一种海马麻醉及运输方法

摘要

本发明公开一种海马麻醉及运输方法。将被运输海马停食；采用10～20μL/L的丁香酚溶液或20～30mg/L的MS-222溶液对海马进行麻醉；将进入中度麻醉状态的海马进行打包：内层为塑胶袋，加入含麻醉剂的海水，加入纯氧，打包，外层采用泡沫箱打包，最后封装。本发明在确保海马成活率的前提下实现海马的批量长途运输。本发明技术对于海马的科学研究、资源保护和水产养殖等领域都有积极的意义。

说明书

技术领域：

本发明属于鱼类养殖技术领域，具体涉及一种海马麻醉及运输方法。

背景技术：

海马(Hippocampus spp.)是一种重要的中药材，同时也作为观赏鱼类广受欢迎。过渡捕捞 导致了野生海马资源衰减，同时也促进了海马养殖产业的发展。随着海马养殖业和观赏海马 产业的快速发展，海马长途运输日渐增多，但运输导致的海马高死亡率给海马从业者带来了 很大的风险和损失。运输死亡的主要原因包括：1、运输引起鱼类的强烈应激反应；2、运输 过程溶氧不足；3、氨氮或二氧化碳过高导致鱼类中毒；4、碰撞或互相攻击引起的鱼体受伤。 鱼类麻醉剂使鱼体进入麻醉状态，鳃动频率下降，鱼体内代谢减缓，耗氧量下降，大大降低 外界刺激对鱼体的胁迫压力，有利于鱼类长途运输。麻醉后运输是国内外经常采用的一种动 物运输方法，合适的麻醉方法能够降低运输过程带来的副作用，有效提高运输鱼类的成活率。

鱼类养殖麻醉剂在实际的研究和生产中已经被广泛使用，对于鱼苗、亲鱼的远距离运输、 病害检测，以及野生资源调查或相关研究工作都有很重要的应用价值。相比之下，关于海马 麻醉等相关研究报道较少，关于采用麻醉处理进行海马长途运输的方法亦尚未见报道。

发明内容：

本发明的目的是提供一种海马麻醉及运输方法。本发明所采用的技术方案为：1、活体海 马麻醉，使海马进入中度麻醉阶段，降低海马新陈代谢速率和应激反应；2、采用双层打包运 输方法：内层塑胶袋封闭充氧，外层泡沫箱低温冷藏，保证运输过程中洋气重组和水质良好； 3、运输袋中放置尼龙绳结，利于海马缠绕固定。

本发明的海马麻醉及运输方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)、停食：将被运输海马停食；

(2)、活体麻醉：采用10～20μL/L的丁香酚(clove oil)溶液或20～30mg/L的MS-222 溶液对海马进行麻醉；

(3)、将步骤(2)中进入中度麻醉状态的海马进行打包：内层为塑胶袋，加入含麻醉 剂的海水，加入纯氧，打包，外层采用泡沫箱打包，最后封装。

步骤(1)所述的将被运输海马停食，优选停食1天。

步骤(2)所述的10～20μL/L的丁香酚溶液，其制备方法为：先将丁香酚与无水乙醇按 照体积比为1：9配成母液，然后使用新鲜海水为溶剂将母液配制成10～20μL/L的丁香酚溶 液。

步骤(2)所述的20～30mg/L的MS-222溶液，其制备方法为：将MS-222与小苏打 (NaHCO₃)按照质量比1：1进行中和后，使用新鲜海水为溶剂将中和后的MS-222配制成 20～30mg/L的MS-222溶液。

优选，步骤(3)中加入塑胶袋1/3～1/2体积的含麻醉剂的海水。

步骤(3)中所述的含麻醉剂的海水，其麻醉剂浓度优选为步骤(1)中对海马进行麻醉 所用麻醉剂浓度的20～100％。

优选，步骤(3)中在塑胶袋内放置尼龙绳结，利于海马缠绕固定。

本发明中的丁香酚俗名也称为丁香油或丁子香，MS-222俗名称为鱼安定或鱼安保。

本发明的海马麻醉及运输方法适用于5～20公分的海马中龄鱼和成鱼。通过比较不同麻醉 剂浓度对海马麻醉效果和代谢速率，并对麻醉处理后的海马摄食和生长情况进行进一步观察 比较，从而得到了本发明的海马麻醉及运输方法，本发明在确保海马成活率的前提下实现海 马的批量长途运输。本发明技术对于海马的科学研究、资源保护和水产养殖等领域都有积极 的意义。

附图说明：

图1是不同浓度麻醉剂作用下海马排氮率(A)与耗氧率(B)比较，其中，Control为对照 组，Clo-10为10μL/L丁香酚，Clo-20为20μL/L丁香酚，MS-20为20mg/LMS-222，MS-30 为30mg/LMS-222；

图2是不同麻醉剂作用下运输后海马的体长(A)和体重(B)生长比较。

具体实施方式：

以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。

实施例1：

本专利提及的海马麻醉运输方法是一种封闭条件运输，因此，运输方法需要保证1、海 马正常存活，2、运输过程中海马代谢速率降低以保持运输环境良好，3、运输过程结束后会 海马存活率和生长率不受影响。基于以上三个方面的要求，本实施例设计了三部分实验。

本实施例在中科院南海海洋研究所湛江海马繁殖基地开展。实验时间为2014年3月至4 月。本实施例采用养殖的F3代美国线纹海马(Hippocampus erectus)，2-3月龄(体长50-70 mm)，实验前停食1天。使用的麻醉剂包括MS222(Tricaine methanesulfonate)和丁香酚 (Cloveoil)，均由翔博生物试剂公司购得。MS222呈弱酸性，使用时按照质量比1:1加小苏 打(NaHCO₃)中和后使用。丁香酚按照使用无水乙醇配成母液使用，体积比1:9。

