用于杀灭细菌芽胞的方法

摘要

本发明涉及一种杀灭细菌芽胞的方法有以下步骤：1）在被污染的物品上，滴洒芽胞萌发剂的L-丙氨酸，2）随后，继续滴洒抗力弱化剂的强碱溶液，作3）以H

说明书

技术领域

本发明涉及一种灭菌的方法，特别涉及一种能有效灭活细菌芽胞的方法。

技术背景

细菌芽胞对理化因子具有高度的抵抗作用。因此，对细菌芽胞所致的疫源地进行洗消时常规手段是采取焚烧加高浓度化学制剂长期浸泡，但这些方法对环境的污染非常严重。如1942年苏格兰海岸附近的Gruinard岛进行了现场炭疽试验，岛屿污染严重，1986年采用高浓度甲醛加海水混合浸泡处理后才得以净化；2003年，重庆三峡库区的炭疽坟墓处理也采用的是高倍量漂白粉与土壤混合浸泡，然后汽油焚烧的方法。

近年来根据生物恐怖袭击的特点，袭击地往往是在人群高度集中的场所，如建筑内、运输工具内和重要的交通场所，现场洗消难度和要求增加；建立可靠、环保型的现场净化处理技术十分必要。

发明内容

本发明的目的是提供一种杀灭细菌芽胞的方法，所述方法利用萌发剂和抗力弱化剂的诱导，促进细菌芽胞启动萌芽，降低胞体结构和组成的抗力，使其在氧化剂的进一步作用下壳质破裂、核酸降解、菌体被有效灭活。本发明用于被污染的环境和物品消毒，杀灭附在环境和物品上的细菌芽胞，并且具有效果好，毒性低，刺激性小，成本低等优点。

本发明的技术方案是：

杀灭细菌芽胞的方法有以下步骤：

1）在被污染的物品上，滴洒浓度为0.10-0.40 mol\L作为芽胞萌发剂的L-丙氨酸，作用20-60min；

2）随后，在经步骤1）所述的芽胞萌发剂处理过的被污染的物品上继续滴洒浓度为0.02-0.50 mol\L作为抗力弱化剂的强碱溶液，作用20-40min；

3）以H₂O₂、Fe²⁺、EDTA为反应体系，其中H₂O₂的浓度为0.10-0.80mol/L；Fe²⁺ 的浓度为0.01-0.08mol/L； EDTA的浓度为0.01-0.08mol/L；取等体积的H₂O₂、Fe²⁺、EDTA溶液混均，调整溶液的pH值为4.0-5.0，即得所配制的配制氧化剂；取配制的氧化剂滴洒在步骤2）所述的被污染的物品上，作用时间30-60min。

步骤2）所述的强碱溶液为氢氧化钠或氢氧化钾等强碱溶液。

步骤3）所述的；Fe²⁺ 为硫酸亚铁或氯化亚铁溶液。

本发明所述的芽胞萌发剂、抗力弱化剂（碱化剂）和氧化剂中所述的试剂均为市售产品。

本发明中萌发剂、抗力弱化剂主要作用于细菌芽胞的芽胞壳质和芽胞衣，使其产生破损，消除屏障和保护作用，芽胞核心暴露；氧化剂可以产生具有强电位的羟基自由基，氧化剂具有强电位，因此有强氧化作用，使发芽体核酸降解、酶活性消失，菌体彻底被灭活。

本发明用于杀灭细菌芽胞的方法对动物呈低毒性，腐蚀性小、成本低，使用方便。各个组成成分在常温保存即可，稳定性好，使用时随配随用。

具体实施方式

下面结合实例对本发明做进一步的说明。

1.实验室研究结果

以终浓度为0.10 mol\L L-丙氨酸为萌发剂主成分，作用芽胞悬液20-60min。以浓度为0.02-0.50 mol\L的氢氧化钠碱溶液为抗力弱化剂，作用上述芽胞悬液20-40min，以H₂O₂、Fe²⁺、EDTA为反应体系，确定H₂O₂的终浓度为0.20mol/L， 硫酸亚铁的浓度为0.02mol/L，EDTA的浓度为0.02mol/L，pH值4.0-5.0，作用时间30-60min。结果如表1所示。

本发明所述的芽胞萌发剂、抗力弱化剂（碱化剂）和氧化剂，使用时按照本方法配制方法，并按照本发明所述灭菌步骤随配随用。

2.现场模拟杀菌实验

取石块，瓦片、叶片、布片、木块表面（1x1cm面积）滴加芽胞悬液滴加10ul芽胞悬液，取沙土0.05g滴加10ul芽胞悬液，模拟受污染外环境。用本发明方法进行芽胞灭活处理：

以终浓度为0.40 mol\L L-丙氨酸为萌发剂，滴加10ul于物品表面，作用20-60min；

以浓度为0.12-0.25 mol\L的氢氧化钠碱溶液为抗力弱化剂，滴加90ul于上述物品表面，作用20-40min；

以H₂O₂、Fe²⁺、EDTA为反应体系，确定H₂O₂的终浓度为0.20mol/L，硫酸亚铁的浓度为0.02mol/L，EDTA的浓度为0.02mol/L，反应pH值4.0-5.0，滴加90ul于上述物品表面，作用30-60min。

对结果进行活菌计数。不同模拟样本芽胞灭活结果见表2。

3.作用混合液毒性试验

选取体重180-200 g的SPF级 Wistar 大鼠60只，分为实验组与对照组，雌雄各半。急性经口毒性试验按1.00ml/100g体重, 将所用消毒混合液一次灌胃给药，连续观察14d记录体重、饮食、死亡情况； 亚急性经口毒性试验按1.00ml/100g体重,每天经口灌胃染毒, 阴性对照组给予无菌蒸馏水。连续染毒28d, 末次染毒后24h断头取血, 检测各项血常规指标，并对主要器官进行病理检查。

结果：各项指标均在本检测单位正常值范围内，各剂量组的各项指标与对照组比较,差异均无统计学意义。该浓度消毒混合液呈无毒。