从准噶尔乌头中提取分离生物碱的方法

摘要

本发明公开一种从准噶尔乌头中提取分离生物碱的方法，包括如下步骤：（1）准噶尔乌头根用乙醇浸提，调节浸取液pH值至4-8，再用二氯甲烷萃取；（2）步骤（1）萃取得到的二氯甲烷相过硅胶柱，用石油醚-乙酸乙酯-二乙胺混合液洗脱，得到生物碱。采用本发明方法从准噶尔乌头的根分别提取分离出4种单一的生物碱，分别为乌头碱、准噶尔乌头碱、16,17-二氢-12β,16β-环氧欧乌头碱和12-表-欧乌碱。

说明书

技术领域

本发明属于植物药有效成分提取领域，具体涉及从准噶尔乌头中提取分离生物碱的方法。

背景技术

准噶尔乌头（Aconitum soongoricum Stapf.）为毛莨科（Ranunculaceae）乌头属（Aconitum）的多年生草本植物。在我国产于新疆伊犁地区新源、尼勒克等县，生于海拔 1800～2600 米的山地和草地阳坡^[1]。其根部供药用，块根有剧毒，可散风寒、除湿、止痛。现有报导虽对准噶尔乌头中生物总碱的组分进行了分析，但如何将分析检测到的各生物碱成分从准噶尔乌头中提取分离出了仍是需要克服的问题。

发明内容

本发明的目的是提供一种从准噶尔乌头中提取分离出生物碱的方法。

从准噶尔乌头中提取分离生物碱的方法，包括如下步骤：

（1）准噶尔乌头根用乙醇浸提，调节浸取液pH值至4-8，再用二氯甲烷萃取；

（2）步骤（1）萃取得到的二氯甲烷相过硅胶柱，用石油醚-乙酸乙酯-二乙胺混合液洗脱，得到生物碱。

进一步，将步骤(1)浸取液pH值调至4；步骤(2)中，石油醚-乙酸乙酯-二乙胺的体积比为8:2:0.5，以每次收集1000 ml计，将第18～23次收集的洗脱液合并，结晶得到乌头碱。

进一步，将步骤(1)浸取液pH值调至8；步骤(2)中，石油醚-乙酸乙酯-二乙胺的体积比为10:1:0.5，以每次收集1000 ml计，将第6～11次收集的洗脱液合并，结晶得到准噶尔乌头碱。

进一步，将步骤(1)浸取液pH值调至8；步骤(2)中，石油醚-乙酸乙酯-二乙胺的体积比为7:3:0.5，以每次收集1000 ml计，将第4～9次收集的洗脱液合并，结晶得到12-表-欧乌碱。

进一步，将步骤(1)浸取液pH值调至8；步骤(2)中，石油醚-乙酸乙酯-二乙胺的体积比为10:1:0.5，以每次收集1000 ml计，将第1～3次收集的洗脱液合并，再过Sephadex LH-20凝胶柱，用体积比为5:5:1的三氯甲烷-石油醚-甲醇混合液洗脱，得到16,17-二氢-12β,16β-环氧欧乌头碱。

进一步，步骤（1）在调节浸取液pH值之前，浸取液浓缩后，先加盐酸混悬，然后用石油醚萃取脱脂，再用氨水调节pH值。

采用本发明方法从准噶尔乌头的根分别提取分离出4种单一的生物碱，分别为乌头碱、准噶尔乌头碱、16,17-二氢-12β,16β-环氧欧乌头碱和12-表-欧乌碱。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明做进一步详细说明。

实施例1

准噶尔乌头根（10.0 kg），粉碎（过20目筛），95wt%乙醇冷浸提取3次，27 L/次，提取液经薄膜蒸发浓缩后以2wt%盐酸5500 ml混悬，使生物碱充分溶于混悬液中，再石油醚萃取脱脂；剩余水液用氨水调PH=4，再用二氯甲烷萃取，得到二氯甲烷相。二氯甲烷相经硅胶柱色谱，用石油醚-乙酸乙酯-二乙胺混合液洗脱，石油醚-乙酸乙酯-二乙胺的体积比为8:2:0.5，流速为20 ml/min，每次收集1000 ml洗脱液，将第18～23次收集的洗脱液合并，结晶，滤过，得到化合物1（1.5449 g），通过TLC薄层色谱确定其为单一化合物。

