(3S)-3-N-(N’-(2-叔丁基苯基)草氨酰基)丙氨酰基氨基-5-(2’,3’,5’,6’-四氟苯氧基)-4-氧代戊酸的结晶形式

摘要

本发明涉及(3S)-3-[N-(N’-(2-叔丁基苯基)草氨酰基)丙氨酰基]氨基-5-(2’,3’,5’,6’-四氟苯氧基)-4-氧代戊酸的结晶形式(参见式I)。本发明进一步涉及包含这种结晶形式的药学组合物以及所述药学组合物和所述结晶形式在治疗多种病症特别在治疗肝纤维化中的用途。

说明书

本发明涉及(3S)-3-[N-(N’-(2-叔丁基苯基)草氨酰基)丙氨酰基]氨基-5- (2’,3’,5’,6’-四氟苯氧基)-4-氧代戊酸的结晶形式。本发明进一步涉及含有这 种结晶形式的药物组合物，以及这种药物组合物和结晶形式在治疗多种病 症中的用途，具体涉及在治疗肝纤维化中的用途。

(3S)-3-[N-(N’-(2-叔丁基苯基)草氨酰基)丙氨酰基]氨基-5-(2’,3’,5’,6’-四 氟苯氧基)-4-氧代戊酸(也称作为(3S)-3[(2S)-2-({N[2-(叔丁基)苯基]氨基甲酰 基}羰基氨基)丙酰氨基]-4-氧代-5-(2,3,5,6-四氟苯氧基)戊酸)具有式(I)所示 的结构。这种化合物及其制法都被公开于已出版的国际专利申请WO-A- 00/01666(参见实例75)中。在所公开的多步骤方法中，所述化合物通过使 用三氟乙酸将相对应的叔丁酯脱保护来释放。在硅胶色谱后，分离岀的化 合物呈无色玻璃状。

如果将化合物开发为药物，那么重要的是得到这样形式的化合物，该 形式的化合物（通常被称为药物物质）可大规模可靠地制备及纯化，且储 存时不会降解。因此，结晶（优选高熔点）形式的化合物是理想的，原因 在于高熔点结晶固体往往易于通过再结晶纯化且储存时稳定。

本发明首次提供了(3S)-3-[N-(N’-(2-叔丁基苯基)草氨酰基)丙氨酰基]氨 基-5-(2’,3’,5’,6’-四氟苯氧基)-4-氧代戊酸的结晶形式。描述了若干种特定 多晶型及其制法。

本发明进一步提供了：一种含有式(I)化合物的结晶形式以及药学上可 接受的赋形剂的药物组合物；一种用作药物的式(I)化合物的结晶形式；一 种用在肝纤维化的治疗中的式(I)化合物的结晶形式；式(I)化合物的结晶形 式用于制造用于治疗肝纤维化的药物的用途；一种治疗哺乳动物中的肝纤 维化的方法，所述方法包括将有效量的式(I)化合物结晶形式施与需要这种 治疗的哺乳动物；以及式(I)化合物的结晶形式与额外的药理活性化合物的 组合。

在优选的方面中，本发明提供了式(I)化合物的若干种特定多晶型。这 些多晶型中的每一种都具有独特的三维结晶构型，其可以通过晶体晶格衍 射电磁辐射(例如粉末X射线衍射、红外光谱、拉曼光谱)、其熔融特性(例 如差示扫描量热)及固态NMR分析等方式进行表征。为了方便，各个多晶 型用罗马数字表示，但该描述符号本身不具有技术意义。

当通过差示扫描量热(DSC)进行分析时，晶型I由于熔融在156℃(±2℃) 时出现吸热尖峰。所观测到的DSC热分析图再现于图1中。当通过粉末X射 线衍射(PXRD)分析时，晶型I具有在7.7、14.1、21.4、26.6及29.4度2θ(±0.1 度)处的独特峰。所观测到的PXRD图样再现于图2中，全体峰列在下表1 中。

表1-晶型I的PXRD数据

当使用固相金刚石外部样品（29.5ppm）作为参照通过固相¹³C NMR 进行分析时，晶型I具有在135.6、127.5及18.8ppm处的独特化学位移。所 观测到的¹³C NMR光谱再现于图3中(用星号标记的峰是自旋边峰)，全体峰 列在表2中。强度值为峰高的测量值，其可根据在数据获知期间所设定的 实验参数以及样品的热历史而发生改变，因此其并不具有任何定量意义。

表2-晶型I的¹³C NMR数据

当使用三氟乙酸(50%体积/体积，在水中)外部样品（-76.54ppm）作 为参照通过固相¹⁹F NMR进行分析时，晶型I具有在-141.9ppm处的独特化 学位移。所观测到的¹⁹F NMR光谱再现于图4中(只示出了光谱的中心谱带 部分)。全体波峰为-138.4、-139.1、-139.4(肩)、-140.9、-141.9、-151.8、- 152.9、-154.2、-154.7(肩)、-156.1及-156.5(肩)ppm。

当通过FT-IR光谱进行分析时，晶型I具有在下列波数下的特征峰： 3354(弱)、3243(中)、3089(弱)、2962(弱)、1741(中)、1718(中)、 1668(中)、1646(强)、1517(强)、1497(强)、1419(弱)、1394(中)、 1335(弱)、1320(弱)、1280(中)、1260(弱)、1212(中)、1179(中)、 1174(弱)、1127(中)、1111(强)、1089(弱)、1032(弱)、1011(中)、973(中)、 941(强)、926(弱)、897(弱)、885(中)、829(中)、759(强)、735(中)、 715(中)、687(弱)、及653(中)cm^-1(±2cm^-1，但在3243下的波峰除外，该波 峰的误差限明显较大)。强度(弱、中、强)是相对于光谱中的主峰。光谱再 现于图5中。

当通过FT-拉曼光谱进行分析时，晶型I具有在下列波数下的特征峰： 3356(弱)、3262(中)、3086(中)、2959(强)、2939(强)、1742(中)、1695(中 强)、1647(弱)、1601(弱)、1541(中)、1451(弱)、1399(弱)、1336(中)、 1271(中强)、1135(弱)、1054(中)、1031(弱)、977(中)、930(弱)、888(中)、 859(弱)、817(弱)、716(中)、688(中)、568(中)、479(中)、439(弱)、 398(中)、340(弱)、223(弱)cm^-1(±2cm^-1，但在2959、1541、1451、1271、 1135、1054、1031、977、930、888、859、716、688、568、479、439、 398及223下波峰除外，这些波峰的误差限为±5cm^-1)。强度(弱、中、中 强、强)是相对于光谱中的主峰。光谱再现于图6中。

当通过DSC进行分析时(参见图7)，晶型II具有在157℃(±2℃)下的吸热 尖峰。当通过PXRD进行分析时(参见图8)，晶型II具有在14.5、17.3、 22.5、25.0及26.8度2θ(±0.1度)下的独特衍射峰。波峰列举在表3中。

