用于抗感染的普卢利沙星的光学活性化合物和制备方法

摘要

用于抗感染的普卢利沙星的光学活性化合物和制备方法，涉及一种光学活性的硫氮杂环丁烷并喹啉羧酸类的抗菌剂和制备方法。本发明的化合物是有下述通式1表示化合物及其盐，其立体构型为S构型，并具有左旋偏转光光学活性；该化合物或其药用盐可添加药用辅料制成口服制剂；制备方法是用左旋尤利沙星为原料在有机溶剂中，碱类物质存在的条件下进行反应，反应温度为-20℃～60℃，反应15分钟至24小时。左旋普卢利沙星及其生理上允许的盐可以替代现有抗菌药物普卢利沙星及其生理上允许的盐，不但抗菌作用明显增强，而且毒性小。

说明书

技术领域

本发明涉及一种光学活性的硫氮杂环丁烷并喹啉羧酸类的抗菌剂和制备方法。具体涉及普卢利沙星的光学活性化合物和它的口服制剂及其制备方法。

背景技术

喹诺酮类药物是近些年合成的一类抗感染药，临床上广泛用于治疗呼吸系统、胃肠道、泌尿系统、皮肤科、妇科、外科等领域，效果很好。普卢利沙星，化学名为(±)6-氟-1-甲基-7-[4-(5-甲基-2-氧代-1，3-二氧杂环戊烯-4-基)甲基-1-哌嗪基]-4-氧代-4H-[1，3]硫氮杂环丁烷并[3，2-α]喹啉-3-羧酸，为日本新药公司与明治制果公司共同进行开发研制的喹诺酮类药物。普卢利沙星是第三代氟喹诺酮类广谱抗菌药，对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌有广谱抗菌作用，可用于全身感染的治疗。特别是对绿脓杆菌的抗菌力显著超越于目前已上市的其他喹诺酮类抗菌素。临床试验的结果表明，普卢利沙星对皮肤科领域感染症、外科领域感染症、呼吸器官感染症、尿路感染症、胆道感染症、感染性肠炎、妇产科领域感染症、眼科领域感染症以及耳鼻科领域感染症有较好疗效。

普卢利沙星除了具有氟喹诺酮类药物的共同特点以外，与其它同类约物相比具有如下特点：1、其抗革兰氏阳性菌活性与加替沙星相近，而对绿脓杆菌等革兰氏阴性菌的抗菌活性超越同类产品，如环丙沙星、氧氟沙星、左氧氟沙星及加替沙星，对耐药性绿脓杆菌同样有效。2、口服吸收好，在体内无积蓄，脑脊液中无分布，副作用小。3、半衰期长8-9小时，服药次数少。4、起效快，血药浓度达峰时间在0.5-1小时内，抗菌作用强。5、几乎无光敏毒性与神经毒性，是目前喹诺酮类药物中安全性最高的产品。

研究表明尤利沙星在体外和体内都发挥强大的抗菌作用，抗菌谱和普卢利沙星基本一致，对革兰阳性菌和革兰阴性菌有广谱抗菌作用，特别是对以绿脓假单胞菌等的革兰阴性菌抗菌能力强。尤利沙星有一个碳原子手性中心(1-C)，因此有两个对映异构体，据文献(Chem.Pharm.Bull.，43(7)，1238-40(English)1995)报导，日本原研药物公司通过手性制备色谱柱获得少量样品进行了药效学研究，发现左旋体比右旋体的抗菌力强2～8倍。

普卢利沙星口服吸收后在肝药酶的作用下，哌嗪基4`-位脱去侧链，变为有抗菌活性的尤利沙星而发挥作用。在此体内过程中手性中心1-C不是代谢活性点，因此，左旋普卢利沙星在体内经肝药酶代谢物为左旋尤利沙星，发挥抗菌作用，所以可以预见左旋普卢利沙星有很好的应用前景。普卢利沙星结构式中有一个碳原子手性中心(1-C)，但现有技术只能获得它的消旋体(旋光度[α]D20≈0°)。因此，有必要开发有光学活性的普卢利沙星。

