以幼虫为寄主人工培育的活体虫草及其培育方法

摘要

一种以幼虫为寄主人工培育的活体虫草，包括昆虫幼虫和生长于幼虫头部的1-2根，长度大于2cm的活体虫草子实体。培养过程包括虫草菌侵染活体昆虫幼虫、菌丝在活体昆虫幼虫体内生长、幼虫僵化和头部长出虫草子实体等过程，整个过程既有昆虫幼虫和菌丝在虫体内生长，又有虫草子实体，所得虫草外观与野生冬虫夏草相同，营养成分基本一致，是通过人工培育得到的真正的活体虫草。

说明书

技术领域

本发明涉及一种人工培育的活体虫草，尤其涉及一种以幼虫为寄主人工培育的活体虫草及其培育方法。

背景技术

冬虫夏草(Cordyceps Sinensis(Berk.)Sacc.)又称冬虫草、虫草，它是麦角菌科真菌冬虫夏草寄生在寄主蝙蝠蛾科昆虫的幼虫上形成的冬虫夏草菌子实体及幼虫僵化体的复合体。每当盛夏，在高海拔的森林草甸或草坪上，蝙蝠蛾将虫卵留在花叶上，蛾卵成虫后，钻进潮湿疏松的土壤里，吸收植物根茎的营养生长。球形的子囊孢子会侵染虫草蝙幅蛾幼虫，在幼虫体内萌发菌丝。此外，当虫草蝙蝠蛾的幼虫食到有虫草真菌的叶子时也有可能成为虫草。

野生虫草的子座单生，稀2-4个，细长圆柱形，长4-7厘米，直径约3毫米；表面深棕色或棕褐色，有细纵皱纹，上部稍膨大，质柔韧，断面类白色。气微腥，味微苦，含粗蛋白、多种氨基酸、虫草酸(D-甘露醇)、虫草菌素(3’-deoxyadenosin，cordycepin)、麦角甾醇、半乳甘露聚糖、尿嘧啶、腺嘌呤等。

冬虫夏草不但对人体各种脏器的功能具有调节作用，还具有调节免疫系统的功能；调节呼吸系统功能；提高机体耐寒能力和减轻疲劳；提高心脏耐缺氧能力，降低心脏对氧的消耗和抗心律失常；可减轻有毒物质对肝脏的损伤和肝纤维化的发生；能减轻慢性病的肾脏病变，改善肾功能，减轻毒性物质对肾脏的损害；增强骨髓生成血小板、红细胞和白细胞的能力；降低血液中的胆固醇和甘油三酯，提高高密度脂蛋白，从而减轻动脉粥样硬化。冬虫夏草中含有虫草素，是其发挥抗肿瘤作用的主要成分。虫草酸还具有提高血浆渗透压，导致组织内的水分进入血管内，从而减轻组织水肿，补充血浆。

蛹虫草(cordyceps.Militaris(L.：Fr.)Link)又名北冬虫夏草，为子囊菌亚门(Ascomycotina)，麦角菌目(Clavicipitales)，麦角菌科(Cordycepps)真菌。子座单生或有数个从昆虫头部发出，有时从节上发出，橙黄色，大多不分枝，高2-5厘米，头部棒形，长1-2厘米，粗0.3-0.5厘米。国内于1958年在吉林省首次发现，通过鉴定，认为它与冬虫夏草是同一个属，定名为蛹草(C.militaris(L.)Link)，生于针叶林、阔叶林或混交林地表土层中鳞翅目昆虫的蛹体上，也有发现感染鞘翅目和双翅目等昆虫的蛹、茧、成虫或幼虫体上。经白求恩医科大学检测表明，蛹虫草的一些营养及药物成分如：虫草素、虫草多糖、蛋白质等还高于冬虫夏草，在药理功能及临床效果方面与冬虫夏草基本一致。现在的医学研究证明，蛹虫草不仅含有丰富的蛋白质和氨基酸，而且含有30多种人体所需的微量元素。