表3-晶型II的PXRD数据

当使用固相金刚石外部样品（29.5ppm）作为参照通过固相¹³C NMR 进行分析时，晶型II具有在136.2、131.6、126.1、30.4及17.7ppm处的独特 化学位移。所观测到的¹³C NMR光谱再现于图9中(用星号标记的峰是自旋 边峰)，全体波峰列在表4中。强度值为峰高的测量值，其可根据在数据获 知期间所设定的实验参数以及样品的热历史而发生改变，因此其并不具有 任何定量意义。

表4-晶型II的¹³C NMR数据

当使用三氟乙酸(50%体积/体积，在水中)外部样品（76.54ppm）作为 参照通过固相¹⁹F NMR进行分析时，晶型II具有在-142.2ppm和-153.4ppm 处的独特化学位移。所观测到的¹⁹F NMR光谱再现于图10中(仅仅示出了光 谱的中心谱带部分)。全体波峰为-138.4、-139.2、-140.9、-142.2、-151.8、 -153.0、-153.4、-154.4、-154.9(肩)、-156.2及-156.7(肩)ppm。

当通过FT-IR光谱进行分析时，晶型II具有在下列波数下的特征峰： 3355(弱)、3244(中)、3089(弱)、2962(弱)、1741(中)、1719(中)、 1669(中)、1646(强)、1517(强)、1498(强)、1394(中)、1334(弱)、 1320(弱)、1279(中)、1260(弱)、1211(中)、1180(中)、1174(弱)、 1127(中)、1112(强)、1089(弱)、1031(弱)、1011(中)、973(中)、941(强)、 926(弱)、896(弱)、885(中)、829(中)、759(强)、734(中)、715(中)、 687(弱)、及653(中)cm^-1(±2cm^-1，但在3244下的波峰除外，该波峰的误差 限明显较大)。强度(弱、中、强)是相对于光谱的主峰。光谱再现于图11 中。

当通过FT-拉曼光谱进行分析时，晶型II具有在下列波数下的特征峰： 3356(弱)、3262(中)、3087(中)、2960(强)、2938(强)、1743(中)、1696(中 强)、1647(弱)、1602(弱)、1541(中)、1451(弱)、1400(弱)、1336(中)、 1272(中强)、1136(弱)、1056(中)、1032(弱)、979(中)、930(弱)、888(中)、 861(弱)、818(中)、718(中)、689(中)、570(中)、480(中)、441(弱)、 400(中)、340(弱)、223(弱)cm^-1(±2cm^-1，但在2960、1541、1451、1272、 1136、1056、1032、979、930、888、861、718、689、570、480、441、 400及223下的波峰除外，这些波峰的误差限为±5cm^-1)。强度(弱、中、中 强、强)相对于光谱中的主峰。光谱再现于图12中。

当通过DSC进行分析时(参见图13)，晶型III具有在82℃(±2℃)的宽吸热 峰，峰肩在66℃(±2℃)。当通过PXRD进行分析时(参见图14)，晶型III具有 在7.2度2θ(±0.1度)处的独特衍射峰。全体波峰列举在表5中。

表5-晶型III的PXRD数据

在为了累积前述DSC数据所进行的实验中，使用Perkin Elmer Pyris  Diamond DSC在50微升有孔洞且有盖的铝盘内、采用氮气净化气体，以每 分钟20℃将晶型I及晶型III样品由25℃加热至240℃，将晶型II样品由25℃ 加热至200℃。

在为了累积前述PXRD数据所进行的实验中，晶型I的粉末X射线衍射 图样采用Bruker-AXS公司的D8先进粉末X射线衍射仪测定，该衍射仪装配 有毛细管平台、θ-θ测角器、铜K-α₁主单色仪及Braun位置敏感检测器。将 样品安装于1.0mm的石英毛细管内。样品在旋转的同时采用在40千伏特/40 毫安下操作的X射线管进行铜K-α₁X射线照射(波长＝1.5406埃)。采用以连 续模式操作的测角器进行分析，设定为：在2度至40度的2θ范围内以每 0.007度步长计数6秒。

晶型II的粉末X射线衍射图样采用Bruker-AXS公司的D4粉末X射线衍 射仪测定，该衍射仪装配有自动样品更换器、θ-θ测角器、自动光束发散狭 缝和PSD Vantec-1检测器。通过将样品填充到具有空腔的硅晶圆试样座来 制备分析用样品。样品在旋转的同时采用在40千伏特/30毫安下操作的X射 线管进行铜K-α₁X射线照射(波长＝1.5406埃)。采用以连续模式操作的测角 器进行分析，设定为：在2度至40度的2θ范围内以每0.018度步长计数0.6 秒。

晶型III的粉末X射线衍射图样采用Bruker-AXS公司的D4粉末X射线衍 射仪测定，该衍射仪装配有自动样品更换器、θ-θ测角器、自动光束发散狭 缝和PSD Vantec-1检测器。通过将样品装到具有低背景的硅晶圆试样座来 制备分析用样品。样品在旋转的同时采用在40千伏特/40毫安下操作的X射 线管进行铜K-α₁X射线照射(波长＝1.5406埃)。采用以连续模式操作的测角 器进行分析，设定为：在2度至40度的2θ范围内以每0.018度步长计数0.2 秒。所得波峰相对于硅参考标准校准。

正如本领域普通技术人员所熟知的，表1、3及5中各峰的相对强度可 由于多项因素而改变，诸如X光束中晶体的定向效应，或接受分析的材料 纯度，或样品的结晶度。峰位置也可以相对于样品高度的变化而发生迁 移，但峰位置基本上如表1、3及5所定义。本领域普通技术人员还认识到 使用不同波长进行测量将导致根据布拉格方程(nλ＝2d sinθ)的迁移不同。 通过使用其它波长所产生的这种另外的PXRD图样为本发明结晶材料的 PXRD图样的其它代表图。

为了累积前述固态NMR数据，将约80毫克的每种样品紧密填充于4毫 米的氧化锆旋转器内。在环境条件下采用定位于宽孔Burker-Biospin高级 DSX500MHz NMR光谱仪中的Bruker-Biospin的4毫米BL HFX CPMAS探 针收集光谱。样品在魔角下定向且在15.0kHz下旋转。快速旋转速度使旋 转边锋的强度最小。调整扫描数目，从而获得适当的信噪比。

采用质子去耦魔角旋转(MAS)实验收集¹⁹F固态光谱。所获得的光谱具 有200ppm的光谱宽度。施加约80kHz的质子去耦场，对各个¹⁹F MAS光谱 收集64次扫描。循环延迟被设定为400秒，从而确保获得定量光谱。光谱 参照三氟乙酸(50%v/v，在水中)外标，设定其共振为-76.54ppm。

采用质子去耦交叉极化魔角旋转(CPMAS)实验收集¹³C固态光谱。 Hartman-Hahn接触时间设定为2毫秒。施加约85kHz的质子去耦场，且收 集8192次扫描。循环延迟被调整至3秒。光谱参照结晶金刚烷外标，设定 其高场共振为29.5ppm。

