中间产物α-酮戊二酸的堆积，α-酮戊二酸作为AST催化的转氨反应的底物激活AST，使得AST活性升高。服用了甜杏仁油的实验各组大鼠心肌组织CK和AST活性明显下降，与缺血再灌组相比均有显著性差异(P＜0.05)，但不存在明显的剂量关系。说明甜杏仁油可以提高大鼠心肌组织的耐缺氧能力，增强心肌组织对缺血再灌心肌损伤的耐受能力。

(3)甜杏仁油对心肌抗氧化酶活性和MDA含量的影响

表3各组大鼠心肌SOD、CAT、GSH-Px酶活性和MDA含量

表中▲表示与假手术组有显著性差异(P＜0.05)；★表示与缺血再灌组有显著性差异(P＜0.05)。

由表3可见，SOD、CAT和GSH-Px活性在缺血再灌后均有不同程度的下降，MDA含量稍有上升，SOD和GSH-Px活性变化与假手术组相比具有显著性差异(P＜0.05)，CAT活性和MDA含量变化与假手术组相比无显著性差异(P＞0.05)。服用甜杏仁油后，大鼠心肌组织中几种抗氧化酶活性均有不同程度的升高，但均没有呈现出明显的量效关系。其中甜杏仁油三种剂量组的SOD活性变化与缺血再灌组相比均有显著性差异(P＜0.05)，甜杏仁油低、中剂量组GSH-Px活性变化与缺血再灌组相比均有显著性差异(P＜0.05)，甜杏仁油三种剂量组CAT活性变化最为明显，与假手术组和缺血再灌组相比均有显著性差异(P＜0.05)。试验结果表明，甜杏仁油能提高缺血再灌大鼠心肌组织的抗氧化能力，降低缺血再灌对大鼠心肌组织的损伤程度。

(4)甜杏仁油对心肌NOS活性和NO含量的影响

表4各组大鼠NOS活性和NO含量

表中▲表示与假手术组有显著性差异(P＜0.05)；★表示与缺血再灌组有显著性差异(P＜0.05)。

由表4可见，缺血再灌后心肌组织中cNOS活性下降，iNOS活性上升，但与假手术组无显著性差异(P＞0.05)，NO含量显著降低(P＜0.05)；甜杏仁油三种剂量组的cNOS活性明显上升(P＜0.05)，iNOS活性呈下降趋势，甜杏仁油低剂量组和高剂量组与缺血再灌组有显著性差异(P＜0.05)，NO含量各组均有显著性升高(P＜0.05)。，试验结果说明，甜杏仁油对缺血再灌大鼠的心肌损伤的保护作用与NO的扩张血管作用有关。

6、试验结论

甜杏仁油对缺血再灌大鼠心肌损伤具有明显的保护和治疗作用，其可以提高大鼠心肌组织的耐缺氧能力，增强心肌组织对缺血再灌心肌损伤的耐受能力，提高缺血再灌大鼠心肌组织的抗氧化能力，降低缺血再灌对大鼠心肌组织的损伤程度。