大孔吸附树脂制备的美洲大蠊抗肿瘤有效部位及用途

摘要

本发明涉及一种具有细胞毒活性的美洲大蠊提取物有效部位及其制备方法和医药用途。本发明的美洲大蠊提取物有效部位由蜚蠊科美洲大蠊(Periplaneta americana)虫体鲜品或干品经醇水提取、大孔吸附树脂柱层析、醇溶剂洗脱精制而成。本发明得到的美洲大蠊提取物有效部位对口腔上皮癌(KB)细胞，低分化胃腺癌肿瘤(BGC－823)细胞，人慢性髓原细胞白血病癌(K562)细胞和人原髓细胞白血病细胞(HL－60)具有明显的细胞毒性和体内抗肿瘤功效，可以用于制备治疗上述肿瘤的药物或保健品。

说明书

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体而言，本发明涉及一种具有细胞毒活性和抗肿瘤功能的美洲大蠊提取物有效部位及其制备方法和医药用途。

背景技术

美洲大蠊(Periplaneta americana)属昆虫纲，有翅亚纲，蜚蠊目，蜚蠊科，大蠊属，俗称蟑螂。它在地球上已经生存了4亿年，是世界上生命力最强、最古老、至今繁衍最成功的昆虫类群之一。据报道，在日本广岛原子弹爆炸后，首先活跃起来的昆虫群体就是美洲大蠊。它能顽强地繁衍4亿年，并且面对上千种针对它的各种杀灭剂，该群体依然十分活跃，其体内无疑具有特殊的生物活性物质和其特有的生理机制。

美洲大蠊入药始载于《神农本草经》，其中将其列为中品[文献：孙星衍等，《神农本草经》，商务印书馆，1955：90]。“蟑螂”为其俗名首见于《本草纲目拾遗》，也称其为石姜、滑虫；各地方有其不同的称法，如：偷油婆、茶婆子、灶蚂子等。其作为室内害虫主要栖息于厨房、食堂、仓库等处损害食物、衣服、书籍等。取食并污染人的食物，传播痢疾、伤寒、蛔虫、蛲虫等多种疾病。

近几年来随着我国对传统中医药资源研究开发的重视，学者对这一几千年来无法根绝的害虫进行了应用开发方面的研究，并取得了可喜的成就，发掘出了这一传统意义上的害虫的正面价值。以美洲大蠊醇提物纯化制成的产品“康复新”，在烧伤、烫伤等外伤创面的良好疗效。从美洲大蠊醇提物中纯化精制而成的“心脉龙注射液”，具强心升压，改善微循环，兴奋呼吸，利尿，增加心、脑、肺、肾的血流量。“心脉龙注射液”主治：右心衰，也可治急慢性心衰，失血性休克，低血压，室性早博，病窦性综合症，心脑缺血性疾病，为2004年通过国家食品药品监督管理局审批的国家二类新药(中药)。

用美洲大蠊中提取分离得到抗菌肽成分通过大肠杆菌测试其抑菌作用，结果大肠杆菌的数量在一定的测试时间内逐渐减少[文献：蓝江林，周先治，卓侃，等，美洲大蠊(Periplaneta americana L.)抗菌肽杀菌作用初步观察，福建农林大学学报(自然科学版)，2004，33(2)：166]。通过电镜观察表明，美洲大蠊抗菌肽首先使细菌的外层及细胞质膜损伤，形成开口，导致内容物外泄而死亡，最后菌体崩解成碎片。认为美洲大蠊抗菌肽对大肠杆菌不是一般的抑菌作用，而是直接杀灭作用。对蜚蠊科昆虫澳洲大蠊(Periplaneta australasie Fabricus)全虫(去翅及足)的油状醇提取物进行的体内筛选，证明澳洲大蠊提取物对S-180及人食管癌小鼠异种移植均有显著的抗癌作用[文献：黄厚聘，程才芬，李淑芳，蟑螂油的抗癌作用，中草药，1981，12(1)：35]。程才芬等将澳洲大蠊用95％乙醇浸泡得油状液对人食管癌小鼠异种移植的抗癌作用，结果表明：每天1次，每次皮下注射以2克生药/公斤计，连续给药5天，能使瘤块显著缩小[文献：程才芬，林文琴，黄厚聘，蟑螂油对人食管癌小鼠异种移植的抗癌作用，中草药，986，17(6)：38]。陈利铭文献：[文献：陈利铭，蟑螂提取物AT2抗癌作用的临床及实验研究，中西医结合杂志，1986，11：648]对蟑螂提取物AT2抗肿瘤作用进行了研究，药理实验表明：AT2具有抗肿瘤活性，能增强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能，并能使脾脏重量增加，在体外可增加T淋巴细胞对刀豆球蛋白Con A的转化反应。

