乳状液膜分离提取黄连中生物碱的方法

摘要

本发明公开了一种乳状液膜分离提取黄连中生物碱的方法。其乳状液的制备是以食用油作膜溶剂，以Span 80或Span 80与助表面活性剂的混合物作为表面活性剂，磷酸脂作载体，再将pH＝4的黄连盐酸提取液或硫酸提取液与乳状液按照乳水体积比为(50∶5～50∶20)加入提取器中，在200转/分～300转/分的低速搅拌提取5－15min；经水浴加热破乳后分出油层，所得水相即为黄连中总生物碱的溶液。本发明使用食用油作为膜溶剂，解决了乳状液膜法目前所使用的有机溶剂有毒，不适用于中草药提取后人、兽使用的难题；提取过程快速、高效、操作简单，可应用于黄连药品、兽药等产品的生产和开发及检验。

说明书

技术领域

本发明涉及一种可应用于药材生产及药物分析检验的乳状液膜分离提取黄连中生物碱的方法。

背景技术

黄连属于毛莫科植物，是一种用途很广的中药，药用取其干燥根茎，主要药用成分是小檗碱，药根碱、巴马亭等生物碱。它们具有相似结构，常统称为黄连生物碱。常用的提取方法是回流提取法，如乙醇水回流提取或水回流提取。这种工艺所得成品含杂质较多，需通过重结晶来提高成品的纯度，然而重结晶又不可避免地导致黄连总生物碱的损失。02103880.5公开了“一种黄连总生物碱的提取工艺”，是先将黄连破碎，然后水浸泡并同时进行超声波处理，水浸泡时间为30～240分钟，水浸泡后的黄连在温浸条件下进行总生物碱提取，提取温度为70～98℃，提取时溶剂水的量为5～16倍生药材重量，提取时间为30～180分钟，提取次数为1～4次，再将提取液进行减压浓缩，浓缩时的真空度为0.04～0.08MPa，浓缩提取液至2～10倍生药材重量的水的体积，然后用浓盐酸调节浓缩提取液的PH值至1～5，再加入4％～16％氯化钠趁热溶解，浓缩提取液静置4～24小时，通过抽滤或离心甩干收集提取液中的沉淀物，沉淀物在50～80℃的温度下进行烘干，干燥后的沉淀物被粉碎即可得到黄连总生物碱盐酸盐成品。这种方法操作繁琐、费时、原料消耗多。乳状液膜法是一种简单、快速、高效、选择性高、经济节能的新型分离提取技术，已应用于环境、化工生产、湿法冶金等领域，但还未应用于中草药中总生物碱的提取，且现有乳状液膜的膜溶剂通常是甲苯、环己烷、二氯甲烷和煤油；这些溶剂都具有一定的毒性，不适用于中草药提取后人、兽的使用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种液膜分离提取黄连中生物碱的方法。以实现提取过程快速、高效、操作简单、且所选择的溶剂无毒，能适用制药后人、兽使用。

本发明包括以下步骤：

(1)乳状液的制备：按膜溶剂食用油：表面活性剂Span80或Span80与助表面活性剂的混合物∶磷酸脂载体的体积比＝(31～45)∶(3～9)∶(2～10)进行混合，然后在混合物中按1∶1～4∶1体积比加入浓度为0.1～0.7mol/L的HCl溶液或稀硫酸溶液，在8000转/分～10000转/分的转速下搅拌1-3min，即制得稳定的W/O型乳状液；

(2)生物碱的分离提取：将pH＝4的黄连盐酸提取液与乳状液按照一定的体积比(50∶5～50∶20)加入提取器中，在200转/分～300转/分的低速搅拌下提取5-15min；

(3)破乳：将乳液转入分液漏斗中静置分层，分出乳液，水浴加热破乳后分出油层，所得水相即为黄连中总生物碱溶液。

所述pH＝4的黄连盐酸提取液是在1份黄连粉末中，加入30-60份0.1mol/L的HCl，超声提取二次，每次50-70min，离心分离，将滤液用0.1mol/L的HCl稀释8-10倍，再用饱和氢氧化钠调节pH＝4。

所述助表面活性剂是C原子数为8-16的醇类，表面活性剂Span80与助表面活性剂的体积比为1∶6～7∶11。

所述助表面活性剂是正癸醇。

所述磷酸脂载体是二(2-乙基己基)磷酸脂。

本发明使用食用油作为膜溶剂，解决了乳状液膜法目前所使用的有机溶剂有毒，不适用于中草药提取后人、兽使用的难题；提取过程快速、高效、操作简单，可应用于黄连药品、兽药等产品的生产和开发及检验。

具体实施方式

以下通过具体实施例对本发明作进一步说明：

实施例1：

(1)黄连提取液的制备：称取1.0克黄连粉末，加入50mL 0.1mol/L的HCl，超声提取60min，在转速为4000r/min的离心机上离心10min，取出滤液，往滤渣中再加入50mL的0.1mol/L的HCl，超声提取60min，再离心10min，合并滤液。用0.1mol/L的HCl稀释滤液至900mL，过滤，用饱和氢氧化钠调剂pH＝4，备用。

