注射用骨肽冻干剂及其制备方法

摘要

本发明涉及一种药物制剂及其制备方法，具体地说是一种注射用骨肽冻干剂及其制备方法。其特点是：(1)、取健康新鲜冷冻的哺乳动物的四肢骨称重，用纯化水清洗三遍后，置液压机上压碎。将压碎的四肢骨，置夹层锅中，按原料重量1∶1～5加入5％NaOH溶液，加热30～55℃水解12～48小时后取上清液；(2)、上清液置夹层锅中用HCl调pH值3.0～6.0，加热至70～100℃15～40min，冷却降温至30～55℃，静置12～48小时后用滤布过滤。本发明为无菌冻干粉针剂，避免了骨肽注射液在长时间保存过程中小分子多肽易发生聚合的现象，使产品质量稳定，疗效可靠。见表1。数据表明，本品三批样品按市售包装，置于40℃±2℃、相对湿度为75％±5％的恒温箱中，放置24个月，各样品的高分子物质含量与0月相比无明显变化。

说明书

技术领域：本发明涉及一种药物制剂及其制备方法，具体地说是一种注射用骨肽冻干剂及其制备方法。

背景技术：骨肽溶液的主要成分为小分子多肽类物质，是由胶原蛋白分解而来的小分子肽类混合物，具有调节骨代谢，刺激成骨细胞增殖，促进新骨形成，以及调节钙、磷代谢，增加骨钙沉积，防止骨质疏松作用，临床上主要用于促进骨折愈合。然而小分子肽类物质在长时间保存的过程中受环境因素的影响，易发生聚合反应，产生高分子物质，而高分子物质是临床上产生过敏反应的主要因素，因此开发一种用药安全、质量稳定、疗效确切的骨肽制剂就显得尤为重要了。

同时，骨肽溶液的现有提取工艺比较简单，对热原的去除还不够彻底，从而增加过敏反应的发生率。

发明内容：本发明的目的在于提供一种用药安全、质量稳定、疗效确切的注射用骨肽冻干剂及其制备方法。本发明的目的是这样实现的：是以哺乳动物的骨经提取的骨提取物为主药，赋形剂可以为甘露醇、山梨醇、右旋糖苷。本发明以瓶为计量单位，每瓶含多肽为10～50mg，含赋形剂为每瓶装量的1～10％(g/ml)，其中本品每瓶的装量为1～5ml，本品为白色或类白色块状物；

a、骨肽溶液的制备方法

(1)、取健康新鲜冷冻的哺乳动物的四肢骨称重，用纯化水清洗三遍后，置液压机上压碎。将压碎的四肢骨，置夹层锅中，按原料重量1∶1～5加入5％NaOH溶液，加热30～55℃水解12～48小时后取上清液；

(2)、上清液置夹层锅中用HCl调PH值3.0～6.0，加热至70～100℃15～40min，冷却降温至30～55℃，静置12～48小时后用滤布过滤；

(3)、取过滤液置夹层锅中用NaOH调PH值8.0～10.5，加热至70～100℃15～40min，冷却降温至30～55℃，静置12～48小时后用滤布过滤，得粗滤液，称取重量，计算收率；

(4)、粗滤液置夹层锅中用HCl调PH值4.0～6.0，按药液量加入0.01～1％药用活性炭加热至80～100℃搅拌吸附15～30min后，冷却降温至30～50℃，过滤除炭，再用0.22m微孔滤膜过滤得精滤液，称取重量；

