一种鼻腔分泌物的处理液及其处理方法

摘要

本发明涉及临床医学领域，特别涉及一种鼻腔分泌物的处理液及其处理方法。鼻腔分泌物的处理液，包括依次使用的清洗液、消化液和保护液，先用清洗液对鼻腔分泌物进行悬浮，同时用消化液对鼻腔分泌物中的粘性成分进行裂解，并通过细胞滤网过滤和离心，去除杂质和粘性物质，然后加入保护液，使细胞在保护液中均匀分散，将均匀分散的细胞转移至细胞滤网，再将细胞滤网上的细胞转移至载玻片上，固定，得到细胞分布薄而均匀，清晰美观的细胞涂片，采用显微镜观察时细胞分布均匀，具有代表性，不仅细胞无重叠，而且去除了阻碍观察的粘液和杂质的影响，并可以直接进行免疫组化染色。

说明书

技术领域

本发明涉及临床医学领域，具体而言，涉及一种鼻腔分泌物的 处理液及其处理方法。

背景技术

鼻腔分泌物的细胞学检查对临床的诊断和治疗具有很重要的意 义。传统的鼻分泌物细胞学检查是将分泌物或粘膜刮出物直接涂在 载玻片中心，干燥固定后直接进行染色处理，但是，鼻分泌物含有 大量的杂质和粘性物质，导致分泌物中的目的细胞不能在载玻片均 匀分散，不能进行免疫组化染色；此外，分泌物中的杂质还会对涂 片的染色效果和结果的正确判断有着很大影响。

发明内容

本发明的目的在于提供一种鼻腔分泌物的处理液及其处理方 法，以解决上述的问题。

在本发明的实施例中提供了一种鼻腔分泌物的处理液，包括依 次使用的清洗液、消化液和保护液；

所述清洗液包括乙二胺四乙酸、甲醇、磷酸氢二钠、磷酸二氢 钾、氯化钠、氯化钾、重蒸水和盐酸，所述乙二胺四乙酸与所述重 蒸水的质量体积比为0.2～0.4g/L，所述甲醇与所述重蒸水的体积比 为1:0.5～1.5，所述磷酸氢二钠与所述重蒸水的质量体积比为1.0～ 1.5g/L，所述磷酸二氢钾与所述重蒸水的质量体积比为0.2～0.3 g/L，所述氯化钠与所述重蒸水的质量体积比为7～9g/L，所述氯化 钾与所述重蒸水的质量体积比为0.1～0.3g/L，所述盐酸将清洗液 pH调至7.2～7.4；

所述消化液包括二硫苏糖醇、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、氯化 钠、氯化钾、重蒸水和盐酸，所述二硫苏糖醇与所述重蒸水的质量 体积比为90～110g/L，所述磷酸氢二钠与所述重蒸水的质量体积比 为1.0～1.5g/L，所述磷酸二氢钾与所述重蒸水的质量体积比为 0.2～0.3g/L，所述氯化钠与所述重蒸水的质量体积比为7～9g/L， 所述氯化钾与所述重蒸水的质量体积比为0.1～0.3g/L，所述盐酸 将消化液pH调至7.2～7.4；

所述保护液包括吐温、乙二胺四乙酸、甲醇、磷酸氢二钠、磷 酸二氢钾、氯化钠、氯化钾、重蒸水和盐酸，所述吐温与所述重蒸 水的体积比为0.04～0.06:1，所述乙二胺四乙酸与所述重蒸水的质量 体积比为0.2～0.4g/L，所述甲醇与所述重蒸水的体积比为1:0.5～ 1.5，所述磷酸氢二钠与所述重蒸水的质量体积比为1.0～1.5g/L， 所述磷酸二氢钾与所述重蒸水的质量体积比为0.2～0.3g/L，所述氯 化钠与所述重蒸水的质量体积比为7～9g/L，所述氯化钾与所述重 蒸水的质量体积比为0.1～0.3g/L，所述盐酸将保护液pH调至7.2～ 7.4。

