槐杞黄颗粒及其制备方法和制药用途

摘要

本发明公开了一种组合物，它含有(a)药学上可接受的载体和(b)有效量的原料药材的水提取物，所述的原料药材包括槐耳菌质、枸杞子和黄精。本发明提供的组合物作为双向免疫调节剂可用于治疗胃癌、肠癌、食管癌、乳腺癌、肺癌、肝癌、胰腺癌、恶性淋巴瘤、骨肉瘤、宫颈癌、卵巢癌、子宫内膜癌、外阴癌、前列腺癌、腮腺癌、甲状腺癌、唾液腺癌、皮肤癌、鼻咽癌、舌癌、口腔癌、喉癌、脑瘤、胆囊癌、肾癌、牙龈癌、睾丸癌、阴茎癌、多发骨髓瘤、恶性黑色素瘤等，可用于治疗缓解期支气管哮喘和免疫性疾病。

说明书

技术领域

本发明涉及植物提取物，尤其涉及槐杞黄颗粒及其制备方法和用途。

背景技术

自身免疫性疾病是自身免疫应答反应导致组织器官损伤和相应功能障碍为主要发病机制的、临床上常见的一大类疾病，目前已被公认的自身免疫疾病至少有30多种。根据自身免疫反应对组织器官造成损伤的范围，通常将自身免疫病划分为器官特异性与非器官特异性两大类。临床上常见的自身免疫疾病包括①结缔组织疾病：类风湿性关节炎、幼年特发性关节炎、系统性红斑狼疮、皮肌炎、硬皮病；②神经肌肉疾病：多发性硬化症、重症肌无力、脱髓鞘疾病；③内分泌性疾病：原发性肾上腺皮质萎缩、慢性甲状腺炎、青少年型糖尿病；④消化系统疾病：慢性非特异性溃疡性结肠炎、慢性活动性肝炎、恶性贫血与萎缩性胃炎；⑤泌尿系统疾病：自身免疫性肾小球肾炎、肺肾出血性综合征；⑥血液系统疾病：自身免疫性溶血性贫血、特发性血小板减少性紫癜、特发性白细胞减少症；⑦其他系统疾病：干燥综合征、成人Still病、白塞病、淀粉样变病等。

自身免疫病是体内出现异常免疫应答的基础上发生的，它的确切病因目前还不清楚，大多数学者认为是多种致病因素作用下破坏机体自身免疫耐受状态而导致持久和过度的自身免疫病理过程所致。这些致病因素可概括为外界环境和机体内部因素。外界环境因素包括：理化与生物因素致自身抗原发生改变，外界抗原与机体组织抗原的交叉作用等。内在因素包括：遗传背景的易感性、免疫系统调节功能紊乱和内分泌系统影响等。由于自身免疫性疾病的确切病因还不清楚，其治疗措施主要是针对发病学来考虑。一般采取的治疗方针是：①消除交叉反应抗原或使自身抗原发生改变的各种因素：②抑制免疫反应；③抵制由免疫反应所致的炎症过程；④调整机体免疫功能紊乱。

目前正致力于研究调整机体免疫调节功能，消除引起异常免疫应答反映的各种因素，以期对自身免疫病的治疗提供更有效的措施。

临床上很多种疾病特别是恶性肿瘤等疑难重症，都属免疫力低下，所谓免疫功能低下就是各种原因使免疫系统不能正常发挥保护作用，在此情况下，极易招致细菌、病毒、真菌等感染，因此免疫力低下最直接的表现就是容易生病。因经常患病，加重了机体的消耗，所以一般有体质虚弱、营养不良、精神萎糜、疲乏无力、食欲降低、睡眠障碍等表现，生病、打针吃药便成了家常便饭。长此以往会导致身体和智力发育不良，还易诱发重大疾病。目前的措施往往是服用一些能增强免疫力的药物。

支气管哮喘是(bronchial asthma，哮喘)一种常见病、多发病，其病程长，常反复发作，患者的生活质量，严重发作时可危及生命。支气管哮喘是由多种细胞(如嗜酸性粒细胞、肥大细胞、T淋巴细胞、中性粒细胞、气道上皮细胞等)和细胞组分(cellular elements)参与的气道慢性炎症性疾患。这种慢性炎症导致气道高反应性的增加，通常出现广泛多变的可逆性气流受限，并引起反复发作的喘息、气急、胸闷或咳嗽等症状，常在夜间和(或)清晨发作、加剧，多数患者可自行缓解或经治疗缓解。哮喘发病率在世界范围内呈上升趋势。据统计，全世界约有1亿5千5百万人患有哮喘。我国成人发病率为0.7％—1.5％，儿童为0.7％—2.03％，亦即全国约有1000万—2000万患者，以青壮年和儿童居多。哮喘缓解期的是支气管哮喘治疗的关键时期，许多哮喘患者存在下丘脑-垂体-肾上腺轴功能紊乱和免疫功能下降，临床证明哮喘缓解期既有正气不足、脏腑亏虚，又有宿邪未消、痰瘀内伏存在，呈现虚实相因、本虚标实的病理特征，这是造成哮喘反复发作、缓解期难以治愈的重要原因。

综上所述表明，本领域迫切需要提供一种具有双向免疫调节作用的物质，从而既能调节与增强机体免疫力，又具有抗炎、抗过敏等综合效应，达到理想的临床效果。

发明内容

本发明旨在提供一种组合物。

本发明的另一个目的是提供所述组合物的制备方法。

本发明的再一个目的是提供所述组合物的用途。

在本发明的第一方面，提供了一种组合物，它含有(a)药学上可接受的载体和(b)占组合物总重量的0.1-99％的原料药材的水提取物，所述的原料药材包括槐耳菌质、枸杞子和黄精。

在另一优选例中，所述的原料药材包括：

15—60重量份数槐耳菌质；

10—40重量份数枸杞子；和

7.5—30重量份数黄精。

在另一优选例中，所述的原料药材包括：

20-45重量份数槐耳菌质；

15-30重量份数枸杞子；

10-25重量份数黄精。

在另一优选例中，所述的原料药材包括：

25-40重量份数槐耳菌质；

17-25重量份数枸杞子；

12-20重量份数黄精。

在另一优选例中，它是散剂、颗粒剂、丸剂、口服液、片剂、或胶囊剂。

在另一优选例中，所述的组合物是药物组合物或饮食补充剂。

在本发明的第二方面，提供了一种如上述的组合物的制备方法，所述的方法包括步骤：

将占组合物总重量的0.1-99％的原料药材的水提取物和药学上可接受的载体混合得到组合物，所述的原料药材包括槐耳菌质、枸杞子和黄精。

在另一优选例中，所述的方法包括步骤：

a将15—60重量份数槐耳菌质和水混合煮沸、过滤、浓缩得到槐耳菌质水提物浸膏；

b将10—40重量份数枸杞子和7.5—30重量份数黄精和水混合煮沸、过滤、浓缩得到枸杞子和黄精水提物浸膏；

c将步骤a和b得到的浸膏合并，然后和药学上可接受的载体混合得到组合物；

其中步骤a和b次序可互换。

在另一优选例中，将1—6次水提物合并得到水提物浸膏。

在另一优选例中，所述的提取物浸膏的相对密度为1.1—1.8(50—60℃)。

在本发明的第三方面，提供了一种如上述的组合物在制备免疫双向调节剂和/或抗肿瘤的药物中的应用。

据此，本发明提供了一种具有双向免疫调节作用的物质，从而既能调节与增强机体免疫力，又具有抗炎、抗过敏等综合效应，达到理想的临床效果。

具体实施方式

发明人经过广泛而深入的研究，发现由槐耳菌质、枸杞子和黄精的水提物构成的组合物具有双向免疫调节作用，对缓解期支气管哮喘和一些常见的免疫性疾病都有很好的疗效。并在此基础上完成了本发明。

