预防和治疗禽类病毒性疾病的中药组合物及制备方法

摘要

一种预防和治疗禽类病毒性疾病的中药组合物及制备方法，其特征在于：所述中药组合物包括下述重量份数比的原料：其中：金银花5～22份、板蓝根5～25份、蒲公英4～18份、黄连4～12份、淡竹叶4～15份、穿心莲4～20份、玄参3～19份、生地5～14份、麻黄3～15份、甘草5～13份。本发明的中药组合物相比现有技术具有天然绿色、高效、提高机体免疫力的优点，通过“驱邪扶正”调整机体的失衡状态、促进生长，达到标本兼治的功效。

说明书

技术领域

本发明涉及兽药生产制备技术领域，具体说是涉及一种高效、安全、低毒的预防和治疗禽类病毒性疾病的中药组合物及其制备方法。

背景技术

随着现代工业生产的迅猛发展和社会经济的繁荣，生态环境遭到严重的污染和破坏，烈性病毒性传染病如传染性非典型性肺炎(SARS)、高致病性禽流感、猪无名高热、人类的流感等不断挑衅人和动物的健康，对人和动物的生存造成极大的威胁。人们迫切需要一种高效、低毒、安全地预防与治疗病毒性传染性的新型药物。

化疗药物在快速、有效地杀灭致病菌的同时，不仅对动物产生药源性疾病的危害、降低生产性能，重要的是药物残留影响食品的安全性及人类健康，还可引起致病微生物产生耐药性，变异的病原微生物还可污染环境导致更严重疾病的传播；病毒性疾病的疫苗接种针对特定的致病微生物能产生抵抗力，但不能抵御变异和其他种类的病毒，同时也有多次免疫操作影响生产性能、增加生产成本等缺点。

中医药是中华民族的“国粹”，有着独特的医学理论和治疗方法，在历次流行性病毒病的治疗中发挥了不可替代的作用。中医药通过“驱邪扶正”调整机体的失衡状态，达到标本兼治的功效；组方中多味药物的合理配伍，针对多种致病因素和途径，多环节、多层次、多靶点地全方位抵御疾病、提高机体的抗病能力；根据植物性药物“药食同源”的用药理论，中药绿色、天然、安全、低(或无)毒、无残留的优势显得更加突出；卫生部部长陈竺提出要探索和发挥中医药“治未病”的优势，是对中药降低传染性病毒的危害、净化生态环境的肯定；中药还有费用比较低廉、临床疗效确切、创新潜力巨大、发展空间广阔等多种特色优势。

发明内容

本发明的目的正是充分发挥中药的多种特色优势，针对上述现有技术中所存在的不足之处所提供的一种预防和治疗禽类病毒性疾病的中药组合物及制备方法。本发明的中药组合物具有天然绿色、高效、提高机体免疫力的优点。

本发明的目的可通过下述技术措施来实现：

本发明的预防和治疗禽类病毒性疾病的中药组合物包括下述重量份数比的原料：其中：金银花5～22份、板蓝根5～25份、蒲公英4～18份、黄连4～12份、淡竹叶4～15份、穿心莲4～20份、玄参3～19份、生地5～14份、麻黄3～15份、甘草5～13份。

本发明的中药组合物的制备方法包括下述步骤：

a、进行水提取：按重量份数比取金银花5～22份、板蓝根5～25份、蒲公英4～18份、黄连4～12份、淡竹叶4～15份、穿心莲4～20份、玄参3～19份、生地5～14份、麻黄3～15份、甘草5～13份，用水量以原料药材被水浸没即可，放入水中浸泡1-2h，然后再用热回流提取5-8h，之后进行过滤、浓缩至原浸提液的1/100成流浸膏状；

b、对水提过的药渣进行2次醇沉，首先在残渣中加入3-5倍体积比的乙醇含量为70％的乙醇进行醇沉12-15h，然后再加入3-5倍体积比的乙醇含量为80％的乙醇进行再次醇沉12-15h，过滤去残渣，滤液进行减压回收乙醇；

c、减压回收乙醇、浓缩提取液至无醇味；加入a步骤所得到的浓缩水提液，之后用纯化水稀释至处方量1g/mL；4℃保存备用。

本发明的组方原则是“祛邪扶正”。在收集和总结众多经方、验方的基础上，按照“君、臣、佐、使″的组方方针，经多方试验论证成方。经过设计提取不同药物的有效成分，使之发挥协同作用，使得药物抗病毒的范围更加广谱、功效更加显著，同时，促进机体产生强大的非特异和特异性免疫功能，提高机体抵御各种疾病的能力。