优选地，所述吐温为吐温20、吐温21、吐温40、吐温60、吐 温61、吐温80、吐温81和吐温85中的任一种或多种混合。

优选地，所述鼻腔分泌物的处理液还包括固定液I，所述固定 液I由多聚甲醛、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、氯化钠、氯化钾、重 蒸水和盐酸组成，所述多聚甲醛与所述重蒸水的质量体积比为35～ 45g/L，所述磷酸氢二钠与所述重蒸水的质量体积比为1.0～1.5g/L， 所述磷酸二氢钾与所述重蒸水的质量体积比为0.2～0.3g/L，所述氯 化钠与所述重蒸水的质量体积比为7～9g/L，所述氯化钾与所述重 蒸水的质量体积比为0.1～0.3g/L，所述盐酸将固定液I的pH调至 7.2～7.4。

优选地，所述鼻腔分泌物的处理液还包括固定液II，所述固定 液II由甲醇和丙酮以体积比为1：0.5～1.5配制而成。

鼻腔分泌物的处理方法包括以下步骤：

(a)取鼻腔分泌物，将得到的鼻腔分泌物转移至所述清洗液 20～40ml中，加入所述消化液，加入的所述消化液与所述清洗液的 体积比为1～5：100，振荡器400～600rpm，20～40分钟振荡混匀；

(b)1500～2500rpm离心5～15分钟，弃去上清，轻轻震散开 底部的沉淀，加入20～40ml所述保护液并混匀，用孔径为30～200 μm细胞滤网过滤，收集过滤液；

(c)将所述过滤液用孔径为3～8μm的细胞滤膜过滤，将细胞 滤膜上的细胞转移至载玻片上，得到细胞涂片；

(d)对所述细胞涂片进行细胞固定，染色处理，然后通过显 微镜观察细胞涂片。

优选地，在所述步骤(c)中，所述过滤液通过细胞涂片机制作 细胞涂片。

优选地，所述细胞涂片机制作细胞涂片具体为：

将所述细胞滤膜进行负压处理，当细胞滤膜上覆盖了8～15％面 积的细胞，负压吸引停止，所述过滤液中的细胞吸附在所述细胞滤 膜表面；

将所述细胞滤膜吸附有细胞的一侧贴附在载玻片上，通过正压 鼓气和静电吸附作用，使吸附在细胞滤膜表面的细胞转移至载玻片 上，得到细胞涂片。

优选地，在所述(d)中，所述细胞固定采用本发明提供的固定 液I或固定液II进行固定。

优选地，在所述(b)中，所述细胞滤网的孔径为80～100μm。

优选地，在所述(a)中，采用取样器对鼻腔分泌物进行取样。

本发明实施例提供的鼻腔分泌物的处理液及其处理方法，采用 清洗液对鼻腔分泌物进行悬浮，同时用消化液对鼻腔分泌物中的粘 性成分进行裂解，并通过细胞滤网过滤和离心，去除杂质和粘性物 质，然后加入保护液，使细胞在保护液中均匀分散，将均匀分散的 细胞转移至细胞滤网，再将细胞滤网上的细胞转移至载玻片上，固 定，得到细胞分布薄而均匀，清晰美观的细胞涂片，采用显微镜观 察时细胞分布均匀，具有代表性，不仅细胞无重叠，而且去除了阻 碍观察的粘液和杂质的影响，并可以直接进行免疫组化染色。