如本文所用，“原料药材”的定义如下：

槐耳(槐蛾)是药用真菌，学名为Trametes robiniophila Murr.，它仅生长于老龄中国槐Sophora japonica树干上。按Ainsworth等1973年分类系统，属担子菌亚门Basidiomycotina，多孔菌科Polyporaceae，栓菌属。如本文所用，槐耳菌质是天然槐耳人工培养物。槐耳菌为药用真菌，味苦，性辛平，入心、肝二经。

枸杞子(Fructus Lycii)：茄科枸杞属植物宁夏枸杞(Lycium barbarumL.)的果实。

黄精(Rhizoma Polygonati)：百合科黄精属植物黄精(Polygonatumsibiricum Delar.Ex Redoute)、多花黄精(P.cyrtonema Hua)和滇黄精(P.kingianum Coll.et Hemsl.)的根茎。

本发明的活性成分(即药材的提取物)可用以下方法制备：将所需药材用水抽提，然后过滤这样获得的抽提液，然后可任选地将过滤液用常规方法(如喷雾干燥、冻干或浓缩干燥)进行干燥。本发明的活性成分可以混合分别抽提的各原料药材的抽提物而制备，也可以通过抽提药材的混合物而获得。

抽提可以在室温或加热条件下进行，但优选在4-35℃，更佳地在5-30℃下进行。

在另一优选例中，可以在制得的液态提取物中添加矫味剂(如蔗糖)、防腐剂(如苯甲酸钠)和其他合适的添加剂，从而制得本发明液态的组合物，如口服液等。

还可将液态提取物用常规方法(如喷雾干燥、冻干或浓缩干燥)进行干燥，获得固体提取物。这些固体提取物可以与制药领域合适的辅料和赋形剂一起混合，制成片剂、胶囊剂、颗粒剂等各种剂型。

通常，将本发明的提取物与合适的载体混合即可得到本发明的组合物。可用于制备本发明组合物的方法没有特别限制，可用本领域的各种常规方法，如混合法等。

在本发明的制剂中，含有上述原料药材的提取物作为活性成分以及药学上可接受的载体或赋形剂。

如本文所用，术语“本发明的组合物”包括药物组合物和饮食补充剂，只要它们含有槐耳菌质、枸杞子和黄精的提取物或基本上由槐耳菌质、枸杞子和黄精等药材的提取物构成。在组合物中，本发明的槐耳菌质、枸杞子和黄精的提取物占组合物总重量的0.1-99％，较佳地占1-90％，最佳地占5-80％。此外，按药材的干重计算，每克固体组合物或每毫升液态组合物宜对应于0.1-10克，更佳地对应于0.2-5克总干药材，最佳地对应于0.5-2.5克总干药材。

如本文所用，术语“药学上可接受的载体”指用于治疗剂给药的载体，包括各种赋形剂、稳定剂、助流剂和稀释剂。该术语指这样一些药剂载体：它们本身并不是必要的活性成分，且施用后没有过分的毒性。合适的载体是本领域普通技术人员所熟知的。在Remington’s Pharmaceutical Sciences(Mack Pub.Co.，N.J.1991)中可找到关于药学上可接受的赋形剂的充分讨论。在组合物中药学上可接受的载体可含有液体，如水、盐水、甘油和乙醇。另外，这些载体中还可能存在辅助性的物质，如润湿剂或乳化剂、pH缓冲物质等。其他非必要成分(例如其他辅助性药材)，也包括在药学上可接受的载体的定义中。

此外，本发明的制剂或组合物还可含有其他免疫调节剂或用于治疗癌症或辅助治疗癌症的化合物，如他莫昔芬、甲氨蝶呤、丙卡巴肼、司莫司汀等。

本发明的组合物还可含有至少一种药学上可接受的添加剂，例如矫味剂(如蔗糖、果糖等)、防腐剂(如苯甲酸钠等)和色素。这些添加剂都是制药领域中熟知的。

本发明的提取物或组合物可用于治疗各种癌症，尤其是胃癌。

本发明的提取物或组合物可用于治疗缓解期支气管哮喘和免疫性疾病，如过敏性鼻炎、花粉症和自身免疫性疾病。所述的自身免疫疾病包括①结缔组织疾病：类风湿性关节炎、幼年特发性关节炎、系统性红斑狼疮、皮肌炎、硬皮病；②神经肌肉疾病：多发性硬化症、重症肌无力、脱髓鞘疾病；③内分泌性疾病：原发性肾上腺皮质萎缩、慢性甲状腺炎、青少年型糖尿病；④消化系统疾病：慢性非特异性溃疡性结肠炎、慢性活动性肝炎、恶性贫血与萎缩性胃炎；⑤泌尿系统疾病：自身免疫性肾小球肾炎、肺肾出血性综合征；⑥血液系统疾病：自身免疫性溶血性贫血、特发性血小板减少性紫癜、特发性白细胞减少症；⑦其他系统疾病：干燥综合征、成人Still病、白塞病、淀粉样变病等。

使用药物组合物时，是将安全有效量的槐耳菌质、枸杞子和黄精的水提取物施用于哺乳动物。其中该安全有效量通常为每人0.1-100克，较佳地为0.5-50克，按槐耳菌质、枸杞子和黄精的干药材量计(注：当使用药材混合物时，以混合物中的槐耳菌质、枸杞子和黄精计算)。当然，具体剂量还应考虑给药途径、病人健康状况等因素，这些都是熟练医师技能范围之内的。

本发明的主要优点在于：

(a)槐耳菌质、枸杞子和黄精提取物对胃癌、缓解期支气管哮喘和免疫性疾病的治疗效果明显；

(b)含槐耳菌质、枸杞子和黄精的提取物的组合物对胃癌、缓解期支气管哮喘和免疫性疾病的治疗效果更明显。

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。

实施例1—4

制备提取浸膏

 

实施例1实施例2实施例3实施例4槐耳菌质(g)150250300600枸杞子(g)100150200400黄精(g)75120150300

(1)取槐耳菌质，加水煎煮3次，第一次加7倍量水，煮沸6小时，过滤，提取液备用；第二、三次分别加5倍量水，煮沸6小时，过滤，合并三次提取液，减压浓缩得相对密度为1.35—1.40(55℃)的浸膏；

(2)另取枸杞子、黄精加水8倍量浸泡半小时后，煎煮二次，每次45分钟，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度1.35以上(50-60℃)的浸膏；

(3)将上述两浸膏合并，得到合并浸膏。

实施例5—8

制备槐杞黄颗粒

在克实施例1—4获得的合并浸膏混匀、加入淀粉、糖粉及矫味剂适量，制粒，制成1000g，干燥，得到槐杞黄颗粒I-IV。

实施例9

抗胃癌临床试验

1材料与方法

1.1受试药物：

1、实施例5所制得的槐杞黄颗粒I。

2、FLP，即使用药物：顺铂+亚叶酸+5-氟尿嘧啶，其中

顺铂(DDP)购自江苏豪森药业股份有限公司

亚叶酸(CF)购自扬子江药业集团有限公司

5-氟尿嘧啶(5-FU)购自海南普利制药有限公司

3、5—氟尿嘧啶(5FU)购自海南普利制药有限公司

4、亚叶酸(CF)购自扬子江药业集团有限公司

5、草酸铂购自江苏恒瑞医药股份有限公司

1.2主要试剂、仪器和评定方法

胃癌中医证候：

注：舌质、舌苔、脉象如实记录，不需评分

生存质量：体力状况计分标准(Karnofsky计分制)

 

体力状况记分一切正常，无不适病症100能进行正常活动，有轻微病症90勉强可以讲行正常活动，有一些症状或体征80生活可自理，但不能维持正常活动或重的工作70生活能大部分自理，但偶尔需要别人帮助60需要别人更多的帮助，并经常需要医疗护理50失去生活能力，需要特别照顾和帮助40

 