AT2治疗原发性肝癌49例，临床观察表明，本品具有缓解症状，使甲胎蛋白下降，延长患者生存期的功效。上海医药工业研究院情报所沙静姝等对消症益肝片(I)的实验研究结果显示：消症益肝片(I)具有破瘀、化积、消肿和解毒等功效。对某些小鼠肿瘤有抑制作用，对动物免疫功能无抑制作用，对小鼠的巨噬细胞机能有明显的增强作用[文献：沙静姝，毛洪奎，消症益肝片，药学通报，1987，22(9)：569]。消症益肝片(I)系由蟑螂活成虫经提取制成的口服片剂，适用于中、晚期原发性肝癌的治疗。经临床试用于49例患者，并与其它中西药治疗组46例进行对比，结果为：(I)组治疗后一年生存率为14.89％，而对照组无一例存活一年以上。临床表明，用药后患者主观症状有改善，肝区疼痛减轻或消失、食欲增加、体重增加、腹胀减轻。部分患者用药后有轻微口干、便秘、全身搔痒等不良反应。在临床应用方面，蟑螂活虫提取物治疗原发性肺癌有良好效果。廖剑英以“康复新”治疗恶性纤维组织细胞瘤，取得良好效果[文献：廖剑英，康复新治疗恶性纤维组织细胞瘤1例，大理学院学报，2003，2(3)：92]。有相关报道表明蟑螂提取物在抗肿瘤的同时具有一定的增强免疫功能的作用[文献：罗志宏，占汉章，李艳红等，中药康复新在头颈部恶性肿瘤治疗中的作用观察，中国中西医结合耳鼻咽喉科杂，1998，6(3)：132；严奉祥等，中药康复新的在体免疫药理学特征，大理医学院学报，1991，3(1)：21]。

为明确美洲大蠊药材抗肿瘤有效部位，进一步弄清其中起主要药理作用的物质结构基础，并从分子药理学基础上阐明美洲大蠊多种生物活性的作用机制，发明人对其展开了详细的药学工艺研究。发明者选用了聚酰胺和反相材料分别对美洲大蠊有效部位进行了研究，发现用上述两种分离材料均能够成功富集得到具有强效肿瘤细胞毒性的有效部位(发明专利：200710067706.X和200710067707.4)。

但是，值得注意的是：聚酰胺的重复应用性有一定程度的局限性，而反相材料(诸如RP-8和RP-18)价格相对较为昂贵。于是，有必要找出一个新的有效替代的方法，其既可以达到聚酰胺和反相材料能够达到的富集美洲大蠊肿瘤细胞毒性的有效部位之能力，又可以达到柱层析材可以多次重复利用并且成本低廉的要求。

