紫叶珊瑚钟的组织培养方法

摘要

本发明涉及紫叶珊瑚钟的组织培养方法，包括无菌材料的获得，芽的分化和增殖，不定芽壮苗培养，生根培养，炼苗与移栽等步骤。与现有技术相比，本发明大大提高了紫叶珊瑚钟的繁殖速度和苗的整齐度，并更好地保持了原有的母本性状，可实现育苗的工厂化大批量生产。

说明书

技术领域

本发明涉及一种植物的组织培养方法，尤其是涉及紫叶珊瑚钟的组织培养方法。

背景技术

紫叶珊瑚钟为虎耳草科矾根属植物。原产北美，为多年生宿根花卉，叶呈紫红色，喜半荫，耐全光；园林中多用于林下花境，地被，庭院绿化等等，花期为4-10月，是理想的色叶宿根花境材料。但是作为国外引进的新品种，该植物引种数量较少，分株繁殖慢，市场上的需求因种苗供应而受到一定的限制。

发明内容

本发明的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种可提高繁殖速度和苗的整齐度，并保持原有母本性状的紫叶珊瑚钟的组织培养方法。

本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：

紫叶珊瑚钟的组织培养方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

(1)无菌材料的获得

取萌发的幼嫩的芽，去除外面包裹的叶片后，用自来水冲洗1-3h后于超净工作台上，依次利用质量浓度为70-75％的乙醇浸泡10-50s，体积浓度为0.5-2‰的汞浸泡10-30min，再用无菌水冲洗4-6次，利用无菌滤纸吸干芽表面的水分后，将芽切成0.5-2cm长的带腋芽的节段，接种于芽诱导培养基上；

(2)芽的分化和增殖

节段接种于芽诱导培养基上1-3周后，腋芽部位开始膨大，出现绿色突起，3-5周后可见芽分生组织，再培养1-2个月，小芽成丛，将不定芽切下转入不定芽增殖培养基中进行增殖培养，分化的芽的基部虽有较多愈伤组织，但不影响不定芽的增殖，不定芽生长迅速且无玻璃化等不良现象，在培养基中生长发育良好；

(3)不定芽壮苗培养

在不定芽增殖培养基上，诱导出的丛生芽中每丛有3-5株能够伸长，其余的丛生芽处于矮化状态，将丛生芽分成小丛后，转至壮苗培养基上生长，不定芽伸长迅速，15-30天后可以长至1-2cm；

(4)生根培养

取1-2cm的不定芽小植株，转接入生根培养基中诱导生根，5-15天后幼苗基部分化出白色的根原基，25-35天后可以长至1-2cm，根系粗壮，须根众多，生根率为90-100％；

(5)炼苗与移栽

生根培养30-35天，根系长至2-3cm时，选择根系发达、生长健壮的无菌苗，于室内开瓶炼苗1-3天，然后将苗取出，洗净根部的琼脂，栽于温室内的苗床中驯化20-40天，即可移栽室外，给予肥水管理，最终的移栽成活率为90-95％。

所述的芽诱导培养基包括MS+6-BA1.0-3.0mg/L+NAA0.1-0.3mg/L。

所述的不定芽增殖培养基包括MS+6-BA0.5-2.0mg/L+NAA0.05-0.2mg/L。

所述的不定芽增殖培养基优选MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L。

所述的壮苗培养基包括MS+6-BA0.2-2.0mg/L+NAA0.05-0.2mg/L。

所述的壮苗培养基优选MS+6-BA0.2mg/L+NAA0.05mg/L。

所述的生根培养基包括MS+NAA0.1-0.3mg/L。

所述的生根培养基优选MS+NAA0.1mg/L。

所述的培养基还包括蔗糖20-40g/L、琼脂粉4-8g/L，培养基pH5.5-6.0，培养温度24-26℃，光照1500-2500lx。

与现有技术相比，本发明通过组培技术，极大提高了紫叶珊瑚钟的繁殖速度和苗的整齐度，并更好地保持了原有的母本性状，可以实现育苗的工厂化大批量生产。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。

实施例1

(1)无菌材料的获得

取萌发的幼嫩的芽，去除外面包裹的叶片后，用自来水冲洗1h后于超净工作台上，依次利用质量浓度为70％的乙醇浸泡10s，体积浓度为0.5‰的汞浸泡10min，再用无菌水冲洗4次，利用无菌滤纸吸干芽表面的水分后，将芽切成0.5cm长的带腋芽的节段，接种于包括MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L的芽诱导培养基上；

(2)芽的分化和增殖

节段接种于腋芽诱导培养基上1周后，腋芽部位开始膨大，出现绿色突起，3周后可见芽分生组织，再培养1个月，小芽成丛，将不定芽切下转入包括MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L的不定芽增殖培养基中进行增殖培养，分化的芽的基部虽有较多愈伤组织，但不影响不定芽的增殖，不定芽生长迅速且无玻璃化等不良现象，在培养基中生长发育良好；

