一种生姜再生植株的诱导方法

摘要

本发明公开了一种生姜再生植株的诱导方法，包括种姜催芽、姜芽消毒处理、芽尖接种、继代增殖、生根培养、炼苗移栽步骤；由于生姜长期埋于地下，易感染多种病菌，本发明聚维酮碘和次氯酸钠配合使用的消毒方法可以最大程度的消毒灭菌却不损害姜芽的生长；6-BA和NAA可促进生姜幼芽发生，且具有相互增益效应，对生姜快繁有明显的影响，芽的再生率高达89%；低浓度的NAA具有促进姜芽申根的功效，芽的生根率可以达到67%。

说明书

技术领域

本发明涉及植物组织培养技术领域，具体涉及一种生姜再生植株的诱导方法。

背景技术

生姜（Zingiber officinale Rosc.）为姜科姜属多年生草本植物，是香料家族和药用植物的主要成员，含蛋白质、粗脂肪、碳水化合物及各种维生素和矿物质，其经济价值较高，在食品工业和医药上具有较好的应用前景，是我国出口创汇的中药蔬菜之一。但生姜以老熟地下根状茎无性繁殖为主，其繁殖系数低，因而栽培成本高。应用组织培养技术可对优良生姜品种进行快速繁殖以满足生产需要，目前，对生姜的组织培养技术的研究比较成熟，但是，多以生长点、茎尖、叶鞘切段、根状茎作为外植体进行离体培养研究，这些研究结果为生姜的快繁提供了一定的技术基础，因为这些外植体的选用极大的耗费了生姜的原有资源，所以离生产需要还有一定距离，

本实验以生姜芽尖作外植体进行培养,以期为生姜优良品种的组培快繁提供更进一步的技术参考。

发明内容

针对现有技术存在的缺陷，本发明所要解决的技术问题是提供一种生姜再生植株的诱导方法，以生姜的芽尖作为外植体进行组织培养，为生姜优良品种的组织培养快繁体系提供技术参考。

为了解决上述技术问题，本发明的技术方案如下：一种生姜再生植株的诱导方法，包括如下步骤：

（1）种姜催芽：挑选块大、肉厚、无腐烂、无病害的健壮姜块作为种姜，将种姜用自来水冲洗干净后置于体积浓度为1-10%的次氯酸钠溶液中消毒3-8min，用无菌蒸馏水冲洗3-5次后埋于消毒过的沙土中，沙土的湿度保持40-60%，在25±2℃下培养2-3周至芽长为1-2cm；

（2）姜芽消毒处理：将步骤1中长度为1-2cm的姜芽从种姜上掰下，剥去表层叶片，在无菌操作台中进行处理，先用无菌水清洗3次，然后放入体积浓度为75%的乙醇中消毒30s，再用质量浓度为5-10%的聚维酮碘消毒5-10min，最后放入体积浓度为1-5%的次氯酸钠溶液中消毒1-5min，无菌水冲洗4次后用无菌滤纸吸干姜芽表面的水分；

（3）芽尖接种：用无菌解剖针一层一层的剥离姜芽的叶片，只剩最后2-4片叶片的姜芽为接种所用的芽尖，将芽尖接种于诱导培养基中诱导丛生芽的形成，培养条件为温度22±2℃、光强1500-2000Lx，光照时间8h；

（4）继代增殖：当步骤3中生成的丛生芽长度为-3cm时，在无菌操作台中用无菌蒸馏水冲洗丛生芽，将丛生芽基部的培养基冲洗干净；然后将丛生芽分成单芽，将单芽转入增殖培养基中进行继代增殖培养，每三个星期继代一次，继代培养条件为温度22±2℃、光强1500-2000Lx，光照时间12h；

（5）生根培养：当步骤4中的单芽长度达到3-4cm时即可进行生根壮苗培养，将长度为3-4cm的单芽从培养基中取出，无菌蒸馏水冲洗干净单芽基部的培养基，接种于生根培养基中培养2-3周至百色的根形成，培养条件为温度25±2℃、光强1500-2000Lx，光照时间12h；

（6）炼苗移栽：步骤5中的单芽形成根后，当根的长度为1-2cm时即可进行炼苗，炼苗时，先将生好根的瓶苗搬到室外，在自然条件下炼苗5-7d，再将瓶盖打开炼苗2-3d，然后将苗取出洗干净培养基，移栽到经消毒的浇透水的蛭石中炼苗10-15d，最后移栽到大田中即可。

进一步的，所述的诱导培养基的配方为：1L MS培养基中添加6-BA1-5mg、NAA0.5-2mg、蔗糖30g、琼脂7g，pH值为5.5-5.8。

进一步的，所述的继代培养基的配方为：1L MS培养基中添加6-BA0.5-2.5mg、NAA 0.1-0.5mg、蔗糖30g、琼脂7g，pH值为5.5-5.8。

进一步的，所述的生根培养基的配方为1L MS培养基中添加NAA 0.05-0.2 mg、蔗糖25g、琼脂5g，pH值为5.5-5.8。

本发明的有益效果是：由于生姜长期埋于地下，易感染多种病菌，本发明的消毒方法可以最大程度的消毒灭菌却不损害姜芽的生长；6-BA和NAA可促进生姜幼芽发生，且具有相互增益效应，对生姜快繁有明显的影响，芽的再生率高达89%；低浓度的NAA具有促进姜芽申根的功效，芽的生根率可以达到67%。