使用ThermoNicolet Avatar FTIR光谱仪获得前述FT-IR光谱，该光谱仪 装配有’Golden Gate^TM’单反射ATR附件(钻石顶面及硒化锌透镜)及DTGS KBr检测器。在2cm^-1的分辨率、共同加成256次扫描下收集该光谱。使用 Happ-Genzel变迹器。因使用单反射ATR纪录FT-IR光谱，所以无需准备样 品。使用ATR FT-IR将造成红外谱带的相对强度与使用KBr片或石蜡糊样 品制剂得到的透射FT-IR光谱中所见谱带的相对强度不同。由于ATR FT-IR 的性质，较低波数处的谱带的强度高于在较高波数处的谱带。除非另行注 明，否则实验误差为±2cm^-1。

使用ThermoNicolet960FT-拉曼光谱仪收集FR-拉曼光谱，该光谱仪装 配有1064纳米的NdYAG激光器及锗检测器。在样品上使用460毫瓦的510毫 瓦的激光功率从而收集晶型II的光谱，其中分辨率为2cm^-1，共同加成8000 次扫描。使用Happ-Genzel变迹器。各样品置于玻璃瓶内，并暴露于激光辐 射下。数据被表示为作为拉曼位移函数的拉曼强度。除非另行注明，否则 实验误差为±2cm^-1。

本发明的结晶形式可通过下述方法制备。本领域普通技术人员将理解 到，化合物特定多晶型的制备有时成问题，并且反应条件的微小变化有时 会导致出乎意料的结果。具体地，在实验进行的气氛下存在晶种可能会对 结果产生决定性影响。但下述方法通常是可靠的。晶型II的多晶型在环境 温度下是热力学上最稳定的，其形成是缓慢结晶的结果。晶型I的多晶型在 环境温度下是在动力学上最有利的产物，其形成是快速结晶技术诸如快速 冷却的结果。采用所需产物播种显然可增加这种制法的成功率。晶型I材料 的制备具体是使用晶型I晶种的结果，由于对改性的天冬酸残基进行差向异 构化，故所述晶型I材料含有非对映异构体的混合物。

晶型I与晶型II的混合物的制备

晶型I与晶型II的混合物可通过如下制备：从乙酸与水的混合物中结晶 无定型的(3S)-3-[N-(N’-(2-叔丁基苯基)草氨酰基)丙氨酰基]氨基-5- (2’,3’,5’,6’-四氟苯氧基)-4-氧代戊酸(或该化合物的任何其它形式)。此种方 法偶尔得到纯晶型I产物。

例如，将(3S)-3-[N-(N’-(2-叔丁基苯基)草氨酰基)丙氨酰基]氨基-5- (2’,3’,5’,6’-四氟苯氧基)-4-氧代戊酸(15.033克)加入装配有磁力搅拌棒的烧 瓶内。搅拌的同时添加乙酸(200毫升)，获得溶液，向该溶液添加活性碳 (1.512克)。将所得黑色悬浮液在环境温度下搅拌10分钟，在真空下过滤， 然后将固体残余物用乙酸(2x40毫升)洗涤两次。将合并的滤液用去离子水 (155毫升)稀释从而获得混浊溶液，当温热至约42℃时该溶液变澄清。加入 额外部分的去离子水(225毫升)，恢复混浊，然后在搅拌的同时将溶液缓慢 冷却至环境温度，从而获得白色结晶物质(晶型I与晶型II的混合物)。

由晶型I与晶型II的混合物不经播晶种制备纯晶型II

纯晶型II可以通过如下制备：将晶型I与晶型II的混合物在乙腈中于室 温浆化，直到完全转化(通常为数日，例如3天)。然后滤出产物，并将其进 行干燥(例如于真空烘箱内)。以下过程是说明性的。

将晶型I与晶型II的40:60混合物(重量比)在乙腈中浆化，然后静置3 天。然后滤出固体产物，并将其在真空烘箱内干燥，从而获得纯晶型II。 此材料需要时被用在下述的进一步实验中作为晶种。

将(3S)-3-[N-(N’-(2-叔丁基苯基)草氨酰基)丙氨酰基]氨基-5-(2’,3’,5’,6’- 四氟苯氧基)-4-氧代戊酸(1.5克，约40:60晶型I：晶型II重量比)在乙腈(13毫 升)中的浆液于室温(22℃)下搅拌3天。通过过滤分离固相，然后将其在真 空下(22℃及25毫巴)干燥16小时，从而获得产率为86%的纯晶型II产物。

纯晶型II还可以通过如下制备：将晶型I与晶型II的混合物在4℃下在选 自于乙酸乙酯、甲苯、乙酸乙酯/水、乙酸乙酯/乙腈及异丙醇(IPA)的溶剂 中浆化数日(例如约5天)。也可通过如下制备纯晶型II：将晶型I与晶型II的 混合物在约50℃下在二氯甲烷或甲基乙基甲酮中浆化。

由晶型I与晶型II的混合物利用播晶种制备纯晶型II

制备(3S)-3-[N-(N’-(2-叔丁基苯基)草氨酰基)丙氨酰基]氨基-5- (2’,3’,5’,6’-四氟苯氧基)-4-氧代戊酸(40克，约90:10晶型I：晶型II重量比)在 异丙醇与水的混合物(400毫升，93:7体积比)中的浆液。以30分钟内将浆液 由22℃加热至60℃，然后将所得溶液在60℃下保持30分钟以达成平衡。此 刻完全溶解。在30分钟内将溶液冷却至25℃，到达25℃时，向过饱和溶液 中播种晶型II的晶体。所用晶种浓度为0.4克或初始进料浓度的1%w/w。将 浆液保持在25℃下4小时，然后在4小时内将其从25℃冷却至0℃，接着保 持在0℃下12小时。将浆液真空过滤，然后将固体产物在50℃的真空烘箱 中干燥60小时。分离出的产物具有80%的产率(32克)。干燥前后样品的 PXRD分析符合晶型II。

由晶型I利用播晶种制备纯晶型II

在装配有三叶后曲式搅拌器(3-blade retreat curve impeller)在250rpm下 操作的烧瓶中制备(3S)-3-[N-(N’-(2-叔丁基苯基)草氨酰基)丙氨酰基]氨基-5- (2’,3’,5’,6’-四氟苯氧基)-4-氧代戊酸(22.5克，100%晶型I)在异丙醇与水的混 合物(300毫升，93:7体积比)中的浆液。在30分钟内将浆液从25℃加热至 50℃。将溶液保持在50℃下30分钟以达成平衡。确保此刻完全溶解。在30 分钟内将溶液冷却至35℃。到达35℃时，向过饱和溶液中播种PF- 3,491,390晶型II。所用晶种的浓度为0.225克或初始进料浓度的1%w/w。本 实验所用晶种被微粉化。将浆液保持在晶种温度即35℃下3小时。在24小 时内将浆液从35℃冷却至-5℃。将浆液保持在-5℃下18小时。真空过滤浆 液，然后将其在50℃的真空烘箱中干燥，从而得到21.6克PF-3,491,390 (95%)。干燥前后样品的PXRD分析符合晶型II。