附图说明

图1示出了本发明实施例1细胞HE染色的显微镜100倍镜下 观察图；

图2示出了本发明实施例1对照组细胞HE染色的显微镜100 倍镜下观察图；

图3示出了本发明实施例2细胞HE染色的显微镜100倍镜下 观察图；

图4示出了本发明实施例2对照组细胞HE染色的显微镜100 倍镜下观察图；

图5示出了本发明实施例3中MUC5AC染色通过显微镜400 倍镜观察图；

图6示出了本发明实施例3中MUC5AC染色通过显微镜1000 倍镜观察图；

图7示出了本发明实施例3中MUC2染色通过显微镜400倍镜 观察图；

图8示出了本发明实施例3中MUC2染色通过显微镜1000倍 镜观察图；

图9示出了本发明实施例4中tubulin染色通过显微镜100倍镜 观察图；

图10示出了本发明实施例4中tubulin染色通过显微镜1000倍 镜观察图。

具体实施方式

下面通过具体的实施例子对本发明做进一步的详细描述。

本发明实施例中提供了一种鼻腔分泌物的处理液及其处理方 法。

一种鼻腔分泌物的处理液，包括依次使用的清洗液、消化液和 保护液；

所述清洗液包括乙二胺四乙酸、甲醇、磷酸氢二钠、磷酸二氢 钾、氯化钠、氯化钾、重蒸水和盐酸，所述乙二胺四乙酸与所述重 蒸水的质量体积比为0.2～0.4g/L，所述甲醇与所述重蒸水的体积比 为1:0.5～1.5，所述磷酸氢二钠与所述重蒸水的质量体积比为1.0～ 1.5g/L，所述磷酸二氢钾与所述重蒸水的质量体积比为0.2～0.3 g/L，所述氯化钠与所述重蒸水的质量体积比为7～9g/L，所述氯化 钾与所述重蒸水的质量体积比为0.1～0.3g/L，所述盐酸将清洗液 pH调至7.2～7.4；

所述消化液包括二硫苏糖醇、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、氯化 钠、氯化钾、重蒸水和盐酸，所述二硫苏糖醇与所述重蒸水的质量 体积比为90～110g/L，所述磷酸氢二钠与所述重蒸水的质量体积比 为1.0～1.5g/L，所述磷酸二氢钾与所述重蒸水的质量体积比为 0.2～0.3g/L，所述氯化钠与所述重蒸水的质量体积比为7～9g/L， 所述氯化钾与所述重蒸水的质量体积比为0.1～0.3g/L，所述盐酸 将消化液pH调至7.2～7.4；

所述保护液包括吐温、乙二胺四乙酸、甲醇、磷酸氢二钠、磷 酸二氢钾、氯化钠、氯化钾、重蒸水和盐酸，所述吐温与所述重蒸 水的体积比为0.04～0.06:1，所述乙二胺四乙酸与所述重蒸水的质量 体积比为0.2～0.4g/L，所述甲醇与所述重蒸水的体积比为1:0.5～ 1.5，所述磷酸氢二钠与所述重蒸水的质量体积比为1.0～1.5g/L， 所述磷酸二氢钾与所述重蒸水的质量体积比为0.2～0.3g/L，所述氯 化钠与所述重蒸水的质量体积比为7～9g/L，所述氯化钾与所述重 蒸水的质量体积比为0.1～0.3g/L，所述盐酸将保护液pH调至7.2～ 7.4。

本发明实施例提供的鼻腔分泌物的处理液及其处理方法，采用 清洗液对鼻腔分泌物进行悬浮，根据分泌物中粘液的多少加入消化 液，消化液对鼻腔分泌物中的粘性成分进行裂解，并通过细胞滤网 过滤和离心，去除杂质和粘性物质，然后加入保护液，使细胞在保 护液中均匀分散，将均匀分散的细胞转移至细胞滤网，再将细胞滤 网上的细胞转移至载玻片上，固定，得到细胞分布薄而均匀，清晰 美观的细胞涂片，采用显微镜观察时细胞分布均匀，具有代表性， 不仅细胞无重叠，而且去除了阻碍观察的粘液和杂质的影响，并可 以直接进行免疫组化染色。

吐温(或聚山梨酯)为非离子型表面活性剂，具有很好的保护 细胞的作用。优选地，所述吐温为吐温20、吐温21、吐温40、吐 温60、吐温61、吐温80、吐温81和吐温85中的任一种或多种混 合。

为了得到更好的固定效果，优选地，所述鼻腔分泌物的处理液 还包括固定液I，所述固定液I由多聚甲醛、磷酸氢二钠、磷酸二氢 钾、氯化钠、氯化钾、重蒸水和盐酸组成，所述多聚甲醛与所述重 蒸水的质量体积比为35～45g/L，所述磷酸氢二钠与所述重蒸水的 质量体积比为1.0～1.5g/L，所述磷酸二氢钾与所述重蒸水的质量体 积比为0.2～0.3g/L，所述氯化钠与所述重蒸水的质量体积比为7～ 9g/L，所述氯化钾与所述重蒸水的质量体积比为0.1～0.3g/L，所述 盐酸将固定液I的pH调至7.2～7.4。固定液I用于常规细胞形态学 观察的细胞的固定，固定效果好。