发明内容

本发明的目的是提供一种有光学活性的普卢利沙星的立体异构体及其制备方法和它的组合物。

本发明人为达到上述发明目的，对现有普卢利沙星的立体构型进行了研究，提供了用于抗感染的普卢利沙星光学活性化合物，具有下述通式1表示的喹诺酮类化合物及其在生理上允许的药用盐，其通式1的化学名为：S-(-)-6-氟-1-甲基-7-[4-(5-甲基-2-氧代-1，3-二氧杂环戊烯-4-基)甲基-1-哌嗪基]-4-氧代-4H-[1，3]硫氮杂环丁烷并[3，2-α]喹啉-3-羧酸(简称左旋普卢利沙星)，立体构型为S构型，并具有左旋偏转光光学性质：

本发明所说的化合物在生理上允许的药用盐，可以是与乙酸、甘氨酸、甲磺酸、乳酸、谷氨酸、扁桃酸、葡萄糖酸、天门冬氨酸、枸橼酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、草酸、乳糖酸、苯磺酸中的任意一种有机酸形成的盐，也可以是与盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸中的任意一种无机酸形成的盐。天门冬氨酸和谷氨酸可分别选用DL、D和L构型，其中优选与甲磺酸、乳酸、谷氨酸、葡萄糖酸或天门冬氨酸中的任意一种有机酸形成盐。

本发明的化合物按以下方法制备：

用S-(-)尤利沙星(下式2)为原料与下式3表示的化合物，在有机溶剂中，碱类物质存在的条件下进行反应。反应式如下：

其中式3中的X为卤素或对甲苯磺酰氧基，优选X为溴的化合物，化学名称为4-溴甲基-5-甲基-1，3-二氧杂环戊烯-2-酮。

反应温度为反应温度通常-20℃～60℃，优选-10℃～30℃；反应时间随溶剂、碱的种类及其用量、反应温度而异，通常反应15分钟至24小时；

原料投料比：以克分子计，投料比左旋尤利沙星∶式3表示的化合物∶碱类物质为1∶0.8～2∶0.5～5。

溶剂为有机溶剂，优选N，N二甲基甲酰胺或N，N二甲基乙酰胺或二甲基亚砜等反应非活性溶剂；

所说的碱类物质是无机碱或有机碱，无机碱可以是碳酸钾、碳酸氢钾、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钙或碳酸氢钙等；有机碱可以是三乙胺、二异丙胺、N，N-二异丙基乙基胺、三丁基胺，N-甲基吗啉、N，N-二甲基苯胺或咪唑等。优选碳酸钾、碳酸氢钾、三乙胺、二异丙胺或N，N-二异丙基乙基胺。

S-(-)-尤利沙星和R-(+)尤利沙星的制备方法采用CN101550142A所公开的方法制备。

日本学者Masato MATSUOKA等已经证明了光学纯尤利沙星的绝对构型，研究采用了化学方法与单晶X-衍射相结合的方法(见文献chem.pharm.bull.43(7)1238-1240(1995)证实了(-)-尤利沙星是S构型，而(+)-尤利沙星则是R构型的对映异构体。

在上述用光学活性尤利沙星制备光学活性普卢利沙星的化学反应过程中，手性中心1-C不参与化学反应，反应条件温和，反应过程中手性中心1-C构型维持不变，以下实验结果可证：产物保持原料的偏振光性质不变(即由左旋光的尤利沙星得到左旋光的普卢利沙星，由右旋光的尤利沙星得到右旋光的普卢利沙星)；用手性高效液相色谱法测定反应前后两个光学异构体的比例不发生变化，证明了反应过程中手性中心1-C构型维持不变。因此由S-尤利沙星为原料制得的普卢利沙星仍维持S构型不变，终产物是S-普卢利沙星。