随着中药现代化发展的需要，中药成分提取分离和纯化中采用了一些新的高分子材料和新的技术方法，其中以20世纪中期发展起来的高分子材料以大孔吸附树脂法在中药生产和开发中最受欢迎。大孔吸附树脂又称聚合物吸附剂，为白色球形颗粒，具有三维空间网状结构的高分子聚合物，理化性质稳定，不溶于酸、碱及有机溶剂，对有机物的选择性较好。其主要特点是多孔性和较高的比表面积。在目前的吸附树脂按其表面性质可分为非极性、中极性、极性和强极性几种类型，常用的为苯乙烯型、丙烯腈型及丙烯酸酯型等。不同类型的大孔吸附树脂极性、孔性结构也都不同，对化合物的吸附分离也不相同。它的吸附性是由范德华力或生成氢键的结果，分离机制主要有物理吸附作用、化学吸附作用和氢键吸附作用，此外孔径均匀的树脂还有类似于膜分离的作用，可按分子直径的大小把不同相对分子质量的物质分开。

本发明的相关试验中选用了多种大孔吸附树脂为分离工具，对美洲大蠊的醇提物进行了分段；并采用对口腔上皮癌(KB)细胞，低分化胃腺癌肿瘤(BGC-823)细胞，人慢性髓原细胞白血病癌(K562)细胞和人原髓细胞白血病(HL-60)细胞的生长抑制试验进行跟踪，以证实经大孔吸附树脂精制所得到的确为具有强效肿瘤细胞毒性之有效部位。

本发明的有益之处是：现在云南有企业及众多农家养殖美洲大蠊，并已形成较大产业，药源十分丰富。美洲大蠊系列昆虫药品的研发被列为云南省重点培育的“云药”特色产品之一。该项研究完全有希望研发出一种资源丰富的且对边疆经济发展有重大推动作用的抗癌新药。特别是对贫困地区养殖美洲大蠊的农民致富有着深远的意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种适合于工业化生产的美洲大蠊具细胞毒和抗肿瘤活性的有效部位提取物；

本发明的另一目的是提供了一种大孔吸附树脂制备美洲大蠊具细胞毒和抗肿瘤活性的有效部位提取物的方法；

本发明的另一目的是提供了将由大孔吸附树脂制备得到的美洲大蠊提取物有效部位用于制备防治肿瘤药物的用途；

本发明的另一目的是提供了一种含有由大孔吸附树脂制备得到的美洲大蠊提取物有效部位用于制备防治肿瘤的药物组合物。

为达到上述目的，本发明的发明者作了各种研究，并且发现了一种十分经济有效的美洲大蠊有效部位的制备方法，并据此完成了本发明。

因此本发明涉及一种应用大孔吸附树脂制备具细胞毒活性的美洲大蠊有效部位提取物的方法。大孔吸附树脂受到中药与天然药物研究者的欢迎其原因在于：1、其除去干扰成分效果好：大孔吸附树脂在水溶液中对水溶性多糖、粘液质、色素、树脂等大分子物质几乎不吸附或吸附力很弱，很容易被水洗除去；2、其操作简便，样品损耗小。3、其成本低，污染小：一次装柱可反复使用多次，一公斤树脂一般可供制备数百批次的供试液，并且整个过程一般不用其它有毒有机溶剂；4、大孔吸附树脂种类有多种多样，根据所需要分离的有效部位可以自行选择：其中例如D-201、D-301、HPD-600、NKA-9等树脂添加有甲基丙烯酸甲酯或丙烯氰；弱极性和极性树脂有D-201、D-301、HPD-300、HPD-600、AB-8、NKA-9等；非极性和弱极性的树脂有D-101、AB-8、HPD-100等；5、从安全性上考虑，市场所售的吸附树脂出厂前都以乙醇、甲醇、酸、碱、丙酮等不同极性的有机溶剂进行梯度洗脱，将树脂中残留的各种不同极性的杂质完全彻底地清洗出来，所以大孔吸附树脂用于中药制剂、中草药的提取、分离中也是安全可靠的[文献：张韵慧，李宁，许建辰，等，高分子材料在中药现代化中的应用，中草药，2003，34(增)：296-297；张虹，柳正良，王洪泉，大孔吸附树脂在药学领域的应用，中国医药工业杂志，2001，32(1)：41-44；高媛，任涛，大孔吸附树脂在中药新药研究中的应用，中草药，2003，34(增)：303-305；刘斌，石任兵，余超，影响大孔吸附树脂分离中草药化学成分的因素，中草药，2002，33(5)：475-476)。有鉴于此，我们尝试用20世纪中期发展起来的高分子材料暨大孔吸附树脂来进行试验，以期成功找到符合要求的分离替代品。