天然虫草或蛹虫草虽然药用和营养价值高，但其数量有限且采集困难，为此人们在人工培养蛹虫草方面进行了广泛探索。中国发明专利申请97105853.9公开了一种蛹虫草菌的高产栽培方法，采用蛹虫草拟青霉菌种(Paecilomyces mlitaris(Kob.)Br.etSm)培养于优质稻米加营养液的合成培养基上，在pH8-8.5、温度23±2℃，避光培养7-10天，菌丝长满培养基后，进行表面搔菌与温差刺激，闪射光照射等方式，经过20-25天得到成熟子实体。中国发明专利申请03133807.0公开了一种蛹虫草食品和蛹虫草基质及其制备方法，其将蛹虫草菌液接种于以大米、牛奶和土豆等制成的培养基当中，经过避光发酵培养和散光发酵培养及补光发酵培养后制得。中国发明专利申请200610117998.9公开了一种高含量虫草素的北冬虫夏草工业化培养方法，该方法采用筛选的菌株蛹虫草COB201、CGMCC No.1823接种于改良马铃薯葡萄糖琼脂培养基中，在温度20±1℃，湿度65-95％，强度1500-3500lx光照9小时下培养45-60天，得到高含量虫草素的北冬虫夏草。这些方法以大米或土豆为主要培养基进行人工培养的蛹虫草和食药用菌栽培方式基本一致。

中国发明专利申请94112056.2公开了一种蛹虫草的快速高产人工培育方法，其将蛹虫草菌的分生孢子制成包子悬浊液，用昆虫针或类似物蘸取菌液，刺入蚕蛹，待营养菌丝在体内充分生长，蚕蛹僵硬后，用多孔材料在其上覆盖一层或将僵蛹插入有孔易保湿的材料上，在适当的温度、湿度、光线下培养即可获得大量的蛹虫草。

中国发明专利97113190.2公开了一种蛹虫草等虫草的人工培养方法，该方法采用日本棒束孢、虫花棒束孢、蛹虫草以及高雄山虫草接种于以蚕蛹的组成成分为主要成分的液体培养基上，或用人工饲料无菌养蚕法得到的蚕蛹上，在适当的环境下培养成与天然虫草相同的子实体。

中国发明专利申请200510101348.0公开了一种以黄粉虫蛹为寄主的蛹虫草子实体及其培育方法，采用蛹虫草菌向黄粉虫蛹前胸注入0.05-0.2ml后，将受侵染的黄粉虫蛹置于无菌的培养基当中进行保湿暗培养，其条件为：相对湿度50-100％，温度18-25℃，至黄粉虫蛹体表外出现白色菌丝；然后进行光照诱导，光照强度要求在1000-2000lx，至体表菌丝变成黄色，在蛹体表产生蛹虫草子实体原基，继续培养50-60天，在蛹体开始萎缩时采收蛹虫草子实体。中国发明专利申请200810013831.7公开了一种蚕蛹虫草的培育方法，用原产于青藏高原的野生天然冬虫夏草菌株孢子接种到有机活体蚕蛹上人工培育而成蚕蛹虫草。

人工蛹虫草的栽培方法主要分为以大米为培养基和以蚕蛹为寄主的蛹虫草子实体两大类。以大米或土豆为主要培养基进行人工培养的蛹虫草，其只有子实体而没有昆虫体，只能算作“虫草菌菇”。而以蚕蛹为寄主培养的蛹虫草，是以蛹寄生的蛹虫草，外观上同野生虫草有本质的区别，与野生环境下虫草菌侵染幼虫并在其体内生长的过程亦有很大差异。此外，这些方法培育得到的虫草子实体大都多条杂乱地丛生于培养基或蛹体上。目前尚没有出现完全以昆虫幼虫为寄主，在头部生长1-2根，长2cm以上，与野生虫草相似的活体虫草。

发明内容

本发明的一个目的在于提供一种以幼虫为寄主人工培育的活体虫草。经虫草菌侵染的活体昆虫幼虫头部长出虫草子实体，其与野生虫草生长过程相似，同时具备野生虫草的形态和成分。