具体实施方式

以下通过实施例进一步阐述本发明的有益效果：

实施例1：

一种生姜再生植株的诱导方法，包括如下步骤：

（1）种姜催芽：挑选块大、肉厚、无腐烂、无病害的健壮姜块作为种姜，将种姜用自来水冲洗干净后置于体积浓度为5%的次氯酸钠溶液中消毒5min，用无菌蒸馏水冲洗3-5次后埋于消毒过的沙土中，沙土的湿度保持40-60%，在25±2℃下培养2-3周至芽长为1-2cm；

（2）姜芽消毒处理：将步骤1中长度为1-2cm的姜芽从种姜上掰下，剥去表层叶片，在无菌操作台中进行处理，先用无菌水清洗3次，然后放入体积浓度为75%的乙醇中消毒30s，再用质量浓度为3%的聚维酮碘消毒8min，最后放入体积浓度为3%的次氯酸钠溶液中消毒3min，无菌水冲洗4次后用无菌滤纸吸干姜芽表面的水分；

（3）芽尖接种：用无菌解剖针一层一层的剥离姜芽的叶片，只剩最后2-4片叶片的姜芽为接种所用的芽尖，将芽尖接种于诱导培养基中诱导丛生芽的形成，培养条件为温度22±2℃、光强1500-2000Lx，光照时间8h；诱导培养基的配方为：1L MS培养基中添加6-BA 2mg、NAA 1mg、蔗糖30g、琼脂7g，pH值为5.5-5.8；培养15-21d天有大量的丛生芽形成，共接种100个芽尖，其中有89个芽尖形成丛生芽，诱导率达到89%，共形成207个新芽；

（4）继代增殖：当步骤3中生成的丛生芽长度为-3cm时，在无菌操作台中用无菌蒸馏水冲洗丛生芽，将丛生芽基部的培养基冲洗干净；然后将丛生芽分成单芽，将单芽转入增殖培养基中进行继代增殖培养，每三个星期继代一次，继代培养条件为温度22±2℃、光强1500-2000Lx，光照时间12h；继代培养基的配方为：1L MS培养基中添加6-BA 1mg、NAA 0.3mg、蔗糖30g、琼脂7g，pH值为5.5-5.8；

（5）生根培养：当步骤4中的单芽长度达到3-4cm时即可进行生根壮苗培养，将长度为3-4cm的单芽从培养基中取出，无菌蒸馏水冲洗干净单芽基部的培养基，接种于生根培养基中培养2-3周至百色的根形成，培养条件为温度25±2℃、光强1500-2000Lx，光照时间12h；生根培养基的配方为1L MS培养基中添加NAA 0.08mg、蔗糖25g、琼脂5g，pH值为5.5-5.8；共接种100个新生芽，其中有67个芽形成根，生根率为67%；

（6）炼苗移栽：步骤5中的单芽形成根后，当根的长度为1-2cm时即可进行炼苗，炼苗时，先将生好根的瓶苗搬到室外，在自然条件下炼苗5-7d，再将瓶盖打开炼苗2-3d，然后将苗取出洗干净培养基，移栽到经消毒的浇透水的蛭石中炼苗10-15d，最后移栽到大田中即可。

实施例2：

操作方法与实施例1相同，所不同的是步骤3中诱导培养基的配方为：1L MS培养基中添加6-BA 1mg、NAA 0.5mg、蔗糖30g、琼脂7g，pH值为5.5-5.8，共接种100个芽尖，其中有80个芽尖形成丛生芽，诱导率达到80%，共形成185个新芽；步骤5中，100个新生芽有65个芽形成根，生根率为65%。

实施例3：

操作方法与实施例1相同，所不同的是步骤3中诱导培养基的配方为：1L MS培养基中添加6-BA 1mg、NAA 2mg、蔗糖30g、琼脂7g，pH值为5.5-5.8，共接种100个芽尖，其中有40个芽尖形成丛生芽，诱导率达到40%，共形成105个新芽；步骤5中，100个新生芽有62个芽形成根，生根率为62%。

实施例4：

操作方法与实施例2相同，所不同的是，步骤5中，生根培养基的配方不同：1L MS培养基中添加NAA 0.05mg、蔗糖25g、琼脂5g，pH值为5.5-5.8。共接种100个芽尖，其中有82个芽尖形成丛生芽，诱导率达到82%，共形成188个新芽；步骤5中，100个新生芽有52个芽形成根，生根率为65%。

实施例5：

操作方法与实施例3相同，所不同的是，步骤5中，生根培养基的配方不同：1L MS培养基中添加NAA 2mg、蔗糖25g、琼脂5g，pH值为5.5-5.8。共接种100个芽尖，其中有42个芽尖形成丛生芽，诱导率达到42%，共形成111个新芽；步骤5中，100个新生芽有39个芽形成根，生根率为39%。

上述实例只是为说明本发明的技术构思以及技术特点，并不能以此限制本发明的保护范围。凡根据本发明的实质所做的等效变换或修饰，都应该涵盖在本发明的保护范围之内。