一种中药提取物,包含该提取物的口服制剂及该制剂的制备方法

摘要

本发明涉及一种中药提取物，包含该提取物的口服制剂及该制剂的制备方法。该中药提取物选用水蛭和地龙为原料药，由如下方法制备：1)原料药的重量份：水蛭1-100份、地龙1-100份；2)按原料药的重量份取水蛭、地龙，用50-95％乙醇(V/V浓度)，4-12倍量(相对于水蛭和地龙的总重量)，提取1-3次，每次1-3h，滤过，回收滤液，浓缩，得干膏。本发明提取物更容易吸收通过血脑屏障，能起到更好的疗效；本发明口服制剂最大程度的降低了辅料的用量，减少了病人的服用剂量，也节约了成本；对脑中风及心血管等方面的疾病具有良好的治疗效果。

说明书

技术领域

本发明涉及一种药物提取物，特别是涉及一种中药提取物，包含该提取物的口服制剂及该制剂的制备方法。

背景技术

当前，以高血压、脑卒中和冠心病为代表的心脑血管疾病严重危害人类健康，被称为″人类健康的头号刽子手″。心脑血管疾病的数量绝对和相对地增多，心脑血管疾病已经逐渐成为我国城乡居民的第一位死因，目前近40％的死亡者都是死于这类疾病，心脑血管疾病已成为威胁人类健康的主要原因。

目前我国各种心脑血管病药物中，口服制剂主要有复方丹参滴丸、通心络、步长脑心通、地奥心血康、速效救心丸、脉络宁、麝香保心丸、杏灵滴丸等。这些药物多以活血化瘀为治疗原则，多采用传统中药如丹参、银杏叶、川芎等药材。但心血管疾病病因复杂，非单纯活血化瘀能治疗。

传统的方式服药量大，口服不容易吸收，药效不能得到充分的保证，本品种克服了传统用药的缺陷，在保证药效的基础上进行了改革和创新。

发明内容

本发明的目的在于提供一种治疗脑中风及心血管疾病的中药提取物。

本发明另一个目的是提供包含该提取物的口服制剂及该制剂的制备方法。

本发明的中药提取物，选用水蛭和地龙为原料药，该提取物由如下方法制备：

1)原料药的重量配比：水蛭1-100份、地龙1-100份；

2)按原料药的重量份取水蛭、地龙，用50-95％乙醇(体积浓度)、4-12倍量(相对于水蛭和地龙的总重量)、每次1-3h，分别提取1-3次，滤过，回收滤液，浓缩，得干膏。

优选地，所述提取物由如下方法制备：

1)原料药的重量配比：水蛭50份、地龙50份；

2)取上述重量份的水蛭、地龙，用70％乙醇(V/V)、10倍量(相对于水蛭或地龙的重量)、每次1.5h，提取2次，滤过，回收滤液，浓缩，得干膏。

本发明还提供包含上述中药提取物的口服制剂，它包括下述重量比的组分：干膏∶微晶纤维素∶淀粉为6∶3∶1。

本发明中药提取物的口服制剂可以为胶囊剂、颗粒剂、片剂，软胶囊，滴丸，口崩片，咀嚼片，分散片等口服剂型。

本发明还提供本发明中药提取物口服制剂的制备方法，包括如下步骤：将干膏粉和微晶纤维素、淀粉按配比混合，用乙醇润湿，制成软材，用合适的目筛制粒。

本发明中药组合物以水蛭为君药，职其味成性平，成能软坚走血，而善于破血逐瘀。早在《神农本草经》就称其“主逐恶血、瘀血、月闭、破血瘕积聚、无子、利水道”。地龙为臣，本品味成性寒，善于走窜，为清热，化瘀通络之常用药。《本草求真》云：“蚯蚓本有钻土之能，化药之力，而凡跌扑受伤，血瘀经络，又安有任其停蓄而不为之消化乎”《中药大辞典》、《全国中草药汇编》和《中药药理与应用》均记载地龙能治“半身不遂”，并称其“降血压，舒筋治络”。水蛭主要含蛋白质、水蛭素、肝素、抗血栓素，其分泌物另含一种组织胺样物质，此外含有十几种氨基酸和Zn、Mn、Fe、Co、Cr、Se、Mo和Ni等多种微量元素。地龙中含有蛋白质、丰富的酶类、琥珀酸等多种不饱和脂肪酸、20种游离氨基酸、核苷酸等等，因此，需将其有效的使有效成分充分的提取出来才能达到良好的效果。