(5)、精滤液用NaOH调PH值6.0～8.0，药液温度15～25℃，用3000～10000道尔顿的超滤器超滤，压力0.05～0.1Mpa，收集超滤液。

b、注射用骨肽的制备方法

(1)、量取处方量的骨肽溶液，加入赋形剂及适量注射用水，搅拌使溶解，加入0.01～1％的针用活性炭，80℃搅拌20～30分钟，过滤至澄明；

(2)、调pH值6.0～8.0，补加注射用水至全量，微孔滤膜过滤，半检后，灌装。冷冻干燥，条件为：先降温至-50～-20℃，维持2～4小时，抽真空，并按1～2℃/小时升温，当温度达到-5℃后，按5～10℃/小时升温至35～50℃，维持2～4小时，压盖，质检，装箱。哺乳动物的骨为牛骨、猪骨、羊骨、马骨。本发明的优点是：(1)本品为无菌冻干粉针剂，避免了骨肽注射液在长时间保存过程中小分子多肽易发生聚合的现象，使产品质量稳定，疗效可靠。见表1。数据表明，本品三批样品按市售包装，置于40℃±2℃、相对湿度为75％±5％的恒温箱中，放置24个月，各样品的高分子物质含量与0月相比无明显变化。

(2)本发明与申请号为200410013508.1的专利相比，在制备骨肽溶液的工艺中增加了除热原的步骤，降低了临床过程中过敏反应发生的几率。

具体实施方式：是以哺乳动物的骨经提取的骨提取物为主药，赋形剂可以为甘露醇、山梨醇、右旋糖苷。本发明以瓶为计量单位，每瓶含多肽为10～50mg，含赋形剂为每瓶装量的1～10％(g/ml)，其中本品每瓶的装量为1～5ml，本品为白色或类白色块状物；

a、骨肽溶液的制备方法

(1)、取健康新鲜冷冻的哺乳动物的四肢骨称重，用纯化水清洗三遍后，置液压机上压碎。将压碎的四肢骨，置夹层锅中，按原料重量1∶1～5加入5％NaOH溶液，加热30～55℃水解12～48小时后取上清液；

(2)、上清液置夹层锅中用HCl调PH值3.0～6.0，加热至70～100℃15～40min，冷却降温至30～55℃，静置12～48小时后用滤布过滤；

(3)、取过滤液置夹层锅中用NaOH调PH值8.0～10.5，加热至70～100℃15～40min，冷却降温至30～55℃，静置12～48小时后用滤布过滤，得粗滤液，称取重量，计算收率；

(4)、粗滤液置夹层锅中用HCl调PH值4.0～6.0，按药液量加入0.01～1％药用活性炭加热至80～100℃搅拌吸附15～30min后，冷却降温至30～50℃，过滤除炭，再用0.22m微孔滤膜过滤得精滤液，称取重量；

(5)、精滤液用NaOH调PH值6.0～8.0，药液温度15～25℃，用3000～10000道尔顿的超滤器超滤，压力0.05～0.1Mpa，收集超滤液。

b、注射用骨肽的制备方法

(1)、量取处方量的骨肽溶液，加入赋形剂及适量注射用水，搅拌使溶解，加入0.01～1％的针用活性炭，80℃搅拌20～30分钟，过滤至澄明；

(2)、调pH值6.0～8.0，补加注射用水至全量，微孔滤膜过滤，半检后，灌装。冷冻干燥，条件为：先降温至-50～-20℃，维持2～4小时，抽真空，并按1～2℃/小时升温，当温度达到-5℃后，按5～10℃/小时升温至35～50℃，维持2～4小时，压盖，质检，装箱。

哺乳动物的骨为牛骨、猪骨、羊骨、马骨。

实施例1

1、骨肽溶液生产工艺

取健康新鲜冷冻的哺乳动物的四肢骨称重，用纯化水清洗三遍后，置液压机上压碎。将压碎的四肢骨，置夹层锅中，按原料重量1∶1加入5％NaOH溶液，加热30℃水解12小时后取上清液。上清液置夹层锅中用6mol/LHCl调PH值3.0，加热至70℃40min，冷却降温至30℃，静置12小时后用滤布过滤。取过滤液置夹层锅中用5mol/L NaOH调PH值8.0，加热至70℃40min，冷却降温至30℃，静置12小时后用滤布过滤，得粗滤液，称取重量，计算收率。粗滤液置夹层锅中用6mol/L HCl调PH值4.0，按药液量加入0.01％药用活性炭加热至80℃搅拌吸附30min后，冷却降温至30℃，0.45m微孔滤膜过滤除炭，再用0.22m微孔滤膜过滤得精滤液，称取重量。精滤液用5mol/L NaOH调PH值6.0，药液温度15℃，用10000道尔顿的超滤器超滤，压力0.05～0.1Mpa，收集超滤液。

