血塞通组合物注射液及其制备方法

摘要

本发明涉及中药，公开了一种血塞通组合物注射液的制备方法，包括如下步骤：（1）加工三七细粉；（2）浸提三七总皂苷；（3）加工血塞通组合物;（4）加工成品。本发明还公开了使用上述方法所制备血塞通组合物注射液。本发明以鲜三七为原材料通过低温加工高活性的三七细粉、并通过无水乙醇在超声波下浸提三七总皂苷，从而能有效的在短时间内使三七细粉中的有效成份在不破坏活性的情况下快速浸出，本发明在提取血塞通组合物时是使用无水乙醇作为浸提液，从而使能溶于水而不溶于乙醇的含金属有害物质的无机盐能被有效滤除；本发明加工的血塞通组合物注射液具有生物活性高、重金属残留量少和有效成份高的优点。

说明书

技术领域

本发明涉及中药，尤其是涉及一种血塞通组合物注射液的制备方法及血塞 通组合物注射液。

背景技术

三七是一种名贵的中药材，俗称“金不换”，有补血、活血、化瘀等功效， 三七的主要有效成分是三七总皂苷，三七总皂苷是从三七中提取有效的药用成 分，它包括20多种皂苷活性物质、17种微量元素、蛋白、丰富的维生素、多 糖等，三七总皂苷具有能增加脑血管流量、扩张脑血管、改善血流动力学、降 低脑缺血脑组织含量、对脑缺血后海马CA1区的迟发性神经元损伤有明显的保 护作用等功效。将其制成注射用针剂(血塞通)主要用于治疗脑血栓形成，具 有抗脑缺血作用。血塞通组合物注射液能改善多发性脑梗死大鼠的脑水肿，促 进脑软化灶的胶质细胞反应，加速软化灶的吸收和机化，可使海马区神经元病 变减轻。对沙土鼠短暂性脑缺血海马迟发性神经元损伤有一定的保护作用，可 降低缺血后脑组织Ca2+含量，减少死亡神经元数量，增加神经元密度。具有抗 心肌缺血作用。血塞通组合物注射液可使脑梗死患者、原发性高血压患者甲襞 微循环形态积分、流态积分、半周积分、总体积分降低；可使原发性高血压患 者袢周渗出明显减少，管径缩小，流速增加，红细胞聚集性下降，袢顶淤张减 轻以及管袢清晰度增加，水肿消退。有降血脂作用。血塞通组合物注射液可降 低Ⅱ型糖尿病患者的总胆固醇、甘油三酯，降低冠心病心绞痛、脑梗死患者血 清甘油三酯、胆固醇和低密度脂蛋白含量。有抗自由基损伤作用。血塞通组合 物注射液可升高冠心病患者红细胞超氧化物歧化酶活性，降低血浆丙二醛含量， 且可使血清蛋白激酶C和谷草转氨酶含量下降。具有很好的疗效。经典的制备 血塞通工艺多为：采用60-80%的乙醇在加热的条件下提取三七，最后加注射用 水制成针剂。但现有的制备方法非常烦琐，且加工时间长、产品的生物活性不 高，有待改进。

发明内容

为克服传统血塞通组合物注射液制备方法加工时间长、产品的生物活性低 的缺点，本发明提供一种加工时间短、不会破坏其生物活性的血塞通组合物注 射液的制备方法。

本发明的目的是通过以下技术措施实现的，一种血塞通组合物注射液的制 备方法，包括如下步骤：

（1）、加工三七细粉，新鲜三七洗净，切片，真空冷冻干燥，在室温相对 湿度小于10%的环境下粉碎成1-5mm的三七细粉；

（2）、浸提三七总皂苷，将上一步所得的三七细粉放入一超声波反应缸中， 加入三七细粉体积3-4倍的无水乙醇浸泡5～10小时后，利用设置在超声波反 应缸中的超声波发生器产生30-50KHz的超声波20-30分钟；

