一种改进的鸟巢蕨快速繁殖组织培养基

摘要

本发明公开了一种改进的鸟巢蕨快速繁殖组织培养基，属于植物组织培养技术领域；该培养基包括鸟巢蕨两个不同生长阶段的培养基配方：增殖培养基、生根壮苗培养基；增殖培养基：包括1/2MS、6-BA0.5～3mg/L、KT0.05～0.2mg/L、2，4-D0.1～0.4mg/L、椰子汁100～350ml/L、蔗糖15～40g/L、AC1～2g/L；生根壮苗培养基：1/2MS、蛋白胨0.3～0.8g/L、土豆汁15～45g/L、椰子汁30～80ml/L、蔗糖15～30g/L；利用本发明的培养基进行鸟巢蕨的组织培养，增殖倍数可达7.6，生根率100%。组培苗对环境适应能力强，移栽成活率高。

说明书

技术领域

本发明涉及植物组织培养领域，尤其涉及一种改进的鸟巢蕨快速繁殖组织培养基。

背景技术

鸟巢蕨是一种附生的蕨类植物，原生于亚洲东南部、澳大利亚东部、印度尼西亚、印度和非洲东部，又称巢蕨、山苏花、王冠蕨，为铁角蕨科，属多年生阴生草本观叶植物。鸟巢蕨株形丰满，叶色葱绿，喜阴凉环境，较耐低温，养护管理较为简单，抗病害能力强，可连续多年栽培，近年来被用作高档叶菜栽培，已成为道地的原生蔬菜。其嫩叶鲜绿，炒食质脆爽口，无苦涩味，颇受消费者喜爱。鸟巢蕨主要靠孢子繁殖，但要求条件高，自然条件下难以萌发出苗，不易获得批量苗木，而采用植物组织培养技术，可以在短期内实现鸟巢蕨的规模化生产以满足市场需求。

发明内容

本发明的目的是提供一种改进的鸟巢蕨快速繁殖组织培养基，该培养基改变传统的配方，在培养基中加入不同的物质，不仅能促进鸟巢蕨的大量增殖，而且使得鸟巢蕨的生根率得到显著提高，通过本发明培养基培养的鸟巢蕨组培苗对环境适应能力强，移栽成活率高。

为了达到上述目的，本发明所采用的技术方案如下：

一种改进的鸟巢蕨快速繁殖组织培养基，包括鸟巢蕨两个不同生长阶段培养基：

（1）增殖培养基：包括1/2MS、6-BA 0.5～3mg/L、KT 0.05～0.2mg/L、2，4-D 0.1～0.4mg/L 、椰子汁 100～350ml/L、蔗糖 15～40g/L、AC 1～2g/L，增殖培养基用以诱导鸟巢蕨块茎快速大面积繁殖；

（2）生根壮苗培养基：1/2MS、蛋白胨 0.3～0.8g/L、土豆汁 15～45g/L、椰子汁 30～80ml/L、蔗糖 15～30g/L，生根壮苗培养基对鸟巢蕨幼苗进行生根及壮苗培养，用以增强鸟巢蕨苗木对外界的抵抗力。

    作为优选，包括鸟巢蕨两个不同生长阶段培养基：（1）增殖培养基：1/2MS、6-BA 1.5～2.5mg/L、KT 0.07～0.15mg/L 、2，4-D 0.1～0.3mg/L 、椰子汁 150～250ml/L、蔗糖 20～30g/L、AC 1～2g/L；（2）生根壮苗培养基：1/2MS、蛋白胨 0.4～0.6g/L、土豆汁 20～40g/L、椰子汁 40～60ml/L、蔗糖 18～25g/L。

作为优选， 6-BA为6-苄氨基腺嘌呤、KT为激动素、2，4-D为二氯苯氧乙酸、AC为活性炭。

作为优选，所述增殖培养基与所述生根壮苗培养基需进行高温灭菌处理，在两者中加入蔗糖之前，先将蔗糖溶解于水后进行过滤灭菌，然后再加到灭过菌的两个所述培养基。

作为优选，两个培养基中的椰子汁是直接将椰子水加热至80℃以上，然后用至少三层纱布过滤后加入到培养基中。

作为优选，所述增殖培养基与所述生根壮苗培养基的PH值范围均在5.8～6.2之间。

作为优选，所述增殖培养基与所述生根壮苗培养基两种培养基的MS均为琼脂为支撑物的固体培养基。

本发明的有益效果是：本发明在传统的鸟巢蕨增殖培养基中加入了KT-激动素，2，4-D，椰子汁；激动素不仅能促进细胞分裂，还具有延缓离体叶片和切花衰老，诱导芽分化和发育及增加气孔开度的作用；2，4-D能促进根的形成和配合细胞分裂素使用，还能诱导组织脱分化，促进愈伤组织的增殖，其效果要明显好于2,4-D-萘乙酸；所述鸟巢蕨生根培养基中加入土豆汁，土豆汁一般含有都含有植物生长所需的碳水化合物、含氮物质、无机盐（包括微量元素）以及维生素和水，能促进鸟巢蕨高效成长；所述鸟巢蕨增殖和生根壮苗培养基中均含有椰子汁，椰子汁含有蛋白质、脂肪、维生素C及钙、磷、铁、钾、镁、钠等矿物质，营养极为丰富，结合了鸟巢蕨生长所需的各种大量元素，有利于培育优质鸟巢蕨幼苗。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明的技术方案作进一步的描述。