本发明提取物及制剂具有以下有益效果：

1、通过70％浓度的醇回流提取，这与传统的水煎煮方式和直接原药材粉碎入药均由很大的区别，同时，所获得的有效成分也不一样，脂溶性物质占绝大多数，通过醇热回流提取，大部分不能口服吸收的大分子物质有可能分裂成小分子片段，更容易吸收通过血脑屏障，因此能起到更好的疗效；

2、在处方筛选上，为了减少辅料的用量，本发明摒弃了传统的采用提取过的药材残渣大粉做辅料的方法，而适当的采用了更符合脂溶性药物性质的化学辅料，通过试验，最大程度的降低了辅料的用量，减少了病人的服用剂量，也节约了成本；

3、在剂型设计上，也充分考虑到药物的特点，以及产品的稳定性，经济性，服用的方便性等，采用与药物性质更符合的口服制剂，优选胶囊制剂；

4、对脑中风及心血管等方面的疾病具有良好的治疗效果。

附图说明

图1 4号样品不同相对湿度下颗粒吸湿百分率；

图2 6号样品不同相对湿度下颗粒吸湿百分率；

图3 7号样品不同相对湿度下颗粒吸湿百分率。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

实施例1

本发明的中药提取物的制备方法如下：取水蛭、地龙各50g，用500g、70％乙醇(体积浓度)提取2次，每次1.5h，滤过，回收滤液，浓缩，得干膏。

实施例2

本发明的中药提取物的制备方法如下：取水蛭1g、地龙100g，用450g、50％乙醇(体积浓度)提取1次，每次1h，滤过，回收滤液，浓缩，得干膏。

实施例3

本发明的中药提取物的制备方法如下：取水蛭100g、地龙1g，用1000g、95％乙醇(体积浓度)提取3次，每次3h，滤过，回收滤液，浓缩，得干膏。

实施例4

本发明的中药提取物的制备方法如下：取水蛭、地龙各50g，用1200g、80％乙醇(体积浓度)提取2次，每次2h，滤过，回收滤液，浓缩，得干膏。

实施例5

本发明中药制剂通过以下方法制备：将过4号筛的干膏粉(按照实施例1方法得到)6g和微晶纤维素3g、淀粉1g混合，用乙醇润湿，制成软材，用10目筛制粒，8目筛整粒，65目筛去细粉，得颗粒剂。

实施例6

本发明中药制剂通过以下方法制备：将过4号筛的干膏粉(按照实施例1方法得到)6g和微晶纤维素3g、淀粉1g混合，用乙醇润湿，制成软材，18-22目筛制粒，填充入胶囊，得胶囊剂。

实施例7

本发明中药制剂通过以下方法制备：将过4号筛的干膏粉(按照实施例1方法得到)6g和微晶纤维素3g、淀粉1g混合，用乙醇润湿，制成软材，16-18目筛制粒，压片即得片剂。

实施例8

本发明中药制剂通过以下方法制备：将过4号筛的干膏粉(按照实施例1方法得到)6g，与氢化大豆油1份，黄蜡1份，植物油4份，0.1％的吐温80，研磨，压制成软胶囊即得。

实施例9

将过4号筛的干膏粉(按照实施例1方法得到)6g，乳糖8g，甘露醇4g，低取代羟丙基纤维素4g，微晶纤维素3g，微粉硅胶0.5g，酒石酸0.5g，研细，过80目筛，混合均匀，将聚乙烯吡咯烷酮溶于适量50％乙醇中作为粘合剂，制成软材，湿法制粒，60℃鼓风烘干，过筛后，加硬脂酸镁0.3g，整粒，混匀，压片，即得口崩片。