（3）、加工血塞通组合物，将上一步所得的液体静置24小时，离心，取 上清液过滤、脱色，调pH值至5.0-7.0，而后滤液在80摄氏度下回收乙醇， 当浓缩至稠膏时真空冷冻干燥后粉碎、过筛，即得纯度达90-98%的血塞通组合 物;

（4）、加工成品，所得血塞通组合物加入注射用水稀释至1～2g/ml的溶液， 灌装，灭菌，冷藏15天，室温放置45～60天；将药液经截留分子量1000～ 10000Da的滤膜过滤，于50℃以下调pH值至5.5～6.5，搅拌均匀后加热至75～ 85℃，加入0.1～0.3％活性炭，煮沸10～25分钟，冷却至室温，调pH值至 5.5～6.5，再经截留分子量采用200～500Da的滤膜过滤后灌装，充氮气压盖， 灭菌，冷冻至结冰，化冰后于避光阴凉处或室温放置3～5个月缓化；将缓化所 得液体加配成所需浓度，过滤，灌封，灭菌后得血塞通组合物注射液。

作为一种优选方式，步骤（3）中的过滤、脱色为：将上清液以1.2～1.4BV/h 的流速过大孔吸附树脂柱吸附，用树脂2～3倍重量的无水乙醇浸泡树脂30～ 60分钟后，用树脂4～6倍量的无水乙醇以1.0～1.2BV/h的流速洗脱；收集洗 脱液以6.0～6.5BV/h的流速过脱色树脂，再加入树脂1～3倍量的无水乙醇以 相同流速冲洗树脂柱，合并初流液和洗脱液，加入三七细粉重量1～3％的活性 炭于30～50℃保温脱色40～60分钟，滤去固形物。

作为一种优选方式，滤去固形物后进行管式膜过滤，所述管式膜过滤过程 为采用错流过滤方式：

通过变频泵使液体形成湍流的速度在膜管中流动，在0.15-0.6MPa的压力 驱动下滤液透过膜孔流到膜管外侧，固体颗粒则被膜截留在膜管内部。

具体的，所述管式膜为截留分子量10000～50000Da的管式膜。

本发明还公开了上述方法所制备的血塞通组合物注射液。

本发明以鲜三七为原材料通过低温加工高活性的三七细粉、并通过无水乙 醇在超声波下浸提三七总皂苷，从而能有效的在短时间内使三七细粉中的有效 成份在不破坏活性的情况下快速浸出，本发明在提取血塞通组合物时是使用无 水乙醇作为浸提液，从而使能溶于水而不溶于乙醇的含金属有害物质的无机盐 能被有效滤除；本发明加工的血塞通组合物注射液具有生物活性高、重金属残 留量少和有效成份高的优点。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步详细说明。

一种血塞通组合物注射液（小水针，10ml:0.4g）的制备方法，包括如下步 骤：

（1）、加工三七细粉，新鲜三七洗净，切片，真空冷冻干燥，在室温相对 湿度小于10%的环境下粉碎成1-5mm的三七细粉；

（2）、浸提三七总皂苷，将上一步所得的三七细粉放入一超声波反应缸中， 加入三七细粉体积3-4倍的无水乙醇浸泡5～10小时后，利用设置在超声波反 应缸中的超声波发生器产生30-50KHz的超声波20-30分钟；

（3）、加工血塞通组合物，将上一步所得的液体静置24小时，离心，取 上清液过滤、脱色，调pH值至5.0-7.0，而后滤液在80摄氏度下回收乙醇， 当浓缩至稠膏时真空冷冻干燥后粉碎、过筛，即得纯度达90-98%的血塞通组合 物;