本发明的另一个目的在于提供一种以幼虫为寄主人工培育的活体虫草培育方法。经过先培养虫草菌液、再将虫草菌菌液侵染昆虫幼虫，培养的菌丝在幼虫体内生长、幼虫僵化和培养活体虫草等步骤后，昆虫幼虫头部长出1-2根，长度大于2cm的活体虫草子实体。

本发明所述的昆虫幼虫选自于节肢动物门，昆虫纲的大麦虫、蚕和蓑蛾。

大麦虫(Barley pest)属于节肢动物门、昆虫纲、鞘翅目、拟步甲虫科昆虫，以麸皮为主要饲料，由此得名。其幼虫除含粗蛋白质51％，脂肪29％外，还含有多种糖类、氨基酸、维生素、激素、酶及磷、铁、钾、钠和钙等微量元素，营养价值高，也作为观赏鱼的饵料。

蚕属于节肢动物门、昆虫纲、鳞翅目，品种繁多，如：桑蚕、柞蚕、蓖麻蚕、木薯蚕、马桑蚕、惠利蚕、天蚕、琥珀蚕、樟蚕、栗蚕、樗蚕、乌桕蚕和柳蚕等，优先选择桑蚕(Bombyx mori Linaeus)。本发明中所列举的具体蚕品种应当理解为仅仅是对“蚕”进行的说明而非限制，对于本领域技术人员可以遇见到的其它没有具体列明的蚕品种也可以作为虫草菌侵染、生长和分化的寄主。

蓑蛾属于节肢动物门、昆虫纲、鳞翅目，品种繁多，如：大窠蓑蛾、小窠蓑蛾、蜡彩蓑蛾、黛蓑蛾、按蓑蛾、线散蓑蛾、茶树茶蓑蛾、茶树白囊蓑蛾和桑蓑蛾等。本发明中所列举的具体蓑蛾品种应当理解为仅仅是对“蓑蛾”进行的说明而非限制，对于本领域技术人员可以遇见到的其它没有具体列明的蓑蛾品种也可以作为虫草菌侵染、生长和分化的寄主。

将虫草菌侵染上述昆虫幼虫后，虫草菌丝在幼虫体内生长，当菌丝布满虫体后幼虫僵化，虫草子实体从幼虫头部长出。

一种以幼虫为寄主人工培育的活体虫草，包括昆虫幼虫和生长于幼虫头部的1-2根，长度为2cm以上的活体虫草子实体。

另一种以幼虫为寄主人工培育的活体虫草，包括昆虫幼虫和生长于幼虫头部的1-2根，长度为2-5cm的活体虫草子实体。

虫体及活体虫草子实体当中含有的虫草素≥0.5‰。

另一种以幼虫为寄主人工培育的活体虫草，包括昆虫幼虫和生长于幼虫头部的1-2根，长度为2-5cm的活体虫草子实体，其虫体及活体虫草子实体含有的虫草素≥0.5‰。

另一种以幼虫为寄主人工培育的活体虫草，包括昆虫幼虫和生长于幼虫头部的1-2根，长度为2-5cm的活体虫草子实体，其虫体及活体虫草子实体含有的虫草素≥1.0‰。

虫体及活体虫草子实体当中含有的虫草酸≥4.5％。

另一种以幼虫为寄主人工培育的活体虫草，包括昆虫幼虫和生长于幼虫头部的1-2根，长度为2-5cm的活体虫草子实体，其虫体及活体虫草子实体含有的虫草酸≥4.5％。

另一种以幼虫为寄主人工培育的活体虫草，包括昆虫幼虫和生长于幼虫头部的1-2根，长度为2-5cm的活体虫草子实体，其虫体及活体虫草含有的虫草素≥0.5‰，虫体及活体虫草子实体含有的虫草酸≥4.5％。

另一种以幼虫为寄主人工培育的活体虫草，包括昆虫幼虫和生长于幼虫头部的1-2根，长度为2-5cm的活体虫草子实体，其虫体及活体虫草含有的虫草素≥1.0‰，虫体及活体虫草子实体含有的虫草酸≥4.5％。