2、注射用骨肽生产工艺

(1)量取骨肽溶液(多肽含量为80mg/ml)125.7ml，加入甘露醇10g及适量注射用水，搅拌使溶解，按溶液量的0.01％加入针用活性炭，80℃搅拌30min，过滤至溶液澄明。

(2)用1mol/L NaOH或1mol/L HCl调pH至6.0，补注射用水至1000ml后，过0.22μm微孔滤膜，测定含量后，每瓶1ml灌装于管制瓶中。

(3)灌装好的样品置入冷冻干燥机中，先降温至-50℃，保温2小时，然后抽真空，并按约2℃/小时升温，当温度达-5℃后，按5℃/小时升温至35℃，保温4小时，压胶塞，扎铝盖，质检，装箱。

实施例2

2、注射用骨肽生产工艺：

(1)量取骨肽溶液(多肽含量为80mg/ml)625.7ml，加入甘露醇500g及适量注射用水，搅拌使溶解，按溶液量的1％加入针用活性炭，80℃搅拌20min，过滤至溶液澄明。(2)用1mol/L NaOH或1mol/L HCl调pH至8.0，补注射用水至5000ml后，过0.22μm微孔滤膜，测定含量后，每瓶5ml灌装于管制瓶中。(3)灌装好的样品置入冷冻干燥机中，先降温至-50℃，保温2小时，然后抽真空，并按约2℃/小时升温，当温度达-5℃后，按5℃/小时升温至35℃，保温4小时，压胶塞，扎铝盖，质检，装箱。

实施例3

1、骨肽溶液生产工艺

同实施例1。

2、注射用骨肽生产工艺

(1)量取骨肽溶液(多肽含量为80mg/ml)124.9ml，加入山梨醇10g及适量注射用水，搅拌使溶解，按溶液量的0.01％加入针用活性炭，80℃搅拌30min，过滤至溶液澄明。

(2)用1mol/L NaOH或1mol/L HCl调pH至8.0，补注射用水至1000ml后，过0.22μm微孔滤膜，测定含量后，每瓶1ml灌装于管制瓶中。

(3)灌装好的样品置入冷冻干燥机中，先降温至-20℃，保温4小时，然后抽真空，并按约2℃/小时升温，当温度达-5℃后，按10℃/小时升温至50℃，保温2小时，压胶塞，扎铝盖，质检，装箱。

实施例4

上述的注射用骨肽生产工艺：(1)量取骨肽溶液(多肽含量为80mg/ml)627.8ml，加入山梨醇500g及适量注射用水，搅拌使溶解，按溶液量的1％加入针用活性炭，80℃搅拌30min，过滤至溶液澄明。(2)用1mol/L NaOH或1mol/L HCl调pH至6.0，补注射用水至5000ml后，过0.22μm微孔滤膜，测定含量后，每瓶5ml灌装于管制瓶中。(3)灌装好的样品置入冷冻干燥机中，先降温至-50℃，保温2小时，然后抽真空，并按约2℃/小时升温，当温度达-5℃后，按5℃/小时升温至35℃，保温4小时，压胶塞，扎铝盖，质检，装箱。

实施例5

1、骨肽溶液生产工艺

同实施例1。

2、注射用骨肽生产工艺

(1)量取骨肽溶液(多肽含量为80mg/ml)125.7ml，加入右旋糖苷(40)10g及适量注射用水，搅拌使溶解，按溶液量的0.01％加入针用活性炭，80℃搅拌20min，过滤至溶液澄明。