严重失去生活能力，需住院，但暂无死亡威胁30病重，需要住院和积极的支持治疗20垂危10死亡0

评价标准：

(一)中医证候：

显效：治疗后积分比治疗前降低2/3以上(≥2/3)。

有效：治疗后积分比治疗前降低1/3以上，但不足2/3。

无效：治疗后积分比治疗前降低不足1/3，甚至增加(≤1/3)。

(二)生存质量：以卡氏评分法，评为降低、稳定、提高三级。疗后比疗前增加10分或以上者为提高，减少10分或以上者为降低，无变化者为稳定。

(三)体重：疗后体重增加1公斤或以上者为“增加”，减少1公斤或以上者为“下降”变化不到1公斤者为“稳定”。

(四)免疫功能：

T细胞亚群、NK细胞等各项指标，疗前、疗后做比较

提高：治疗前低于正常，治疗后恢复正常或治疗后较疗前提高≥10％；

下降：治疗前低于正常，治疗后较疗前下降≥10％，治疗前正常，治疗后低于正常。

稳定：治疗前低于正常，治疗后较治疗前上升、下降不足10％者。治疗前后均正常。

T细胞亚群、NK细胞等各项指标的方法、试剂及仪器：

方法：流式细胞术

仪器：流式细胞仪

试剂：专用测定试剂盒(T细胞亚群测定试剂盒、NK细胞测定试剂盒)

1.3试验方法

应用实施例5制得的槐杞黄颗粒I结合化疗治疗胃癌患者65例，并与单纯化疗治疗62例进行对照观察。

对照组：采用顺铂+亚叶酸+5-氟尿嘧啶(FLP)或5—氟尿嘧啶(5FU)+亚叶酸(CF)+草酸铂化疗方案进行治疗。

治疗组：在对照组化疗基础上配合槐杞黄颗粒治疗。

入组标准：有明确的西医胃癌诊断；中医：必备主证2项，及次证2项或以上。

主症：1)神疲乏力，2)少气懒言，3)脘腹疼痛，4)脘腹胀闷。

次证：1)纳谷少馨，2)大便干结，3)大便溏泄，4)舌质暗或有瘀斑，5)舌苔腻或薄白，6)脉弦或涩或滑。

用法用量：在对照药基础上，服用槐杞黄颗粒每日3次，每次10g。疗程：6-8周(2个化疗周期)

1.4统计分析方法

统计分析采用SPSS10.0统计分析软件进行计算。

所有的统计检验均采用双侧检验，P值小于或等于0.05将被认为所检验的差别有统计意义。

不同治疗组各次就诊的计量资料将采用均数±标准差进行统计描述。与筛选期基础值进行比较，采用配对t检验比较组内前后差异。两组治疗前后的变化采用两样本均数t检验、方差分析(ANOVA)和Wilcoxon秩和检验进行比较。

不同治疗组各次就诊的计数资料采用频数(构成比)进行统计描述。两组治疗前后的变化采用x2检验或非参数检验。

脱落分析：两组总脱落率和由于不良事件而脱落率的比较将采用x²检验。

基础值的均衡性分析：采用方差分析或x²检验来比较人口学资料和其它基础值指标，以衡量两组均衡性如何。

有效性分析：采用两样本均数t检验、方差分析(ANOVA)、x²检验、CMHx²检验、Wilcoxon秩和检验进行比较分析。将考虑中心效应对疗效指标的影响。

安全性分析：x²检验采用比较两组不良事件发生率，并列表描述本次试验所发生的不良事件；实验室检验结果在试验前后正常/异常的变化情况以及发生异常改变时与试验药物的关系。

2试验结果

中医证侯试验组有效率为92.31％，对照组有效率为46.77％，疗后症状分析试验组明显好于对照组，P<0.05；

治疗后生存质量评价(体力状况计分)，试验组提高率64.62％，对照组提高率17.74％，试验组明显好于对照组，P<0.05；

治疗后体重评价，试验组提高率58.46％，对照组提高率19.35％，试验组明显好于对照组，P<0.05；

治疗后免疫功能评价，NK细胞试验组提高率53.84％、对照组提高率17.74％，试验组明显好于对照组，P<0.05；

CD4+/CD8+试验组提高率52.31％、对照组提高率16.13％，试验组明显好于对照组，P<0.05。

未观察到该药安全性方面的变化。

3试验结论

结果表明，采用实施例5制备的槐杞黄颗粒I治疗胃癌可以改善肿瘤患者的症状，可以提高患者的生存质量、增加患者的体重，提高患者的免疫功能。

同时，结果表明，实施例5制备的槐杞黄颗粒I用药十分安全，无严重的不良反应。为肿瘤患者提供更多的选择机会，临床应用此药不会给患者带来风险。

实施例10—12

抗胃癌临床试验

将实施例6—8制得的槐杞黄颗粒II-IV进行实施例9的试验，结果相似。

实施例13

抗胃癌治验举例

范某，男，45岁。患者2004年10月因胃部不适、疼痛、腹胀及胃脘部触及肿块，质硬，经医院B超、CT检查，肿物6×13cm，诊断为胃癌。2004年11月做胃癌切除术，术后病理诊断为腺癌中分化，并做2个周期化疗。2005年5月B超检查残胃病灶复发，大小为6.1×4.7cm，且患者胃疼、胃胀、恶心、消瘦，神疲乏力，身体虚弱，免疫力低下，不宜再次手术治疗。对患者进行两个周期的化疗结合槐杞黄颗粒治疗。经过两个周期的治疗后，患者自觉症状明显好转、体重增加、体力恢复、食欲增加，实验室检查：免疫功能提高，病灶明显缩小，大小为4.8×4.6cm。对患者再进行两个周期的巩固治疗，B超检查，残胃部复发灶完全消失，体重增加6kg。患者出院，坚持服用槐杞黄颗粒半年，体重增加9.5kg，体力恢复，饮食正常，已能正常上班。

实施例14

缓解期支气管哮喘临床试验

1材料与方法

1.1受试药物：

1、实施例5所制得的槐杞黄颗粒I。

2、喘康速气雾剂(硫酸特布他林气雾剂)，购自阿斯利康制药有限公司

1.2疗效标准

临床治愈：哮喘症状完全缓解，停药后保持无症状1年以上；

显效：治疗期间哮喘急性发作每周<1次，夜间哮喘症状每周<2次，但皆为轻度发作，呼气峰流速变异率<20％；

好转：治疗期间哮喘每周≥1次，但每日<1次，夜间哮喘症状每周>2次，呼气峰流速变异率20％—30％；

无效：症状、体征及发作频率无明显变化。两组病例均治疗1年，随访1年。

1.3试验方法

应用实施例5所制得的槐杞黄颗粒I结合西药治疗缓解期支气管哮喘患者55例，并与单纯西药治疗45例进行对照观察。

对照组：采用喘康速气雾剂吸入治疗，合并肺部感染者，选择相应抗生素治疗。

治疗组：在对照组治疗基础上配合实施例5所制得的槐杞黄颗粒I。

用法用量：在对照药基础上，服用槐杞黄颗粒每日2次，每次10g。疗程：3个月

1.4统计分析方法

统计分析采用SPSS10.0统计分析软件进行计算。

所有的统计检验均采用双侧检验，P值小于或等于0.05将被认为所检验的差别有统计意义。

不同治疗组各次就诊的计量资料将采用均数±标准差进行统计描述。与筛选期基础值进行比较，采用配对t检验比较组内前后差异。两组治疗前后的变化采用两样本均数t检验、方差分析(ANOVA)和Wilcoxon秩和检验进行比较。

不同治疗组各次就诊的计数资料采用频数(构成比)进行统计描述。两组治疗前后的变化采用x²检验或非参数检验。

脱落分析：两组总脱落率和由于不良事件而脱落率的比较将采用x²检验。

基础值的均衡性分析：采用方差分析或x²检验来比较人口学资料和其它基础值指标，以衡量两组均衡性如何。

有效性分析：采用两样本均数t检验、方差分析(ANOVA)、x²检验、CMHx²检验、Wilcoxon秩和检验进行比较分析。将考虑中心效应对疗效指标的影响。

安全性分析：x²检验采用比较两组不良事件发生率，并列表描述本次试验所发生的不良事件；实验室检验结果在试验前后正常/异常的变化情况以及发生异常改变时与试验药物的关系。