优选地，所述鼻腔分泌物的处理液还包括固定液II，所述固定 液II由甲醇和丙酮以体积比为1：0.5～1.5配制而成。固定液II用于 对细胞核观察的细胞的固定，固定效果好。

鼻腔分泌物的处理方法包括以下步骤：

(a)取鼻腔分泌物，将得到的鼻腔分泌物转移至所述清洗液 20～40ml中，加入所述消化液，加入的所述消化液与所述清洗液的 体积比为1～5：100，振荡器400～600rpm，20～40分钟振荡混匀；

(b)1500～2500rpm离心5～15分钟，弃去上清，轻轻震散开 底部的沉淀，加入20～40ml所述保护液并混匀，用孔径为30～200 μm细胞滤网过滤，收集过滤液；

(c)将所述过滤液用孔径为3～8μm的细胞滤膜过滤，将细胞 滤膜上的细胞转移至载玻片上，得到细胞涂片；

(d)对所述细胞涂片进行细胞固定，染色处理，然后通过显 微镜观察细胞涂片。

本鼻腔分泌物的处理方法步骤简单易行，且得到的细胞涂片细 胞分布薄而均匀，清晰美观的细胞涂片，采用显微镜观察时细胞分 布均匀，具有代表性，不仅细胞无重叠，而且去除了阻碍观察的粘 液和杂质的影响，并可以直接进行免疫组化染色。

其中，细胞固定中细胞涂片浸入固定液20～30分钟，以达到更 好的固定效果。在所述步骤(b)中，离心采用1500～2500rpm离 心5～15分钟，足以分散细胞，又不破坏细胞形态。

优选地，在所述步骤(c)中，所述过滤液通过细胞涂片机制作 细胞涂片。使用细胞涂片机制作细胞涂片，效率高，节约人力，且 得到的细胞涂片细胞分布均匀。

优选地，所述细胞涂片机制作细胞涂片具体为：

将所述细胞滤膜进行负压处理，当细胞滤膜上覆盖了8～15％面 积的细胞，负压吸引停止，所述过滤液中的细胞吸附在所述细胞滤 膜表面；

将所述细胞滤膜吸附有细胞的一侧贴附在载玻片上，通过正压 鼓气和静电吸附作用，使吸附在细胞滤膜表面的细胞转移至载玻片 上，得到细胞涂片。

采用这种方式制作细胞涂片，细胞的杂质含量少，通过控制细 胞滤膜上的覆盖细胞的数量，可以避免细胞的重叠，且细胞在载玻 片上分布薄且均匀，制得的细胞涂片进行观察，清晰美观，细胞分 布均匀，具有代表性，不仅细胞无重叠，而且去除了阻碍观察的粘 液和杂质的影响，并可以直接进行免疫组化染色。

固定液I用于常规细胞形态学观察的细胞的固定；固定液II用 于对细胞核观察的细胞的固定；两者根据不同的细胞固定的观察目 的而使用，且两者固定效果好。优选地，在所述(d)中，所述细胞 固定采用本发明提供的固定液I或固定液II进行固定。

