促毛发生长物质及其制备方法和应用

摘要

本发明是关于一种促毛发生长物质和其制备方法，以及以该促毛发生长物质为有效成份的促毛发生长剂及其应用，该促毛发生长物质是啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiaeHansen)促毛1号 CCTCC M201024菌株以Gibco1640培养基培养发酵后经除菌过滤所得的产物，其制备方法包括培养发酵、过滤除菌，该促毛发生长物质具有促进毛发生长作用，可用于治疗秃发和增加羊毛、兔毛等动物毛的产量，且安全无毒。

说明书

                          技术领域

本发明是关于一种促毛发生长物质和其制备方法，以及以该促毛发生长物质为有效成份的促毛发生长剂及其应用。

                          背景技术

目前，秃发患者占成人比例约为10％，但尚无确切有效的药物和方法对其进行治疗，寻找确切有效的治疗秃发的方法和药物是人们长期的愿望，并在此领域付出了不懈的努力。另外，全世界对羊毛、兔毛等动物毛的需求量不断增加，以前应对需求扩大的主要措施是增加饲养产毛动物的数量，扩大饲养规模。然而，由于环境破坏日益严重，草场退化加剧等因素的限制，采用扩大产毛动物饲养来增加动物毛供应量的做法已不再可行，必须另辟他径。

                          发明内容

本发明的目的在于提供一种利用微生物生产的促毛发生长物质，使其具有促进毛发生长作用，可用于治疗秃发和增加羊毛、兔毛等动物毛的产量，且安全无毒。

使用的微生物：

用来生产本发明所述的促毛发生长物质是啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiaeHansen)促毛1号(以下简称促毛1号菌株)，经118次诱变而得，其具有产生本发明所述促毛发生长物质的能力，该菌种于2001年7月8日在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为CCTCC M201204。

促毛1号菌株具有下述性质

1.形态特征

该菌株在沙氏琼脂基上28℃培养，形成软而湿的菌落，乳白色，细胞形态呈园形，卵园形，椭园形，其大小为3～6×5～10微米，在麦芽汁液体培养基中有沉淀，子束孢子园形、平滑。

2.生化特性：

对葡萄糖、果糖、甘露醇、半乳糖、蔗糖、麦芽糖发酵。

对密二糖不发酵

不利用硝酸盐

培养及精制方法：

用上述生产菌，应用Gibco 1640培养基培养即可制得本发明所述的促毛发生长物质。具体操作是：将冻干保藏的上述菌种启封，复苏，用沙氏培养基于28℃培养48小时后进行菌种鉴定，优选促生长活力高的菌株用Gibco 1640培养基进行种子培养，摇床220转/分，28℃48～72小时，装于发酵罐，在Gibco培养基，28℃、300转/分、搅拌培养条件下培养24h，再用板框滤器过滤除去菌体即制得本发明所述的促毛发生长物质，将制得的促毛发生化物质置于低温条件下保存。

促毛发生长剂

以本发明所述的促毛发生长物质为有效成份，可配制成具有促毛发生长的功能的制剂，作为有效成份的本发明所述的促生长物质在制剂中的配比为0.1～1％，一般以水作为稀释剂。

本发明所述的促生长物质具有促进细胞、动物毛和人体头发生长的作用。

试验1：

材料：NIH3T3

24孔多孔培养板

方法：①将生长良好NIH3T3细胞稀释成1×10⁵/ml个细胞，每孔加100ul；

②每孔加0.5ml1640营养液(含10％灭活牛血清)；

③其中三孔加0.5％的本发明促生长剂100ul作为试验组；

④另三孔各加营养液100ul作为对照。

试验结果：试验组：细胞界限清楚，细胞贴壁生长密集，数量增多，细胞透明度增加，细胞内颗粒少，并可隐约见细胞核；对照组：细胞数量增多不明显，贴壁较差，细胞内颗粒较多，透明度较差。

试验2

材料：小鼠，昆明种，重25g

方法：取小鼠6个，3个为试验组，3个为对照组；

①先将小鼠背部毛用剪刀剪净；

②试验组涂以1∶1000的本发明促毛发生长制剂，均匀涂布，使全背

湿润，每天一次，共涂3次，对照组涂以盐水；

试验结果：试验组1～2天后背部迅速生长，3天即复盖全背。对照组：待7天后才长毛。

试验3

经上海天乐美容发饰品厂测试100例脂溢性脱发患者，结果100％生发，所长毛发光泽亮黑，硬度好。

试验4

(1)急性毒性试验  腹腔注射2.5ml/kg最大剂量未出现急性毒性，动物全部存活，毛色、饮食、活动、体重无异常变化，LD50＞25ml/kg。

(2)长期毒性试验连续灌胃给药3个月，体重、血常规、尿常规、肝功、肾功及重要脏器病理检查均未见异常。

(3)Ames试验  Ames试验阴性，无致突变性。

(4)精子畸形试验  各试验组精子畸形率与阴性对照组相近，无显著差异，证实无致生殖细胞遗传损伤作用。

(5)微核试验  微核试验阴性，不具染色体畸变作用。

(6)局部用药毒性研究

(a)阴道粘膜刺激试验：家兔局部粘膜未见充血、红肿、水肿等明显刺激作用。

(b)皮肤过敏试验结果：该制剂致敏性极低。

根据以上试验可以证明，以本发明所述的促毛发生长物质为有效成份的促毛发生长剂是一种确切有效的促毛发生长剂，人有促进动物毛之生长，治疗人体脂溢性脱发的功效，且安全无毒，对皮肤无损伤。

                          具体实施方式

实施例1：

将冻干保藏的啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae Hansen)促毛1号CCTCCM201024菌种启封，复苏，用沙氏培养基于28℃培养48小时后进行菌种鉴定，优选促生长活力高的菌株用Gibco 1640培养基进行种子培养，摇床220转/分，28℃48～72小时，装于发酵罐，在Gibco1640培养基，28℃、300转/分、搅拌培养条件下培养24h，再用板框滤器过滤除去菌体即制得本发明所述的促毛发生长物质，将制得的促毛发生化物质置于低温条件下保存备用。

实施例2：

在1毫升本发明所述的促毛发生长物质中加水至1000毫升，即制得1∶1000的以本发明所述促毛发生长物质为有效成份的促毛发生长剂，具有促进细胞、动物毛和人体头发生长的作用，可用于治疗人体脱发和促进兔、羊等动物的毛发生长。治疗脱发的使用方法是：清洗脱发的局部，并用手充分按摩或用蒸汽董蒸局部，然后用纸擦去脱发部位的油脂，涂擦本发明所述促毛发生长剂，按摩，一周三次，一月为一疗程。用于促进动物毛生长的使用方法是：用本发明所述促毛发生长剂淋洗剪过毛的兔或羊。