由晶型I与晶型II的混合物制备纯晶型I

纯晶型I可以通过如下制备：将晶型I与晶型II的混合物于升高的温度 (通常为约50℃)下溶解于最小量的极性有机溶剂(通常为异丙醇(IPA)、四氢 呋喃(THF)或乙酸)，然后通过冷却至较低温度(通常冷却至约4℃，整夜)来 进行结晶。可添加非极性有机溶剂如正庚烷或三氟甲苯(通常被称作反溶剂) 来辅助结晶。以下实验是说明性的

在50℃下，将(3S)-3-[N-(N’-(2-叔丁基苯基)草氨酰基)丙氨酰基]氨基-5- (2’,3’,5’,6’-四氟苯氧基)-4-氧代戊酸(300毫克，约40:60的晶型I：晶型II)溶 于最小量的异丙醇(4毫升)中。然后溶液以0.5℃/分钟冷却至4℃，然后在 4℃下搅拌整夜，从而得到纯晶型I产物。

在50℃下，将(3S)-3-[N-(N’-(2-叔丁基苯基)草氨酰基)丙氨酰基]氨基-5- (2’,3’,5’,6’-四氟苯氧基)-4-氧代戊酸(200毫克，约40:60的晶型I：晶型II)溶 于0.3毫升的四氢呋喃中。添加正庚烷(0.9毫升)作为反溶剂来促成沉淀。将 所得浆液以0.5℃/分钟冷却至4℃，然后在4℃搅拌整夜，从而得到纯晶型I 产物。

在50℃下，将(3S)-3-[N-(N’-(2-叔丁基苯基)草氨酰基)丙氨酰基]氨基-5- (2’,3’,5’,6’-四氟苯氧基)-4-氧代戊酸(200毫克，约40:60的晶型I：晶型II)溶 于0.3毫升的四氢呋喃中。添加三氟甲苯(1.5毫升)作为反溶剂来促成沉淀。 将所得浆液以0.5℃/分钟冷却至4℃，然后在4℃下搅拌整夜，从而得到纯 晶型I产物。

在50℃下，将(3S)-3-[N-(N’-(2-叔丁基苯基)草氨酰基)丙氨酰基]氨基-5- (2’,3’,5’,6’-四氟苯氧基)-4-氧代戊酸(200毫克，约40:60的晶型I：晶型II)溶 于0.8毫升的乙酸中。添加正庚烷(3.5毫升)作为反溶剂来促成沉淀。将所得 浆液以0.5℃/分钟冷却至4℃，然后在4℃下搅拌整夜，从而得到纯晶型I产 物。

由晶型I与晶型II的混合物制备纯晶型III

将(3S)-3-[N-(N’-(2-叔丁基苯基)草氨酰基)丙氨酰基]氨基-5-(2’,3’,5’,6’- 四氟苯氧基)-4-氧代戊酸(41毫克，约75:25的晶型I：晶型II)溶于甲基乙基 甲酮(1毫升)中。过滤溶液，然后使其缓慢蒸发19天，从而得到凝胶。此刻 添加甲苯(10微升)。另外3天后，添加额外量的甲苯(100微升)。另外4天 后，分离与晶型III相对应的结晶物。

由晶型I制备纯晶型III

将(3S)-3-[N-(N’-(2-叔丁基苯基)草氨酰基)丙氨酰基]氨基-5-(2’,3’,5’,6’- 四氟苯氧基)-4-氧代戊酸(50毫克，型I)溶于甲基乙基甲酮(1毫升)中。过滤 所得澄清溶液，然后用甲苯(3毫升)进行稀释，使其在环境温度下蒸发2 天，直到形成不透明材料为止。通过真空过滤收集不透明固体，然后在减 压下风干约10分钟，从而得到47.5毫克晶型III产物。

在另一实验中，将(3S)-3-[N-(N’-(2-叔丁基苯基)草氨酰基)丙氨酰基]氨 基-5-(2’,3’,5’,6’-四氟苯氧基)-4-氧代戊酸(700毫克，型I)超声溶于14毫升2- 丁酮(甲基乙基甲酮)中。将所得澄清溶液滤入烧杯中，然后用甲苯(42毫升) 稀释。将溶液彻底混合，使其在环境温度下蒸发6天，直到形成凝胶状不 透明材料为止。将凝胶状材料在室温下真空过滤约30分钟，从而得到633 毫克晶型III。在另一类似实验中，使2-丁酮/甲苯溶液在室温下蒸发6天。 所制造的固体未经真空过滤或在空气中进一步干燥。产物为晶型III(700毫 克)。

通过苄酯前驱体的脱氢作用(伴以播晶种)来制备纯晶型II

在20℃下搅拌的同时，将(3S)-3-[N-(N’-(2-叔丁基苯基)草氨酰基)丙氨 酰基]氨基-5-(2’,3’,5’,6’-四氟苯氧基)-4-氧代戊酸苄酯(500克，0.758莫耳)添 加至四氢呋喃(2.5升)中。然后加入钯/碳(10%，50克)，以20磅/平方英寸 (psi)将氢气施加到液体上方。4小时后，通过在床上过滤除去催化 剂，然后用四氢呋喃(2x1升)洗涤滤饼。将滤液在30℃、真空下蒸发浓缩至 剩余体积为2升，然后在搅拌的同时在1小时内加入正庚烷。添加晶型II的 晶种(4.32克)，然后在20℃下连续搅拌3小时。然后又加入正庚烷(2.35升)， 接着将悬浮液在20℃下搅拌12小时。然后，在6小时内将悬浮液冷却至- 5℃，此温度下搅拌约1小时，然后过滤。将产物用正庚烷(2x1升)洗涤， 然后在40℃、真空下烘箱干燥16小时，从而得到纯晶型II(389克)。

如前文指示，可以根据专利申请WO-A-00/01666中所述具体方法及通 用方法制备无定型(3S)-3-[N-(N’-(2-叔丁基苯基)草氨酰基)丙氨酰基]氨基-5- (2’,3’,5’,6’-四氟苯氧基)-4-氧代戊酸。该化合物也可通过如下示意图1中所 示途径来制备。当然分离产物所采用的具体程序可能导致制成无定型或者 本发明结结晶形式的其中之一。

在示意图1中，P¹表示适当羧基保护基，诸如苄基。适当保护基的其它 实例可参考Theorora Greene和Peter Wuts的“Protective Groups in Organic  Synthesis”(第三版，1999，John Wiley and Sons)。因此，为了获得式(I)化 合物，使式(II)化合物使用根据保护基P¹适当选择的条件进行脱保护。例如 若P¹为苄基，那么将式(II)化合物在适当溶剂(诸如四氢呋喃)中的溶液用氢 化催化剂(诸如钯/碳)进行处理，然后将其暴露于氢气气氛下。式(II)化合物 可通过使式(III)化合物的酸与式(IV)胺偶联来制备。可以使用诸如盐酸盐的 盐形式的胺(IV)。可以使用任何一种适当的肽偶联剂。在优选的方法中， 将胺(IV)及酸(III)在适当溶剂(诸如四氢呋喃)中的溶液用氯甲酸酯(诸如氯甲 酸异丁酯)及碱(诸如N-甲基吗啉)进行处理。