(2)用1mol/L NaOH或1mol/L HCl调pH至6.0，补注射用水至1000ml后，过0.22μm微孔滤膜，测定含量后，每瓶1ml灌装于管制瓶中。

(3)灌装好的样品置入冷冻干燥机中，先降温至-45℃，保温2小时，然后抽真空，并按约2℃/小时升温，当温度达-5℃后，按5℃/小时升温至45℃，保温2小时，压胶塞，扎铝盖，质检，装箱。

实施例6

上述的注射用骨肽生产工艺：(1)量取骨肽溶液(多肽含量为80mg/ml)624.3ml，加入右旋糖苷(40)500g及适量注射用水，搅拌使溶解，按溶液量的1％加入针用活性炭，80℃搅拌30min，过滤至溶液澄明。

(2)用1mol/L NaOH或1mol/L HCl调pH至8.0，补注射用水至5000ml后，过0.22μm微孔滤膜，测定含量后，每瓶5ml灌装于管制瓶中。

(3)灌装好的样品置入冷冻干燥机中，先降温至-45℃，保温2小时，然后抽真空，并按约2℃/小时升温，当温度达-5℃后，按5℃/小时升温至45℃，保温2小时，压胶塞，扎铝盖，质检，装箱。

实施例7

取健康新鲜冷冻的哺乳动物的四肢骨称重，用纯化水清洗三遍后，置液压机上压碎。将压碎的四肢骨，置夹层锅中，按原料重量1∶3加入5％NaOH溶液，加热45℃水解24小时后取上清液。上清液置夹层锅中用6mol/L HCl调PH值4.5，加热至80℃30min，冷却降温至45℃，静置24小时后用滤布过滤。取过滤液置夹层锅中用5mol/L NaOH调PH值9.6，加热至85℃30min，冷却降温至45℃，静置24小时后用滤布过滤，得粗滤液，称取重量，计算收率。粗滤液置夹层锅中用6mol/L HCl调PH值4.5，按药液量加入0.5％药用活性炭加热至85℃搅拌吸附25min后，冷却降温至45℃，过滤除炭，再用0.22m微孔滤膜过滤得精滤液，称取重量。精滤液用6mol/L NaOH调PH值6.3，药液温度18℃，用6000道尔顿的超滤器超滤，压力0.05～0.1Mpa，收集超滤液。

实施例8

取健康新鲜冷冻的哺乳动物的四肢骨称重，用纯化水清洗三遍后，置液压机上压碎。将压碎的四肢骨，置夹层锅中，按原料重量1∶5加入5％NaOH溶液，加热55℃水解48小时后取上清液。上清液置夹层锅中用6mol/L HCl调PH值6.0，加热至100℃15min，冷却降温至55℃，静置48小时后用滤布过滤。取过滤液置夹层锅中用5mol/L NaOH调PH值10.5，加热至100℃15min，冷却降温至55℃，静置48小时后用滤布过滤，得粗滤液，称取重量，计算收率。粗滤液置夹层锅中用6mol/L HCl调PH值6.0，按药液量加入1％药用活性炭加热至100℃搅拌吸附15min后，冷却降温至50℃，过滤除炭，再用0.22m微孔滤膜过滤得精滤液，称取重量。精滤液用5mol/L NaOH调PH值8.0，药液温度25℃，用3000道尔顿的超滤器超滤，压力0.05～0.1Mpa，收集超滤液。