细胞直径为10～20μm，细胞滤网是将液体成份中大于细胞体积 的杂质成份过滤掉。优选地，在所述(b)中，所述细胞滤网的孔径 为80～100μm。

优选地，在所述(a)中，采用取样器对鼻腔分泌物进行取样。

鼻腔分泌物取样器，包括：刷头、刷体和刷柄，所述刷头和刷 柄分别位于所述刷体的两端；

所述刷头的长度为3～30mm，宽度为1～5mm，厚度为2～10mm； 所述刷体的长度为50～80mm，所述刷柄的长度为50～80mm；

所述刷头为柱体，所述刷头的前端端面和其侧面分别设置有刷 毛。

优选地，所述刷体和所述刷柄之间还设置有衔接部；

所述衔接部的一端与所述刷体连接，另一端与所述刷柄连接， 所述刷体与所述刷柄分别位于所述衔接部的两侧，所述刷柄和所述 刷体的延长线之间的夹角为0～30度。

优选地，所述刷毛的横截面为圆形或椭圆形或十字形或多边形。

优选地，所述刷毛的材质为聚酰胺6，所述刷毛的横截面直径 为0.05～0.5mm。

优选地，所述刷毛的长度为2～5mm。

优选地，所述刷毛在距所述端面或所述侧面的边缘0.1～5mm 处设置。

优选地，所述刷柄呈长条状，所述刷柄的横截面为扁平状或圆 柱状，其宽度或直径为2～10mm。

优选地，所述刷体的宽度沿所述刷头的方向逐渐减小，所述刷 体与所述衔接部连接的部位其宽度为4～6mm，所述刷体与所述刷头 连接的部位其宽度为2～3mm。

优选地，所述刷柄的表面设置有防滑槽。

刷头的长度为3～30mm，刷头的宽度为1～5mm，刷头的厚度为 2～10mm，刷体的长度为50～80mm，刷柄的长度为50～80mm，鼻腔 分泌物取样器的大小与鼻孔相适；刷头为柱体，刷头的端面和侧面 设置有刷毛。通过在刷头侧面设置的刷毛在鼻腔刷取，来收集鼻腔 侧壁上的分泌物；通过在刷头前端设置的刷毛，可以精准定位刷取 指定范围的分泌物，收集的样本定位点准确且更为全面，此外，采 用刷毛收集分泌物后，刷毛直接在溶液中涮洗，刷毛本身没有残留 物，并且不会对标本产生额外的干扰物。

实施例1

清洗液包括乙二胺四乙酸、甲醇、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、 氯化钠、氯化钾、重蒸水和盐酸，所述乙二胺四乙酸与所述重蒸水 的质量体积比为0.3g/L，所述甲醇与所述重蒸水的体积比为1:1， 所述磷酸氢二钠与所述重蒸水的质量体积比为1.44g/L，所述磷酸 二氢钾与所述重蒸水的质量体积比为0.24g/L，所述氯化钠与所述 重蒸水的质量体积比为8g/L，所述氯化钾与所述重蒸水的质量体积 比为0.2g/L，所述盐酸将清洗液pH调至7.3；

消化液包括二硫苏糖醇、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、氯化钠、 氯化钾、重蒸水和盐酸，所述二硫苏糖醇与所述重蒸水的质量体积 比为100g/L，所述磷酸氢二钠与所述重蒸水的质量体积比为1.44 g/L，所述磷酸二氢钾与所述重蒸水的质量体积比为0.24g/L，所述 氯化钠与所述重蒸水的质量体积比为8g/L，所述氯化钾与所述重蒸 水的质量体积比为0.2g/L，所述盐酸将消化液pH调至7.3；

保护液包括吐温-20、乙二胺四乙酸、甲醇、磷酸氢二钠、磷酸 二氢钾、氯化钠、氯化钾、重蒸水和盐酸，所述吐温-20与所述重 蒸水的体积比为0.05:1，所述乙二胺四乙酸与所述重蒸水的质量体 积比为0.3g/L，所述甲醇与所述重蒸水的体积比为1:1，所述磷酸 氢二钠与所述重蒸水的质量体积比为1.44g/L，所述磷酸二氢钾与 所述重蒸水的质量体积比为0.24g/L，所述氯化钠与所述重蒸水的质 量体积比为8g/L，所述氯化钾与所述重蒸水的质量体积比为0.2 g/L，所述盐酸将保护液pH调至7.3。

固定液I，由多聚甲醛、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、氯化钠、氯 化钾、重蒸水和盐酸组成，所述多聚甲醛与所述重蒸水的质量体积 比为40g/L，所述磷酸氢二钠与所述重蒸水的质量体积比为1.44 g/L，所述磷酸二氢钾与所述重蒸水的质量体积比为0.24g/L，所述 氯化钠与所述重蒸水的质量体积比为8g/L，所述氯化钾与所述重蒸 水的质量体积比为0.2g/L，所述盐酸将固定液I的pH调至7.3。