2试验结果

治疗组55例，临床治愈48例，占87.3％；显效4例，占7.3％；有效2例，占3.6％；无效1例，占1.8％。总有效率94.6％。

对照组45例，临床治愈16例，占35.6％；显效10例，占22.2％；有效16例，占35.6％；无效3例，占6.7％。总有效率57.8％。

经x²检验，两组临床治愈率、总有效率比较均有显著性差异(P<0.05)。

3试验结论

支气管哮喘是由嗜酸粒细胞、肥大细胞和T淋巴细胞等多种炎症细胞参与的气道慢性炎症。这种炎症使易感者对各种激发因子具有气道高反应性，并引起气道狭窄，具有长期性、反复性的特点。即使在缓解期，气道慢性炎症改变仍然存在。治疗支气管哮喘，历代医家多遵循元代朱丹溪提出的“日久喘之证，未发时宜扶正为主，已发时以攻邪为主”，中医学认为“久病必虚”，哮喘缓解期属“本虚”，主要表现在肺、脾、肾三脏，采取益肺健脾、补肾纳气的扶正固本法，可使“正气存内，邪不可干”，从而达到根治的目的。

结果表明，采用实施例5所制得的槐杞黄颗粒I结合西药结合治疗缓解期支气管哮喘可取得比单用中药或西药更好的疗效，在缓解期以中医扶正固本之法与西医的预防用药结合起来，不仅提高了疗效，而且降低了药物的副作用，使不少依赖糖皮质激素的患者得到解脱，显示出防治支气管哮喘的优势。

实施例15—17

缓解期支气管哮喘临床试验

将实施例6—8制得的槐杞黄颗粒II-IV进行实施例14的试验，结果相似。

实施例18

缓解期支气管哮喘治验举例

曹×，男，13岁。支气管哮喘史8年。时常因受寒而哮喘发作，影响学习和生活，2004年2月，就诊，患者平时气短，极易感冒，动则喘促，腰酸肢软，畏寒肢冷，面色苍白。舌淡，苔白，脉沉细，诊断为缓解期支气管哮喘。结合患者病情，进行服用3个月的槐杞黄颗粒治疗。患者服药3个月后，症状全部消失，痊愈，其间未发生感冒。疗后3个月随访，期间病情未有发作。

实施例19

过敏性鼻炎临床试验

1材料与方法

1.1受试药物：

1、实施例5所制得的槐杞黄颗粒I。

2、息斯敏(阿司咪唑片)购自西安杨森制药有限公司

1.2诊断标准和疗效标准

诊断标准：

有鼻炎反复发作史，呈季节性或常年性发作者；

有典型的发作症状，或鼻涕，或连续打喷嚏，或流清涕及鼻阻塞者；

鼻腔检查可见鼻腔粘膜，或黄白，或水肿，或肥厚，少数有鼻息肉者；

鼻腔分泌物涂片试验见嗜酸细胞计数超过5％者，结束后半年随访未见复发者。

疗效标准：

显效为症状消失，体征明显减轻，鼻腔分泌物涂片试验见嗜酸细胞计数小于5％，结束后半年随访未见复发者；

好转为症状消失，体征明显减轻，鼻腔分泌物涂片试验见嗜酸细胞计数小于5％，但疗程结束后半年内有复发者；

无效为症状改善不显著，体征变化不大，鼻腔分泌物涂片试验见嗜酸细胞计数大于5％，疗程结束后半年内有复发者。

1.3试验方法

应用实施例5所制得的槐杞黄颗粒I治疗过敏性鼻炎患者71例，并与息斯敏治疗70例进行对照观察。

治疗组：服用实施例5所制得的槐杞黄颗粒I，每天2次，每次1包(10g)，30天为一疗程。

对照组：临睡前服用息斯敏片，每天一次，每次1片(10mg)，30天为一疗程。

1.4统计分析方法

统计分析采用SPSS10.0统计分析软件进行计算。

所有的统计检验均采用双侧检验，P值小于或等于0.05将被认为所检验的差别有统计意义。

不同治疗组各次就诊的计量资料将采用均数±标准差进行统计描述。与筛选期基础值进行比较，采用配对t检验比较组内前后差异。两组治疗前后的变化采用两样本均数t检验、方差分析(ANOVA)和Wilcoxon秩和检验进行比较。

不同治疗组各次就诊的计数资料采用频数(构成比)进行统计描述。两组治疗前后的变化采用x²检验或非参数检验。

脱落分析：两组总脱落率和由于不良事件而脱落率的比较将采用x²检验。

基础值的均衡性分析：采用方差分析或x²检验来比较人口学资料和其它基础值指标，以衡量两组均衡性如何。

有效性分析：采用两样本均数t检验、方差分析(ANOVA)、x²检验、CMHx²检验、Wilcoxon秩和检验进行比较分析。将考虑中心效应对疗效指标的影响。

安全性分析：x²检验采用比较两组不良事件发生率，并列表描述本次试验所发生的不良事件；实验室检验结果在试验前后正常/异常的变化情况以及发生异常改变时与试验药物的关系。

2试验结果

实施例5所制得的槐杞黄颗粒I组显效29例(40.85％)；好转41例(57.75％)；无效1例(1.41％)。

息斯敏组显效7例(10.00％)；好转62例88.57％)；无效1例(1.43％)。从疗效结果分析，总有效率(显效+好转)两组无明显差异，从临床症状的改善时间、程度，息斯敏组还优于槐杞黄颗粒组，但治疗结束半年后随访反馈，实施例5所制得的槐杞黄颗粒I组要明显好于息斯敏组，显效率比较有显著性差异。

3试验结论

结果表明，息斯敏片仅仅是缓解症状，一旦停药后容易复发。而实施例5所制得的槐杞黄颗粒I是通过调节体液免疫功能，恢复体内自稳平衡状态，改变过敏体质而达到从根本上治疗过敏性鼻炎的目的，患者不易复发。

实施例20—22

过敏性鼻炎临床试验

将实施例6—8制得的槐杞黄颗粒II-IV进行实施例19的试验，结果相似。

实施例23

过敏性鼻炎治验举例

吴某，男，54岁，2004年5月初诊。过敏性鼻炎反复发作13年，遇寒即发作，春夏轻，秋冬加重。先后用“脱敏”，“冷冻”，“激素”等药物治疗无效。近1年来，病情加重，持续发作，喷嚏频作，鼻涕量多呈清水样，伴有头胀，周身无力，畏寒怕冷。双鼻腔粘膜苍白，下甲水肿，鼻道有大量稀性分泌物，舌质淡，苔薄白，脉细沉。用槐杞黄颗粒治疗，服药半个月，病情好转，继续服用1个月，病情痊愈，随访2年无复发。

实施例24

系统性红斑狼疮临床试验

1材料与方法

1.1受试药物：

1、实施例5所制得的槐杞黄颗粒I。

2、强的松购自赤峰蒙欣药业有限公司

3、地塞米松购自西安博森生物制药有限责任公司

4、环磷酰胺购自上海华氏制药有限公司天平制药厂

5、氯喹购自华北制药集团制剂有限公司

1.2诊断标准和疗效标准

诊断标准：(1)颊部红斑；(2)盘状红斑；(3)光过敏；(4)口腔溃疡；(5)关节炎；(6)浆膜炎；(7)肾脏病变；(8)神经系统异常；(9)血液学异常；(10)免疫学异常；(11)免疫荧光抗核抗体滴度异常，或相当于该法的其他试验滴度异常。上述11项中满足4项或4项以上者即可以确诊。

疗效标准：显效：临床症状明显好转，尿常规尿蛋白较前减少，由(++++)—(++)变成(+或者±)，血浆蛋白恢复到50—60g/L，尿中管型较前减少，贫血状态好转，免疫指标检查较前好转；