相应地，R-普卢利沙星同样可用以上描述的方法由R-(+)尤利沙星与式3表示的化合物反应制备得到。

反应式如下：

本发明制备的S-普卢利沙星测旋光，为左旋光性质，因此是S(-)-普卢利沙星；本发明制备的R-普卢利沙星测旋光，为右旋光性质，因此是R(+)-普卢利沙星。

本发明使用圆二色性光谱来研究了S(-)-普卢利沙星和R(+)-普卢利沙星对圆偏振光的吸收的特征，两个光谱图互为镜像，证明它们是互为对映异构体的关系。

通过比较如附图4所示的圆二色性光谱和文献chem.pharm.bull.47(12)1765-1773(1999)的已知绝对构型的结构相似物的圆二色光谱，发现(-)-普卢利沙星与文献报道的S(-)-6，7-二氟-1-甲基-4-氧代-4H-[1，3]硫氮杂环丁烷并[3，2-α]喹啉-3-羧酸乙酯及S(-)-6，7-二氟-1-氟甲基-4-氧代-4H-[1，3]硫氮杂环丁烷并[3，2-α]喹啉-3-羧酸乙酯两个结构相似物的康顿(COTTON)效应相似，(+)-普卢利沙星情况亦然，从另一方面也确证本发明的左旋普产利沙星的绝对构型是S型；而右旋普卢利沙星的绝对构型是R型。

本发明的化合物可以与生理上允许的酸制备成盐。将S(-)-普卢利沙星溶解在或悬混于溶剂中例如氯仿，DMF等，搅拌下加入酸或酸的溶液(例如盐酸或氯化氢甲醇溶液等)，固体盐从溶剂溶液中析出、过滤；或将盐溶液用浓缩、喷雾干燥等直接除去溶剂得到S(-)-普卢利沙星的盐；固体还可以进一步重结晶。

常用的有机酸可采用乙酸、甘氨酸、甲磺酸、乳酸、谷氨酸、扁桃酸、葡萄糖酸、天门冬氨酸、枸橼酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、草酸、乳糖酸、苯磺酸中的任意一种有机酸；无机酸可采用盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸中的任意一种无机酸。天门冬氨酸和谷氨酸可分别选用DL、D和L构型，其中优选甲磺酸或乳酸或谷氨酸或葡萄糖酸或天门冬氨酸。

本发明的S(-)-普卢利沙星或其药用盐可作为有效成分，并添加约用辅料制成口服制剂

本发明的S(-)-普卢利沙星或其的盐可经口给药，给药量以左旋普卢利沙星的施用量是0.1mg-100mg/(Kg体重.天)，最佳施用量是2mg-30mg/(Kg体重.天)较适合。为此，将该化合物或其药用盐作为有效成分添加药用辅料如赋形剂、崩解剂、黏合剂、润滑剂、抗氧化剂、包衣剂、着色剂、芳香剂、表面活性剂等混合将其制成片剂、分散片、胶囊剂、糖浆剂、溶液剂、颗粒剂、乳液、混悬液和干混悬液等口服剂型，片剂可以是普通片可以是包衣片，制剂中该化合物的量为0.1％-100％(重量比)。