实施例10

称取PEG 4000和PEG 6000(2∶3重量比)18g，加热融化，加入过4号筛的干膏粉(按照实施例1方法得到)6g，不断搅拌使熔融，趁热转移至滴丸机贮液池，滴制温度85℃，滴距6cm，滴速40滴/min，冷却剂为二甲硅油，高度85cm，温度10℃，收集滴丸，以滤纸吸去滴丸表面的冷却剂，干燥，即得滴丸。

实施例11

将过4号筛的干膏粉(按照实施例1方法得到)6g，蔗糖∶乳糖∶甘露醇(3∶1∶1重量比)18g，，按等量递加法放置在混合机中混合，加1‰硬脂酸镁，混合均匀，压片，即得咀嚼片。

实施例12

将过4号筛的干膏粉(按照实施例1方法得到)6g，羧甲淀粉钠2g  交联PVP 3g，低取代羟丙基纤维素4g，微晶纤维素4g，混匀，过100-120目筛，再与其他辅料混匀，制粒，最后加入交联PVP 2g，硬脂酸镁0.6g微粉硅胶0.4g，混匀，压片，即得分散片。

实验例1提取工艺考察

本发明中药提取物在提取时，以次黄嘌呤和药效学为指标，对乙醇浓度、乙醇用量，提取时间进行了考察。

称取水蛭50g、地龙50g，共100g，9份，按表1进行热回流提取，放冷，滤过，合并相对应的滤液，回收乙醇至无醇味，浓缩定容至250ml。用于次黄嘌呤的测定，计算提得量。结果见表2，方差分析结果见表3、4。

表1提取因素水平表

表2提取的正交实验结果

表3方差分析表

结论：由表3可知因素A对试验结果有显著影响，结合药理的药效结果，正交试验表中的2号样品的药效最佳，因此确定最优提取方案为A₁B₂C₂。即70％乙醇，10倍量提取，每次1.5小时。

提取次数考察

取水蛭、地龙各50g，分别用70％乙醇、10倍量、1.5h/次，分别提取1、2、3次，滤过，分别回收滤液，浓缩，定容至250ml，摇匀，即得，备用。以次黄嘌呤含量为指标，确定提取次数。结果见表4：

表4提取次数考察

由上表可知提取2次的次黄嘌呤的提得量是提取三次的92％，所以结合实际的大生产，确定为提取2次。

提取工艺为：70％乙醇，10倍量，提取2次，每次1.5h。

实验例2本发明中药口服制剂成型工艺考察

1、对不同的辅料及配比进行考察

将过4号筛的干膏粉(实施例1得到的提取物)和不同的辅料按不同的比例混合，用乙醇润湿，制成软材，用18目筛制粒。结果见表5：

表5不同的辅料配比及结果

2、堆密度的测定

将过筛后的颗粒放入干燥的10ml量筒中，轻轻振动至刻度，然后将量筒中的颗粒称重为M(g)，两者的比值即为堆密度。堆密度＝M/V，结果见表6：

表6各样品的堆密度

  样品号  堆密度(g/ml)  4  0.321  5  0.318  6  0.346  7  0.329

3、休止角的测定

采用固定漏斗法，将2只漏斗串联并固定于水平放置的坐标纸上2cm的高度处，小心地将颗粒沿漏斗壁倒入最上的漏斗中直到坐标纸上形成的颗粒圆锥体尖端接触到漏斗口为止，由坐标纸测出圆锥底部的直径(2R)，计算出休止角tga＝H/R。做3次，计算平均值。结果见表7：

表7各样品的休止角

  样品  休止角  4  28.75  5  28.88  6  28.84  7  30.38

4、临界相对湿度的确定

平衡吸湿时间的测定：分别称取4、6、7号样品约1g，平铺于干燥至恒重的秤量瓶中，干燥至恒重，精密秤定，打开瓶盖，置盛有氯化钠过饱和溶液的玻璃干燥器内(相对湿度为75.3％)，于25℃恒温保存，分别于2、4、8、12、18、24、36、48、60、72、96h取出秤量瓶，精密秤定重量，计算吸湿率。结果4份样品均在72h达到吸湿平衡。