组方中君药为金银花、板蓝根、蒲公英、黄连，为清热解毒类药物，具有清热解毒、散热疏风、通淋利尿、消肿散结、燥湿泻火等功效，发挥直接的杀毒、杀菌、减少体内病毒的作用，而且金银花、板蓝根的有效成分，通过提高胞浆内药物的含量抑制病毒的复制、阻断病毒增殖；臣药为玄参、淡竹叶、穿心莲，具有滋阴降火、清热利尿、消肿止痛等功效，可促进机体免疫机能增强，通过特异性和非特异性机制产生大量抗病毒因子，抑制病毒蛋白合成、影响病毒粒子的组装和释放，从而达到抑杀病毒的功效；辅佐药为生地、麻黄、甘草，具有滋阴生津、解表散寒、宣肺平喘、健脾和药性等功效，能够提高机体的免疫功能，促进机体正常生理功能协调，从而达到抗病毒、增强体质的疗效。

本发明的有益效果如下：

本发明的中药组合物相比现有技术具有天然绿色、高效、提高机体免疫力的优点，通过“驱邪扶正”调整机体的失衡状态、促进生长，达到标本兼治的功效。

附图说明

图1免疫器官指数。

图2体重增长对比。

图3鸡胚尿囊液中NDV的HA效价。

具体实施方式

本发明将结合以下实施例作进一步描述：

实施例1：

a、按重量份数比取金银花18份、板蓝根25份、蒲公英12份、黄连4份、淡竹叶4份、穿心莲20份、玄参3份、生地5份、麻黄4份、甘草5份进行水提取，首先浸泡1-2h，用水量以原料药材被水浸没即可，然后用热回流提取5-8h，之后进行过滤、浓缩至原浸提液的1/100成流浸膏状；

b、对水提过的药渣进行2次醇沉，首先在残渣中加入3-5倍体积比的乙醇含量为70％的乙醇进行醇沉12-15h，然后再加入3-5倍体积比的乙醇含量为80％的乙醇进行再次醇沉12-15h，过滤去残渣，滤液进行减压回收乙醇；

c、减压回收乙醇、浓缩提取液至无醇味；加入a步骤所得到的浓缩水提液，之后用纯化水稀释至处方量1g/mL；4℃保存备用。

实施例2：

a、按重量份数比取金银花5份、板蓝根18份、蒲公英18份、黄连5份、淡竹叶15份、穿心莲4份、玄参5份、生地10份、麻黄15份、甘草5份进行水提取，首先浸泡1-2h，用水量以原料药材被水浸没即可，然后用热回流提取5-8h，之后进行过滤、浓缩至原浸提液的1/100成流浸膏状；

b、对水提过的药渣进行2次醇沉，首先在残渣中加入3-5倍体积比的乙醇含量为70％的乙醇进行醇沉12-15h，然后再加入3-5倍体积比的乙醇含量为80％的乙醇进行再次醇沉12-15h，过滤去残渣，滤液进行减压回收乙醇；

c、减压回收乙醇、浓缩提取液至无醇味；加入a步骤所得到的浓缩水提液，之后用纯化水稀释至处方量1g/mL；4℃保存备用。

实施例3：

a、按重量份数比取金银花22份、板蓝根5份、蒲公英4份、黄连12份、淡竹叶4份、穿心莲4份、玄参19份、生地14份、麻黄3份、甘草13份进行水提取，首先浸泡1-2h，用水量以原料药材被水浸没即可，然后用热回流提取5-8h，之后进行过滤、浓缩至原浸提液的1/100成流浸膏状；