（4）、加工成品，所得血塞通组合物加入注射用水稀释至1～2g/ml的溶液， 灌装，灭菌，冷藏15天，室温放置45～60天；将药液经截留分子量1000～ 10000Da的滤膜过滤，于50℃以下调pH值至5.5～6.5，搅拌均匀后加热至75～ 85℃，加入0.1～0.3％活性炭，煮沸10～25分钟，冷却至室温，调pH值至 5.5～6.5，再经截留分子量采用200～500Da的滤膜过滤后灌装，充氮气压盖， 灭菌，冷冻至结冰，化冰后于避光阴凉处或室温放置3～5个月缓化；将缓化所 得液体加配成10ml:0.4g的小水针，过滤，灌封，灭菌后得血塞通组合物注射 液。

本实施例中步骤（3）中的过滤、脱色具体为：将上清液以1.2～1.4BV/h 的流速过大孔吸附树脂柱吸附，用树脂2～3倍重量的无水乙醇浸泡树脂30～ 60分钟后，用树脂4～6倍量的无水乙醇以1.0～1.2BV/h的流速洗脱；收集洗 脱液以6.0～6.5BV/h的流速过脱色树脂，再加入树脂1～3倍量的无水乙醇以 相同流速冲洗树脂柱，合并初流液和洗脱液，加入三七细粉重量1～3％的活性 炭于30～50℃保温脱色40～60分钟，滤去固形物。

本实施例中滤去固形物后还进行管式膜过滤，所述管式膜过滤过程为采用 错流过滤方式：

通过变频泵使液体形成湍流的速度在膜管中流动，在0.15-0.6MPa的压力 驱动下滤液透过膜孔流到膜管外侧，固体颗粒则被膜截留在膜管内部；其中， 管式膜为截留分子量10000～50000Da的管式膜。

本发明以鲜三七为原材料通过低温加工高活性的三七细粉、并通过无水乙 醇在超声波下浸提三七总皂苷，从而能有效的在短时间内使三七细粉中的有效 成份在不破坏活性的情况下快速浸出，本发明在提取血塞通组合物时是使用无 水乙醇作为浸提液，从而使能溶于水而不溶于乙醇的含金属有害物质的无机盐 能被有效滤除；本发明加工的血塞通组合物注射液具有生物活性高、重金属残 留量少和有效成份高的优点。

通过以下实验表明本发明组合物“重金属残留少”、“有效成份高”等指标 均较传统工艺有较大提高：

1、重金属残留检测：

取传统工艺加工和本实施例加工的血塞通组合物各2.0g，取炽灼残渣项下 遗留的残渣，依法检查（中国药典2000年版一部附录IX E第二法）。

重金属残留检测结果

  重金属含量（PPM） 传统工艺产品 6.3 本实施产品 1.2

结论：本实施例加工的血塞通组合物重金属残留显著减少。

2、有效成份测定

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相A：乙腈，流动相B：水，按 下表进行梯度洗脱；流速为1.0ml/min；检测波长为203nm。重复进样，其相对 标准偏差（RSD）应小于2.0％。

时间（分钟） A（%） B（%） 0 20 80 17 40 60 18 20 80 30 20 80

对照品溶液的制备：分别取60℃减压干燥2小时的对照品三七皂苷R1、人 参皂苷Rgl和人参皂苷Rb1，适量，精密称定，加甲醇制成每lml含三七皂苷 R1对照品0.4mg，人参皂苷Rg1对照品1.5mg，人参皂苷Rb1对照品1.5mg的 混合溶液，即得。

供试品溶液的制备：取本发明的血塞通组合物和传统工艺加工的血塞通 组合物适量，精密称定，分别加甲醇制成每1ml含5mg的溶液，即得试样1和 试样2。

测定法：分别精密吸取对照品溶液与试样1和试样2溶液各10ul，注入 液相色谱仪，测定，即得。

有效成份检测结果

  三七皂苷Rl（%） 人参皂苷Rg1（%） 人参皂苷Rbl（%） 试样1 15 38 35 试样2 10 23 27

结论：本实施例加工的血塞通组合物有效成份较传统工艺加工的血塞通组 合物有显著提高。

以上是对本发明血塞通组合物注射液的制备方法进行了阐述，用于帮助理 解本发明，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，任何未背离本发明 原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包 含在本发明的保护范围之内。