本发明提出一种改进的鸟巢蕨快速繁殖组织培养基，包括鸟巢蕨两个不同生长阶段培养基：

增殖培养基：包括1/2MS、6-BA 0.5～3mg/L、KT 0.05～0.2mg/L、2，4-D 0.1～0.4mg/L 、椰子汁 100～350ml/L、蔗糖 15～40g/L、AC 1～2g/L，增殖培养基用以诱导鸟巢蕨块茎快速大面积繁殖；

生根壮苗培养基：包括1/2MS、蛋白胨 0.3～0.8g/L、土豆汁 15～45g/L、椰子汁 30～80ml/L、蔗糖 15～30g/L，生根壮苗培养基对鸟巢蕨幼苗进行生根及壮苗培养，用以增强鸟巢蕨苗木对外界的抵抗力。

其中，6-BA为6-苄氨基腺嘌呤、KT为激动素、2，4-D为二氯苯氧乙酸、AC为活性炭。

实施例一：

    （1）外植体：鸟巢蕨组织培养丛生芽；（2）增殖培养：在无菌环境中将上述丛生芽切成包含1或2个芽点的小块接种到增殖培养基中，培养基配方为：1/2MS、6-BA 2.0mg/L、KT 0.1mg/L、2，4-D 0.2mg/L、椰汁 200ml/L、蔗糖 25g/L、AC 1g/L、琼脂5.0g/L，PH 6.0；（3）生根壮苗培养：增殖培养35d左右，将具有3片以上叶、株高1.5cm以上的增殖苗分成单株，置于生根壮苗培养基中培养，培养基配方为：1/2MS、蛋白胨 0.5g/L、椰汁 50ml/L、土豆 30g/L、蔗糖 20g/L、琼脂5.0g/L，PH 5.8；（4）培养过程环境条件：温度为24±2℃，光照强度为2500～3500Lx，光照时间为10h/d，所述增殖培养基与所述生根壮苗培养基需进行高温灭菌处理，在两者中加入蔗糖之前，先将蔗糖溶解于水后进行过滤灭菌，然后再加到灭过菌的两个所述培养基，防止蔗糖产生水解反应。

利用本发明的培养基进行鸟巢蕨的组织培养，增殖倍数可达7.6，生根率100%。组培苗对环境适应能力强，移栽成活率高。

实施例二：

与实施例一不同的是：

增殖培养基配方为： 6-BA 2.5mg/L、KT 0.15mg/L 、2,4-D 0.3mg/L 、椰汁 250ml/L、糖 30g/L、AC 2g/L，PH 5.8；

生根壮苗培养基配方为：蛋白胨 0.6g/L、土豆 40g/L、椰汁 60ml/L、蔗糖 25g/L，PH 6.2。

实施例三：

    与实施例一不同的是：

增殖培养基配方为： 6-BA 1.5mg/L、KT 0.07mg/L 、2,4-D 0.1mg/L 、椰汁 150ml/L、糖 20g/L、AC 1g/L，PH 6.0；

生根壮苗培养基：蛋白胨 0.4g/L、土豆 20g/L、椰汁 40ml/L、蔗糖 18g/L，PH 6.0。

实施例四：

与实施例一不同的是：增殖培养基配方为： 6-BA 0.5mg/L、KT 0.2mg/L 、2,4-D 0.4mg/L 、椰汁 350ml/L、糖 15g/L、AC2g/L，PH 5.9；

生根壮苗培养基：蛋白胨 0.8g/L、土豆 15g/L、椰汁 80ml/L、蔗糖 15g/L，PH 5.9。

实施例五：

与实施例一不同的是：增殖培养基配方为： 6-BA3mg/L、KT 0.05mg/L 、2,4-D 0.1mg/L 、椰汁 100ml/L、糖 40g/L，PH 6.1；

生根壮苗培养基：蛋白胨 0.3g/L、土豆45g/L、椰汁30ml/L、蔗糖30g/L，PH6.1。

本发明的有益效果是：本发明在传统的鸟巢蕨增殖培养基中加入了KT-激动素，2，4-D，椰子汁；激动素不仅能促进细胞分裂，还具有延缓离体叶片和切花衰老，诱导芽分化和发育及增加气孔开度的作用；2，4-D能促进根的形成和配合细胞分裂素使用，还能诱导组织脱分化，促进愈伤组织的增殖，其效果要明显好于2,4-D-萘乙酸；所述鸟巢蕨生根培养基中加入土豆汁，土豆汁一般含有都含有植物生长所需的碳水化合物、含氮物质、无机盐（包括微量元素）以及维生素和水，能促进鸟巢蕨高效成长；所述鸟巢蕨增殖和生根壮苗培养基中均含有椰子汁，椰子汁含有蛋白质、脂肪、维生素C及钙、磷、铁、钾、镁、钠等矿物质，营养极为丰富，结合了鸟巢蕨生长所需的各种大量元素，有利于培育优质鸟巢蕨幼苗。