上述各种以幼虫为寄主人工培育的活体虫草，培育方法依次为：将预先培养的虫草菌菌液侵染昆虫幼虫，再培养活体虫草子实体，最后得到活体虫草。在虫草培养过程当中依次经过菌丝在活体昆虫幼虫体内生长、幼虫因虫草菌丝布满全体而僵化和头部长出活体虫草子实体等过程。

虫草菌菌液培养基应当包括碳源、氮源、微量元素和维生素等。

人工培育过程中，一般以葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、淀粉、果胶或其任意比例的组合为碳源，并优先选择葡萄糖、蔗糖等小分子糖类。

虫草菌生长过程中所需氮源可以选择氨基酸、蛋白胨、豆饼粉和蚕蛹粉等有机氮化合物，也可以选择氯化铵、硝酸钠、磷酸氢二铵等无机氮化合物。其中，尤以有机氮的利用效果最好。

通过在培养基当中添加无机盐类来满足虫草对微量元素的需要，磷、钾、钙和镁等元素最为重要。

由于虫草菌丝生长过程中不能自行合成必要的维生素，应当在培养基当中添加一定量的维生素。

此外，温度的高低对虫草的生长亦有较大的影响。一般情况下，菌丝生长温度为6℃-30℃，温度在18℃-22℃时最适生长。子实体生长温度控制在10℃-25℃，最适生产温度则通常为15℃-23℃。原基分化时由于需要通过较大的温差进行刺激，温差一般应保持在5℃-10℃。

水分是虫草菌体细胞的重要组成部分。菌丝生长阶段，培养基含水量保持在60％-65％，空气相对湿度保持在60％-70％；子实体生长阶段，培养基含水量要达到65％-70％，空气相对湿度保持在80％-90％。在虫草的培育过程中，还要注意通风。

孢子萌发和菌丝生长阶段不需要光照，应保持黑暗环境。但转化到生殖生长阶段需要明亮的散射光，光照强度为1000-2400lx。

培养虫草菌：

一种虫草菌培养液，每1000ml液体中各成分组成如下：葡萄糖1-2％(w/v)、磷酸二氢钾0.1-0.2％(w/v)、硫酸镁0.1-0.15％(w/v)、奶粉0.5％(w/v)、牛肉浸膏1％(w/v)、马铃薯过滤液200ml和2片复合维生素B。

将虫草菌接种于上述经高温灭菌的蛹虫草菌培养液当中，20-30℃培养5-7天后得到虫草菌菌液。

另一种虫草菌培养液，每1000ml液体中各成分组成如下：葡萄糖1-2％(w/v)、磷酸二氢钾0.1-0.2％(w/v)、硫酸镁0.1-0.15％(w/v)、奶粉0.5％(w/v)、牛肉浸膏1％(w/v)、马铃薯过滤液200ml和2片复合维生素B。

将虫草菌接种于上述经高温灭菌的虫草菌培养液当中，10-18℃摇瓶培养45天后得到虫草菌菌液。

上述虫草菌培养液当中，每片复合维生素B含有3mg维生素B1、1.5mg维生素B2、0.2mg维生素B6、10mg烟酰胺和1mg泛酸钙。还含有碳酸氢钙、淀粉、糊精、酒石酸和羧甲基淀粉钠等辅料。

虫草菌侵染活体昆虫幼虫：

一种虫草菌侵染活体昆虫幼虫的方法，在温度22-30℃，相对湿度60-70％的环境下，先将虫草菌液混合于饲料当中喂养昆虫幼虫15天以上，之后将上述虫草菌菌液喷淋活体昆虫幼虫，使虫草菌侵染幼虫。

根据不同的昆虫幼虫，配制不同的饲料。以大麦虫为例，可以在饲料中预先混入一定量的虫草菌液。

一种大麦虫幼虫饲料，包括5-20％(w/w)玉米粉、1-9％(w/w)虫草菌菌液和复合维生素B，其余量由麦麸补足，其中每公斤虫草菌菌液当中投入10片复合维生素B。