(3)不定芽壮苗培养

在不定芽增殖培养基上，诱导出的丛生芽中每丛有3株能够伸长，其余的丛生芽处于矮化状态，将丛生芽分成小丛后，转至包括MS+6-BA0.2mg/L+NAA0.05mg/L的壮苗培养基上生长，不定芽伸长迅速，15天后可以长至1cm；

(4)生根培养

取1cm的不定芽小植株，转接入包括MS+NAA0.1mg/L的生根培养基中诱导生根，5天后幼苗基部分化出白色的根原基，25天后可以长至1cm，根系粗壮，须根众多，生根率为90％；

(5)炼苗与移栽

生根培养30天，根系长至2cm时，选择根系发达、生长健壮的无菌苗，于室内开瓶炼苗1天，然后将苗取出，洗净根部的琼脂，栽于温室内的苗床中驯化20天，即可移栽室外，给予肥水管理，最终的移栽成活率为90％。

上述各种情况的培养基还包括蔗糖20g/L、琼脂粉2g/L，pH＝5.5，培养温度22℃，光照1500lx。

实施例2

(1)无菌材料的获得

取萌发的幼嫩的芽，去除外面包裹的叶片后，用自来水冲洗2h后于超净工作台上，依次利用质量浓度为75％的乙醇浸泡30s，体积浓度为1‰的汞浸泡15min，再用无菌水冲洗5次，利用无菌滤纸吸干芽表面的水分后，将芽切成1cm长的带腋芽的节段，接种于包括MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L的芽诱导培养基上；

(2)芽的分化和增殖

节段接种于腋芽诱导培养基上2周后，腋芽部位开始膨大，出现绿色突起，3周后可见芽分生组织，再培养1个月，小芽成丛，将不定芽切下转入包括MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L的不定芽增殖培养基中进行增殖培养，分化的芽的基部虽有较多愈伤组织，但不影响不定芽的增殖，不定芽生长迅速且无玻璃化等不良现象，在培养基中生长发育良好；

(3)不定芽壮苗培养

在不定芽增殖培养基上，诱导出的丛生芽中每丛有5株能够伸长，其余的丛生芽处于矮化状态，将丛生芽分成小丛后，转至包括MS+6-BA0.2mg/L+NAA0.05mg/L的壮苗培养基上生长，不定芽伸长迅速，20天后可以长至1.5cm；

(4)生根培养

取1.5cm的不定芽小植株，转接入包括MS+NAA0.1mg/L的生根培养基中诱导生根，10天后幼苗基部分化出白色的根原基，30天后可以长至3cm，根系粗壮，须根众多，生根率为100％；

(5)炼苗与移栽

生根培养30天，根系长至3cm时，选择根系发达、生长健壮的无菌苗，于室内开瓶炼苗3天，然后将苗取出，洗净根部的琼脂，栽于温室内的苗床中驯化30天，即可移栽室外，给予肥水管理，最终的移栽成活率为95％。

上述各种情况的培养基还包括蔗糖30g/L、琼脂粉6g/L，pH＝5.8，培养温度25℃，光照2000lx。

实施例3

(1)无菌材料的获得

取萌发的幼嫩的芽，去除外面包裹的叶片后，用自来水冲洗3h后于超净工作台上，依次利用质量浓度为75％的乙醇浸泡50s，体积浓度为2‰的汞浸泡30min，再用无菌水冲洗6次，利用无菌滤纸吸干芽表面的水分后，将芽切成2cm长的带腋芽的节段，接种于包括MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.3mg/L的芽诱导培养基上；

(2)芽的分化和增殖

节段接种于腋芽诱导培养基上3周后，腋芽部位开始膨大，出现绿色突起，5周后可见芽分生组织，再培养2个月，小芽成丛，将不定芽切下转入包括MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L的不定芽增殖培养基中进行增殖培养，分化的芽的基部虽有较多愈伤组织，但不影响不定芽的增殖，不定芽生长迅速且无玻璃化等不良现象，在培养基中生长发育良好；

(3)不定芽壮苗培养

在不定芽增殖培养基上，诱导出的丛生芽中每丛有4株能够伸长，其余的丛生芽处于矮化状态，将丛生芽分成小丛后，转至包括MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L的壮苗培养基上生长，不定芽伸长迅速，30天后可以长至2cm；

(4)生根培养

取2cm的不定芽小植株，转接入包括MS+NAA0.3mg/L的生根培养基中诱导生根，15天后幼苗基部分化出白色的根原基，35天后可以长至2cm，根系粗壮，须根众多，生根率为96％；

(5)炼苗与移栽

生根培养35天，根系长至3cm时，选择根系发达、生长健壮的无菌苗，于室内开瓶炼苗3天，然后将苗取出，洗净根部的琼脂，栽于温室内的苗床中驯化40天，即可移栽室外，给予肥水管理，最终的移栽成活率为92％。

上述各种情况的培养基还包括蔗糖40g/L、琼脂粉8g/L，pH＝6.0，培养温度26℃，光照2500lx。