临界相对湿度的测定：分别称取4、6、7号样品，每份约1g，平铺于干燥至恒重的秤量瓶中，干燥至恒重，精密秤定，打开瓶盖，置盛有不同盐过饱和溶液的玻璃干燥器内，于25℃的恒温放置保存72h，取出秤量瓶，精密秤定重量，计算吸湿率，结果见表8。以吸湿率对相对湿度作图得吸湿平衡曲线，见附图1、2、3。

表8临界相对湿度测定结果

由以上各图可知，4号样品的临界相对湿度约为70％、6号样品的临界相对湿度约为75％，7号样品的临界相对湿度约为60％。

结论：根据以上的各试验数据，考虑到实际的工业大生产的成本和服用量，确定最优的制剂成型工艺为：干膏∶微晶纤维素∶淀粉(6∶3∶1)，用乙醇润湿，根据剂型不同，采用不同的目筛制粒。

实验例3本发明中药提取物对小鼠脑缺血的影响作用

1实验目的

考察本发明中药提取物对尾静脉注射过氧化物引起小鼠脑缺氧模型的影响作用。

2实验材料

2.1受试物

由中国医药研究开发中心有限公司天然药物研发部提供，批号：20080303。

1号药液(50％醇提)：黄棕色液体200ml，-20℃保存，临用时解冻后应用(用蒸馏水适量，最终配成含生药材66mg/ml)。

2号药液(水提)：黄棕色液体200ml，-20℃保存，临用时解冻后应用(含生药材66mg/ml)。

3号药液(70％醇提)：黄棕色液体200ml，-20℃保存，临用时解冻后应用(使用实施例1所得干膏配制，用蒸馏水适量，最终配成含生药材66mg/ml)。

4号药液(细粉-药材生药粉)：黄白色细粉40g，常温保存，临用时用0.5％CMC配制成所需浓度(含生药材66mg/ml)灌胃给予动物。

2.2药品与试剂

过氧化氢叔丁基：国药集团化学试剂有限公司，黄色透明状液体，易燃易爆品远离热源，火种，处于阴凉通风处保存。批号T20060822。

过氧化氢：国药集团化学试剂有限公司，无色透明液体，含量30％，无色透明液体，批号20070907。

维脑路通片：北京大恒制药有限公司，片剂，规格：60mg/片。临用时研磨成药粉后用0.5％CMC配制成所需浓度(60mg/ml)灌胃给予动物。批号：071214。

2.3实验动物

SPF级ICR小鼠60只，雌雄各半，体重18～22g；动物由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，许可证编号：SCXK(京)2007-0001。

3实验方法

3.1实验原理

利用尾静脉注射过氧化物及缺氧引起的血液内高氧化状态导致小鼠TIA样发作为动物模型，观察本发明中药提取物的治疗和保护作用。

3.2实验过程

取体重18～22g SPF级ICR小鼠60只，雌雄各半，随机分为7组：①阳性对照组；②模型对照组；③～⑦供试品1号药液、2号药液、3号药液、4号药液。阳性对照组灌胃给予300mg/kg的维脑路通溶液，空白组给等量溶酶，各给药组分别给20％(体积用量)的供试品溶液(给药剂量分别为6g/kg)，给药5d，2次/d。

给药第6d，在给药30min后，采用尾静脉注射过氧化物(过氧化氢叔丁基/过氧化氢)的方法，每间隔24小时给药7.5ml/kg，在尾静脉给药后观察10min，再把小鼠置于容积为500ml的密封容器中观察15min，连续给药并观察4d，1次/d。观察给药后的动物反应的TIA样发作并对其评分，同时记录给药后的死亡率。评分标准表9：

表9TIA样发作评分标准

  反应症状  分值  卒中指数  毛发脏乱，颤抖发声  1  运动下降或迟钝或过强  1  耳触觉减退  1  头翘起  3  眼球固定状睁开  3  后肢呈”八”字  3  上睑下垂  1  转圈  3  惊厥爆发样运动  3  极度衰竭  6  神经系统症状活动  自发性探究  1  刺激时走动或爬行  1  刺激时不能动  2  步态  正常  0  共济失调/肌张力高  1  爬行  2  无步态  3