本发明的相关试验中选用了多种大孔吸附树脂为分离工具，对美洲大蠊的醇提物进行了分段；并采用对口腔上皮癌(KB)细胞，低分化胃腺癌肿瘤(BGC-823)细胞，人慢性髓原细胞白血病癌(K562)细胞和人原髓细胞白血病(HL-60)细胞的生长抑制试验进行跟踪，以证实经大孔吸附树脂精制所得到的确为具有强效肿瘤细胞毒性之有效部位。通过大量的试验，发明者发现：美洲大蠊醇提物经大孔吸附树脂分段后得到的某些部位对口腔上皮癌(KB)细胞，低分化胃腺癌肿瘤(BGC-823)细胞，人慢性髓原细胞白血病癌(K562)细胞和人原髓细胞白血病(HL-60)细胞的生长抑制活性明显强于其它部位，并且某些活性部位细胞毒和抗肿瘤活性强于粗提物的相应活性；进一步的，经大孔吸附树脂分段后得到的这些部位对肿瘤细胞毒性略强于用聚酰胺和反相分离材料所制备得到的有效部位。更为重要的是：经大孔吸附树脂分段后得到的这些有效部位之得率也大于用聚酰胺和反相分离材料所制备得到的有效部位之得率，说明使用大孔吸附树脂对美洲大蠊醇提物进行精制在生产工艺上有着相当的优势，并且以往未见相关的报道，从而构成本发明。

具体而言，本发明中美洲大蠊具细胞毒和抗肿瘤活性的有效部位提取物的制备方法如下：用溶剂提取经粉碎或未粉碎的美洲大蠊虫体、浓缩提取回收溶剂、大孔吸附树脂柱层析、水洗、醇水溶液梯度洗脱方法纯化；得到的抑制癌细胞增值和体内抑瘤活性有效部位经减压浓缩至无醇味、减压浓缩或冷冻干燥，粉碎得产品。

本发明中的动物药材可以是美洲大蠊任一部位，即可以是美洲大蠊(Periplaneta americana)头、身、翅，也可以是它们的混合物，优选全虫。可以是干燥全虫，也可以是未经干燥的全虫或活体全虫。

美洲大蠊醇提物经大孔吸附树脂富集到的提取物或其混合物可以与药学上常用的辅料或载体结合，制备得到具有肿瘤细胞生长抑制活性从而可以用于防治肿瘤的药物组合物。上述各类药物组合物可以采用注射剂、片剂、胶囊剂、气雾剂、栓剂、膜剂、滴丸剂、外用搽剂、软膏剂等剂型药物，还可以采用现代制药界所公知的控释或缓释剂型或纳米制剂。

本发明的美洲大蠊醇提物经大孔吸附树脂富集到的提取物可以与现已上市的抗肿瘤药物如铂类药物顺铂(DDP)、喜树碱类药物伊立替康(Irinatecan，CPT-11)、长春花碱类药物失碳长春花碱(inorebine，NVB诺维本)、脱氧胞昔类药物吉西他滨(Gemcitabine，Gemzar，健择)、足叶乙甙(Etoposide)、紫杉醇(Paclitaxel)等联合使用，制备得到具有肿瘤生长抑制活性的细胞毒性组合物，可用于治疗肿瘤疾病。该类药物组合物可以采用注射剂、片剂、胶囊剂、气雾剂、栓剂、膜剂、滴丸剂、外用搽剂、软膏剂等剂型药物，还可以采用现代制药界所公知的控释或缓释剂型或纳米制剂。这些药物组合物可以用于治疗肿瘤疾病、延缓肿瘤恶化、延长肿瘤病人生存时间和/或质量等用途。