好转：临床症状部分改善，尿常规和血浆蛋白检查较前有好转，免疫指标及其他化验室检查有好转或无明显好转；

无效：治疗前后症状及实验室检查无明显改善，或病情加重。

1.3试验方法

应用实施例5制得的槐杞黄颗粒I结合西药治疗系统性红斑狼疮患者80例，并与西药治疗75例进行对照观察。

对照组：肾上腺皮质醇类激素，一般用强的松60mg/d，口服，或地塞米松10—15mg/d，静脉点滴，根据情况递减。如血浆蛋白低、大量蛋白尿者，加用环磷酰胺100—200mg，隔日或每周1次静脉注射(总量一般不超过2g)；水肿明显者，加利尿药；对轻度皮损、轻度关节症状或盘状红斑用氯喹，每日0.25—0.5g，口服。

治疗组：在西医治疗的基础上配合实施例5制得的槐杞黄颗粒I治疗。

1.4统计分析方法

统计分析采用SPSS10.0统计分析软件进行计算。

所有的统计检验均采用双侧检验，P值小于或等于0.05将被认为所检验的差别有统计意义。

不同治疗组各次就诊的计量资料将采用均数±标准差进行统计描述。与筛选期基础值进行比较，采用配对t检验比较组内前后差异。两组治疗前后的变化采用两样本均数t检验、方差分析(ANOVA)和Wilcoxon秩和检验进行比较。

不同治疗组各次就诊的计数资料采用频数(构成比)进行统计描述。两组治疗前后的变化采用x²检验或非参数检验。

脱落分析：两组总脱落率和由于不良事件而脱落率的比较将采用x²检验。

基础值的均衡性分析：采用方差分析或x²检验来比较人口学资料和其它基础值指标，以衡量两组均衡性如何。

有效性分析：采用两样本均数t检验、方差分析(ANOVA)、x²检验、CMHx²检验、Wilcoxon秩和检验进行比较分析。将考虑中心效应对疗效指标的影响。

安全性分析：x²检验采用比较两组不良事件发生率，并列表描述本次试验所发生的不良事件；实验室检验结果在试验前后正常/异常的变化情况以及发生异常改变时与试验药物的关系。

2试验结果

实施例5制得的槐杞黄颗粒I组显效29例(40.85％)；好转41例(57.75％)；无效15例(18.75％)。

对照组显效12例(16.00％)；好转46例(61.33％)；无效17例(22.67％)。

3试验结论

结果表明，总有效率(显效+好转)两组无明显差异，但是显效率治疗组明显好于对照组。

实施例25—27

系统性红斑狼疮临床试验

将实施例6—8制得的槐杞黄颗粒II-IV进行实施例24的试验，结果相似。

实施例28

系统性红斑狼疮治验举例

韩某，女，15岁，患者系统性红斑狼疮病史1年，采用中西医结合治疗，无明显效果，

2004年3月10日初诊，当时患者情况：精神差、满月脸、头晕胀、流涕、咳嗽、无恶心呕吐及发热，眼睑浮肿、腹胀、关节疼痛、腰痛、双下肢轻度浮肿，无蝶型红斑及网状青斑，舌质红、苔薄白、脉浮大而有力。实验室检查：尿蛋白(+++)、潜血(++)、IF-ANA(+)、滴度(1：1280)抗双链DNA抗(+)，循环免疫复合物32RU/ml。给予槐杞黄颗粒1个月后精神佳、无头晕胀，服用槐杞黄颗粒2个月后浮肿消失、关节疼痛、腹胀减轻、尿常规正常，服用药6个月后痊愈，建议巩固治疗1年，同时给予保健指导，随访至今未见复发。

实施例29

自身免疫性肾小球肾炎临床试验

1材料与方法

1.1受试药物：

1、实施例5所制得的槐杞黄颗粒I。

2、西医常规治疗药物：

①降低蛋白尿：强的松(购自赤峰蒙欣药业有限公司)或环磷酰胺(购自上海华氏制药有限公司天平制药厂)

②扩血管：潘生丁(购自青岛黄海制药有限责任公司)

③抗氧化剂：维生素E、维生素C(购自西南药业股份有限公司)

④非皮质类固醇消炎药：消炎痛(购自青海大地药业有限公司)

⑤其他降压、利尿、抗感染对症治疗药物

1.2主要试剂、仪器和评定方法

疾病疗效判定标准

(1)临床控制：尿常规检查蛋白转阴性，或24小时尿蛋白定量正常；尿常规检查红细胞数正常，或尿沉渣红细胞计数正常；肾功能正常。

(2)显效：尿常规检查蛋白减少2个“+”，或24小时尿蛋白定量减少≥40％，RBC减少≥3个/HP或2个“+”，或尿沉渣RBC计数检查减少≥40％；肾功能正常或基本正常(与正常值相差不超过15％)。

(3)有效：尿常规检查蛋白减少1个“+”，或24小时尿蛋白定量减少<40％，RBC减少<3个/HP或1个“+”，或尿沉渣RBC计数检查减少<40％；肾功能正常或改善。

(4)无效：临床表现与上述实验室检查均无改善或加重者。

证侯疗效判定标准

(1)临床痊愈：中医临床症状体征消失或基本消失，证侯积分减少≥95％。

(2)显效：中医临床症状体征明显改善，证侯积分减少≥70％。

(3)有效：中医临床症状体征明显好转，证侯积分减少≥30％。

(4)无效：中医临床症状体征无明显改善，甚或加重，证侯积分减少不足30％。

注：计算公式(尼莫地平法)为：[(治疗前积分-治疗后积分)÷治疗前积分]×100％。

主要症状的疗效评价

(1)临床痊愈：治疗后症状消失。

(2)显效：治疗后症状轻重分级下降2级，既由重度到轻度。

(3)有效：治疗后症状轻重分级下降1级，既由重度到中度，或中度到轻度。

(4)无效：治疗前后无改变。

尿蛋白疗效评价

(1)临床控制：尿常规检查蛋白转阴性，或24小时尿蛋白定量正常。

(2)显效：尿常规检查蛋白减少2个“+”，或24小时尿蛋白定量减少≥40％。

(3)有效：尿常规检查蛋白减少1个“+”，或24小时尿蛋白定量减少<40％。

(4)无效：尿蛋白无减少或增加。

尿红细胞疗效评价

(1)临床控制：尿常规检查RBC数正常，或尿沉渣RBC计数正常。

(2)显效：RBC减少≥3个/HP或2个“+”，或尿沉渣RBC计数检查减少≥40。

(3)有效：RBC减少<3个/HP或1个“+”，或尿沉渣RBC计数检查减少<40％。

(4)无效：尿RBC数无变化或增多。

评分标准：

慢性肾炎症状分级量化表

 

(郑莜萸主编.中药新药临床研究指导原则.北京：中国医药科技出版社，2002，162)症状轻(1分)中(2分)重(3分)腰脊酸痛腰脊酸痛偶见，劳累后可出现，工作活动仍正常腰脊酸痛隐隐，休息缓解，可一般工作，影响行动腰脊酸痛明显，不能多站多行，休息时亦有浮肿晨起眼睑浮肿，或午后足肿，肿势隐约可见眼睑及双下肢浮肿，按之有陷全身浮肿，按之深陷

 