b、对水提过的药渣进行2次醇沉，首先在残渣中加入3-5倍体积比的乙醇含量为70％的乙醇进行醇沉12-15h，然后再加入3-5倍体积比的乙醇含量为80％的乙醇进行再次醇沉12-15h，过滤去残渣，滤液进行减压回收乙醇；

c、减压回收乙醇、浓缩提取液至无醇味；加入a步骤所得到的浓缩水提液，之后用纯化水稀释至处方量1g/mL；4℃保存备用。

本发明的试验效果如下：

(1)药物的毒性试验

试验方法：将3组实施例的组合物用生理盐水分别进行0、5、10、50、100倍稀释，分别注入9日龄的SPF鸡胚尿囊腔内，0.2mL/只，隔12h再注一次，共注射2次，每个处理4个平行实验，设生理盐水对照组，共用72枚鸡胚。注射后，于37℃恒温培养箱孵育72h，每天观察鸡胚成活状态，72h未死亡的鸡胚继续孵化直至出雏。以鸡胚出现死亡的最小用药浓度为该药液的最小致死浓度。

试验结果：所有浓度药液接种鸡胚无一死亡，孵化的雏鸡正常。因此，药液对鸡胚的最小致死量大于1g/mL。

结论：3组实施例的鸡胚毒性极小或无毒。

(2)组合物增强免疫力、促生长作用

试验方法：购买1日龄肉杂鸡480只为实验动物，正常饲养至第9天随机分为4组：实例一给药组、实例二给药组、实例三给药组、空白对照组，每个处理分6个重复，每个重复20只鸡。第10天开始实验，采用口服喂药的方式，早晚各喂一次，间隔12h，0.2mL/只·次；对照组给予生理盐水替代药液。正常饲养方式进行饲喂，未进行任何疫病的免疫和治疗。试验期16天。

用药后的第16天(即25日龄)，各试验组鸡放血致死，称其体重，取胸腺、脾脏和法氏囊，剥离周围的脂肪组织和肌膜等多余组织，用滤纸吸水份后称重，按下面公式计算各免疫器官：法氏囊、脾脏和胸腺的器官指数，作为促进免疫能力的指标。

法氏囊指数(mg/g)＝法氏囊重(mg)/体重(10g)

胸腺指数(mg/g)＝胸腺重(mg)/体重(10g)

脾指数(mg/g)＝脾重(mg)/体重(10g)

试验期间，分别在第16日龄和第25日龄进行逐只称重记录，作为药液对生长能力影响的指标。

试验结果：

A免疫器官指数检测(参见图1)

从免疫器官指数可以看出，3组实施例方案的法氏囊指数、胸腺指数和脾脏指数都明显高于空白对照组，说明3组实施例方案均能促进免疫器官的发育，有效的提高机体的免疫能力和抗病能力，其中实施例一的法氏囊指数较高，实施例二的胸腺指数和脾脏指数较高。

B体重的测定(参见图2)；

通过体重测定，不同实验组一周后体重显示明显差别，3个实施例组鸡只平均体重比对照组高70-90g；试验结束时，3个实施例组平均体重高于对照组110-135g。

结论：三个实施例方案对生长和免疫均有一定的促进作用。

(3)抗鸡新城疫病毒的鸡胚试验

试验方法：将组合物与病毒采用不同的方式进行作用。以加入组合物2-4h后再注入病毒为“预防”方式；以组合物和病毒在体外作用2-4h后再注入鸡胚为“直接杀毒”方式；以先注入病毒2-4h后加入组合物为“治疗”方式。同时，将病毒和生理盐水注入鸡胚设为阳性和阴性对照，以鸡胚病毒滴度的变化和鸡胚的成活率作为衡量指标，计算组合物对鸡胚的保护率：