本发明的优点：

本发明的化合物左旋普卢利沙星及其生理上允许的盐可以替代现有抗菌药物普卢利沙星及其生理上允许的盐，不但抗菌作用明显增强，而且毒性小。

附图说明

图1是消旋体普卢利沙星的手性HPLC图

图2是右旋普卢利沙星的手性HPLC图

图3是左旋普卢利沙星的手性HPLC图

图4是左旋普卢利沙星和右旋谱卢利沙星的圆二无色性光谱图(溶剂：乙腈C＝20μg/ml)，虚线的曲线表示左旋普卢利沙星，实线的曲线表示右旋普卢利沙星。

下面结合实施例和附图进一步说明本发明的技术方案，但不限于本实施例。

具体实施方式

实施例1(S)-(-)-尤利沙星的制备

将消旋的尤利沙星105克溶解于1500mL的二甲基亚砜中，搅拌下滴加27克D-酒石酸溶解于405mL二甲基亚砜的溶液，室温下搅拌20小时，沉淀过滤，所得固体在真空下干燥得86克，将此固体于二甲基亚砜中重结晶，得到左旋尤利沙星-D-酒石酸盐37克，经过元素分析C49.08％，H5.06％，N9.50％，S7.44％(分子组成：C₁₆H₁₆FN₃O₃S·1/2C₄H₆O₆·H₂O，计算值C48.86％，H4.78，N9.50％，S7.25％)；将此盐加入水成悬浮液，搅拌下用2％NaOH水溶液调节pH值到7-8，沉淀过滤干燥，得到(S)-尤利沙星24.5克，其化学名：(S)-(-)-6-氟-1-甲基-4-氧代-(1-哌嗪基)-1H，4H-[1，3]硫氮杂环丁烷并[3，2-a]喹啉-3-羧酸

比旋度(c＝0.5，0.1mol/L甲磺酸)；¹H-NMR(DMSO-d₆)δ2.11(3H，d，j＝6.2Hz)，2.87(4H，m)，3.19(4H，m)，6.40(1H，q，j＝6.2Hz)，6.89(1H，d，j＝7.4Hz)，7.79(1H，d，j＝13.9Hz)，光学纯度e.e.96％。

实施例2(R)-(+)-尤利沙星的制备

将消旋的尤利沙星105克溶解于1500mL的DMSO中，搅拌下滴加27克L-酒石酸溶解于405mL二甲基亚砜的溶液，出现浑浊和沉淀，室温下搅拌20小时，过滤，得到的固体于真空下干燥得82克，将此固体于二甲基亚砜中重结晶纯化得到到右旋尤利沙星-L-酒石酸盐34克，将此盐加入水成悬浮液，搅拌下用2％NaOH水溶液调节pH值到7-8，过滤干燥，得到(R)-尤利沙星22克，其化学名：(R)-(+)-6-氟-1-甲基-4-氧代-(1-哌嗪基)-1H，4H-[1，3]硫氮杂环丁烷并[3，2-a]喹啉-3-羧酸

比旋度(c＝0.5，0.1mol/L甲磺酸)，光学纯度e.e.96％。

实施例3S-(-)-普卢利沙星的制备

取实施例1制备的S-(-)-尤利沙星3.49g(0.01mol)、三乙胺2.02g(0.02mol)和N，N-二甲基甲酰胺(简称DMF，以下同)20ml混合搅拌，降温至-5～5℃滴加4-溴甲基-5-甲基-1，3-二氧杂环戊烯-2-酮(简称DMDO-Br，以下同)0.012mol的DMF(5ml)溶液，继续在-5～5℃下搅拌3小时，将反应液倾入100ml冰水中，搅拌30分钟过滤，水洗，收集固体，真空干燥。用乙腈重结晶，得到S-(-)-普卢利沙星2.9克，化学名：S-(-)-6-氟-1-甲基-7-[4-(5-甲基-2-氧代-1，3-二氧杂环戊烯-4-基)甲基-1-哌嗪基]-4-氧代-4H-[1，3]硫氮杂环丁烷并[3，2-α]喹啉-3-羧酸，纯度98％。收率63％。比旋度(c＝0.5，0.1mol/L甲磺酸)

实施例4R-(+)-普卢利沙星的制备

取实施例2制备的R-(+)-尤利沙星为原料，方法同实例3。得目标产物R-(+)-普卢利沙星2.7克，收率60.7％，纯度98％。比旋度(c＝0.5，0.1mol/L甲磺酸)

试验例1普卢利沙星的结构证明

用实施例3制备的样品进行以下常规的结构鉴定测试元素分析(C₂₁H₂₀FN₃O₆S)结果：

                表1有机元素分析

红外测定(用KBr压片法)结果：

表2红外吸收峰及归属(KBr压片)

备注：V：伸缩振动，δ：弯曲振动，s：强吸收，m：中等吸收，w：弱吸收质谱测定结果：

Ms(FAB)：m/z462(M+1)，461，444，360.