  反应症状  分值  进食  有  0  无  1  饮水  有  0  无  1  对痛刺激的反应  移动/走动  0  头/躯干运动过强或反应  1  肢体回缩或无反应  2  总分  39

4实验结果

实验结果表明：本发明中药提取物对尾静脉注射过氧化物后导致小鼠TIA样发作为动物模型有一定的保护作用，四个药物对模型动物的TIA样发作症状均有一定的抑制作用，反应在其症状评分都低于对应的模型组，其中2～4号药液对该反应的抑制作用最为明显，其反应症状评分与模型组均显著性的降低，并与模型组比较有显著性差异(P＜0.05)，其中以3号药物和4号药物作用最为明显。实验结果见表10。

同时从动物的病死率上判断，四个药物组的病死率均低于模型组，其中以3号药和4号药的效果最为明显。实验结果见表11。

表10本发明中药提取物给药后症状评分统计表

与模型组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01

表11本发明中药提取物给药后病死率统计表

5结论

4个供试样品对尾静脉注射过氧化物后导致小鼠TIA样发作为动物模型均有一定的保护作用，其中以3号药和4号药的效果最为明显。

实验例4

1实验目的

对本发明的中药口服胶囊，进行药效学实验比较研究，以确定本品口服是否有效。

2实验材料

2.1受试物

由牡丹江友搏制药厂提供，批号：070731；

供试品A：水蛭、地龙寡肽液两瓶，黑棕色液体，生药含量分别为0.81g/ml和1.4g/ml，临用时用蒸馏水配制成所需浓度，4℃保存。

供试品B：疏血通注射液，黄色透明状液体，生药含量为0.5g/ml，临用时用蒸馏水配制成所需浓度，4℃保存。

供试品C：实施例6所得胶囊(下称疏血通胶囊)，临用时用0.5％CMC(羧甲基纤维素)配制成所需浓度，4℃保存。

供试品D：水蛭、地龙残渣粉，深灰色粉末，生药含量为11g/g，临用时用0.5％CMC配制成所需浓度，4℃保存。

2.2药品与试剂

凝血酶原时间(PT)测定试剂盒：上海太阳生物技术有限公司，批号：105053

凝血酶时间(TT)测定试剂盒：上海太阳生物技术有限公司，批号：121018

阿司匹林(ASP)：白色粉末，沈阳万能制药厂生产，批号：20020808

ADP：sigma进口分装，批号：073K7007

2.3仪器

QX-200全血血小板聚集仪：上海医大仪器厂

2.4动物

SPF级ICR小鼠100只，雌雄各半，体重18～22g；SPF级雄性SD大鼠200只，体重250～300g；动物由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，许可证编号：SCXK(京)2007-0001。

3实验方法

3.1疏血通胶囊对小鼠凝血系统的影响

取体重18～22g SPF级ICR小鼠100只，雌雄各半，随机分为十组：①阳性对照组；②空白对照组；③～⑩供试品A、B、C、D高低剂量组。阳性对照组灌胃给予100mg/kg的ASP溶液，空白组给等量溶酶，各给药组高低剂量组分别给予20％及5％(给药剂量分别为6g/kg及1.5g/kg)的供试品溶液，给药体积为15ml/kg，给药7d，2次/d。d7给药30min后，利用尾静脉采血测定凝血时间(CT)后，每只动物眼眶采血0.8～1ml加入装有0.109M的枸掾酸钠的离心管中，3000rmp/min离心10min后，取血浆检测凝血酶原时间(PT)及凝血酶时间(TT)，结果见表12。

3.2疏血通胶囊对大鼠凝血系统的影响

取体重250～300g SPF级SD雄性大鼠100只，随机分为十组：①阳性对照组；②空白对照组；③～⑩供试品A、B、C、D高低剂量组。阳性对照组灌胃给予70mg/kg的ASP溶液，空白组给等量溶酶，各给药组高低剂量组分别给予20％及5％(给药剂量分别为4.0g/kg及1.0g/kg)的供试品溶液，给药体积为10ml/kg，给药7d，2次/d。