鼻腔分泌物的处理方法，包括以下步骤：

(a)采用取样器取鼻腔分泌物，将得到的鼻腔分泌物转移至清 洗液20ml中，加入0.2ml消化液，用振荡器500rpm，20min，振 荡混匀；

(b)用离心机离心，2000rpm，10min，弃去上清，轻轻震散 开底部的沉淀，加入30ml保护液并混匀，用孔径为100μm细胞滤 网过滤，收集过滤液；

(c)将过滤液用孔径为3μm的细胞滤膜过滤，将细胞滤膜上 的细胞转移至载玻片上，得到细胞涂片；

(d)采用固定液I对细胞涂片进行细胞固定，固定液对细胞涂 片上的细胞固定是将细胞涂片直接浸没在固定液20min，用于常规 细胞形态学观察，然后进行HE染色处理，HE染色按常规方法进行， 然后通过显微镜100倍观察细胞涂片，结果如图1所示；对照组采 用常规的方式处理鼻腔分泌物然后进行HE染色处理，然后通过显 微镜100倍观察细胞涂片，结果如图2所示。从图1可以看出，细 胞分散效果好，且基本没有重叠现象，而图2中细胞重叠严重，分 散性差。

实施例2

清洗液包括乙二胺四乙酸、甲醇、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、 氯化钠、氯化钾、重蒸水和盐酸，所述乙二胺四乙酸与所述重蒸水 的质量体积比为0.2g/L，所述甲醇与所述重蒸水的体积比为1:0.5， 所述磷酸氢二钠与所述重蒸水的质量体积比为1.0g/L，所述磷酸二 氢钾与所述重蒸水的质量体积比为0.2g/L，所述氯化钠与所述重蒸 水的质量体积比为7g/L，所述氯化钾与所述重蒸水的质量体积比为 0.1g/L，所述盐酸将清洗液pH调至7.2；

消化液包括二硫苏糖醇、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、氯化钠、 氯化钾、重蒸水和盐酸，所述二硫苏糖醇与所述重蒸水的质量体积 比为90g/L，所述磷酸氢二钠与所述重蒸水的质量体积比为1.0g/L， 所述磷酸二氢钾与所述重蒸水的质量体积比为0.2g/L，所述氯化钠 与所述重蒸水的质量体积比为7g/L，所述氯化钾与所述重蒸水的质 量体积比为0.1g/L，所述盐酸将消化液pH调至7.2；

保护液包括吐温-80、乙二胺四乙酸、甲醇、磷酸氢二钠、磷酸 二氢钾、氯化钠、氯化钾、重蒸水和盐酸，所述吐温-80与所述重 蒸水的体积比为0.04:1，所述乙二胺四乙酸与所述重蒸水的质量体 积比为0.2g/L，所述甲醇与所述重蒸水的体积比为1:0.5，所述磷酸 氢二钠与所述重蒸水的质量体积比为1.0g/L，所述磷酸二氢钾与所 述重蒸水的质量体积比为0.2g/L，所述氯化钠与所述重蒸水的质量 体积比为7g/L，所述氯化钾与所述重蒸水的质量体积比为0.1g/L， 所述盐酸将保护液pH调至7.2。

固定液I，由多聚甲醛、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、氯化钠、 氯化钾、重蒸水和盐酸组成，所述多聚甲醛与所述重蒸水的质量体 积比为35g/L，所述磷酸氢二钠与所述重蒸水的质量体积比为1.0 g/L，所述磷酸二氢钾与所述重蒸水的质量体积比为0.2g/L，所述氯 化钠与所述重蒸水的质量体积比为7g/L，所述氯化钾与所述重蒸水 的质量体积比为0.1g/L，所述盐酸将固定液I的pH调至7.2。