另一种大麦虫幼虫饲料，包括10-20％(w/w)玉米粉、1-7％(w/w)虫草菌菌液和复合维生素B，其余量由麦麸补足，其中每公斤虫草菌菌液当中投入10片复合维生素B。

另一种大麦虫幼虫饲料，包括80％(w/w)麦麸、15％(w/w)玉米粉、5％(w/w)虫草菌菌液和复合维生素B，其中每公斤虫草菌菌液当中投入10片复合维生素B。

上述饲料当中，每片复合维生素B含有3mg维生素B1、1.5mg维生素B2、0.2mg维生素B6、10mg烟酰胺和1mg泛酸钙。还含有碳酸氢钙、淀粉、糊精、酒石酸和羧甲基淀粉钠等辅料。

桑蚕饲料一般为桑叶，将虫草菌液喷洒于桑叶后喂养桑蚕幼虫15天以上，之后将上述虫草菌菌液喷淋活体桑蚕幼虫，使虫草菌侵染幼虫。

蓑蛾饲料一般为柳树叶，将虫草菌液喷洒于柳树叶后喂养蓑蛾幼虫15天以上，之后将上述虫草菌菌液喷淋活体蓑蛾幼虫，使虫草菌侵染幼虫。

培养活体虫草：

经虫草菌侵染的大麦虫、蚕或蓑蛾幼虫置于温度为10-30℃，相对湿度85-95％的条件下培养60天以上，得到昆虫幼虫头部长出1-2根，长2-5cm的活体虫草子实体。随着培养时间的继续延长，子实体仍然会继续生长并使其长度超过5cm。

本发明技术方案实现的有益效果

本发明以昆虫幼虫为虫草菌寄主培养的虫草，由昆虫幼虫和生长于幼虫头部的子实体组成。培养过程包括虫草菌侵染活体大麦虫、蚕或蓑蛾的幼虫、菌丝在幼虫体内生长、幼虫僵化和头部长出虫草子实体等过程，整个过程既有昆虫幼虫和菌丝在虫体内生长，又有虫草子实体，所得虫草外观与野生冬虫夏草相同，营养成分基本一致。

本发明采用先将虫草菌饲料喂养大麦虫、蚕或蓑蛾的幼虫，再将菌液喷淋幼虫的方式实现了虫草菌对活性大麦虫、蚕或蓑蛾的幼虫的侵染，感染率达到85％以上。侵染后的大麦虫、蚕或蓑蛾的幼虫经培养，仅在幼虫头部生长出1-2根，长度大于2cm的虫草子实体，是通过人工培育得到的真正的活体虫草。

本发明所涉及的术语与其在本领域的一般概念相同。

所述的“虫草”包括冬虫夏草和蛹虫草。

所述的“虫草菌”为冬虫夏草菌(Cordyceps Sinensis(Berk.)Sacc.)或蛹虫草菌(Cordyceps.Militaris(L.：Fr.)Link)。

所述“活体虫草”为虫草菌侵染活体昆虫幼虫后，再经过培育得到的一种虫草。

所述的“虫草子实体”或“子实体”为生长于昆虫幼虫头部的冬虫夏草(Cordyceps Sinensis(Berk.)Sacc.)或蛹虫草(Cordyceps.Militaris(L.：Fr.)Link)子实体。“活体虫草子实体”为虫草菌侵染活体昆虫幼虫后，再经过培育得到的生长于幼虫头部的虫草子实体。

所述的“大麦虫幼虫饲料”，其中各种组分均以饲料的总重量为基数进行计算，不足部分用麦麸补足，使饲料的总重量为100％(w/w)；复合维生素B的重量不计入饲料的总重量。

所述的“复合维生素B”，其所列辅料仅仅是复合维生素B片充分公开的必要而对其组分的列举而非限定。各种辅料应当理解为是一种碳源，如：淀粉、糊精、酒石酸或羧甲基淀粉钠，或微量元素，如：碳酸氢钙和羧甲基淀粉钠。这些组分在培养溶液当中含量极低，其对菌体生长不具有主要作用。