保护率＝(总鸡胚数-死亡鸡胚数)/总鸡胚数×100％。

注入组合物的浓度为1g/mL，以9-11日龄的SPF鸡胚为实验材料，病毒选用鸡新城疫中等毒力活疫苗(I系)，注射量均剂量为0.2mL/枚，每种处理设3个重复，每个重复10枚鸡胚，共用330枚SPF鸡胚。37℃恒温箱培养。弃去24h以内死亡鸡胚，收集24-72h存活鸡胚的尿囊液，采用血凝实验测定尿囊液病毒的滴度。

试验结果：

A HA效价情况(参见图3)；

为了便于与实验组病毒效价对照，将阳性对照的病毒平均效价按三种方式连线突出显示。从图中可以看出：3个实施例的三种作用方式都能不同程度地抑杀新城疫病毒在鸡胚中的生长，其中“预防”的作用方式对病毒的抑杀作用最明显，“预防”的方式能有效地抑杀(即降低)病毒3.7-4.5个滴度，使病毒存活总量减少49-60％；“直接”作用方式能有效地抑杀病毒2.5-4.5个滴度，病毒存活总量减少33-60％；“治疗”作用方式能有效地抑杀病毒1.8-2.3个滴度，病毒存活总量减少24-31％。阴性生理盐水对照的病毒滴度为零。

B鸡胚的保护率

药液对鸡胚的保护率(％)

24h内试验组和对照组均无鸡胚死亡。60h内，3个实施例组无鸡胚死亡，保护率为100％，病毒对照组死亡12枚鸡胚(共30枚)，死亡率为40％，保护率为60％；86h时，实施例开始出现1-3枚鸡胚死亡，各组保护率出现不同程度的下降，而此时病毒对照组的鸡胚死亡率高达80％，保护率也降到20％。实施例试验组比阳性对照增加70-80％的保护率，其中实施例一和例二增加73.3-80％的保护率，实施例三增加70-73.3％的保护率。

(4)防治法氏囊疾病的临床试验

试验方法：

①试验动物分组

采用30日龄的SPF鸡为试验动物，试验分组见下表。

②预防+治疗组(即持续用药)：每天喂药2次，间隔12h，每次0.2mL/只·次，喂药3d后，感染法氏囊病毒制作病理模型(IBDV-BC6/85强毒株稀释液点眼0.05mL/只)，感染后第2d观察实验鸡的临床症状，同时，持续喂药进行治疗，实验持续10d。

③治疗(即感染后用药)：感染法氏囊病毒制作病理模型(同上)，感染病毒4h后，开始喂药，每天2次，间隔12h，每次0.2mL/只·次，观察实验鸡的临床症状，持续喂药10d进行治疗。

④对照组(即感染后不用药)：按照病理模型的攻毒剂量(同上)对鸡进行攻毒感染，不进行任何预防和治疗。

⑤观察指标的测定方法：攻毒后第3d，每个实验组任取5只鸡进行剖杀，采集法氏囊观察病理变化，计算病变发生率；攻毒后第10d对所有实验鸡进行剖杀，观察统计法氏囊病理变化。

试验结果：

攻毒3d后试验鸡的临床表现

攻毒3d后，预防+治疗组的鸡临床表现基本正常；治疗组的个别鸡出现轻微的精神沉郁，偶见稀便；病毒对照组的鸡只表现精神沉郁、食欲减损、羽毛蓬松、运动呆立以及白色稀粪等症状。

攻毒后第3d法氏囊眼观病理变化

攻毒第3d后，3组实施例鸡只的法氏囊均有略微肿大；其中实施例二的预防+治疗组以及治疗组的法氏囊外部出现胶冻样渗出物和零星的内部出血点；实施例一和例二的预防+治疗组和治疗组仅有内部略微的胶冻样渗出物；3组实施例的法氏囊病变发生率为1/5-3/5。病毒对照组法氏囊看到肿大、变黄和内部零星出血点，其中，外部和内部胶冻样渗出物明显，病变发生率达到5/5。