实施例9

上述的哺乳动物的骨包括猪骨、牛骨、马骨、羊骨。

实施例10

取健康新鲜冷冻的猪四肢骨120kg，用纯化水清洗三遍后，置液压机上压碎。将压碎的四肢骨，置夹层锅中，加入250L 5％NaOH溶液，加热35℃水解12小时后取上清液。上清液置夹层锅中用6mol/L HCl调PH值4.3，加热至75℃35min，冷却降温至30℃，静置36小时后用滤布过滤。取过滤液置夹层锅中用5mol/L NaOH调PH值8.9，加热至80℃20min，冷却降温至40℃，静置24小时后用滤布过滤，得粗滤液，称取重量，计算收率。粗滤液置夹层锅中用6mol/L HCl调PH值4.6，按药液量加入0.2％药用活性炭加热至85℃搅拌吸附25min后，冷却降温至40℃，过滤除炭，再用0.22m微孔滤膜过滤得精滤液，称取重量。精滤液用5mol/LNaOH调PH值6.7，药液温度23℃，用5000道尔顿的超滤器超滤，压力0.05～0.1Mpa，收集超滤液。

实施例11

取健康新鲜冷冻的牛四肢骨70kg，用纯化水清洗三遍后，置液压机上压碎。将压碎的四肢骨，置夹层锅中，加入213L5％NaOH溶液，加热42℃水解36小时后取上清液。上清液置夹层锅中用6mol/L HCl调PH值5.5，加热至90℃25min，冷却降温至40℃，静置36小时后用滤布过滤。取过滤液置夹层锅中用5mol/L NaOH调PH值10.0，加热至90℃25min，冷却降温至40℃，静置36小时后用滤布过滤，得粗滤液，称取重量，计算收率。粗滤液置夹层锅中用6mol/L HCl调PH值5.8，按药液量加入0.7％药用活性炭加热至95℃搅拌吸附30min后，冷却降温至40℃，过滤除炭，再用0.22m微孔滤膜过滤得精滤液，称取重量。精滤液用5mol/LNaOH调PH值6.5，药液温度20℃，用10000道尔顿的超滤器超滤，压力0.05～0.1Mpa，收集超滤液。

实施例12

取健康新鲜冷冻的马四肢骨80kg，用纯化水清洗三遍后，置液压机上压碎。将压碎的四肢骨，置夹层锅中，加入400L5％NaOH溶液，加热55℃水解48小时后取上清液。上清液置夹层锅中用6mol/L HCl调PH值6.0，加热至100℃40min，冷却降温至55℃，静置48小时后用滤布过滤。取过滤液置夹层锅中用5mol/L NaOH调PH值10.5，加热至100℃40min，冷却降温至55℃，静置48小时后用滤布过滤，得粗滤液，称取重量，计算收率。粗滤液置夹层锅中用6mol/L HCl调PH值6.0，按药液量加入1％药用活性炭加热至100℃搅拌吸附15min后，冷却降温至50℃，过滤除炭，再用0.22m微孔滤膜过滤得精滤液，称取重量。精滤液用5mol/LNaOH调PH值6.0，药液温度15℃，用6000道尔顿的超滤器超滤，压力0.05～0.1Mpa，收集超滤液。

实施例13

取健康新鲜冷冻的羊四肢骨45kg，用纯化水清洗三遍后，置液压机上压碎。将压碎的四肢骨，置夹层锅中，加入200L5％NaOH溶液，加热30℃水解12小时后取上清液。上清液置夹层锅中用HCl调PH值3.5，加热至75℃20min，冷却降温至35℃，静置24小时后用滤布过滤。取过滤液置夹层锅中用NaOH调PH值9.0，加热至75℃20min，冷却降温至35℃，静置24小时后用滤布过滤，得粗滤液，称取重量，计算收率。粗滤液置夹层锅中用HCl调PH值4.7，按药液量加入0.2％药用活性炭加热至85℃搅拌吸附20min后，冷却降温至35℃，过滤除炭，再用0.22m微孔滤膜过滤得精滤液，称取重量。精滤液用NaOH调PH值7.4，药液温度17℃，用10000道尔顿的超滤器超滤，压力0.05～0.1Mpa，收集超滤液。

表1

  批次           1           2           3  时间(月)  高分子含量(％)  0  3  6  9  2  18  24  0  0  0  0  0  0   0  0  3  6  9  12  18  24  0  0  0  0  0   0   0  0  3  6  9  12  18  24  0  0  0  0  0   0   0