具体实施方案

为了更好地理解本发明的实质，下面通过实施例进一步说明本发明。实施例给出了代表性的部分精制物的制备方法和生理活性数据，包括用美洲大蠊醇提物经大孔吸附树脂富集到的提取物对人口腔上皮癌(KB)细胞，人低分化胃腺癌肿瘤(BGC-823)细胞，人慢性髓原细胞白血病癌(K562)细胞和人原髓细胞白血病(HL-60)细胞肿瘤细胞株生长的抑制作用的药理实验结果，说明其在抗肿瘤药物研究领域中的用途。必须说明，本发明的实施例是用于说明本发明而不是对本发明的限制，根据本发明的实质对本发明进行的简单改进都属于本发明要求保护的范围。

实施例1：美洲大蠊醇提物经大孔吸附树脂AB-8精制之提取部位的制备

1.1美洲大蠊醇提物的制备：美洲大蠊药材3公斤，加55％乙醇10000毫升，室温浸泡提取，提取3次，每次24小时。合并提取液，减压浓缩至干，真空干燥，即得美洲大蠊醇提物。

1.2大孔吸附树脂AB-8分段不同提取物的制备：美洲大蠊醇提物20克，用30克大孔吸附树脂AB-8吸附拌样，上柱，先用水洗脱至无色。续用60％乙醇-水溶液洗脱至无色，取洗脱液10毫升减压浓缩至干，真空干燥，即得提取物(I)[美洲大蠊醇提物AB-8柱60％醇洗液]。

实施例2：美洲大蠊醇提物经大孔吸附树脂D-101精制之提取部位的制备

2.1美洲大蠊醇提物的制备：同实施例1.1。

2.2大孔吸附树脂D-101分段不同提取物的制备：美洲大蠊醇提物20克，用30克大孔吸附树脂D-101吸附拌样，上柱，先用水洗脱至无色。续用60％乙醇-水溶液洗脱至无色，取洗脱液10毫升减压浓缩至干，真空干燥，即得提取物(II)[美洲大蠊醇提物D-101柱60％醇洗液]。

实施例3：美洲大蠊醇提物经大孔吸附树脂DA-201精制之提取部位的制备

3.1美洲大蠊醇提物的制备：同实施例1.1。

3.2大孔吸附树脂DA-201分段不同提取物的制备：美洲大蠊醇提物20克，用30克大孔吸附树脂DA-201吸附拌样，上柱，先用水洗脱至无色。续用60％乙醇-水溶液洗脱至无色，取洗脱液10毫升减压浓缩至干，真空干燥，即得提取物(III)[美洲大蠊醇提物DA-201柱60％醇洗液]。

实施例4：用大孔吸附树脂D-101富集的美洲大蠊有效部位对人口腔上皮癌(KB)细胞的细胞毒试验

4.1测试样品：测试样品为美洲大蠊醇提物，以及醇提物经大孔吸附树脂D-101富集的美洲大蠊提取部位，即根据实施例2制备得到的提取物(II)，以顺铂和阿霉素为阳性对照。

4.2提取物(II)细胞毒性试验：KB细胞用RPMI 1640培养基培养，培养基中含10％的胎牛血清，100U/毫升青霉素和100U/毫升的链霉素。细胞以每孔5×10³的浓度加入到96孔板中，在37℃含5％二氧化碳潮湿空气的培养箱中培养24小时。细胞存活率的测定用改良MTT法。细胞经过24小时的孵育后，分别将新配的美洲大蠊提取物(II)的二甲亚砜溶液以浓度梯度加入到各孔中，使孔中提取物(II)最终浓度分别为200，66.7，22.2和7.4微克/毫升。72小时后，加入10微升MTT(5毫克/毫升)的磷酸盐缓冲液，再继续在37℃培养4小时后，离心5分钟除去未转化的MTT，每孔中加入200微升二甲亚砜，以溶解还原的MTT晶体甲臜(formazan)，所形成的formazan用酶标仪在570nm波长下比色，细胞存活率由样品相对于对照品的比值计算。其中提取物(II)对KB细胞半抑制浓度(IC₅₀)由剂量效应曲线得到。