1HNMR谱结果：

1HNMR图谱数据及归属分析如下表(溶剂DMSO-d6)：

表3氢谱解析表

¹³CNMR谱结果：

产品的¹³CNMR图谱数据及归属分析如下表(溶剂DMSO-d₆)：

表4碳谱解析表

结论：根据以上试验可确定样品的分子结构为普卢利沙星结型，如下式表示

试验例2样品构型的确证

用实施例1-4的样品进行以下试验：

1、比旋光的测定

试验结果见表5。

2、测含量并计算e.e.值

按以下手性高效液相方法测样品中左旋体和右旋体的含量，并计算e.e.值。

尤利沙星光学异构体的高效液相手性色谱方法：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以L-异亮氨酸手性溶液(取L-异亮氨酸1.04g和硫酸铜0.50g溶于1000mL水中)-甲醇(83∶17)为流动相；流速为每分钟1.0ml；检测波长为330nm。取本品适量，用流动相溶解并稀释制成每1ml中含1mg的溶液，取10μl注入液相色谱仪，理论塔板数按左旋尤利沙星峰计算不低于4000，左旋尤利沙星峰与右旋尤利沙星峰的分离度应符合规定。含量测定使用归一法。

普卢利沙星光学异构体的高效液相手性色谱方法：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以L-异亮氨酸手性溶液(取L-异亮氨酸1.04g和硫酸铜0.50g溶于1000mL水中)-甲醇(85∶15)为流动相；流速为每分钟1.0ml；检测波长为330nm。取本品适量，用流动相溶解并稀释制成每1ml中含1mg的溶液，于80℃加热回流1小时，放冷，取10μl注入液相色谱仪，理论塔板数按左旋普卢利沙星峰计算不低于4000，左旋普卢利沙星峰与右旋普卢利沙星峰的分离度应符合规定。含量测定使用归一法。

试验结果见表5

                            表5

  实施例  比旋度[α]_D²⁰  e.e.值  1  -133°(c＝0.5，0.1mol/L甲磺酸)  96％  2  +132.4°(c＝0.5，0.1mol/L甲磺酸)  96％  3  -108°(c＝0.5，0.1mol/L甲磺酸)  96％  4  +108°(c＝0.5，0.1mol/L甲磺酸)  96％

3、测定实施例3-4制备的样品的圆二色谱

实验结果如附图4所示。

以上实验结果可证明：产物保持原料的偏振光性质不变(即由左旋光的尤利沙星得到左旋光的普卢利沙星，由右旋光的尤利沙星得到右旋光的普卢利沙星)。用手性高效液相色谱法测定反应前后两个异构体比例不发生变化，证明了反应过程中手性中心1-C构型维持不变。因此由S-尤利沙星为原料制得的普卢利沙星仍维持S构型不变，终产物是S-普卢利沙星。

本发明使用圆二色性光谱来研究了S(-)-普卢利沙星和R(+)-普卢利沙星对圆偏振光的吸收的特征，两个光谱图互为镜像，证明它们是互为对映异构体的关系。

通过比较附图4的圆二色性光谱和文献chem.pharm.bull.47(12)1765-1773(1999)的已知绝对构型的结构相似物的圆二色光谱，发现(-)-普卢利沙星与文献报道的S(-)-6，7-二氟-1-甲基4-氧代-4H-[1，3]硫氮杂环丁烷并[3，2-α]喹啉-3-羧酸乙酯及S(-)6，7-二氟-1-氟甲基-4-氧代-4H-[1，3]硫氮杂环丁烷并[3，2-α]喹啉-3-羧酸乙酯两个结构相似物的康顿(COTTON)效应相似，(+)-普卢利沙星情况亦然，从另一方面也确证本发明的左旋普卢利沙星的绝对构型是S型；而右旋普卢利沙星的绝对构型是R型。