食少纳呆食欲欠佳，口味不香食量减少不超过1/4食欲不振，口味不香食量减少1/4—1/2食欲甚差，无饥饿感食量减少1/2以上胃脘胀闷胃脘稍胀，可以忍受不影响饮食胃脘胀闷，空腹缓解饮食减少胃脘胀闷，终日不解难以忍受目睛干涩双目少津，视物易感疲劳双目滞涩不爽，视物常模糊双目干燥，昏暗不明视物模糊视物欠清晰物体视物模糊，辩物费劲视物模糊不清，难辩头晕头晕轻微，偶尔发生不影响活动及工作动及工作头晕较重，活动时出现，休息可安头晕重，行走欲仆，终日不缓解，影响活耳鸣耳鸣轻微，偶尔出现数秒即逝，不影响听力耳鸣较重，经常出现持续数分钟，轻度影响听力耳鸣如蝉，如火车声持续不已，明显影响工作和睡眠五心烦热手足心发热，偶有心烦手足心发热，欲露衣被外，时有心烦手足心发烫，欲持冷物，终日心烦不宁手足心热手足心发热，时有时无手足心发热，手足需暴露手足心发烫，欲接触冷物皮肤疖肿皮肤浅表红肿热痛皮肤浅表红肿热痛皮肤浅表红肿热痛疮疡疖肿直径不超过1.5cm，疖肿直径1.5—3cm，单发或2—3个疖肿直径超过3cm，或3个以上咽喉肿痛咽喉微红肿，示轻度充血或水肿咽喉红肿，充血或水肿明显，咽腔缩小咽喉红肿极显，咽腔缩小过半小溲黄赤小溲色黄小溲深黄小溲黄赤小溲灼热小溲灼热，不影响排小溲灼热，排尿不爽觉痛小溲灼热，尿道口充血疼痛

 

小便涩痛尿时尿道隐隐痛，不影响排尿，可以忍受红肿尿时尿道痛较重，排尿不爽尿时尿道痛剧烈，小便滴沥或尿闭，局部口中粘腻口微粘腻，不影响食欲口中粘腻，食欲下降饮食口中粘腻难受，不欲口干咽燥咽喉微干，稍饮水即可缓解咽喉干燥，饮水能解也难缓解咽喉干燥难忍，饮水口苦晨起口苦，或口中微苦口苦食不知味口苦而涩口干夜间口干口干少津口干欲饮口干不欲口干不欲饮，但欲漱饮口渴不欲饮，但饮则口无反应口渴不欲饮，饮后恶心

舌脉：具体描述，不记分

1.3试验方法

应用实施例5制得的槐杞黄颗粒I结合西药治疗自身免疫性肾小球肾炎患者72例，并与西药治疗72例进行对照观察。

对照组：给药期间除西医常规对症治疗：降压、利尿、抗感染，并发肾病综合征者给予激素外，停用其他药物，连续观察12周。

治疗组：在西医治疗基础上，给予实施例5制得的槐杞黄颗粒I配合治疗。

用法用量：在对照组治疗基础上，服用槐杞黄颗粒每日3次，每次10g。疗程：12周

1.4统计分析方法

统计分析采用SPSS10.0统计分析软件进行计算。

所有的统计检验均采用双侧检验，P值小于或等于0.05将被认为所检验的差别有统计意义。

不同治疗组各次就诊的计量资料将采用均数±标准差进行统计描述。与筛选期基础值进行比较，采用配对t检验比较组内前后差异。两组治疗前后的变化采用两样本均数t检验、方差分析(ANOVA)和Wilcoxon秩和检验进行比较。

不同治疗组各次就诊的计数资料采用频数(构成比)进行统计描述。两组治疗前后的变化采用x²检验或非参数检验。

脱落分析：两组总脱落率和由于不良事件而脱落率的比较将采用x²检验。

基础值的均衡性分析：采用方差分析或x²检验来比较人口学资料和其它基础值指标，以衡量两组均衡性如何。

有效性分析：采用两样本均数t检验、方差分析(ANOVA)、x²检验、CMHx²检验、Wilcoxon秩和检验进行比较分析。将考虑中心效应对疗效指标的影响。

安全性分析：x²检验采用比较两组不良事件发生率，并列表描述本次试验所发生的不良事件；实验室检验结果在试验前后正常/异常的变化情况以及发生异常改变时与试验药物的关系。

2试验结果

治疗4周、8周试验组总有效率分别为88.89％、88.89％，对照组总有效率分别为80.77％、80.77％，两组疗效差异无显著性(经x²检验，P>0.05)；

治疗12周试验组总有效率为92.59％，对照组总有效率为84.62％。治疗12周，试验组总有效率略高于对照组，但两组疗效差异无显著性(经x2检验，P>0.05)。

治疗组与对照组单项症状：腰痛、手足心热分值的变化，两组比较，经秩和检验差异有显著性(P<0.05)。

3试验结论

结果表明，试验组与对照组总疗效接近。但是在治疗4周、8周、12周痊愈显效率分别为22.42％、42.75％、72.18，对照组痊愈显效率分别为25.37％、30.14％、39.25，可以看出随着服药时间的增加，治疗组痊愈显效率增加显著高于对照组，治疗12周，试验组痊愈显效率高于对照组，两组疗效差异有显著性(经x²检验，P<0.05)。

实施例30—32

自身免疫性肾小球肾炎临床试验

将实施例6—8制得的槐杞黄颗粒II-IV进行实施例29的试验，结果相似。

实施例33

自身免疫性肾小球肾炎治验举例

刘某，女，24岁，2004年3月诊断为自身免疫性肾小球肾炎，患者发热微恶风寒，伴头痛，颜面部浮肿而无华，少气乏力，手足心热，口干咽燥，咽部暗红，舌红少苔，脉细。尿蛋白(++)，白细胞18—25个，血压22/13kPa。服用槐杞黄颗粒15天，热退肿消，尿蛋白(±)，白细胞0—6个，红细胞0—1个，继续服用15天，诸症已除，尿检正常。继服15天巩固疗效。1年随访，未复发。

实施例34

槐杞黄颗粒免疫功能调节药效学试验

1材料与方法

材料：

受试药物：实施例5所制得的槐杞黄颗粒I。

对照药：黄芪精口服液(以下简称黄芪精)，购自南京中医药大学制药厂生产，批号为970601。

动物：BALB/C小鼠，17—23g，雌雄兼用，购自安徽医科大学实验动物中心；昆明种小鼠，18—22g，雌雄兼用，购自南京军区总院实验动物中心。每组10只动物。

给药途径：采用与拟用临床相同途经灌胃(ig)给药。

试剂与仪器：

印度墨汁，购自上海长江日用粘合材料厂；2，4——二硝基氟苯(DNFB)，购自上海金山兴塔化工厂；RPMI1640培养粉，购自美国Gibco公司；刀豆蛋白A(Concanavalin A，Con A)和大肠杆菌、脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)，购自美国Sigma公司；四甲基偶氮唑盐(MTT)，美国Sigma公司产品；环磷酰胺(Cyclophosphamide，Cy)，上海华联制药有限公司产品，批号961205；2一巯基乙醇(2-mercaptoethenol，2—ME)，美国Sigma公司产品；羊抗BALB/C小鼠IgG，北京生物制品研究所产品。

Napco-6100 CO₂培养箱，美国杜邦公司产品；XSZ倒置显微镜，重庆光学仪器厂产品；GL-20A全自动高速冷冻离心机，湖南仪器仪表总厂离心机厂产品；EL301 Strip reader(酶标仪)，美国Bio-Tek公司产品；7530型紫外可见分光光度计，上海分析仪器厂产品。

方法：

1.小鼠颗粒碳廓清实验

将昆明种小鼠随机分组，每鼠尾静脉注射印度墨汁0.05ml·10g^-1体重，分别于2min(t₂)和10min(t₁₀)时从眼眶取血20μl，加至2ml 0.1％ Na₂CO₃溶液中摇匀，用分光光度计在680nm下比色，测其吸光度A值。按下式计算廓清指数K值及校正的吞噬指数α值(A₂和A₁₀分别代表2min和10min的A值)：

$K=\frac{\log A_2-\log A_{10}}{T_{10}-T_2}$

2.小鼠迟发型变态反应(delayed type hypersensitivity，DTH)模型

将BALB/C小鼠随机分组，每鼠腹部去毛区均匀涂以1％DNFB丙酮液50μl致敏，并于第2天以同量强化一次。5天后于小鼠右耳两面均匀涂以1％DNFB丙酮液10μl进行攻击，24小时后处死小鼠，剪下左右两耳，用打孔器取下直径8mm耳片，称重，以左右耳片重量之差作为肿胀度。同时取下胸腺和脾脏，称重，以胸腺指数和脾指数表示结果。