4.3结果：如表1所示，美洲大蠊醇提物经大孔吸附树脂D-101富集的提取部位，即提取物(II)对口腔上皮癌细胞具有较强细胞毒活性，且其抑制口腔上皮癌细胞增值活性大大超过美洲大蠊醇提物。

4.4实验结论：KB细胞是测试化合物对肿瘤细胞的细胞毒性的有效工具和评价指标。本实验表明美洲大蠊醇提物经大孔吸附树脂D-101富集的提取部位对KB细胞具有较强的细胞毒性，有可能发展成为新的具有抗肿瘤作用的药物。

表1对口腔上皮癌细胞(KB)的细胞毒试验

测试样品IC₅₀(微克/毫升)美洲大蠊醇提物提取物(II)[经大孔吸附树脂D-101精制物]阳性对照顺铂(DDP)阳性对照阿霉素(ADR)    105.4    3.12    0.5    0.17

实施例5：美洲大蠊醇提物经大孔吸附树脂D-101富集的提取物[提取物(II)]对鼻咽癌细胞(CNE)的细胞毒活性

5.1CNE细胞用RPMI 1640培养基培养，培养基中含10％的胎牛血清，100U/毫升青霉素和100U/毫升的链霉素。以每孔5×10³细胞的浓度加入到96孔板中，在37℃含5％CO₂潮湿空气的培养箱中培养24小时。

5.2细胞存活率的测定用改良MTT法，具体方法如实施例4。

5.3结果表明(表2)，美洲大蠊醇提物经大孔吸附树脂D-101富集的提取物(II)对鼻咽癌细胞(CNE)具有较强细胞毒活性，且其抑制鼻咽癌细胞增值活性大大超过美洲大蠊醇提物。

5.4实验结论：鼻咽癌CNE细胞是测试化合物对肿瘤细胞的细胞毒性的有效工具和评价指标。本实验表明美洲大蠊醇提物经大孔吸附树脂D-101富集的提取物对鼻咽癌CNE细胞具有较强的细胞毒性，有可能发展成为新的具有治疗鼻咽癌作用的药物。

表2提取物(II)对鼻咽癌细胞(CNE)的细胞毒试验

测试样品  IC₅₀(微克/毫升)美洲大蠊醇提物提取物(II)[经大孔吸附树脂D-101精制物]阳性对照顺铂阳性对照阿霉素    151.8    3.51    3.45    0.18

实施例6：美洲大蠊醇提物经大孔吸附树脂D-101富集的提取物[提取物(II)]对低分化胃腺癌肿瘤细胞(BGC-823)的细胞毒活性

6.1 BGC-823细胞用RPMI 1640培养基培养，培养基中含10％的胎牛血清，100U/毫升青霉素和100U/毫升的链霉素。细胞以每孔5×10³的浓度加入到96孔板中，在37℃含5％CO₂潮湿空气的培养箱中培养24小时。

6.2细胞存活率的测定用改良MTT法。细胞经过24小时的孵育后，分别将新配的提取物(II)的二甲亚砜溶液以浓度梯度加入到各孔中，使孔中提取物(II)最终浓度分别为200，66.7，22.2和7.4微克/毫升。72小时后，加入10微升MTT(5毫克/毫升)的磷酸盐缓冲液，再继续在37℃培养4小时后，离心5分钟除去未转化的MTT，每孔中加入200微升二甲亚砜，以溶解还原的MTT晶体甲臜(formazan)，所形成的formazan用酶标仪在570nm波长下比色，细胞存活率由样品相对于对照品的比值计算。其中提取物(II)对BGC-823细胞半抑制浓度IC₅₀由剂量效应曲线得到。