结论：实施例3制备的样品的绝对构型是S构型，如下式表示：

实施例5S-(-)-普卢利沙星的制备

S-(-)尤利沙星3.49即0.01mol、无水碳酸氢钾1.2g即0.012mol和二甲基亚砜20ml混合搅拌，在-20℃下，滴加DMDO-Br即0.012mol的DMSO(5ml)溶液，继续在-20℃中搅拌3小时，将反应液倾入100ml冰水中，用20％的冰醋酸调PH-7，搅拌30分钟过滤，水洗，收集固体，真空干燥。乙腈重结晶，得到目标产物左旋普卢利沙星2.5克，纯度98％。收率54％。

比旋度(c＝0.5，0.1mol/L甲磺酸)

实施例6S-(-)-普卢利沙星的制备

去S-(-)-尤利沙星3.49克即0.01mol、N，N-二异丙基乙基胺1.04g即0.008mol和N，N-二甲基甲酰胺(DMF)20ml混合搅拌，加入DMDO-Br0.008mol的DMF(5ml)溶液，加热至60℃反应15分钟，将反应液倾入100ml冰水中，用20％的冰醋酸调PH-7，搅拌30分钟过滤，水洗，收集固体，真空干燥。用乙腈重结晶，得到目标产物左旋普卢利沙星2.0克，纯度98％。收率43％。比旋度(c＝0.5，0.1mol/L甲磺酸).

实施例7S-(-)-普卢利沙星的制备

取左旋尤利沙星10g即0.029mol、N，N-二甲基乙酰胺30毫升和三乙胺14.7g即0.145mol混合，冷却到5～10℃，搅拌下滴加4-(对甲苯磺酸-1-甲酯)-5-甲基-1，3-二氧杂环杂烯-2-酮8.5g，即0.03mol的N，N-二甲基乙酰胺25毫升溶液中，滴加完毕，在室温反应10小时，将反应液倾入200ml冰水中，用20％的冰醋酸调PH至7，搅拌30分钟过滤，水洗，收集固体，真空干燥。用乙腈重结晶，得到目标产物左旋普卢利沙星7.46克，纯度98％。收率57％。比旋度(c＝0.5，0.1mol/L甲磺酸)

实施例8S-(-)-普卢利沙星的制备

取S-(-)-尤利沙星3.49克即0.01mol、碳酸钾0.79克即0.05mol和20ml二甲基甲酰胺(DMF)混合搅拌，在-10℃滴入DMDO-Br即0.012mol的DMF(5ml)溶液，维持温度反应2小时，将反应液倾入100ml冰水中，用20％的冰醋酸调PH至7，搅拌30分钟过滤，水洗，收集固体，真空干燥。乙腈重结晶，得到目标产物左旋普卢利沙星2.2克，纯度98％。收率48％。比旋度-108°(c＝0.5，0.1mol/L甲磺酸).

实施例9S-(-)-普卢利沙星的制备

取S-(-)-尤利沙星3.49克即0.01mol、二异丙胺2.6g即0.02mol和20ml二甲基甲酰胺(DMF)混合搅拌，在0℃滴入DMDO-Br即0.02mol的DMF(5ml)溶液，维持温度反应2小时，将反应液倾入100ml冰水中，用20％的冰醋酸调PH-7，搅拌30分钟过滤，水洗，收集固体，真空干燥。用乙腈重结晶，得到目标产物左旋普卢利沙星2.5克，纯度98％。收率54％。比旋度(c＝0.5，0.1mol/L甲磺酸)

实施例10R-(+)-普卢利沙星的制备

用R-(+)-尤利沙星为原料，方法同实例5。得目标产物R-(+)-普卢利沙星2.5克，收率54％。纯度98％。比旋度(c＝0.5，0.1mol/L甲磺酸)

