一种水果、蔬菜中农药多残留快速分析方法

摘要

本发明公开了一种水果、蔬菜中农药多残留快速分析方法，是称取样品，添加无水醋酸钠和无水硫酸镁，再加入醋酸乙腈溶液，震荡提取后，进行离心，将离心后得到的乙腈提取液装入有混合填料的离心管中，震荡、离心，吸取净化液，浓缩蒸干，乙腈与水体积比为1∶1的混合液定溶，UPLC/MS/MS检测，本发明以水果蔬菜为基质、利用基质分散固相萃取技术对样品进行预处理、实现水果蔬菜中阿维菌素、涕灭威、灭蝇胺等130种农药残留的快速检测，具有检测结果快速、准确、高效、且价格低廉的特点。

说明书

技术领域

本发明属于食品检测方法技术领域，尤其是涉及一种水果、蔬菜中农药多残留快速分析方法。

背景技术

随着各国加强对进口食品的安全检测，如日本肯定列表的实施，各种农产品限量标准越来越低，且农药涉及到的范围越来越广，出口形势变的十分严峻。在食品安全日益受到关注的同时，各国都力求寻找一种简便快速、准确高效、价格低廉的多残留分析方法，将来满足食品安全的需要。

近年来，检测仪器发展日新月异，然而在仪器检测效率提高的同时，传统的样品预处理技术却极大的制约了检测效率的进一步提高，针对水果蔬菜中农药残留的检测，现行的多残留分析方法有GB/T 19648-2006、GB/T20769-2006及日本的一齐分析法等，这些方法均采用传统的超声或者均质进行提取，用到的试剂量都比较大，再加上用固相萃取SPE柱进行富集、浓缩、和净化，样品制备效率低且成本比较高，且费时费力，急需一种高效的预处理方法进行替代，在食品安全日益关注的形势下，寻求一种快速的多残留分析方法，显得尤为重要。

发明内容

本发明的目的在于改进已有技术的不足而提供一种以水果蔬菜为基质、利用基质分散固相萃取技术对样品进行预处理、实现水果蔬菜中阿维菌素、涕灭威、灭蝇胺等130种农药残留的快速检测、检测结果快速、准确、高效、且价格低廉的水果、蔬菜中农药多残留快速分析方法。

本发明的目的是这样实现的，一种水果、蔬菜中农药多残留快速分析方法，其特点是该方法包括以下步骤：

a、提取：称取制备好的样品，添加到含有无水醋酸钠和无水硫酸镁的离心管中，再加入醋酸乙腈溶液，剧烈震荡，超声提取后，进行离心；

b、净化：将离心后得到的乙腈提取液装入有混合填料的离心管中，震荡、离心，吸取净化液，浓缩蒸干，乙腈和水体积比为1∶1的混合液定容待检测；

c、UPLC/MS/MS检测。

仪器条件：液相条件：A：0.1％甲酸水，B：0.1％甲酸乙腈

色谱柱：ACQUITY UPLC^TM BEH C18 1.7um 2.1×50mm Column

色谱条件：

  Time-min  Flow-ml/min-  ％A  ％B  Curve  Initial  0.25  60  40  0.3  0.25  60  40  6  4  0.25  10  90  6  4.5  0.25  10  90  6  5.5  0.25  60  40  1

质谱条件：多反应监测-MRM扫描模式

提取是称取均匀制样的样品15.0g，添加到含有1.5g无水醋酸钠和6g无水硫酸镁的50mL离心管中，再加入15mL1％醋酸乙腈溶液，剧烈震荡1min，超声提取15min后，5000r/min离心1min。

净化是转移10mL乙腈提取液到装有不同比例混合填料的15mL离心管中，震荡1min，5000r/min离心1min，吸取5mL净化液，浓缩蒸干，乙腈和水体积比为1∶1的混合液定容2mL，待UPLC/MS/MS检测。

使用的混合填料比例为：叶菜类、水果类为PSA和石墨化碳的质量比为1∶1，含油作物为石墨化碳、PSA、C18的质量比为1∶2∶2。

本发明与已有技术相比具有以下显著特点和积极效果：本发明采用的基质分散固相萃取技术是一种样品预处理技术，其基本操作是将固态或液态样品直接与固相萃取材料一起混合研磨，使样品均匀分散于固定相颗粒的表面，形成一个独特的色谱固定相。它浓缩了传统样品均化、组织细胞裂解、提取、过滤、净化等过程，使样品的预处理变得简便，同时也避免了目标物的损失。该方法操作简便、快捷、溶剂用量少，针对水果蔬菜中阿维菌素、涕灭威、灭蝇胺等近130种农药能够快速的进行定性、定量，检出限完全能够满足检测需求，检测效率能够提升3-5倍。