6.3结果表明(表3)，美洲大蠊醇提物经大孔吸附树脂D-101富集的提取物(II)对胃腺癌肿瘤细胞具有较强细胞毒活性，且其抑制鼻咽癌细胞增值活性大大超过美洲大蠊醇提物。

6.4实验结论：胃腺癌肿瘤细胞(BGC-823)是测试化合物对肿瘤细胞的细胞毒性的有效工具和评价指标。本实验表明美洲大蠊醇提物经大孔吸附树脂D-101富集的提取物对胃腺癌肿瘤细胞具有较强的细胞毒性，有可能发展成为新的具有治疗胃腺癌作用的药物。

表3不同提取物和阳性对照对胃腺癌肿瘤细胞(BGC-823)的细胞毒性

测试样品IC₅₀(微克/毫升)美洲大蠊醇提物提取物(II)[经大孔吸附树脂D-101精制物]阳性对照顺铂阳性对照阿霉素    166.2    4.51    2.85    0.28

实施例7：美洲大蠊醇提物经大孔吸附树脂D-101富集的提取物[提取物(II)]对人慢性髓原细胞白血病细胞(K562)的细胞毒活性

7.1 K562细胞用RPMI 1640培养基培养，培养基中含10％小牛血清，100U/毫升青霉素和100U/毫升链霉素。细胞以每孔1×10⁴个密度接种到96孔板中，在37℃，5％二氧化碳潮湿空气的培养箱中培养24小时。

7.2细胞存活率的测定用改良MTT法，具体方法如实施例4。结果表明(表4)，美洲大蠊醇提物经大孔吸附树脂D-101富集的提取物(II)对人慢性髓原细胞白血病细胞具有较强细胞毒活性，且其抑制K562细胞增值活性大大超过美洲大蠊醇提物。

7.3实验结论：人慢性髓原细胞白血病细胞(K562)是测试化合物对肿瘤细胞的细胞毒性的有效工具和评价指标。本实验表明美洲大蠊醇提物经大孔吸附树脂D-101富集的提取物对人慢性髓原细胞白血病细胞(K562)具有较强的细胞毒性，有可能发展成为新的具有治疗慢性髓原细胞白血病作用的药物。

表4提取物(II)对人慢性髓原细胞白血病细胞(K562)的细胞毒试验

测试样品IC₅₀(微克/毫升)美洲大蠊醇提物提取物(II)[经大孔吸附树脂D-101精制物]阳性对照顺铂阳性对照阿霉素    139.6    3.83    4.60    0.27

实施例8：提取物II对人原髓细胞白血病细胞HL-60的细胞毒活性

8.1 HL-60细胞用RPMI 1640培养基培养，培养基中含10％小牛血清，100U/毫升青霉素和100U/毫升链霉素。细胞以每孔1×10⁴个密度接种到96孔板中，在37℃，5％CO₂潮湿空气的培养箱中培养24小时。

8.2细胞存活率的测定用改良MTT法，具体方法如实施例4。结果表明(表5)，美洲大蠊醇提物经大孔吸附树脂D-101富集的提取物(II)对人原髓细胞白血病细胞(HL-60)具有较强细胞毒活性，且其抑制HL-60细胞增值活性大大超过美洲大蠊醇提物。

8.3实验结论：人原髓细胞白血病细胞是测试化合物对肿瘤细胞的细胞毒性的有效工具和评价指标。本实验表明美洲大蠊醇提物经大孔吸附树脂D-101富集的提取物对HL-60细胞具有较强的细胞毒性，有可能发展成为新的具有治疗人原髓细胞白血病作用的药物。

表5对人原髓细胞白血病细胞(HL-60)的细胞毒试验

测试样品  IC₅₀(微克/毫升)美洲大蠊醇提物提取物(II)[经大孔吸附树脂D-101精制物]阳性对照顺铂阳性对照阿霉素    169.5     6.7    1.43    0.26