3.定量溶血素测定法(quantitative haemolysis of SRBC，QHS)

将BALB/C小鼠随机分组，于每鼠ip5％绵羊红细胞(SRBC)0.2ml致敏。第5天处死小鼠，取脾，以冷Gey氏液-溶血Gey氏液-明胶Gey氏液-Gey氏液系统制备脾细胞悬液(每ml含60mg脾重)，于每试管中加入细胞悬液，0.2％SRBC和1:10豚鼠血清各0.5ml后混匀，另设不加豚鼠血清的空白对照。置37℃水浴中温育1小时，以900xg离心5min，取上清在413nm波长处测吸光值(A)，以反映产生IgM能力。同时测定脾指数。

IgG水平的测定亦采用分光光度法，小鼠于致敏后7天用同样剂量(5％，0.2ml)SRBC再次免疫。再次免疫后7天将小鼠眼球摘除，取血分离血清。将每只小鼠血清分为二份，一份不作处理，一份加等量0.2M的2-巯基乙醇(2-ME)后于37℃水浴中保温0.5小时以破坏IgM。再分别将二份血清作200倍稀释。取2—ME处理的血清0.5ml和3％SRBC 0.5ml，充分混匀，再加羊抗BALB/C小鼠IgG和豚鼠血清各0.5ml，空白管以0.5ml N.S.代替血清；取未处理的血清0.5ml依次加入SRBC、豚鼠血清、N.S.各0.5ml，混匀，置37℃温育1小时后以900xg离心10min，取上清在540nm处测A值。溶血素含量(HC)按下式计算：

HC_IgG＝2-ME处理血清的A值×稀释倍数

HC_IgM＝未处理血清的A值×稀释倍数

HC_Ig＝HC_IgG+HC_IgM

4.小鼠淋巴细胞增殖的反应

在DTH模型或QHS模型上取胸腺或脾脏，用Hank’s液洗涤，制备细胞悬液，用RPMI1640培养液调整细胞数为1×10¹⁰·L^-1，于96孔培养板上每孔加入0.1ml细胞悬液和0.1ml Con A(终浓度为5mg·L^-1)，或LPS(终浓度为4mg·L^-1)，置37℃，5％CO₂培养箱培养48小时，然后于每孔加入5g·L^-1的MTT液10μl，振荡1min，再放入培养箱中继续培养2小时，培养结束后以760xg离心10min，吸弃上清后每孔加入酸化异丙醇120μl，振荡30秒，在酶标仪上于570nm处读每孔吸光度(absorbance，A)，结果以其A的均值表示。

5.数据统计学处理：

实验数据以X±S表示，采用t检验。

2结果

1.槐杞黄颗粒对小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响

分组情况见表1。

结果表明，槐杞黄颗粒2个剂量连续8天ig用药均能明显提高小鼠的吞噬指数，揭示本发明提供的槐杞黄颗粒能促进巨噬细胞的吞噬功能。

表1 槐杞黄对小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响

 

组别剂量(g·kg^-1)Kα正常对照0.329±0.01336.39±1.20槐杞黄—2.885.7611.530.0512±0.0111^**0.1047±0.0143^**0.1132±0.0129^**0.0612±0.0124^**6.83±0.607.51±1.10^*7.82±1.20^**7.00±0.90黄芪精1.7

X±S，n＝10，^*P<0.05，^**P<0.01与正常对照组比

2.槐杞黄对Cy诱导免疫低下小鼠DTH的影响

分组情况详见表2。于DNFB致敏后iP Cy(125mg·kg^-1)可诱导DTH低下模型。

结果表明，于致敏前3天ig本发明提供的槐杞黄颗粒(2、4、8g·kg^-1)每天1次，连续8天，其4和8g·kg^-1组可明显对抗cy所致的免疫低下作用，其作用与阳性对照药黄芪精相近。

表2 槐杞黄对免疫低下小鼠DTH的影响

 

组别剂量(g·kg^-1)耳肿胀度(△mg)正常对照—0.7±0.2DTH模型—12.6±3.4^**Cy—7.4±0.6^##Cy+槐杞黄27.7±1.0413.8±1.9^△△812.3±1.6^△△Cy+黄芪精1.712.9±2.3^△△

X±S，n＝10，^**P<0.01与正常对照组比，^##P<0.01与DTH模型组比，^△△P<0.01与Cy组比

3.槐杞黄对低下的DTH小鼠胸腺指数和脾指数的影响

分组情况及用药情况同2。结果见表3，

结果表明，Cy组小鼠胸腺指数和脾指数明显降低，本发明提供的槐杞黄颗粒(4和8g·kg—1)可明显对抗Cy的降低作用。

表3 槐杞黄对免疫低下DTH小鼠胸腺指数和脾指数的影响

 

组别剂量(g·kg^-1)胸腺指数(mg·10g^-1体重)脾指数(mg·10g^-1体重)正常对照—8.19±2.3841.34±5.63DTH模型—15.03±2.34^**69.03±17.59^**Cy—5.11±0.89^##41.81±5.54^##Cy+槐杞黄25.86±1.2346.31±10.8549.70±2.58^△△87.23±13.03^△△811.02±1.80^△△91.67±14.60^△△Cy+黄芪精1.711.95±3.37^△△73.02±14.51^△△

X±S，n＝8～10，^**P<0.01与正常对照组比，^##P<0.01与DTH模型组比，^△△P<0.01与Cy组比

4.槐杞黄对低下的DTH小鼠T淋巴细胞增殖功能的影响

分组及用药情况同2。结果见表4。

结果表明，本发明提供的槐杞黄颗粒的3个剂量组均可明显对抗Cy所致DTH小鼠胸腺T淋巴细胞增殖反应的低下，以维持T淋巴细胞参与正常DTH的反应。

表4 槐杞黄对低下的DTH小鼠T淋巴细胞增殖反应的影响

 

组别剂量(g·kg^-1)淋巴细胞增殖(A)正常对照—0.032±0.009DTH模型—0.107±0.027^**Cy—0.047±0.014^#Cy+槐杞黄20.123±0.041^△40.091±0.018^△80.100±0.026^△Cy+黄芪精1.70.283±0.051^△△

X±S，n＝3～4，^**P<0.01与正常对照组比，^#P<0.05与DTH模型组比，^△P<0.05，^△△P<0.01与Cy组比

5.槐杞黄对Cy诱导免疫增高小鼠DTH的影响

分组情况详见表5。于DNFB致敏前3天ip Cy(250mg·kg^-1)可诱导DTH增高模型。

结果表明，于致敏前3天ig本发明提供的槐杞黄颗粒，每天1次，连续8天，该药在4g·kg^-1和8g·kg^-1剂量组能明显对抗Cy所致的免疫增高作用，其作用与黄芪精相近。

表5 槐杞黄对免疫增高小鼠DTH的影响

 

组别剂量(g·kg^-1)耳肿胀度(△mg)正常对照—0.7±0.2DTH模型—12.6±3.4^**Cy—20.8±2.0^##Cy+槐杞黄221.7±3.2412.3±2.5^△△

 

811.2±3.2^△△Cy+黄芪精1.712.2±1.7^△△

X±S，n＝10，^**P<0.01与正常对照组比，^##P<0.01与DTH模型组比，^△△P<0.01与Cy组比

6.槐杞黄对增高的DTH小鼠胸腺指数和脾指数的影响

分组及用药情况同5。结果见表6。

结果表明，本发明提供的槐杞黄颗粒3个剂量(2、4、8g·kg^-1)组均能明显对抗Cy增高DTH小鼠胸腺指数的作用，但对Cy增高的脾指数无明显影响。

表6 槐杞黄对免疫增高DTH小鼠胸腺指数和脾指数的影响

 