式(III)化合物可经由如下示意图2所示途径制备，其中R^x为C₁-C₆烷 基，优选为甲基或乙基。

式(III)化合物可以通过如下制备：用适当碱对式(V)化合物进行处理， 从而使酯官能团水解。在优选过程中，将式(V)化合物在适当溶剂(优选为 四氢呋喃)中的溶液用碱金属氢氧化物(优选为氢氧化锂)进行处理。

式(V)化合物可通过使式(VI)酸与式(IX)胺偶联来制备。可选使用盐形 式的式(IX)胺，优选使用盐酸盐形式的式(IX)胺。可以使用任何一种适当 的肽偶联剂。在优选的过程中，在诸如N-甲基吗啉的碱的存在下，将酸 (VI)及胺(IX)在适当溶剂(优选为二甲基甲酰胺)中的溶液用碳二亚胺偶联剂 进行处理。

式(VI)化合物可以通过如下制备：用碱对式(VII)化合物进行处理，从 而使酯官能团水解。在优选过程中，将式(VI)化合物在适当溶剂(优选为甲 苯)中的溶液用碱金属氢氧化物(优选为氢氧化钠)进行处理。

式(VII)化合物可以通过如下制备：在胺碱的存在下，用式(X)化合物 对式(VIII)胺进行处理。在优选过程中，将化合物(VIII)及化合物(X)于适当 溶剂(优选为甲苯)中的溶液用三乙胺进行处理。

式(IV)化合物(参见示意图1)可通过如下示意图3所示途径制备，其中P¹如前文定义，P²为适当的胺保护基(优选为叔丁氧羰基BOC)。适当的胺保 护基的实例可参考Theorora Greene和Peter Wuts的“Protective Groups in  Organic Synthesis”(第三版，1999，John Wiley and Sons)。

式(IV)化合物可通过如下制备：使用根据保护基P²而适当选定的条件 使式(XI)化合物脱保护。例如，如果P¹为叔丁氧羰基，那么将式(XI)化合物 在适当溶剂(优选为乙酸乙酯)中的溶液用酸(优选为盐酸)进行处理。须审慎 选择保护基P¹及P²，结果除去保护基P²所需条件不会除去保护基P¹。

式(XI)化合物可通过如下制备：采用通过2,3,5,6-四氟苯酚去质子化而 衍生得到的苯酚酸根阴离子来替代式(XII)化合物中的溴基。优选使用苯酚 的碱金属盐，最优选使用钾盐。因此，适当的去质子化试剂为氢化钠或氢 化钾。在优选的过程中，在亲核催化剂(优选为碘化钠)的存在下，将式(XII) 化合物在适当溶剂(优选为丙酮)中的溶液用去质子化的苯酚进行处理。

式(XII)化合物可通过如下制备：使式(XIII)酸在重氮甲烷的媒介中进 行同系化作用（homologation）。在典型过程中，将式(XIII)化合物在适当 溶剂(优选为四氢呋喃)中的溶液依次用(a)氯甲酸酯(优选为氯甲酸异丁酯) 及碱(优选为N-甲基吗啉)，(b)重氮甲烷及(c)溴化氢进行处理。

在前述过程中所使用的化合物(其制法未进行描述)诸如式(VIII)、 (IX)、(X)及(XIII)化合物为市售化合物以及/或者可在本领域普通技术人员 的公知常识的范围内通过常规过程来制备。

式(XII)化合物也可通过如下制备：在碱的存在下，用三甲基氧化锍 ((CH₃)₃S=O)对下式化合物进行处理：

其中P¹及P²如前文定义；随后添加溴阴离子源(例如溴化氢或溴化 锂)。

式(V)化合物也可通过如下以一锅法来制备：先后用草酰氯(ClCOCOCl) 和2-叔丁基苯胺对下式化合物：或其酸盐(特别为盐酸盐)进行处理：

式(XI)化合物还可以通过如下示意图4所示途径来制备。P¹及P²为前文 定义的保护基。在优选的实施方式中，P¹为苄基及P²为叔丁氧羰基。

式(XI)化合物可由此通过如下制备：使式(XVI)化合物进行选择性水解 和脱羧化。须小心确保化合物(XVI)的甲酯部分比被保护的羰基-CO₂P¹（特 别在后种基团也可为酯的情况下）具有更高的反应性，因而更易水解。典 型的水解试剂为氢氧化钠。

式(XVI)化合物可通过如下制备：使式(XIII)化合物活化，然后用双重 去质子化形式的式(XVII)化合物对活化物进行处理。亲核加成反应发生后 接着发生去羧化反应。活化可以通过如下来实现：用酰胺偶联剂诸如碳二 亚胺对式(XIII)化合物进行处理。

式(XVII)化合物可通过如下制备:用去质子化形式的2,3,5,6-四氟苯对α-氯- 丙二酸二甲基酯进行处理，然后使产物中的甲酯基团之一进行选择性水解。

式(XI)化合物也可通过示意图5所示途径来制备。P¹及P²为前文定义的 保护基。在优选的实施方式中，P¹为苄基，P²为叔丁氧羰基。

式(XI)化合物可由此通过如下制备：使式(XVIII)化合物进行选择性双 重水解和脱羧化。须小心确保化合物(XVIII)的甲酯部分比被保护的羰基- CO₂P¹（特别在后种基团也可为酯的情况下）具有更高的反应性，因而更 易水解。典型的水解试剂为氢氧化钠。

式(XVIII)化合物可通过如下制备：使式(XIII)化合物活化，然后用去 质子化形式的式(XIX)化合物对活化物进行处理。活化可以通过如下来实 现：用酰胺偶联剂诸如碳二亚胺对式(XIII)化合物进行处理。

式(XIX)化合物可通过如下制备：用去质子化形式的2,3,5,6-四氟苯对 α-氯-丙二酸二甲基酯进行处理。

式(XI)化合物也可通过如下制备：使式(XIII)化合物(其中P¹及P²为前文 定义保护基，优选分别为苄基和叔丁氧羰基)活化，然后用双重去质子化形 式的下式化合物对活和物进行处理：

活化可通过如下来实现：用酰胺偶联剂诸如碳二亚胺对式(XIII)化合物进行 处理。

式(XX)化合物也可通过如下：用去质子化形式的2,3,5,6-四氟苯酚对2- 位置具有离去基团的乙酸衍生物(例如2-氯乙酸)进行处理。

式(XI)化合物也可如示意图6所示来制备。P¹及P²为前文定义的保护 基。在优选的实施方式中，P¹为苄基，P²为叔丁氧羰基。

式(XI)化合物可通过如下制备：采用通过2,3,5,6-四氟苯酚去质子化而 衍生得到的苯酚酸根阴离子来替代式(XXI)化合物中的氯基。优选使用苯 酚的碱金属盐，最优选使用钾盐。因此，适当的去质子化试剂为氢化钠或 氢化钾。在优选的过程中，在亲核催化剂(优选为碘化钠)的存在下，将式 (XXI)化合物在适当溶剂(优选为丙酮)中的溶液用去质子化的苯酚进行处 理。