实施例11左旋普卢利沙星盐酸盐的制备

S-(-)-6-氟-1-甲基-7-[4-(5-甲基-2-氧代-1，3-二氧杂环戊烯-4-基)甲基-1-哌嗪基]-4-氧代-4H-[1，3]硫氮杂环丁烷并[3，2-α]喹啉-3-羧酸盐酸盐取S-(-)-普卢利沙星0.5克溶解在15毫升氯仿中，搅拌下加入0.5毫升33％(v/v)盐酸甲醇溶液，过滤，滤渣用甲醇洗，收集固体，干燥，获得化合物450毫克，收率83％。熔点大于220℃(测试过程中样品颜色变深)。

实施例12左旋普卢利沙星甲磺酸盐的制备

S-(-)-6-氟-1-甲基-7-[4-(5-甲基-2-氧代-1，3-二氧杂环戊烯-4-基)甲基-1-哌嗪基]-4-氧代-4H-[1，3]硫氮杂环丁烷并[3，2-α]喹啉-3-羧酸甲磺酸盐取S-(-)-普卢利沙星0.5克溶解在15毫升氯仿中，搅拌下加入0.5毫升50％甲磺酸甲醇溶液，过滤，滤渣用甲醇洗，收集黄色固体，真空/氯化钙干燥24小时，再真空/氯化钙/80℃干燥5小时获得化合物470毫克，收率78％。熔点大于220℃(测试过程中样品颜色变深)。

实施例13左旋普卢利沙星盐酸盐的制备

取S-(-)-普卢利沙星0.5克溶解在15毫升氯仿中，搅拌下加入0.5毫升33％(v/v)盐酸甲醇溶液，将溶液蒸干，残余物加甲醇搅拌10分钟，过滤，滤渣用甲醇洗，收集固体，干燥，获得化合物460毫克，收率85％。

实例14左旋普卢利沙星薄膜包衣片的制备

片芯处方组成：

原、辅料                      用量

左旋普卢利沙星                132.1g

乳糖                          25g

微晶纤维素                    10g

淀粉                          5g

羟丙基纤维素                  6g

交联羧甲基纤维素钠            4g

气相硅胶                      0.4g

硬脂酸镁                      1g

3％羟丙甲基纤维素75％乙醇液   85～90g

共制成1000片，每片含左旋普卢利沙星132.1mg，每片重约200mg包衣液处方组成

1kg片芯的用量

欧巴代(OY-C-7000A)白色        35g

95％乙醇                      402.5g

片芯的制备原、辅料分别过80目筛，按处方量称取各物料并混和均匀。加入3％羟丙甲基纤维素75％乙醇液适量，制成软材，用16目筛制粒，55℃±5℃干燥，16目筛整粒，加入羟丙基纤维素、交联羧甲基纤维素、气相硅胶和硬脂酸镁，混和均匀，测定颗粒含量，用Φ8.5mm浅弧冲压片，片重约200mg/片，硬度8～11kg。

包衣液的配制(片芯重量1kg)在容器中加入95％乙醇402.5g，放在搅拌器上，开动搅拌器，边搅拌边加入欧巴代(OY-C-7000A)白色粉末35g，搅拌均匀。包衣时边搅拌边包衣。

包衣取片芯放入包衣锅内，于60℃±5℃预热，开动包衣机，调节转速，锅内温度约45℃左右。开动蠕动泵，将包衣液喷于片芯表面上，同时检查片外观，至包衣液喷完。

实例15盐酸左旋普卢利沙星薄膜包衣片的制备

片芯处方组成：

原、辅料                           用量

盐酸左旋普卢利沙星                 142.5g

乳糖                               25g

微晶纤维素                         10g

淀粉                               5g

羟丙基纤维素                       6g

交联羧甲基纤维素钠                 4g

气相硅胶                           0.4g

硬脂酸镁                           1g

3％羟丙甲基纤维素75％乙醇液        85～90g

共制成1000片，每片含左旋普卢利沙星132.1mg，每片重约200mg制备方法同实例7

下面用试验例证明本发明的化合物的药效

试验例3小鼠全身性感染试验

试验方法

1、试验样品来源

左氧氟沙星为市售品；

普卢利沙星为自制品，按文献J.Med.Chem.1992，35，4727-4738的方法制备；左旋普卢利沙星、右旋普卢利沙星、左旋普卢利沙星盐酸盐、左旋普卢利沙星甲磺酸盐为自制品，制法见实施例(表6中试药后的括号内序数)；