化合物1：无色方晶，碘化铋钾反应呈阳性，mp.189~190℃，C₃₄H₄₇NO₁₁，¹H NMR (400 MHz，CDCl₃) δ ppm: 1.10(t，J =7.0 Hz，3H，NCH₂CH₃)，1.39(s，3H，COCH₃)，3.11，3.27，3.34，3.75(s，各3H，OCH₃)，4.04(d，J =6.5 Hz，1H，6-βH)，4.48(s，1H)，4.88(d，J =4.8 Hz，1H，14-αH)，8.03(d，J =7.6 Hz，2H，Ar-H)，7.66–7.39(m，3H，Ar-H)；¹³C NMR (400 MHz，CDCl₃) δ ppm:13.35(C-21)，21.45(COCH₃)，33.63(C-2)，35.83(C-12)，40.90(C-10)，43.14(C-4)，44.21(C-9)，44.70(C-7)，46.85(C-5)，46.86(C-19)，48.93(C-20)，50.00(C-11)，55.94(C-1')，58.00(C-6')，59.13(C-18')，61.02(C-16')，61.15(C-17)，71.55(C-3)，74.05(C-13)，76.69(C-18)，78.85(C-15)，78.92(C-14)，82.38(C-1)，83.38(C-6)，89.97(C-16)，92.06(C-8)，128.65(C-3")，129.61(C-2")，129.78(C-1")，133.29(C-4")，166.08(ArCO)，172.43(COCH₃)。以上数据与文献基本一致，故鉴定为乌头碱。

实施例2

准噶尔乌头根（10.0 kg），粉碎（过20目筛），95wt%乙醇冷浸提取3次，27 L/次，提取液经薄膜蒸发浓缩后以2%盐酸5500 ml混悬，使生物碱充分溶于混悬液中，石油醚萃取脱脂；剩余水液用氨水调PH=8，再用二氯甲烷萃取，得到二氯甲烷相。二氯甲烷相经硅胶柱色谱，用体积比为10:1:0.5的石油醚-乙酸乙酯-二乙胺混合液洗脱，流速为20 ml/min，每次收集1000 ml洗脱液，将第6～11次收集的洗脱液合并，结晶，滤过，从而得到化合物2（1.3345g），通过TLC薄层色谱确定其为单一化合物。

化合物2：无色方晶，碘化铋钾反应呈阳性，mp.200~202 ℃，C₂₂H₃₁NO₃，¹H NMR (400 MHz，CDCl₃) δppm:0.77(s，4H，4-CH₃)，1.07(t, J =6.8 Hz，3H，NCH₂CH₃)，3.10(d，J =2.4 Hz，1H)，3.34(dd，J =17.1，11.7 Hz，2H)，3.45(s，1H)，3.85(s，1H，1-βH)，4.36(d，J =8.1 Hz，1H，15-αH)，5.20，5.30(s，2H，17-CH₂)；¹³C NMR(400 MHz，CDCl₃)δ ppm:13.63(NCH₂CH₃)，23.23(C-6)，26.07(C-18)，31.66(C-2)，32.24(C-3)，34.11(C-4)，35.21(C-9)，37.33(C-11)，38.13(C-14)，43.51(C-7)，49.19(C-5)，50.03(C-8)，50.91(NCH₂CH₃)，52.42(C-10)，53.79(C-13)，57.41(C-19)，66.01(C-20)，70.37(C-1)，77.22(C-15)，111.42(C-17)，115.08(C-16)，209.90(C-12)。以上数据与文献基本一致，故鉴定为准噶尔乌头碱。