所述的“虫草菌菌液及其培养方法”为常规的微生物培养，在此列出仅仅为了满足实现本发明所涉及培育方法的充分公开的需要，菌液培养基的具体组成和培养的具体方式不能限定本发明。本领域技术人员可以通过调节培养基的组成或改用固体培养基等方式实现对虫草菌的培养。如：磷酸二氢钾可以直接选自于各种磷酸二氢盐(H₂PO₄^-)，或通过向磷酸盐、磷酸氢盐(HPO₄^2-)溶液加入碱性溶液的方式进行配制；维生素B为B族维生素，其可以通过发酵或化学合成后得到的单种或多种该族维生素直接投入培养溶液，或根据一定的配比混合后投入培养溶液；使用蚕蛹的组成成分，如：个体、组织液和蚕蛹粉等，代替奶粉、马铃薯和牛肉浸膏之一种或几种为菌体生长提供必要的蛋白质、微量元素、糖原和脂类等。

附图说明

图1为蛹虫草菌侵染大麦虫幼虫后培养得到的活体虫草，其中，“1”表示活体虫草子实体，“2”表示虫体；

图2为蛹虫草菌侵染大麦虫幼虫后培养得到的活体虫草，其中，“3”表示活体虫草子实体，“4”表示虫体；

图3为蛹虫草菌侵染桑蚕幼虫后培养得到的活体虫草，其中，“5”表示活体虫草子实体，“6”表示虫体；

图4为蛹虫草菌侵染蓑蛾幼虫后培养得到的活体虫草，其中，“7”表示活体虫草子实体，“8”表示虫体。

具体实施方式

以下结合附图详细描述本发明的技术方案。本发明实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围中。

本发明所用的试剂若未明确指明，则均购自于西格玛-奥德里奇(Sigma-Aldrich)。

实施例1培养蛹虫草菌

根据组分比例配制每1000ml培养液。其中，葡萄糖2％(w/v)、磷酸二氢钾0.2％(w/v)、硫酸镁0.15％(w/v)、奶粉0.5％(w/v)(上海光明乳业有限公司)、牛肉浸膏1％(w/v)(Invitrogen公司)、马铃薯过滤液200ml和2片复合维生素B(上海九福药业有限公司)。

每1000ml水中加入200g马铃薯，煮半小时后过滤制得马铃薯过滤液。

将蛹虫草菌(上海市农业科学院)接种于上述经高温灭菌的蛹虫草菌培养液当中，20-30℃摇瓶培养5-7天后得到蛹虫草菌菌液。

实施例2蛹虫草菌侵染活体大麦虫幼虫

将88％(w/w)麦麸、10％(w/w)玉米粉、2％(w/w)蛹虫草菌菌液(实施例1培养的)和每公斤蛹虫草菌菌液当中投入10片复合维生素B配成活体大麦虫幼虫饲料。

在温度22-30℃，相对湿度60-70％环境下，将该饲料喂养大麦虫幼虫(华南珍稀昆虫繁育研究中心)16天。之后，将实施例1培养的蛹虫草菌菌液喷淋活性大麦虫幼虫，使蛹虫草菌侵染幼虫。

实施例3蛹虫草菌侵染活体大麦虫幼虫

将77％(w/w)麦麸、15％(w/w)玉米粉、8％(w/w)蛹虫草菌菌液(实施例1培养的)和每公斤蛹虫草菌菌液当中投入10片复合维生素B配成活体大麦虫幼虫饲料。

在温度22-30℃，相对湿度60-70％环境下，将该饲料喂养大麦虫幼虫25天。之后，将实施例1培养的蛹虫草菌菌液喷淋活性大麦虫幼虫，使蛹虫草菌侵染幼虫。

实施例4蛹虫草菌侵染活体大麦虫幼虫

将80％(w/w)麦麸、15％(w/w)玉米粉、5％(w/w)蛹虫草菌菌液(实施例1培养的)和每公斤蛹虫草菌菌液当中投入10片复合维生素B配成活体大麦虫幼虫饲料。