2、实验菌种：用于感染动物的细菌为临床分离的致病性菌株。

3、试验用菌液的制备：挑取试验菌的2-3个菌落接种于M-H肉汤中，37℃培养18小时，用5％来菌干酵母液适当稀释备用。

4、实验动物：选用健康昆明种小鼠SPF级，体重18-22克，雌雄各半。

5、最小致死菌量的测定：小鼠随机分组，每组10只，雌雄兼备，吸取上述不同稀释度的菌液分别腹腔注射小鼠，每鼠0.5ml，感染后连续观察7天，并记录小鼠死亡数，以引起小鼠100％死亡的最低菌量作为最小致死菌量。用该菌量作为体内试验的感染菌量。

6、实验药物的配制：试验用药分别用1％CMC配制。

7、感染及治疗实验方法：将实验动物按性别、体重随机均匀分组，每组10只，雌雄各半，分别给小鼠腹腔注射最小致死菌量感染，0.5ml/鼠，感染后1小时，分别给小鼠灌胃不同剂量的受试药物0.2ml/10g。大肠埃希氏菌设0.05，0.10，0.20，0.40，0.80，1.60，3.20mg/kg七个剂量组，铜绿假单胞菌设0.50，1.0，2.0，4.0，8.0，16.0，32.0mg/kg七个剂量组，给药后观察，记录小鼠死亡情况。同时设立对照组，记录感染后七天内小鼠死亡数。采用bliss法的程序处理计算ED₅₀。

8、实验结果见表6

试验结果

表6发明对小鼠实验全身性的感染模型的治疗作用

结论：本发明的化合物对小鼠感染有很强的治疗效果，左旋普卢利沙星相对于消旋体，治疗效果明显提高了，左旋普卢利沙星盐的效果与左旋普卢利沙星相近似

试验例4左旋普卢利沙星的急性毒性试验

方法：用限量给药量法NIH小鼠进行急性毒性试验。

试验组：左旋普卢利沙星    对照组：消旋体普卢利沙星组和空白对照组

每组用NIH小鼠20只，雌雄各半，体重为18～22g，禁食过夜。左旋普卢利沙星和消旋体普卢利沙星分别用0.3％CMC配成250mg/ml的混悬液，以0.2ml/10g单次灌胃给药，给药后持续观察4小时，以后每天观察1次，持续观察2周，记录动物毒性反应表现及出现和恢复时间，在第2、4、8、11、15天称量动物体重及测定饲料摄取量。观察指标包括动物饮食、外观、行为、分泌物、排泄物等。记录所有动物的死亡情况、中毒症状及中毒反应的起始时间、严重程度、持续时间、是否可逆等。中毒死亡、濒死动物及时进行大体解剖，观察结束后对其他动物大体解剖，当发现器官出现体积、颜色、质地等改变时，则对改变的器官进行组织病理学检查。采用bliss法的程序处理计算LD₅₀。

结果：各组动物给药后均未见异常，未见动物死亡，动物体重均正常增长，各组间未见显著性差异，病理解剖未见各器官和组织有异常，表明本发明的化合物毒性很低，左旋普卢利沙星和消旋体普卢利沙星小鼠口服的LD₅₀都大于5000mg/kg。

因此本发明化合物可以作为全身感染症、呼吸道感染、尿路感染或者胆道感染那样的局部感染症的治疗，可以安全地用于包括人在内的哺乳动物。