因样品类型复杂多样，为实现对不同基质都能实现好的净化效果，固相萃取填料采用混合填料，即C18、石墨化碳、PSA、硅藻土等吸附剂按不同的比例进行混合，来完成对样品的净化。对净化过程而言，使用混合固相萃取填料能够有效去除组分中的脂肪酸，色素、甾醇、脂肪等干扰杂质，再用无水硫酸镁去除水分，得到的浸提液可用带有高灵敏度MS/MS检测器的UPLC进行农药多残留分析。

相比原来的净化方法，本方法操作简单、高效、成本低，检测的信噪比、灵敏度完全能满足需求，实现了水果蔬菜中阿维菌素、涕灭威、灭蝇胺等多残留的快速分析，并能满足检测限的要求。针对不同样品类型我们制定以下混合固相萃取填料来对样品实施净化。

混合填料类型

叶菜类、水果类采用的填料：PSA和石墨碳的质量比为1∶1

含油作物填料：石墨化碳、PSA、C18的质量比为1∶2∶2

填料用量由具体的样品类型定。

净化效果见图1。

附图说明

图1为净化效果见图。

具体实施方式

实施例1，一种水果、蔬菜中农药多残留快速分析方法，以绿芦笋为例，配制130种农药混合标准品溶液，分别添加0.01mg/kg、0.1mg/kg农药标准品做回收，每个含量水平重复4次，然后提取，称取均匀制样的样品15.0g，添加到含有1.5g无水醋酸钠和6g无水硫酸镁的50mL离心管中，再加入15mL1％醋酸乙腈溶液，剧烈震荡1min，超声提取15min后，5000r/min离心1min；净化，转移10mL乙腈提取液到装有不同比例混合填料的15mL离心管中，填料为500mg PSA和石墨化碳的质量比为1∶1，震荡1min，5000r/min离心1min，吸取5mL净化液，浓缩蒸干，乙腈和水体积比为1∶1混合液定容2mL；UPLC/MS/MS检测，仪器条件：液相条件：A：0.1％甲酸水，B：0.1％甲酸乙腈，色谱柱：ACQUIYT UPLCTM BEH C181.7um 2.1×50mm Column，色谱条件：

  Time-min  Flow-mL/min  ％A  ％B  Curve  Initial  0.25  60  40  0.3  0.25  60  40  6  4  0.25  10  90  6  4.5  0.25  10  90  6  5.5  0.25  60  40  1

所得到的各种农药化合物的平均回收率及相对标准偏差见表1：

表1各种农药化合物的平均回收率及相对标准偏差n＝4

Table1 Recovery and RSD n＝4

由数据可以看出，回收率在70％-120％，相对标准偏差均不大于10％，方法检出限为0.01mg/kg。回收率及相对标准偏差均符合农残检测要求。

实施例2，一种水果、蔬菜中农药多残留快速分析方法，以毛豆为例，配制28种农药混合标准品溶液，做0.02mg/kg水平添加回收，每个含量水平重复4次，然后提取，称取均匀制样的样品15.0g，添加到含有1.5g无水醋酸钠和6g无水硫酸镁的50mL离心管中，再加入15mL1％醋酸乙腈溶液，剧烈震荡1min，超声提取15min后，5000r/min离心1min；净化，转移10mL乙腈提取液到装有不同比例混合填料的15mL离心管中，填料为500mg石墨化碳、PSA、C18的质量比为1∶2∶2混合，震荡1min，5000r/min离心1min，吸取5mL净化液，浓缩蒸干，乙腈与水体积比为1∶1的混合液定容2mL；UPLC/MSMS检测，仪器条件：液相条件：A：0.1％甲酸水，B：0.1％甲酸乙腈，色谱柱：ACQUITY UPLC^TM BEH C18 1.7um 2.1×50mmColumn，色谱条件：

  Time-min  Flow-ml/min  ％A  ％B  Curve  Initial  0.25  60  40  0.3  0.25  60  40  6  4  0.25  10  90  6  4.5  0.25  10  90  6  5.5  0.25  60  40  1

所得到的各种农药化合物的回收率均在70％～120％之间，相对标准偏差均不大于10％，方法检出限为0.02mg/kg，回收率及相对标准偏差均符合农残检测要求，见表2

表2各种农药化合物的平均回收率及相对标准偏差n＝4

Table2 Recovery and RSD n＝4

以上所述的实例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通工程技术人员对本发明的技术方案作出的各种变形和改进，均应落入本发明的权利要求书确定的保护范围内。