鼻腔分泌物的处理方法，包括以下步骤：

(a)采用取样器取鼻腔分泌物，将得到的鼻腔分泌物转移至清 洗液20ml中，加入0.2ml消化液，用振荡器500rpm，20min，振 荡混匀；

(b)用离心机离心，2000rpm，10min，弃去上清，轻轻震散 开底部的沉淀，加入30ml保护液并混匀，用孔径为80μm细胞 滤网过滤，收集过滤液；

(c)将过滤液用孔径为3μm的细胞滤膜过滤，将细胞滤膜 上的细胞转移至载玻片上，得到细胞涂片；

(d)采用固定液I对细胞涂片进行细胞固定，固定液对细胞涂 片上的细胞固定是将细胞涂片直接浸没在固定液20min，用于常规 细胞形态学观察，然后进行HE染色处理，HE染色按常规方法进行， 通过显微镜100倍观察细胞涂片，结果如图3所示；对照组采用常 规的方式处理鼻腔分泌物然后进行HE染色处理，然后通过显微镜 100倍观察细胞涂片，结果如图4所示。从图3可以看出，细胞分 散效果好，且基本没有重叠现象，而图4中细胞重叠严重，分散性 差。

实施例3

清洗液包括乙二胺四乙酸、甲醇、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、 氯化钠、氯化钾、重蒸水和盐酸，所述乙二胺四乙酸与所述重蒸水 的质量体积比为0.4g/L，所述甲醇与所述重蒸水的体积比为1:1.5， 所述磷酸氢二钠与所述重蒸水的质量体积比为1.5g/L，所述磷酸二 氢钾与所述重蒸水的质量体积比为0.3g/L，所述氯化钠与所述重蒸 水的质量体积比为9g/L，所述氯化钾与所述重蒸水的质量体积比为 0.3g/L，所述盐酸将清洗液pH调至7.4；

消化液包括二硫苏糖醇、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、氯化钠、 氯化钾、重蒸水和盐酸，所述二硫苏糖醇与所述重蒸水的质量体积 比为110g/L，所述磷酸氢二钠与所述重蒸水的质量体积比为1.5 g/L，所述磷酸二氢钾与所述重蒸水的质量体积比为0.3g/L，所述氯 化钠与所述重蒸水的质量体积比为9g/L，所述氯化钾与所述重蒸水 的质量体积比为0.3g/L，所述盐酸将消化液pH调至7.4；

保护液包括吐温-20、乙二胺四乙酸、甲醇、磷酸氢二钠、磷酸 二氢钾、氯化钠、氯化钾、重蒸水和盐酸，所述吐温-20与所述重 蒸水的体积比为0.06:1，所述乙二胺四乙酸与所述重蒸水的质量体 积比为0.4g/L，所述甲醇与所述重蒸水的体积比为1:1.5，所述磷 酸氢二钠与所述重蒸水的质量体积比为1.5g/L，所述磷酸二氢钾与 所述重蒸水的质量体积比为0.3g/L，所述氯化钠与所述重蒸水的质 量体积比为9g/L，所述氯化钾与所述重蒸水的质量体积比为0.3 g/L，所述盐酸将保护液pH调至7.4。

固定液II由甲醇和丙酮以体积比为1：0.5配制而成。

鼻腔分泌物的处理方法，包括以下步骤：

(a)采用取样器取鼻腔分泌物，将得到的鼻腔分泌物转移至清 洗液40ml中，加入1ml消化液，用振荡器600rpm，30min，振荡 混匀；

(b)用离心机离心，1500rpm，15min，弃去上清，轻轻震散 开底部的沉淀，加入40ml保护液并混匀，用孔径为200μm细胞滤 网过滤，收集过滤液；

(c)将过滤液用孔径为8μm的细胞滤膜过滤，将细胞滤膜上 的细胞转移至载玻片上，得到细胞涂片；

(d)采用固定液II进行固定，用于对细胞核的观察，固定液 对细胞涂片上的细胞固定是将细胞涂片直接浸没在固定液10min， 取出，然后进行免疫组化染色，MUC5AC染色和MUC2染色，分 别通过显微镜400倍和1000倍观察细胞涂片，MUC5AC染色通过 显微镜400倍如图5所示；MUC5AC染色通过显微镜1000倍如图 6所示；MUC2染色通过显微镜400倍如图7所示；MUC2染色通 过显微镜1000倍如图8所示。从图5～8中可以看出，细胞染色效果 非常好，且观察背景纯净，无其他杂质干扰。