实施例3

准噶尔乌头根（10.0 kg），粉碎（过20目筛），95wt%乙醇冷浸提取3次，27 L/次，提取液经薄膜蒸发浓缩后以2%盐酸5500 ml混悬，使生物碱充分溶于混悬液中，石油醚萃取脱脂；剩余水液用氨水调PH=8，再用二氯甲烷萃取，得到二氯甲烷相。二氯甲烷相经硅胶柱色谱，用体积比为10:1:0.5的石油醚-乙酸乙酯-二乙胺洗脱，流速为20 ml/min，以每次收集1000 ml计，将第1～3次收集的洗脱液合并，合并的洗脱液再过Sephadex LH-20凝胶柱，再用体积比为5:5:1的三氯甲烷-石油醚-甲醇混合液洗脱，流速为5 ml/min，洗脱液按15 ml/次收集，将第7次收集的洗脱液结晶，滤过，用丙酮重结晶，从而得到化合物3（100 mg），通过TLC薄层色谱确定为单一化合物。

化合物3：白色无定型粉末，碘化铋钾反应呈阳性，mp.230~232 ℃，C₂₂H₃₃NO₃，¹H NMR (400 MHz，CDCl₃) δ ppm:0.74(3H，s，18-H)，1.04(3H，t，J =8Hz，22-H)，1.38(3H，s，17-H)，1.78(1H，d，J =6Hz，14α-H)，2.71(1H，dd，J =4，8Hz，13-H)，3.42(1H，brs，20-H)，3.47(1H，s，15-H)，3.88(1H，dd，J =16.3，9.4Hz，1-H)，4.83(1H，dd，J =7.7，3.9Hz，12-H)。¹³C NMR (400 MHz，CDCl₃) δ ppm:13.61(C-22)，21.84(C-17) ，22.52(C-6) ，26.00(C-18) ，26.00(C-11) ，28.76(C-14) ，31.97 (C-2)，33.88 (C-4)，38.03(C-3) ，38.22 (C-9)，38.55 (C-13)，43.39(C-7) ，49.22 (C-8)，50.79(C-21) ，51.29 (C-10)，51.53(C-5) ，57.28(C-19) ，66.54(C-20) ，70.86 (C-1)，77.51(C-12) ，79.73(C-15) ，89.33 (C-16)。以上数据与基本一致，故鉴定为16,17-二氢-12β,16β-环氧欧乌头碱。

实施例4

准噶尔乌头根（10.0 kg），粉碎（过20目筛），95wt%乙醇冷浸提取3次，27 L/次，提取液经薄膜蒸发浓缩后以2%盐酸5500 ml混悬，使生物碱充分溶于混悬液中，石油醚萃取脱脂；剩余水液用氨水调PH=8，再用二氯甲烷萃取，得到二氯甲烷相。二氯甲烷相经硅胶柱色谱，用体积比为7:3:0.5的石油醚-乙酸乙酯-二乙胺混合液洗脱，流速为20 ml/min，每次收集1000 ml洗脱液，将第4～9次收集的洗脱液合并，结晶，滤过，得到化合物4（1.2910 g），通过TLC薄层色谱确定其为单一化合物。

化合物4：白色无定型粉末，碘化铋钾反应呈阳性，C₂₂H₃₃NO₃，¹H NMR (400 MHz，CDCl₃) δ ppm:0.77(3H，s，4-CH₃)，1.09(3H，t，J =4 Hz，NCH₂CH₃)，3.91(1H，br，s，1-βH)，4.20(1H，dd，J =15.9，7.2Hz，12-αH)，5.13，5.34(2H，s，17-CH₂)。¹³C NMR (400 MHz，CDCl₃) δ ppm:13.47 (NCH₂CH₃)，23.58 (C-6)，26.40 (C-18)，29.57 (C-2)，31.60 (C-3)，32.64 (C-11)，33.77 (C-4)，36.05 (C-14)，37.02 (C-9)，43.84 (C-7)，43.88 (C-13)，48.58 (C-5)，50.93 (NCH₂CH₃)，51.04 (C-8)，52.54 (C-10)，58.29 (C-19)，66.33 (C-20)，67.10 (C-1)，69.89 (C-12)，77.23 (C-15)，111.55 (C-17)，155.00(C-16)。以上数据与文献基本一致，故鉴定为12-表-欧乌碱。