式(XXI)化合物可通过如下制备：使式(XIII)化合物活化，然后用双重 去质子化形式的2-氯乙酸对活化物进行处理。活化也可通过如下实现：转 化成酯，或用酰胺偶联剂诸如碳二亚胺进行处理。在优选的过程中，将氯 乙酸钠在适当溶剂(诸如四氢呋喃)中的溶液用氯化锌及二异丙基氨基溴化 镁进行处理，然后加入式(XIII)化合物的甲酯溶液中。

药物必须适合配制成根据期望的给药途径所选定的剂型。最常见的药 学制剂为片剂或胶囊，这种剂型易于且便于通过口服途径给药。为了配制 成为片剂或胶囊，药物应当为非吸湿性且可压缩。吸湿性可能导致加工问 题及储存寿命短的问题-即在加工步骤期间由于水的摄入而导致材料强度改 变，而且水的摄入可能导致流动特性不良(即发粘)。适当药物还应当具有 溶解度及溶解速率，这些会导致暴露于胃部环境时生物利用率较高。前述 (3S)-3-[N-(N’-(2-叔丁基苯基)草氨酰基)丙氨酰基]氨基-5-(2’,3’,5’,6’-四氟苯 氧基)-4-氧代戊酸的结晶形式具有这种优异性质，适合配制成为片剂及胶 囊。晶型II特别适合。

使用动态水蒸气吸附(DVS)评估晶型I及晶型II的吸湿性。样品采用 Surface Measurement System Ltd的型号为DVS-1的动态水蒸气吸附设备进 行表征。在30℃下以200cc/分钟的氮气流进行分析。水的吸附及解吸附在0 至90%相对湿度(RH)的范围内进行测定，间隔15%RH。暴露于各个湿度下 至少两小时，或暴露直到重量变化速率小于0.0005%/分钟为止(10分钟的平 均值)。样品重量在23-36毫克的范围内。样品用CAHN D-200七位纪录天平 进行称重，其整个设备的主要部分。结果列在表6及表7中，且在图15及16 中作图。

表6-晶型I的水吸附数据

表7-晶型II的水吸附数据

本发明包括由本发明所提供的结晶形式的药学上可接受的经同位素标 记的全部变体。在经同位素标记的变体中，一个或多个原子被具有相同原 子数但原子量或质量数与自然界中占优势的原子量或质量数不同的原子替 换。

适当同位素包括氢同位素诸如²H及³H；碳同位素诸如¹¹C、¹³C及¹⁴C； 氮同位素诸如¹³N及¹⁵N；氧同位素诸如¹⁵O、¹⁷O及¹⁸O；及硫同位素诸如 ³⁵S。

某些经同位素标记的化合物诸如掺有放射性同位素的化合物也可用在 药物及/或底物组织分布研究中。放射性同位素氚即³H及碳-14即¹⁴C由于其 容易掺入且便于检测所以特别可用于此项目的。

用较重的同位素诸如氘即²H取代，由于具有代谢稳定性更高例如体内 半衰期更长及剂量需求减低，因而可获得某些治疗优势，因此在某些情况 下是优选的。

用正电子发射同位素诸如¹¹C、¹⁸F、¹⁵O及¹³N取代可用在正电子发射断 层扫描(PET)研究中用于检验底物受体的占据率。

经同位素标记的化合物可通过本领域普通技术人员熟知的常用技术来 制备，其中用适当的经同位素标记的试剂替代先前所使用的未经标记的试 剂。

如WO-A-00/01666所述，(3S)-3-[N-(N’-(2-叔丁基苯基)草氨酰基)丙氨 酰基]氨基-5-(2’,3’,5’,6’-四氟苯氧基)-4-氧代戊酸为抑制细胞凋亡的不可逆 Pan-caspase抑制剂，因此，本发明所提供的这种化合物的结晶形式可有利 地用于治疗下述范围内的疾病，包括感染疾病(例如脑膜炎、输卵管炎)、 败血性休克、呼吸道疾病、发炎病症(例如关节炎、胆管炎、大肠炎、脑 炎、肝炎、胆道闭锁、晶状体结痂、胰炎、再灌流伤害)、缺血性疾病(例 如心肌梗塞、中风、缺血性肾病)、免疫方面的疾病(例如过敏)、自体免疫 疾病(例如多发性硬化)、骨病、II型糖尿病(胰岛素抗阻降低)及神经退化疾 病(例如Alzheimer氏疾病、Parkinson氏疾病)。它们也可用在化疗或放射性 治疗之后使造血细胞再生，以及用在移植(特别为肝脏移植)中延长器官的 存活率。Caspase抑制剂进一步可用于扩大或增加体外细胞群的存活率，因 此在提高生物制造效率方面有用。

本发明的结晶形式特别可用于治疗及预防肝纤维化。肝纤维化是身体 试图处理各型肝炎(肝脏发炎)的结果，因而导致肝受损、肝硬化及最终导 致死亡。纤维化(结痂)由胶原蛋白沉积所引起，其导致肝功能减低，最终 导致肝硬化。如果硬化的肝脏未接受移植，那么可能导致死亡。导致纤维 化的肝炎可能由对肝脏在一定范围内的各类伤害所引起，包括病毒感染(特 别为B型肝炎及C型肝炎)、过量脂肪沉淀(非酒精性脂肪肝炎(NASH))及酒 精沉积。

本发明所提供的(3S)-3-[N-(N’-(2-叔丁基苯基)草氨酰基)丙氨酰基]氨基 -5-(2’,3’,5’,6’-四氟苯氧基)-4-氧代戊酸的结晶形式(此后被称作本发明的化 合物)可单独服用，但通常结合一种或多种药学上可接受的赋形剂以制剂形 式服用。本文所用术语“赋形剂”用来描述本发明化合物以外的任何成分。 对赋形剂的选择在很大程度上取决于多项因素，诸如特定给药模式、赋形 剂对溶解度及稳定性的影响及剂型的性质。

适合输送本发明化合物的药学组合物及其制法对本领域普通技术人员 来说显然易知。这种组合物及其制法例如可参见Remington’s  Pharmaceutical Sciences，第19版(Mack出版公司，1995年)。

本发明化合物可经口服用。口服可以包括吞服，结果化合物进入胃肠 道，或可经颊给药或舌下给药，通过该过程化合物由口腔直接进入血流。

适合经口服用的制剂包括诸如片剂的固体制剂、含有微粒的胶囊、液 体或散剂、锭剂(包括被液体填充的锭剂)、咀嚼片、微米颗粒及纳米颗 粒、凝胶、固态溶液、脂质体、薄膜、卵状剂、喷雾剂及液体制剂。

液体制剂包括悬浮液、溶液、糖浆及酏剂。这种制剂可用作软胶囊或 硬胶囊的填充剂，通常包含载剂，例如水、乙醇、聚乙二醇、丙二醇、甲 基纤维素或适当油，以及一种或多种乳化剂及/或悬浮剂。液体制剂还可通 过如下制备：由固体重新配制，例如由小药囊重新配制。

本发明化合物还可以呈快速溶解、快速崩解的剂型形式使用，诸如由 Liang和Chen(2001)在Expret Opinion in Therapeutic Patents,11(6)，981-986 中所述的那些剂型。