在温度22-30℃，相对湿度60-70％环境下，将该饲料喂养大麦虫幼虫19天。之后，将实施例1培养的蛹虫草菌菌液喷淋活性大麦虫幼虫，使蛹虫草菌侵染幼虫。

实施例5培养大麦虫幼虫活体虫草

经实施例2-4蛹虫草菌侵染的大麦虫幼虫置于温度为20-30℃，相对湿度90-95％的条件下培养，在大麦虫幼虫头部会长出1-2根，长2-5cm的活体虫草子实体，得到大麦虫幼虫活体虫草。(见图1和图2)

子实体虫草酸的含量可以选择2005版《中国药典》关于甘露醇的检测方法。有多种方法检测子实体中的虫草素(特产研究[J]，2008，4，75-78)，大多通过HPLC方法进行检测(西北大学学报(自然科学版)[J]，2003，33，569-571)。

本实施例培养得到的虫草经农业部食用菌产品质量监督检验测试中心(上海)测定，培养得到的蛹虫草与野生冬虫夏草的虫草酸含量接近，其虫草素含量远高于野生虫草。(见表1)

表1培育虫草与野生虫草比较

实施例6培养冬虫夏草菌

根据组分比例配制每1000ml培养液。葡萄糖2％(w/v)、磷酸二氢钾0.2％(w/v)、硫酸镁0.15％(w/v)、奶粉0.5％(w/v)(上海光明乳业有限公司)、牛肉浸膏1％(w/v)(Invitrogen公司)、马铃薯过滤液200ml和2片复合维生素B(上海九福药业有限公司)。

每1000ml水中加入200g马铃薯，煮半小时后过滤制得马铃薯过滤液。

将冬虫夏草菌(青海省农牧科学院)接种于上述经高温灭菌的虫草菌培养液当中，10-18℃摇瓶培养45天后得到虫草菌菌液。

实施例7活体大麦虫幼虫培育活体虫草

将88％(w/w)麦麸、10％(w/w)玉米粉、2％(w/w)虫草菌菌液(实施例6培养的)和每公斤虫草菌菌液当中投入10片复合维生素B配成活体大麦虫幼虫饲料。

在温度22-30℃，相对湿度60-70％环境下，将该饲料喂养大麦虫幼虫16天。之后，将实施例6培养的冬虫夏草菌菌液喷淋活性大麦虫幼虫，使蛹虫草菌侵染幼虫。在10-30℃，相对湿度85-95％的条件下培养60天以上，大麦虫幼虫头部会长出1-2根，长2-5cm的活体虫草子实体，得到大麦虫幼虫活体虫草。

实施例8活体桑蚕幼虫培育活体虫草

在温度22-30℃，相对湿度60-70％环境下，将该喷洒有虫草菌液的桑叶喂养桑蚕幼虫(浙江蚕业研究所)18天。之后，将实施例1培养的蛹虫草菌菌液喷淋活性桑蚕幼虫，使蛹虫草菌侵染幼虫。

经蛹虫草菌侵染的大麦虫幼虫置于温度为20-30℃，相对湿度90-95％的条件下培养，在大麦虫幼虫头部会长出1-2根，长2-5cm的活体虫草子实体。在10-30℃，相对湿度85-95％的条件下培养60天以上，大麦虫幼虫头部会长出1-2根，长2-5cm的活体虫草子实体，得到桑蚕幼虫活体虫草。(见图3)

实施例9活体蓑蛾幼虫培育活体虫草

在温度22-30℃，相对湿度60-70％环境下，将该喷洒有虫草菌液的桑叶喂养蓑蛾幼虫(上海市农业科学院)16天。之后，将实施例1培养的蛹虫草菌菌液喷淋活性蓑蛾幼虫，使蛹虫草菌侵染幼虫。

经蛹虫草菌侵染的大麦虫幼虫置于温度为20-30℃，相对湿度90-95％的条件下培养，在大麦虫幼虫头部会长出1-2根，长2-5cm的活体虫草子实体。在10-30℃，相对湿度85-95％的条件下培养60天以上，大麦虫幼虫头部会长出1-2根，长2-5cm的活体虫草子实体，得到蓑蛾幼虫活体虫草。(见图4)