组别剂量(g·kg^-1)胸腺指数(mg·10g^-1体重)脾指数(mg·10g^-1体重)正常对照—8.19±2.3841.34±5.63DTH模型—15.03±2.34^**69.03±17.59^**Cy—23.68±4.87^##109.12±13.36^##Cy+槐杞黄29.59±3.01^△△120.36±16.82410.43±3.26^△△123.52±25.30811.38±2.20^△△108.73+23.58Cy+黄芪精1.710.50±2.01^△△120.58±17.67

X±S，n＝8～10，**P<0.01与正常对照组比，##P<0.01与DTH模型组比，△△P<0.01与Cy组比

7.槐杞黄对增高的DTH小鼠T淋巴细胞增殖功能的影响

分组及用药情况同5。结果见表7。

结果表明，本发明提供的槐杞黄颗粒3个剂量组均能明显对抗Cy所致增高的DTH小鼠胸腺T淋巴细胞增殖反应。

表7 槐杞黄对增高的DTH小鼠T淋巴细胞增殖反应的影响

 

组别剂量(g·kg^-1)淋巴细胞增殖(A)正常对照—0.027±0.008DTH模型—0.142±0.026^**Cy—0.246±0.050^##

 

Cy+槐杞黄20.108±0.027^△△40.118±0.022^△△80.093±0.028^△△Cy+黄芪精1.70.108±0.031^△△

X±S，n＝3～4，**P<0.01与正常对照组比，##P<0.01与DTH模型组比，△△P<0.01与Cy组比

8.槐杞黄对Cy诱导免疫增高小鼠溶血素抗体(IgM)生成的影响。

分组情况详见表8。

结果表明，于SRBC致敏前3天ipCy(250m g·kg^-1)诱导了QHS增高模型，于ipCy同时开始ig本发明提供的槐杞黄颗粒，每天一次，连续8天，该药8g·Kg^-1可明显对抗Cy所致IgM生成的增多，而黄芪精无明显作用。

表8 槐杞黄对免疫增高小鼠溶血素抗体(IgM)生成的影响

 

组别剂量(g·kg^-1)溶血素抗体(IgM)(A)N.S.—0.296±0.046Cy—0.573±0.091^**Cy+槐杞黄20.517±0.07140.497±0.06180.355±0.029^△△Cy+黄芪精1.70.543±0.108

X±S，n＝8～10，^**P<0.01与N.S.组比，^△△P<0.01与Cy组比

9.槐杞黄对Cy增高的QHS小鼠脾指数的影响

分组及用药情况同表8。结果见表9。

结果表明，于SRBC致敏前3天ipCy250mg·kg^-1，能明显提高QHS小鼠的脾指数，但本发明提供的槐杞黄颗粒3个剂量组和黄芪精组对此均无明显影响。

表9 槐杞黄对Cy增高QHS小鼠脾指数的影响

 

组别剂量(g·kg^-1)脾指数(mg·10g^-1体重)N.S.—28.30±2.54Cy—41.54±8.82^*Cy+槐杞黄242.06±6.57443.64±11.57

 

836.17±7.76Cy+黄芪精1.741.49±9.22

X±S，n＝7～10，^*P<0.05与N.S.组比

10.槐杞黄对Cy增高QHS小鼠T和B淋巴细胞增殖功能影响。

分组及用药情况同表8。结果见表10。

结果表明，于SRBC致敏前3天ip Cy250mg·kg^-1，能明显促进QHS小鼠ConA或LPS诱导的T或B淋巴细胞增殖反应，本发明提供的槐杞黄颗粒2和4g·kg^-1，ig给药连续8天能明显对抗Cy促进T淋巴细胞增殖的作用，且该药3个剂量组对Cy升高的B淋巴细胞增殖反应均有明显对抗作用。

表10 槐杞黄对Cy增高的QHS小鼠T、B淋巴细胞增殖反应的影响

X±S，n＝3～4，^*P<0.05，^**P<0.01与N.S.组比，^△P<0.05，^△△p<0.01与Cy组比

11.槐杞黄对Cy诱导增高SRBC再次免疫小鼠IgG生成的影响

分组情况详见表11。

结果表明，于SRBC初次免疫前3天ip Cy(250mg·kg^-1)可使SRBC再次免疫后7天的血清HC_Ig和HC_IgG升高，而对HC_IgM无明显影响。于ip Cy同时开始ig本发明提供的槐杞黄颗粒或黄芪精，每天一次，连续14天，该药3个剂量(2、4、8g·kg^-1)组和黄芪精(1.7g·kg^-1)组均可明显对抗Cy升高HC_Ig和HC_IgG的作用。

提示本发明提供的槐杞黄颗粒不仅对Cy所致SRBC初次免疫IgM的过度生成有下调作用，而且对Cy所致SRBC再次免疫IgG的过度生成亦有明显下调作用。

表11 槐杞黄对Cy增高的小鼠血清HC_IgG的影响

 

组别剂量(g·kg^-1)HC_IgGHC_IgMHC_IgN.S.—15.7±3.635.2±4.948.7±5.0Cy—29.3±1.7^**34.9±5.563.2±5.6^**Cy+槐杞黄219.5±1.8^△△31.9±4.152.5±3.4^△△410.9±1.7^△△32.2±4.443.1±5.6^△△811.7±1.7^△△35.6±2.847.2±4.0^△△Cy+黄芪精1.711.7±1.8^△△33.8±5.044.0±3.2^△△

X±S，n＝5～8，^**P<0.01与N.S.组比，^△△P<0.01与Cy组比

本发明提供的槐杞黄颗粒不仅可明显提高巨噬细胞吞噬功能，而且在2～8g·kg^-1范围内对环磷酰胺所致增高或低下的细胞和体液免疫异常改变均有明显调节作用，并能使T、B淋巴细胞增殖能力和IgM、IgG含量维持近正常水平。

本发明提供的槐杞黄颗粒2个剂量组能明显促进小鼠巨噬细胞吞噬功能，有益于改善机体的免疫状态。本发明提供的槐杞黄颗粒4和8g·kg^-1于致敏前3天ig给药，每天一次，连续8天，可明显对抗Cy所致DTH的异常增高或降低，具有明显双向调节作用，它还可明显恢复异常改变的胸腺指数和脾指数；它的三个剂量组均可明显恢复异常DTH小鼠的T淋巴细胞增殖功能，这可能是其发挥免疫调节作用的重要机制之一。本发明提供的槐杞黄颗粒可能具有控制自身抗体形成的作用。

综上所述，本发明提供的槐杞黄不仅可促进非特异性免疫功能，而且对异常改变的细胞和体液免疫反应具有明显调节作用。

实施例35

槐杞黄颗粒急性毒性试验

1.材料

受试物：实施例3制备的槐杞黄浸膏。每克浸膏相当于生药1.79克，加蒸馏水配成1g(浸膏)/ml溶液供试。

动物：昆明种小鼠，19—20g，雌雄各半，南京军区总医院动物实验中心提供，合格证号：苏(质)95047，苏(环)9300109。

2试验方法和结果

(1)急性毒性试验：

昆明种小鼠10只，雌雄各半，灌服受试物0.8ml/20g，给药量为40g/kg，观察小鼠出现的毒性反应。

试验中可见小鼠未出现任何死亡和异常，继续观察7天，仍未出现异常。重复实验，结果同上。

(2)最大耐受量试验

20只小鼠，雌雄各半，灌服受试物0.8ml/20g，于上午8时和下午16时各给药

一次，给药总量为80g/kg，观察小鼠出现的毒性反应，连续7天，未见异常。

3结论

小鼠灌胃给药急性毒性试验表明：灌胃给药40g浸膏/kg未出现死亡；小鼠灌胃给药的最大耐受量为80g浸膏/kg，相当于人用剂量的276倍。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并非用以限定本发明的实质技术内容范围，本发明的实质技术内容是广义地定义于申请的权利要求范围中，任何他人完成的技术实体或方法，若是与申请的权利要求范围所定义的完全相同，也或是一种等效的变更，均将被视为涵盖于该权利要求范围之中。