对于片剂剂型，根据剂量本发明的化合物占剂型的1重量%至80重 量%，更典型占剂型的5重量%至60重量%。

此外，片剂通常含有崩解剂。崩解剂的实例包括淀粉乙醇酸钠、羧甲 基纤维素钠、羧甲基纤维素钙、交联甲基纤维素钠、交联聚维酮 (crospovidone)、聚乙烯基吡咯烷酮、甲基纤维素、微晶纤维素、低级烷基 取代的羟基丙基纤维素、淀粉、预胶化淀粉及褐藻酸钠。通常，崩解剂系 占剂型的1重量%至25重量%，优选占剂型的5重量%至20重量%。

粘结剂通常也可用于为片剂制剂提供内聚性质。适当的粘结剂包括微 晶纤维素、明胶、糖类、聚乙二醇、天然树胶及合成树胶、聚乙烯基吡咯 烷酮、预胶化淀粉、羟丙基纤维素及羟丙基甲基纤维素。片剂还可以包含 稀释剂诸如乳糖(一水合物、喷雾干燥的一水合物、无水合物等)、甘露糖 醇、木糖醇、右旋糖、蔗糖、山梨糖醇、微晶纤维素、淀粉和磷酸氢钙二 水合物。

片剂还可选包含表面活性剂诸如月桂基硫酸钠及多乙氧基醚 （polysorbate-80）；以及滑动剂诸如二氧化硅及滑石。表面活性剂存在时 可占片剂的0.2重量%至5重量%，滑动剂可占锭剂的0.2重量%至1重量%。

片剂通常还含有润滑剂，诸如硬脂酸镁、硬脂酸钙、硬脂酸锌、硬脂 基富马酸钠以及硬脂酸镁与月桂基硫酸钠的混合物。润滑剂通常占片剂的 0.25重量%至10重量%，优选占0.5重量%至3重量%。

其它可能的片剂成分包括抗氧化剂、着色剂、调味剂、防腐剂及掩味 剂。

示例性片剂含有高达约80%的药物，约10重量%至约90重量%的粘结 剂，约0重量%至约85重量%的稀释剂，约2重量%至约10重量%的崩解剂以 及约0.25重量%至约10重量%的润滑剂。

片剂共混物可被直接压成片剂，或可通过辊压被压成片剂。在制片之 前，可以使片剂共混物或部分共混物进行湿法造粒、干法造粒或熔体造 粒，熔体聚结或挤出。最终的制剂可以包含一层或多层，可被包衣或未被 包衣；甚至可被封装。

在H.Lieberman和L.Lachman的Pharmaceutical Dosage Forms： Tablets，Vol.1(Marcel Dekker，New York，1980)中对片剂的配方进行了讨 论。

本发明化合物还可以为可消耗口服薄膜形式供人类使用或动物使用。 这种薄膜通常为软性水溶性薄膜剂型或水可溶胀性薄膜剂型，其可快速溶 解或吸附于粘膜，通常包含本发明的化合物、成膜聚合物、粘结剂、溶 剂、湿润剂、增塑剂、稳定剂或乳化剂、粘度调节剂及溶剂。该制剂中的 一些组分可起到一项以上的功能。

成膜聚合物可选自于天然多醣、蛋白质或合成水状胶体，其含量通常 在0.01重量%至99重量%的范围内，更常见在30重量%至80重量%的范围 内。

其它可能的薄膜组分包括抗氧化剂、着色剂、调味剂及风味增强剂、 防腐剂、唾液分泌刺激剂、冷却剂、共溶剂(包括油类)、软化剂、增量 剂、消泡剂、表面活性剂及掩味剂。

根据本发明的薄膜通常通过如下制备：将涂覆于具有可玻璃衬底的撑 体或纸张上的水性薄膜蒸发干燥。这可以在干燥烘箱或管道中进行，通常 在组合的涂覆器干燥器中进行，或者通过冻干或真空干燥进行。

口服的固体制剂可被配制成即刻释放及/或改性释放、延迟释放、持续 释放、脉冲式释放、控制释放、靶向释放及程序式释放。

美国专利6,106,864中描述了适用于本发明目的的改性的释放制剂。其 它适当释放技术诸如高能分散及渗透颗粒及包衣颗粒的细节可参照Verma 等人(2001)的Pharmaceutical Technology On-line,25(2)，1-14。WO-A- 00/35298中描述了使用咀嚼树胶来达到控制释放。

本发明化合物还可以直接施与血流中、肌肉中或内部器官中。此种肠 道外给药可通过静脉、动脉、腹内、鞘内、脑室内、尿道内、胸内、颅 内、肌肉或皮下途径给药。肠道外给药的适当装置包括有针(包括微针)注 射器、无针注射器及输注技术。

肠道外制剂通常为水性溶液剂，其可包含赋形剂诸如盐类、碳水化合 物类及缓冲剂(优选pH为3至9)，但对于一些应用，它们更适于配制成无菌 非水性溶液，或呈干燥形式结合适当载剂诸如无菌无热源水使用。

在无菌条件下例如通过冻干来制备肠道外制剂便于采用本领域普通技 术人员所熟知的标准制药技术来实现。

肠道外给药用的制剂可被配制成即刻释放及/或改性释放。改性释放包 括延迟释放、持续释放、脉冲式释放、控制释放、靶向释放、程序释放。 因此，本发明的化合物可被配制成固体、半固体或触变性液体，作为植入 型长效剂以使本发明的化合物呈改性释放，从而实现给药。这种制剂的实 例包括涂药支架及聚(dl-乳酸-共聚乙醇酸)(PGLA)微球。

本发明化合物也可局部施予皮肤或粘膜，即经皮给药或穿皮给药。用 于该目的的典型制剂包括凝胶、水凝胶、洗剂、溶液、乳膏、软膏、干 粉、敷料、泡沫、薄膜、皮肤贴片、糊剂、植入剂、海绵、纤维、绷带及 微乳液。也可使用脂质体。典型的载剂包括醇、水、矿油、液体石蜡、白 软石蜡、甘油、聚乙二醇及丙二醇。也可掺入穿透促进剂，参考例如Finin 和Morgan的J.Pharm.Sci.,88(10),955-958,(1999年10月)。其它局部给药方 式包括通过电泳、离子泳、光子泳、声波泳及微针注射或无针注射(例如 Powderject^TM，Bioject^TM)输送。

局部给药用制剂可被配制成即刻释放及/或改性释放。改性释放包括延 迟释放、持续释放、脉冲式释放、控制释放、靶向释放、及程序释放。

本发明化合物也可经鼻给药或吸入给药，通常呈干粉形式(单独或呈混 合物，例如与乳糖的干共混物；或呈混合成分颗粒，例如与诸如磷脂基胆 碱的磷脂质混合)由干粉吸入器给药，或呈气溶胶喷雾由加压容器、泵、喷 洒器、喷雾器(优选为使用电液动力学制造细雾的喷雾器)或雾化器给药， 其可使用适当推进剂诸如1,1,1,2-四氟乙烷或1,1,1,2,3,3,3-七氟丙烷或不使 用适当推进剂。对于鼻内使用，粉剂可包含生物粘着剂例如甲壳聚糖或环 糊精。