给药前，动物眼眶静脉取血2～3ml，测定凝血时间(CT)后，将0.8～1ml血液分装于装有0.109M的枸掾酸钠的离心管中，3000rmp/min离心10min后，取血浆检测凝血酶原时间(PT)及凝血酶时间(TT)。

d7给药30min后，动物眼眶静脉取血测定凝血时间(CT)后，每只动物眼眶采血0.8～1ml加入装有0.109M的枸掾酸钠的离心管中，3000rmp/min离心10min后，取血浆检测凝血酶原时间(PT)及凝血酶时间(TT)，结果见表13、14。

3.3疏血通胶囊对ADP引起的大鼠血小板聚集的影响

取体重250～300g SPF级SD雄性大鼠100只，随机分为十组：①阳性对照组；②空白对照组；③～⑩供试品A、B、C、D高低剂量组。阳性对照组灌胃给予70mg/kg的ASP溶液，空白组给等量溶酶，各给药组高低剂量组分别给予20％及5％(给药剂量分别为4.0g/kg及1.0g/kg)的供试品溶液，给药体积为10ml/kg，给药7d，2次/d。

d7给药30min后，动物眼眶静脉取血测定凝血时间(CT)后，继续取血0.8～1.0ml分装于装有200U/ml肝素的离心管内代测。实验时，取0.5ml血样加入专有的试管中，再用定量移液器在血样中加入0.5ml的台式液，37℃温育5min后，加入1mmol/L的ADP溶液5μl，观察5min内的最大聚集程度。分别记录30s、60s、90s的血小板聚集程度，并记录达到最大聚集程度的时间点和达到1/2最大聚集程度的时间点。所有样本的血小板聚集实验均在4h内完成。

台式液(pH＝7.4)的制备：取NaCl 8.0g、MgCl₂.6H₂O 0.427g、CaCl₂0.2g、KCl 0.2g、葡萄糖1g、NaHCO₃ 1.5g、NaH₂PO₄.2H₂O0.065g、肝素2000U，用蒸馏水定容至1000ml，即为该实验专用的缓冲溶液，4℃保存。结果见表15。

3.4疏血通胶囊对大鼠静脉血栓的影响

取体重250～300g SPF级SD雄性大鼠100只，随机分为十组：①阳性对照组；②空白对照组；③～⑩供试品A、B、C、D高低剂量组。阳性对照组灌胃给予70mg/kg的ASP溶液，空白组给等量溶酶，各给药组高低剂量组分别给予20％及5％(给药剂量分别为4.0g/kg及1.0g/kg)的供试品溶液，给药体积为10ml/kg，给药8d，2次/d。

d8给药30min后，3.5％水合氯醛(10ml/kg，ip)麻醉动物后开腹，分离下腔静脉，与左肾静脉下方用手术线结扎下腔静脉，缝合腹壁，2h、6h后重新打开腹腔，取出血栓除去浮血后称湿重，60℃干燥4h，冷却后称干重，计算血栓重量及血栓抑制率。结果见表16、17。

表12疏血通胶囊对小鼠凝血系统的影响作用(n＝10)

与空白对照比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01。

表13疏血通胶囊对大鼠凝血系统的影响作用给药前测量值(n＝10)

与空白对照比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01

表14疏血通胶囊对大鼠凝血系统的影响作用给药后测量值(n＝10)

与空白对照比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01

表15疏血通胶囊对大鼠血小板聚集的影响作用(n＝10)

与空白对照比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01

表16疏血通胶囊对大鼠下腔静脉结扎2h后静脉血栓的影响作用(n＝10)

与空白对照比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01

表17疏血通胶囊对大鼠下腔静脉结扎6h后静脉血栓的影响作用(n＝10)

与空白对照比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01

实验结果：

本发明胶囊对凝血系统的有较明显的影响作用：对小鼠及大鼠的凝血时间有较明显的延长作用，并且对大鼠的凝血酶时间(TT)，有较明显的延长作用；对ADP引起的大鼠血小板聚集均有较明显的抑制作用；对大鼠静脉血栓形成的抑制作用均较明显。