实施例4

清洗液包括乙二胺四乙酸、甲醇、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、 氯化钠、氯化钾、重蒸水和盐酸，所述乙二胺四乙酸与所述重蒸水 的质量体积比为0.2g/L，所述甲醇与所述重蒸水的体积比为1:0.5， 所述磷酸氢二钠与所述重蒸水的质量体积比为1.0g/L，所述磷酸二 氢钾与所述重蒸水的质量体积比为0.2g/L，所述氯化钠与所述重蒸 水的质量体积比为7g/L，所述氯化钾与所述重蒸水的质量体积比为 0.1g/L，所述盐酸将清洗液pH调至7.2；

消化液包括二硫苏糖醇、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、氯化钠、 氯化钾、重蒸水和盐酸，所述二硫苏糖醇与所述重蒸水的质量体积 比为100g/L，所述磷酸氢二钠与所述重蒸水的质量体积比为1.0g/L， 所述磷酸二氢钾与所述重蒸水的质量体积比为0.2g/L，所述氯化钠 与所述重蒸水的质量体积比为7g/L，所述氯化钾与所述重蒸水的质 量体积比为0.1g/L，所述盐酸将消化液pH调至7.2；

保护液包括吐温-60、乙二胺四乙酸、甲醇、磷酸氢二钠、磷酸 二氢钾、氯化钠、氯化钾、重蒸水和盐酸，所述吐温-60与所述重 蒸水的体积比为0.04:1，所述乙二胺四乙酸与所述重蒸水的质量体 积比为0.2g/L，所述甲醇与所述重蒸水的体积比为1:0.5，所述磷酸 氢二钠与所述重蒸水的质量体积比为1.0g/L，所述磷酸二氢钾与所 述重蒸水的质量体积比为0.2g/L，所述氯化钠与所述重蒸水的质量 体积比为7g/L，所述氯化钾与所述重蒸水的质量体积比为0.1g/L， 所述盐酸将保护液pH调至7.2。

固定液II由甲醇和丙酮以体积比为1：1.5配制而成。

鼻腔分泌物的处理方法，包括以下步骤：

(a)采用取样器取鼻腔分泌物，将得到的鼻腔分泌物转移至清 洗液30ml中，加入0.3ml消化液，用振荡器400rpm，40min，振 荡混匀；

(b)用离心机离心，2500rpm，5min，弃去上清，轻轻震散 开底部的沉淀，加入20ml保护液并混匀，用孔径为30μm细胞滤 网过滤，收集过滤液；

(c)将过滤液用孔径为5μm的细胞滤膜过滤，将细胞滤膜上 的细胞转移至载玻片上，得到细胞涂片；

(d)采用固定液II进行固定，用于对细胞核的观察，固定液 对细胞涂片上的细胞固定是将细胞涂片直接浸没在固定液15min， 取出，然后进行免疫组化染色，然后进行tubulin染色，分别通过显 微镜100倍(图9)和1000倍(图10)观察细胞涂片。从图9和图 10中可以看出，细胞染色效果非常好，且观察背景纯净，无其他杂 质干扰。

本发明提供的鼻腔分泌物的处理液及其处理方法，不仅继承了 传统检查方法的所有优点，更解决传统分泌物涂片技术存在细胞丢 失、不能全部被染色、分泌物中粘性液体、杂质存在和细胞不能均 匀分散、重叠等对结果正确判断的影响问题。采用本发明提供的鼻 腔分泌物的处理液及其处理方法，使鼻分泌物中的有效目的细胞呈 单层、均匀地平铺到载玻片上，制成细胞成份丰富、背景清晰、形 态完整、分布均匀的超薄细胞涂片，并可以直接进行免疫组化染色， 对结果判断的准确性大大提高。

以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明， 对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在 本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等， 均应包含在本发明的保护范围之内。