(2)乳状液的制备：取膜溶剂食用油37mL，表面活性剂总量为7mL，其中Span80为1mL，正癸醇为6mL，磷酸脂载体6mL，将三者进行混合，每取此混合物20mL就按2∶1的体积比加入10mL 0.1mol/L的HCl溶液，在9000转/分的转速下搅拌2min，即制得稳定的W/O型乳状液。

(3)生物碱的分离提取：将pH＝4的黄连盐酸提取液与乳状液按照乳水体积比50∶10加入提取器中，在250转/分的低速搅拌提取10min；

(4)破乳：转入分液漏斗中静置分层，分出乳液，水浴加热破乳后分出油层，所得水相即为黄连中总生物碱的溶液。  

经高效液相色谱分析，药根碱、巴马亭和小檗碱的萃取率分别达到了82.97％、85.92％和88.86％；其富集因子分别达到了7.21、6.93和6.97，说明乳状液膜能有效地分离富集黄连中的生物碱。

高效液相色谱的条件如下：

色谱柱：Spherigel C18，SZ：200×4.6mm，5μm

流动相：A(50mmol/LKH₂PO₄+14mmol/L三乙胺+3.6mmol/L

C₁₂H₂₅NaO₃S)∶B(乙腈)＝65∶35(V/V)

流速：1.0mL/min

检测波长：346nm

进样量：10μL

柱温：30℃

实施例2：

(1)黄连提取液的制备：称取2公斤黄连提取物粉末，加入120L 0.1mol/L的HCl，超声提取70min，在转速为4000r/min的离心机上离心10min，取出滤液，往滤渣中再加入120L的0.1mol/L的HCl，超声提取70min，再离心10min，合并滤液。用0.1mol/L的HCl稀释滤液至2400L，过滤，用饱和氢氧化钠调剂pH＝4，备用；

(2)乳状液的制备：取膜溶剂食用油124L，表面活性剂总量为36L，其中Span80为14L，正癸醇为22L，磷酸脂载体40L，将三者进行混合，然后将此混合物与0.7mol/L的HCl溶液按照4∶1的体积比加到制乳器中，在10000转/分的转速下搅拌15min，即制得稳定的W/O型乳状液。

(3)生物碱的分离提取：将pH＝4的黄连盐酸提取液与乳状液按照乳水体积比为50∶5加入提取器中，在300转/分的低速搅拌提取15min；

(4)破乳：转入分液漏斗中静置分层，分出乳液，水浴加热破乳后分出油层，所得水相即为黄连中总生物碱的溶液，用高效液相色谱分析其中药根碱、巴马亭和小檗碱的分离、富集程度。

经高效液相色谱分析，药根碱、巴马亭和小檗碱的萃取率分别达到了72.85％、78.22％和82.08％；其富集因子分别达到了6.65、6.51和6.82，说明乳状液膜能有效地分离富集黄连中的生物碱。

高效液相色谱的条件如下：

色谱柱：Spherigel C18，SZ：200×4.6mm，5μm

流动相：A(50mmol/L KH₂PO₄+14mmol/L三乙胺+3.6mmol/L

C₁₂H₂₅NaO₃S)∶B(乙腈)＝65∶35(V/V)

流速：1.0mL/min

检测波长：346nm

进样量：10μL

柱温：30℃

实施例3：

(1)黄连提取液的制备：称取1.0克黄连粉末，加入30mL 0.1mol/L的HCl，超声提取30min，在转速为4000r/min的离心机上离心10min，取出滤液，往滤渣中再加入30mL的0.1mol/L的HCl，超声提取30min，再离心10min，合并滤液。用0.1mol/L的HCl稀释滤液至500mL，过滤，用饱和氢氧化钠调剂pH＝4，备用。

(2)乳状液的制备：取膜溶剂食用油42mL，表面活性剂总量为3.5mL，其中Span80为0.5mL，正癸醇为3mL，磷酸脂载体4.5mL，将三者进行混合，每取此混合物20mL就按1∶1的体积比加入20mL 0.4mol/L的HCl溶液，在8000转/分的转速下搅拌1min，即制得稳定的W/O型乳状液。

(3)生物碱的分离提取：将pH＝4的黄连盐酸提取液与乳状液按照乳水体积比为50∶20加入提取器中，在200转/分的低速搅拌提取5min；

(4)破乳：转入分液漏斗中静置分层，分出乳液，水浴加热破乳后分出油层，所得水相即为黄连中总生物碱的溶液，用高效液相色谱分析其中药根碱、巴马亭和小檗碱的分离、富集程度。

经高效液相色谱分析，药根碱、巴马亭和小檗碱的萃取率分别达到了75.25％、79.24％和82.44％；其富集因子分别达到了6.45、6.48和6.71，说明乳状液膜能有效地分离富集黄连中的生物碱。