攻毒第10d后法氏囊病理变化

  变黄  外部胶冻样  渗出物  内部胶冻样  渗出物  内部出血点 实施例一预防+治疗组  +  -  -  - 实施例二预防+治疗组  +  -  +  - 实施例三预防+治疗组  +  -  -  -  实施例一治疗组  +  -  +  -  实施例二治疗组  +  -  +  -  实施例三治疗组  +  -  -  -  病毒对照组  ++  +++  +++  ++

攻毒10d后，3组实施例的法氏囊轻度变黄，其中实施例一的治疗组、实施例二的预防+治疗组和治疗组法氏囊内部有少量的胶冻样渗出物，法氏囊的出血症状、外部胶冻样渗出物消失，内部胶冻样渗出减少；病毒对照组法氏囊肿大、变黄重于实施例组，内部有区域状出血点，且内部和外部胶冻样渗出物严重。

结论：通过各组实施例组合物的治疗，法氏囊症状有明显好转，中药组合物对法氏囊疾病有一定的防治作用。

5中药组合物临床疗效

实例一：河南某养鸡场38日龄肉仔鸡出现大批死亡，全群共5800多只鸡，有近1000只鸡发病，已死亡139只鸡，大部分病鸡表现精神萎靡、采食量下降、咳嗽喷嚏、张口呼吸、拉白色稀粪、羽毛松乱、双翼下垂等症状，怀疑鸡传支与细菌性疾病混合感染。应用本发明实施例一制备的中药组合物进行治疗，前3天以药液为饮水进行全群饮水，不能饮水的病鸡隔离饲喂，每天4次，每次0.5mL，症状严重的鸡只淘汰深埋，治疗前后对圈舍及其周围环境进行严格消毒处理。用药3天后全群未再增加发病鸡只数，病鸡的临床症状及精神状态好转。用药7天后，776只病鸡临床症状消失，基本恢复健康，治愈率达到90％。治愈一个月后回访，未再复发。

实例二：青岛某个体饲养户的3500只28日龄的蛋仔鸡出现病情，约850只病鸡表现鸡头垂地、嗜睡、食欲废绝，病鸡出现啄肛、排出白色粘稠水样稀便，经兽医检查诊断为强致病性法氏囊感染。使用本发明实施例三制备的中药组合物进行治疗，前3天进行全群饮水喂药，不能饮水的病鸡隔离注射高免卵黄抗体，症状严重的弱鸡及时淘汰焚烧。治疗前后对圈舍及其周围环境进行严格消毒处理。用药3天后，除发病严重的病鸡死亡33只以外，全群未再增加发病鸡只数，病鸡的临床症状及精神状态有所好转。用药7天后，809只病鸡临床症状消失，基本恢复健康，8只弱小鸡只淘汰。治愈一个月后进行回访未再发病。

实例三：河北某个体养殖户产蛋鸡发生非典型性新城疫，一栋3000只、250日龄的产蛋鸡出现明显产蛋下降，经诊断为非典型性新城疫感染。应用本发明实施例二制备的中药组合物进行治疗，采用饮水给药的方式集中给药，治疗前后对鸡舍及周围环境进行严格消毒。用药3天后鸡群采食量上升、产蛋下降减缓，用药6天后，产蛋开始恢复，壳蛋恢复正常，经10天用药产蛋恢复至原93％，治愈率达100％。

6优点

本发明的组合物主要针对家禽病毒性疾病有确实的疗效，通过多种途径迅速解除因病毒感染所引起的发热、机体损伤、减轻临床病症、促进病禽产生免疫力、恢复采食、促进产蛋率和蛋品质恢复。在临床的防治实验中，通过提高直接杀灭病毒和提高机体免疫性能，减少了动物的发病率和死亡率，提高了保护率，促进动物生长发育，一般用药后第3天控制发病规模不再扩大，临床症状开始缓解，5～7天后临床症状消失，基本痊愈，确实具有良好的生产实用效果。该产品在使用中无药物残留、低毒或无毒，对机体刺激性小，不影响产蛋，不易产生耐药性，是完全信赖的纯天然绿色安全药物。