1.1麻醉剂短期作用对海马的麻醉效果比较

为确定海马运输过程中的两种麻醉剂浓度范围，实验1.1首先比较了不同麻醉剂浓度下海 马的行为反应，借此初步确定海马麻醉所需的麻醉剂浓度范围。

基于预实验结果，分别设置不同浓度的麻醉剂浓度(MS-222：10mg/L,20mg/L,40mg/L, 60mg/L,80mg/L,100mg/L,120mg/L,140mg/L,160mg/L,180mg/L；丁香酚：1μL/L,2μL/L, 5μL/L,10μL/L,20μL/L,30μL/L,40μL/L)，每个浓度3个重复，每个水箱(6L)放3尾海马， 观察海马的行为反应，统计海马的最终麻醉程度和所需时间。实验过程中一旦发现海马进入 深度麻醉状态(呼吸停止)，则立即将其移入新鲜海水中恢复，同时记录时间。若实验海马在 实验水箱中超过15分钟仍未进入深度麻醉状态，则记录最终麻醉程度并移入干净海水，统计 恢复时间。

为了方便统计，本实验在Pawar(2011)对大海马麻醉行为的描述基础上将海马麻醉状态 (Induction stage)划分为4个阶段，中度麻醉是海马运输的最佳状态。

表1.不同麻醉状态海马的行为描述

实验结果如表2所示，海马在10～30μL/L丁香酚作用下能够达到并维持在中度麻醉状态； 在20～60mg/L的MS-222作用下可以达到并维持在中度麻醉状态。

表2不同麻醉剂浓度作用下的海马麻醉时间和恢复时间比较

说明：0，未麻烦；1，轻度麻醉；2，中度麻醉；3，深度麻醉。

1.2不同麻醉剂作用下的海马代谢速率比较

为进一步确定麻醉剂浓度对海马的影响，1.2部分设计了不同麻醉剂浓度下海马的代谢速 率影响实验。

基于1.1的实验结果，本实验设置6个实验组(clove oil 10μL/L,clove oil 20μL/L,clove oil 30μL/L,MS22220mg/L,MS22230mg/L,MS22240mg/L)和一个对照组，每个组设3个重复， 每个重复放2尾海马。实验用鱼提前1天禁食。实验采用2L塑胶袋，装满水并密封隔绝空气， 弱光(200-400lux)常温(25-26)培养12个小时，瓶内放置尼龙绳结。

测定实验前后实验瓶中水的溶解氧(DO)和氨氮浓度(N-NH₄⁺)。DO测定采用电极溶氧 仪(Clean DO500)进行，N-NH₄⁺浓度按照次溴酸钠氧化法(GBT12763.42007)进行测量。 铵盐浓度测定采集水样前要摇晃水体至均匀，用虹吸法将导管插入实验瓶中部水样。实验结 束后，测量实验海马的体长和体重。

耗氧率计算公式OCR＝[(DO_initial-DO_final)*V]/(T*W)

OCR＝Oxygen consumption rate(mg O₂kg^-1h^-1)

DO_initial＝initial DO concentration(mg L^-1)

DO_final＝final DO concentration(mg L^-1)

V＝volume of chamber(L)

T＝time between initial and final(h)

M＝mass of fish(g)

排氨率计算公式ammonia-N excretion rate(AER),

AER＝[(AN_final-AN_initial)*V]/(T*W)

AER＝ammonia-N excretion rate(μmol g^-1h^-1)

AN_initial＝initial DO concentration(mg L^-1)

AN_final＝final DO concentration(mg L^-1)

V＝volume of chamber(L)

T＝time between initial and final(h)

M＝mass of fish(g)

实验结果如图1所示，海马在10μL/L和20μL/L的丁香酚作用下，呼吸速率明显下降，前 者同时伴随着明显的耗氧率和排氨率下降。在20mg/L和30mg/L的MS-222作用下，海马同样 表现出显著的耗氧率下降和排氨率上升(图1)。在30μL/L的丁香酚及40mg/L的MS-222作用下， 海马出现死亡，故将该实验组终止，未能获得呼吸速率相关数据。

即实验1.2表明，在MS-222浓度为20-30mg/L或丁香酚浓度10-20μL/L的作用下，海马能够 正常存活并维持较低的新陈代谢速率，更有利于长时间运输。

1.3麻醉处理过的海马成活率和生长比较

为进一步确认麻醉剂处理后，海马的成活率与生长速率是否受到影响，实验1.3统计了 麻醉处理后的海马一周内的成活率与生长率。分别选择30mg/L MS-222和20μL/L丁香酚麻 醉处理海马，将麻醉海马进行打包并长距离运输：内层为容积0.5～5L的透明塑胶袋(水产运 输专用)，加入1/3～1/2体积的含麻醉剂的海水，麻醉剂浓度为对海马进行麻醉所用麻醉剂浓 度的20～100％，加入纯氧，橡皮筋打包，外层采用泡沫箱打包，最后胶带封装12小时后进行 清水恢复。正常养殖一周。测量实验前后海马的体长和体重。

实验结果表明，所有麻醉实验组都没有海马死亡，发现其海马生长并没有受到影响(图 2)。30mg/L MS-222和20μL/L丁香酚麻醉处理海马后对海马的成活和生长均没有影响，则 20mg/L MS-222和10μL/L丁香酚对海马的成活和生长也是无任何影响的。

综上，本发明技术采用丁香酚和MS-222对于海马进行麻醉是安全的，能够达到对海马 不同程度的麻醉，这对于海马进行科研、运输等不同需求是重要的；同时，基于对批量海马 麻醉后进行长途运输的方法也是非常实用的，这对于我国目前海马产业的推广等有很高的应 用价值。