加压容器、泵、喷洒器、喷雾器或雾化器包含本发明化合物的溶液或 分散液，这些溶液或分散液包含例如乙醇，水性乙醇，或其它使活性成分 分散、增溶或延迟释放的试剂，呈溶剂形式的推进剂以及任选的表面活性 剂诸如三油酸山梨糖醇酯、油酸或低聚乳酸。

用于干粉制剂或悬浮制剂以前，将药品产物微粉化至适于通过吸入输 送的尺寸(通常小于5微米)。微粉化可通过任何适当的研磨方法达成，诸如 通过螺旋喷射研磨、流体床喷射研磨、超临界流体加工形成纳米颗粒、高 压均化或喷雾干燥。

用于吸入器或吹入器中的胶囊(例如由明胶或羟丙基甲基纤维素制 成)、泡囊剂及弹药剂可被配制成含有本发明化合物、适当粉末基质诸如乳 糖或淀粉以及效能修改剂诸如l-亮氨酸、甘露糖醇或硬脂酸镁的粉末混合 物。乳糖可为无水形式或呈一水合物形式，优选为后者。其它适当的赋形 剂包括右旋糖、葡萄糖、麦芽糖、山梨糖醇、木糖醇、果糖、蔗糖及海藻 糖。

适合用在使用电液力学制造细雾的喷雾器中的溶液制剂每次作动时含 有1微克至20毫克的本发明化合物，作动体积可以在1微升至100微升之间 变化。典型的制剂可以包含本发明的化合物、丙二醇、无菌水、乙醇及氯 化钠。可用来替代丙二醇的其它溶剂包括甘油及聚乙二醇。

适当调味剂诸如薄荷脑及左旋薄荷脑，或甜味剂诸如糖精或糖精钠可 被添加到意欲通过吸入/经鼻给药的本发明的这种制剂中。

吸入/经鼻给药用制剂可例如使用PGLA配制成即刻释放及/或改性释 放。改性释放包括延迟释放、持续释放、脉冲式释放、控制释放、靶向释 放、及程序释放。

在干粉吸入剂及喷雾剂的情况下，剂量单位由输送计量量的阀来确 定。总每日剂量可以采用单一剂量方式施与，更常见在一天内以多次剂量 方式施与。

本发明化合物也可为例如栓剂、子宫托或灌肠剂的形式经直肠或经阴 道施与。可可脂为传统栓剂基质，但如果适当也可使用多种替代品。

直肠/阴道投药用制剂可被配制成即刻释放及/或改性释放。改性释放 包括延迟释放、持续释放、脉冲式释放、控制释放、靶向释放、及程序释 放。

本发明化合物也可直接施与眼或耳，通常以在等压pH经调整的无菌盐 水中的微粉化悬浮液或溶液的滴剂形式施与。其它适合经眼给药及经耳给 药的制剂包括软膏剂、可生物降解(例如可吸收凝胶海绵、胶原蛋白)及不 可生物降解(例如聚硅氧烷)的植入物、糊剂、镜片及颗粒系统或泡囊系 统，诸如泡囊（niosome）或脂质体。聚合物诸如交联聚丙烯酸、聚乙烯 醇、透明质酸、纤维素聚合物（例如羟丙基甲基纤维素、羟乙基纤维素或 甲基纤维素）或杂多醣聚合物（例如gelan胶）可连同防腐剂诸如苯扎氯铵 一起混杂。这种制剂可通过离子泳输送。

经眼/经耳给药用制剂可被配制成即刻释放及/或改性释放。改性释放 包括延迟释放、持续释放、脉冲式释放、控制释放、靶向释放、及程序释 放。

本发明化合物可与可溶性大分子实体组合，诸如与环糊精或其适当衍 生物或含聚乙二醇的聚合物组合，从而改善溶解度、溶解速率、口味遮盖 性、生物利用率及/或以前述任一种给药模式使用的稳定性。

举例药物环糊精复合物通常可用于大部分剂型及给药途径。可使用包 合物及非包合物二者。作为与药物直接复合的替代方式，可使用环糊精作 为辅助添加剂，即作为载剂、稀释剂、或增溶剂。最常用于此等目的的使 α-环糊精、β-环糊精及γ-环糊精，其实例可参考WO-A-91/11171、WO-A- 94/02518及WO-A-98/55148。

对于人类患者服用，本发明化合物的总每日剂量通常在0.01毫克/千克 至100毫克/千克的范围内，当然依据给药模式而定。通过口服途径每名患 者的总每日剂量在1毫克至100毫克的范围内。总每日剂量可以采用单一剂 量方式施与或多次剂量方式施与，根据医嘱，可以落在本文所给出的典型 范围以外。

为了避免疑问，本文中所述治疗包括治疗性治疗、安慰性治疗及预防 性治疗。

Pan-caspase抑制剂(具体为(3S)-3-[N-(N’-(2-叔丁基苯基)草氨酰基)丙氨 酰基]氨基-5-(2’,3’,5’,6’-四氟苯氧基)-4-氧代戊酸，最具体为本发明结晶形 式的其中之一)具体在肝纤维化的治疗中可与其它药理活性化合物组合，或 与两种或多种其它药理活性化合物组合。例如，这种抑制剂可与选自于下 列的一种或多种药剂组合同时、依次或分别施与：

·抗病毒剂诸如利巴威灵(ribaviron)或干扰素；

·CCR-5拮抗剂；

·胰岛素敏化剂诸如美佛明(metformin)；

·肝脏保护剂诸如维生素E、盘妥喜菲林(pentoxiphylline)、菜碱或熊 去氧胆酸；

·降脂剂诸如亚康里亚(accomplia)、偶里史泰(orlistat)、费布瑞特 (fibrates)或消胆胺(cholestyramine)；

·HMG-CoA还原酶抑制剂诸如亚妥乏塔汀(atorvastatin)；

·葛塔宗(glitasone)

·生物剂诸如抗-TNFα抗体或抗-MAdCAM抗体；及

·免疫抑制剂诸如环孢灵(cyclosporine)或塔克里莫(tacrolimus)；

以及如果适当，上述药剂的药学上可接受盐及溶剂化物。

因此期望施与组合的活性化合物，所以两种或多种药学组合物落在本 发明的范围内，其中的至少一种含有本发明化合物，并且便于以适于共同 施与组合物的试剂盒形式组合。

这种试剂盒含有两种或多种单独的药学组合物，其中的至少一种含有 本发明化合物以及单独保有所述组合物的装置，诸如容器、分装瓶或分装 泡罩。这种试剂盒的实例为所熟知的用于包装锭剂、胶囊剂等的泡罩板包 装。

这种试剂盒特别适合施与不同剂型，例如口服剂型及肠道外剂型；适 合施与以不同用药间隔施与的单独组合物；或者适合相对于彼此滴定分开 的组合物。为了提高依从性，试剂盒通常包含服药说明并且可提供所谓的 记忆辅助。